PCR问题交流报告
PCR常见问题、原因分析及其对策
镁离子浓度不当
总结词
镁离子是PCR反应的重要成分，对PCR的效率和产物质量有 重要影响。
详细描述
镁离子浓度过高可能导致非特异性扩增和产物稳定性下降； 镁离子浓度过低则可能影响DNA聚合酶的活性，导致PCR失 败或扩增效率低下。因此，需要根据实验条件和试剂盒推荐 ，选择合适的镁离子浓度。
03
pcr问题对策
详细描述
模板质量的好坏直接影响到pcr的扩增 效果，因此需要确保模板的纯度和浓 度，避免使用降解严重的模板，以提 高pcr的产量和特异性。
优化pcr循环参数
总结词
pcr循环参数的优化可以显著提高pcr的效率和特异性。
详细描述
通过调整变性、退火、延伸等温度和时间，可以优化pcr循环参数，提高pcr的效率和特异性。同时， 合理设置预变性时间和循环数，可以有效避免非特异性扩增和产物积累。
优化引物设计
总结词
引物设计是pcr反应的关键，优化引物设计可以显著提高pcr的特异性和效率。
详细描述
引物设计时需考虑特异性、长度、GC含量、引物二聚体和发夹结构等因素，通过合理设计引物，可以避免非特 异性扩增和引物二聚体形成，提高pcr的特异性。
提高模板质量
总结词
模板质量对pcr结果的影响不容忽视， 提高模板质量可以提高pcr的产量和特 异性。
模板质量差
总结词
模板质量的好坏直接影响到PCR的效率和产物质量。
详细描述
模板中可能含有抑制剂、DNA聚合酶抑制剂或DNA聚合酶竞争性抑制剂等物质， 这些物质会影响DNA聚合酶的活性，导致PCR失败或扩增效率低下。此外，模 板的浓度过低或过高也可能影响PCR结果。
pcr循环参数不当
总结词
PCR循环参数包括变性、退火、延伸等步骤，这些步骤 的温度和时间设置对PCR结果有重要影响。
PCR扩增过程中常见的问题及解决方法
PCR技术具有高度的特异性、选择性、灵敏性，而且快速、简便、易于自动化，因此在临床医学工作中受到广泛的重视及合理的应用。
目前在我国许多基层医疗单位均已相继开展P CR研究用应用工作。
PCR技术很简单，原理也很清楚，因此有条件的单位都能较顺利地上马，但毕竟PCR技术是一种新生事物，受到许多条件因素的影响，所以要做得好也不容易。
在PCR技术应用过程中会遇到这样或那样的问题，更甚至会得到与事实完成相反的结果。
为了使我们能够顺利地开展PCR工作，更好地发挥PCR技术的工具作用，我们根据多年来PCR工作总结的经验，对PCR扩增过程中经常出现的一些问题进行简要的总结，提供给广大科研工作者作为参考，抛砖引玉，不足之处欢迎指正。
一、假阳性扩增在实验过程中有时会碰到所检验的样本全部阳性，而且扩增产物电泳条带亮度均一，这是扩增系统受到污染时最典型的一种表现，需仔细检查，排除污染源，一般应从以下步骤着手：⒈试剂污染：厂方提供的试剂或其中的某种组分在出厂或运输、贮存过程中受到污染。
检测方法，可按试剂盒说明书将试剂分装好，直接置于PCR仪中扩增（不加阴性对照，可加适量蒸馏水），便可简单而有效地判断试剂是否已受到污染。
⒉实验室污染：这是最常见的污染源，由于PCR技术可以在几个小时内将模板中某些特异性序列扩增到数百万倍以上，扩弗产物可能在电泳等过程中污染移液器、操作台或随着蒸发所形成气溶胶而污染整个实验室。
扩增产物又是最有效的模板，一旦出现产物污染其污染程度都较严重。
判断方法：可以将实验中最关键步骤如试剂分装、样品处理等转移到一个新的环境中或转移到超净工作台中完成。
当然，所用的移液器、吸咀管（离心管）都应彻底更换。
解决方法：实验室污染是PCR扩增过程中最易出现的现象，而且一旦出现污染，消除污染源又极其困难，往往需对整个实验室及实验器材彻底清洗处理，所以应该以预防为主，实验过程中严格遵守实验基本要求，样品处理与扩增产物及电泳应尽量分开，最好能在两个房间进行。
PCR扩增DNA实验报告讨论
PCR扩增DNA实验报告讨论简介PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，可以在体外迅速扩增DNA 片段。
本实验旨在通过PCR扩增DNA的方法，探索其应用于分子生物学研究的潜力。
实验步骤1.DNA模板制备：从适当的来源（比如细胞提取物、血液样本等）提取DNA，并进行纯化处理，以保证所需DNA的质量和纯度。
2.PCR反应体系设置：根据实验需求，配置PCR反应液，包括DNA模板、引物、聚合酶、缓冲液和dNTPs等。
3.PCR扩增条件选择：根据所扩增片段的长度和GC含量，确定适当的退火温度、延伸温度和循环次数，以提高扩增效率和特异性。
4.PCR扩增过程：将PCR反应液装入热循环仪，按照设定的温度和时间程序进行循环加热，分别进行变性、退火和延伸。
5.PCR产物分析：通过电泳方法，将PCR产物分离并可视化，以验证目标DNA片段是否成功扩增。
结果与讨论PCR扩增效果评估通过电泳分离PCR产物，观察可见的DNA条带，可以初步评估PCR扩增效果。
明显的单一条带表示扩增成功，而多个或模糊的条带可能存在非特异性扩增或污染。
扩增产物验证方法为确保PCR产物的特异性，可以采用以下方法进行进一步验证：1.限制性酶切：使用适当的限制性酶对PCR产物进行切割，观察切割产物的条带模式与预期是否一致。
2.DNA测序分析：将PCR产物进行测序，通过比对测序结果与目标序列比对，确认扩增片段的准确性。
3.引物设计验证：重新设计引物，分别将其与目标序列和非目标序列进行PCR扩增，观察产物特异性，以排除非特异性扩增影响。
PCR扩增优化探讨1.引物设计：合理设计引物，包括序列特异性与互补性、GC含量、长度等因素。
引物的优化会对PCR扩增效果产生重要影响。
2.温度参数调整：通过温度梯度法等方法，寻找PCR反应的最佳温度，能够提高扩增效率和特异性。
3.PCR反应体系优化：调整反应液中各组分的浓度和配比，以达到最佳效果。
实验应用PCR扩增技术在分子生物学研究中有着广泛的应用，包括：1.基因克隆：PCR扩增可以快速获得目标基因片段的大量DNA，供后续克隆和表达研究使用。
pcr实验报告结论与心得
pcr实验报告结论与心得PCR（聚合酶链反应）是一种基因分析技术，可以在试管中扩增DNA序列，从而提供大量的DNA样本进行分析。
在进行PCR实验后，我得出了以下结论和心得体会。
结论：1. PCR技术可以有效扩增DNA序列，使得小样本量的DNA得以被扩增，从而可以进行更加精细的分析。
2. PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度对PCR反应效果有重要影响，因此需要精细的操作技巧和实验设计。
3. PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，以便及时对反应条件进行调整，从而获得更好的PCR扩增效果。
4. 在PCR反应过程中，需要防止样本的污染和交叉感染，以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
心得：1. PCR实验需要精细的操作和实验设计，因此需要提前充分准备和规划，以确保实验顺利进行。
2. 在PCR反应过程中，实时监测PCR产物的扩增情况可以及时调整反应条件，从而获得更好的PCR扩增效果。
3. 在进行PCR实验时，需要防止样本的污染和交叉感染，尽量避免使用已被污染的试剂和工具，以确保PCR反应结果的可靠性。
4. 在进行PCR实验时，需要仔细阅读实验操作手册和相关文献，了解PCR反应的基本原理和应用技巧。
5. PCR技术在生命科学研究中具有广泛的应用前景，如基因诊断、病原体检测和种群遗传学研究等方面，因此具有重要的科学意义和实际应用价值。
总之，PCR实验是一项高精度的基因分析技术，可以为生命科学研究提供精细的DNA分析和检测手段。
在进行PCR实验时，需要认真掌握PCR反应的基本原理和应用技巧，避免样本污染和交叉感染，并及时调整反应条件，以获得更好的PCR扩增效果。
通过PCR实验的学习和实践，我对PCR技术的原理和应用有了更深入的了解和认识，以及更加实际的操作技巧和经验。
PCR实验常见问题、原因分析及其解决方案!
PCR实验常见问题、原因分析及其解决方案！PCR产物的电泳检测时间，一般为48h以内，有些最好于当日进行检查，大于48h后带型不规章甚至消逝。
但有时仍会与到这样那样的问题，影响检测结果的推断，详细归类为以下常见的4点，描述如下：问题一：无扩增产物现象：正对比有条带，而样品则无。
缘由：1、模板:含有抑制物，含量低。
2、Buffer对样品不合适。
3、引物设计不当或者发生降解。
4、反应条件：退火温度太高，延长时间太短。
对策：1、纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量。
2、更换Buffer或调整浓度。
3、重新设计引物（避开链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物。
4、降低退火温度、延长延长时间。
问题二：非特异性扩增现象：条带与估计的大小不全都或者非特异性扩增带。
缘由：1、引物特异性差。
2、模板或引物浓度过高。
3、酶量过多。
4、Mg2+浓度偏高。
5、退火温度偏低。
6、循环次数过多。
对策：1、重新设计引物或者使用巢式PCR。
2、适当降低模板或引物浓度。
3、适当削减酶量。
4、降低镁离子浓度。
5、适当提高退火温度或使用二阶段温度法。
6、削减循环次数。
问题三：拖尾现象：产物在凝胶上呈Smear状态。
缘由：1、模板不纯。
2、Buffer不合适。
3、退火温度偏低。
4、酶量过多。
5、dNTP、Mg 2+浓度偏高。
6、循环次数过多。
对策：1、纯化模板。
2、更换Buffer。
3、适当提高退火温度。
4、适量用酶。
5、适当降低dNTP和镁离子的浓度。
6、削减循环次数。
问题四：假阳性现象：空白对比消失目的扩增产物。
缘由：靶序列或扩增产物的交叉污染。
对策：1、操作时应当心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
2、除酶及不能耐高温的物质外，全部试剂或器材均应高压消毒。
所用离心管及加样枪头等均应一次性使用。
3、各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存。
PCR training问题交流报告
目标日期 Date
断点Breakpoint:
结果Status
4. 验证方法和目标 Verification Method and Results:
•更新文件Updated document: SOS/JIS
PFMEA
控制计划Control Plan
_________
__________
• 跟踪记录Tracking Records.从From _______ 到to _______
Problem Description 问题描述
6 5 4
1 2 3
Problem Definition 问题定义
Cause Investigation 调查原因
Locate Point of Cause 确定原因所在
SGM CONFIDENTIAL
Issue Date: 2003年2月16日
p.29
Grasp the Situation 掌握情况
SGM CONFIDENTIAL
Issue Date: 2003年2月16日
p.31
实际问题解决 Practical Problem Solving
Example 范例
1 Problem Description: 揟he seatbelt is an obstacle!? 问题描述：“安全带障碍了？”
Steps of Problem Solving 解决问题的步骤
Problem Description问题描述
1
Problem Definition问题定义
Grasp the Situation 掌握情况
2
Locate Point of Cause 确定原因所在
质量问题交流报告 PCR
故障数F比率 Rate目标Target 日期date 故障率failure 合格判定Pass or not日期date 故障率failure rate 合格判定Pass or not发现问题，无措施 发现问题，有临时措施 发现问题，有永久措施 永久措施有效，问题关闭发行日期Date：签发部门Issue Dept：提出部门Source：发生工位Station：问题描述 Prob. Description根本原因（5个为什么）Root Reason (5 Why's)记录编号： 质量问题交流报告（PCR）车型 ModelPCR报告进度管理PCR Prog.Status初步原因分析Analysis：故障照片Pic：关闭确认签名： 审核：Closed by : Reviewed by:解决方法 Corrective Actions顺序号：措施实施情况及交付物确认How Corrective Actions work and Confirm. Of Deliverables：第1个为什么（直接原因）1st Why (Direct Reason)：第2个为什么 2nd Why:实施时间Time of Implementation措施实施者Responsible因果分析Cause-Effect Analysis：责任部门Resp.Dept ：外检科主管部长Resp Dept Mng ：主任/科长Sec Mng：验证结果 Validation分析鱼骨图原因Anal. Of Fishbone验证方法Validation Method 第3个为什么3rd Why：完成时间Due Date结论Conclusio n 临时措施S-T 线长/主管Line Leader： 班组长/科员Team Leader：确认人Person to Confirm临时措施S-T永久措施L-T责任单位质量部长确认签名Sign. Of Q Manager from Resp. Dept：永久措施L-T第4个为什么4th Why：第5个为什么（根本原因）（必须填写）5th Why (Root Reason) (must)：验证人 Resp.Person审定： 关闭日期：Confirmed by: Closing Date:果Effect ：机Machine ：人Man ：料Material ：法Method ：。
PCR报告模版
发布者：发布部门：工程师班次A B 发布日期：项目经理班组长问题编号：部门经理车间主任目标日期责任人完成状态YN Y N 3、是否使用正确的零件?2、是否遵循正确的工具?4、是否符合零件图纸?6a、验证方法：（责任人填写）6b、验证结果（验证人填写）：2、当场控制方法 断点：1、是否遵循正确的工艺?注：上述四项必须按照顺序全部填写，如果有NO,则进入3b，填写5个W，查找Root-Cause；然后进入第五个步骤，如果全为YES，则直接进入4a核查：长期措施（永久）：第五个为什么？根本原因：3b、根本原因产生分析（5个why）第一个为什么？直接原因：第二个为什么？原因：第三个为什么？原因：第四个为什么？原因：5、解决办法 责任人 断点 状态短期措施（临时）：跟踪记录：从________到________发现不符合数量________合格率________。
更新文件：SOS ____ JES ____ PFMEA _________控制计划Control Plan_____防错Error Proofing _________分层审核Layered Audit ___________ 经验教训__________结案日期： 发出者签名：部门批准车间批准质量问题交流报告(PCR)PROBLEM COMMUNICATION REPORT 责任部门： 责任人： 部经理审批： 3a、过程和零件检查A、差异分析B、分析差异产生的原因C、根本原因验证测试4b、复杂问题根本原因产生分析根本原因产生验证方法4a、复杂问题根本原因查找1、问题描述：潜在影响范围/数量(遏制表单)：外协库： 供应商： 车间：成品库： 中转库： 客户端：。
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6a.验证方法 Verification Method (责任人填写 Issue Owner):
6b.验证结果 Verification Result (验证人填写 Tracker):
跟踪记录Tracking Records.从From _______ 到to _______ 发现不符合项数量 #N/C Found _______ 更新文件Updated document: SOS ____ JIS ____ PFMEA ____ 控制计划Control Plan_____ TPM _____ 防错Error Proofing ____ 工程更改EWO____ 分层审核Layered Audit_____ 过程能力 CPK___
发出者Author: 发现部门AreaProb.Found: 负责部门Resp. Dept: 负责人Owner: 工号ID: 发现日期Date Opened:
SGM问题交流报告 SGM PROBLEM COMMUNICATION REPORT
07.4.18 跟踪号Tracking No.
科室内批准 Section Approval 工程师 主管 科室高级经理
车间内批准 Area Approval 班次Grew 班组长 T/L 工段长 G/L 值班长 S/L 车间高级经理 A B C
Red X Master 审核 Red X Master Review:
1.问题描述Problem definition:
作图 Sketch:
4a.复杂问题根本原因查找 Find the Root Cause: A. 差异分析 Difference Analysis:
3b.根本原因产生分析 Root Cause (5个为什么 5 Whys): 第1个为什么？直接原因 1st Why? Direct Cause 第2个为什么？间接原因 2nd Why? Cause 第3个为什么？间接原因 3rdWhy? Cause 第4个为什么？间接原因 4th Why? Cause 第5个为什么？根本原因 5th Why? Root Cause
Y
N
2. 是否使用正确的工具?d?
4. 零件是否符合图纸要求？
Are the Parts to Spec?
长期措施(永久) L/T (permanent
注：上述四项必须按顺序全部填写.如果有NO,则进入3b,填写 5个W,查找Root-Cause；然后进 入第5个步骤。如果全为YES,则直接进入4a。
1. 是否遵循正确的工艺？
Is correct process followed?
断点 Breakpoint: 07.4.18 5.解决办法 Countermeasure: 短期措施(临时) S/T (temporary)
N
3. 是否使用正确的零件？
Is correct part being used?
4月18号夜班车号316816的轮胎排序错误
B. 分析差异产生的原因 Find the Root Cause for Difference: C. 根本原因验证确认测试 Verification: 4b.复杂问题根本原因产生分析 How did the Root Cause happen: 根本原因产生 The Root Cause happen 验证方法 Verification method 责任人 Resp. 目标日期 Date 状态 Status
潜在影响范围/数量 Potential Range/Number: 总装停线5分钟 变速箱Transmission: 车型Model:T-200/T250 发动机Engine: 班次 Crew 物料零件号和名称 Material P/N and Name 工位Station 158L B 9049391轮胎总成 2.当场控制办法 Immediate containment: 将正确的轮胎拉动上线 3a.过程和零件检查 Process/Part Check: Y