个人总结的MTT方法
MTT实验心得2
MTT实验心得MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。
MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。
由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。
1、培养好细胞点板。
养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。
如果知道了细胞的名字，就可以上检索细胞的培养信息，这个网站上的培养方法是标准培养方法。
当然可以根据自己实验要求进行修改。
由于细胞计数很繁琐，点板时的细胞浓度是最难掌握的，这一点笔者的心得如下：自己先将细胞养一段时间，大概了解细胞的增殖情况，在MTT检测时实际上要求细胞大概能长满96-孔板的80-90%，如果打算养48小时就检测，根据细胞的生长情况反推点板时的细胞浓度状况。
这时可以将细胞不进行计数，将消化好的细胞混匀后（可能是10 ml）直接在一个废弃（最好进行过无菌处理）的96孔板中依次加入180、100、50微升细胞，将细胞放置几分钟就会沉到板底了，这时在显微镜下观察，推测哪个孔的细胞48 h能基本长满板底，假设50 微升的孔比较合适，而点板时没孔需点200 微升，那么就将细胞浓度再稀释4倍就可以正式点板了，这时顺便将细胞进行计数（因为实验记录要求写啊）。
这样就OK了！如果细胞还太多，将细胞稀释4倍后再重复以上操作。
注意：不要过分信赖细胞计数，因为细胞计数的取样量为20 微升左右，由于颗粒的分布不均匀，代表性是很差的。
建议：细胞计数一定要会，但不要完全依赖它。
点板时一定要将细胞消化成单个细胞，而且一定要混匀，最好用排枪，否则，MTT的SD会狂大。
2、点板布局。
其实这一点很多人不懈一顾。
如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。
因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了，有些人称之为“边缘效应”这些孔的SD也会狂大，既然如此，不如不用。
MTT总结--sssholy
药物MTT实验步骤(贴壁细胞)----个人改进版By sssholy (2012-10-22)(sssholy@)1. 边缘孔用无菌PBS充填。
收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度为50000个/ml，每孔加入100ul 细胞悬液(每孔5000个细胞)。
注：⑴每次加入细胞都使枪头贴着孔底边缘(最好相同位置)，缓慢加入100ul细胞悬液。
孔加入顺序：可从上到下，从左到右依次加入。
⑵为了保证细胞密度均匀，最好每加3-5列细胞混匀一下细胞悬液，避免因重力沉降导致细胞密度不均。
⑶每块96孔板加完细胞后，应拿起板子前后左右水平摇晃几下（勿旋转摇晃），使细胞均匀分散。
⑷一般设6个复孔（B-G行），对照孔非常重要，且变异大，故设2列（2，3列为对照孔），4-10或4-11列为给药孔。
⑸边缘孔用无菌PBS充填，2-11列均可加入细胞。
因为要设置调零孔（即不加细胞孔），所以可将第11列设为调零孔，也可将第12列的无菌PBS孔在第2天加药时改为调零孔。
2. 细胞放入培养箱培养，待贴壁后第二天给药（通常前一天下午或晚上铺板，第2天上午给药）。
给药方法：先配好药（用EP管配好药），再拿出96孔板，弃去原有培养液（可不用PBS洗，太麻烦了），加入药物。
注：⑴MTT加药时都是先配药再弃去原培养液，最后加入药物。
切勿先弃去原有培养液再配药，⑵药物是用母液溶于无血清培养基配成工作液，事先算好对照孔，药物孔，调零孔如何配制，如何设置加药顺序。
一般越靠中央的孔变异越小，故最重要的给药孔一般放在最中间，次要孔放边缘，⑶如果某个给药孔需加入2种药物，一般需要一种药物先预处理1-2h（预处理药物可用Ep管配好后再分别加入各孔），1-2h再加入另一种药物（直接加入各孔）。
3.细胞放入培养箱培养24h（或其他指定时间）。
4. 药物作用结束后，每孔加入20ul---MTT(5mg/ml)，培养3-4h。
若药物能与MTT反应，可先弃去原培养液，再加入含MTT的培养液（无血清培养液：MTT=5：1配制）。
MTT原理方法及操作步骤
MTT原理方法及操作步骤MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）是一种常用的细胞增殖测定试剂，用于定量测定细胞的存活情况。
MTT的工作原理：MTT原理是基于还原型特种金属试剂Florida Cyanide。
MTT可进入细胞内部，被活细胞内的膜连蛋白酶还原为水溶性紫色化合物，甲基化噻唑胺盐（formazan）。
甲基化噻唑胺盐可溶于有机溶剂如DMSO或乙醇。
MTT的量越多，被还原为甲基化噻唑胺盐越多，即细胞活性越高。
MTT的操作步骤：1.预处理细胞将需要检测细胞的培养基倒入培养皿中，将获得的细胞悬液加入培养基中，根据实验要求进行设定浓度和培养时间。
2.处理试剂根据常规的MTT工作浓度（通常为0.5 mg/ml），将MTT试剂精确称取并溶解在无菌的溶剂（例如PBS）中。
3.细胞处理将培养中的细胞培养液抽取约100μl至新的96孔板孔中，并注意控制每个孔中细胞数相同时的培养基体积。
4.加入MTT试剂将所制备的MTT溶液以100μl的体积的溶液加入到培养细胞上，并尽量在操作中迅速搅拌均匀，以使MTT均匀分布。
5.细胞孔板孔的处理将MTT试剂添加到孔中后，覆盖板密封（如用保鲜膜密封）。
然后将培养皿放入暗处，37°C培养孔中的细胞进行inculbation与MTT碳酸酯酶的反应。
通常培养12至24小时，可以根据具体实验情况延长培养时间。
6.细胞孔中溶解甲基化噻唑胺盐将培养平皿中的培养液取出约50μl，悬浮溶解掉的甲基化噻唑胺盐，再加入200μlDMSO混合均匀。
7.测定吸光度将孔中的溶液分别转移到透明壁的96孔板，并使用微孔板阅读装置（Multiskan Spectrum）在570 nm波长下测定吸光度。
DMSO溶液作为空白参照，用作光强的基准。
8.数据分析根据检测吸光度得到的数据，计算出每个孔的平均值，并根据实验要求，进行数据图表分析。
总结：MTT法是一种可靠、灵敏、简单、可重复性好的细胞增殖测定方法。
干货分享MTT—想说爱你其实不难
干货分享MTT—想说爱你其实不难本人科研狗一只，整理了一篇与MTT实验相关联的细节操作和注意事项，虽然MTT在被CCK-8逐渐替代，但是一定有很多人和小编一样，在MTT上不断地入坑，再不断地爬出来。
日常实验中用MTT检测无非是药敏试验和细胞增值实验，实验成功的前提是细胞铺板的均匀性、一致性以及细胞活性。
所以一定要进行预实验：1、在预实验中，我们要摸清消化液的使用量。
比如说，小编养的是HUVEC(人脐静脉内皮细胞)，正常传代时使用0.25%+0.53mM EDTA胰酶消化液2ml，孵箱消化4-5min，但是在铺板时，建议不要消化太长时间，主要靠后期加入等量培养基缓慢吹打下细胞，因为96孔板并没有给细胞生长提供很大的空间，前期消化时不能太过破坏掉细胞的贴壁性。
2、在预实验中，我们要摸清楚细胞量。
用于MTT实验检测的细胞，需是处于对数期阶段的细胞，所谓的对数期，就是生长较快的那个阶段，可以通过牛鲍计数板或者细胞计数器进行计数，药敏试验调整到5000个/100ul，细胞增殖实验调整到10000个/100ul。
一、药敏试验1、如图所示，红线标注的边缘孔用PBS填充，每孔加入约5000个/100ul的细胞量，这里有个加细胞的小贴士：我们平时加细胞的时候会发现，明明枪头指向培养皿中间，但是待细胞贴壁后，还是边缘区多余中心区，所以在铺板时，每次加入细胞的枪头贴着96孔的四周，转圈缓慢加入。
2、一行12个孔，个人习惯设置两个PBS填充孔，两个对照孔，两个空白孔，6个复孔，即2-3列对照，4-9列复孔，10-11空白（对照孔加细胞、培养基和MTT试剂、DMSO;空白孔加培养基、MTT和DMSO）3、每块96 孔板加完细胞后，前后左右水平摇晃几下，使细胞均匀分散。
4、放入孵箱培养，待贴壁后加药（铺板后24小时即可加药）。
用基础培养基配制药物，配好后再弃去空中原有的培养基。
5、放入孵箱中培养指定的时间。
6、药物作用结束后，每孔加入50ulMTT试剂，培养4h。
MTT用法强大总结
MTT用法强大总结一、安装和使用MTT1.安装MTT- 在Linux系统上，可以通过包管理器（如apt、yum等）安装MTT。
2.使用MTT- 打开终端或命令提示符，输入“mtt”命令即可启动MTT。
二、常用命令和功能1.创建表格- 使用命令“create”或“c”可以创建一个新的表格。
-可以指定表格的行数和列数，或者直接在命令行中输入表格的内容。
2.插入和删除行列- 使用命令“insert row”或“ir”可以在指定位置插入一行。
- 使用命令“insert column”或“ic”可以在指定位置插入一列。
- 使用命令“delete row”或“dr”可以删除指定位置的行。
- 使用命令“delete column”或“dc”可以删除指定位置的列。
3.填充单元格- 使用命令“fill”或“f”可以填充表格的指定范围（行、列、或整个表格）。
-可以填充具体的数值、随机数、日期等。
-可以指定填充的规则和格式，如步长、小数位数等。
4.排序和筛选- 使用命令“sort”或“s”可以对表格的指定列进行排序。
-可以按升序或降序进行排序，也可以指定多个排序属性。
- 使用命令“filter”或“fl”可以根据指定的条件筛选表格的行。
5.合并和拆分单元格- 使用命令“merge”或“m”可以合并指定范围内的单元格。
- 使用命令“split”或“sp”可以拆分指定单元格为多个单元格。
6.导出和导入表格- 使用命令“export”或“e”可以将表格导出为各种格式，如Markdown、CSV、HTML等。
- 使用命令“import”或“i”可以从外部文件导入表格。
三、MTT的优势和应用场景2.支持大规模表格的处理。
-MTT可以处理大规模的表格，不受行列数限制，适用于处理复杂的数据表格。
3.提供灵活的数值填充和处理功能。
-MTT可以根据指定的规则和格式填充单元格，如根据数值序列、随机数、日期等填充。
-MTT还提供了一些常用的数值处理功能，如合计、平均值、最大最小值等。
【整理总结】关于MTT实验总结--心血啊!大全[修改版]
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第一篇：【整理总结】关于MTT实验总结--心血啊!大全【整理总结】关于MTT实验总结－－心血啊！MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT 噻唑蓝为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
也可以用DMSO来溶解。
MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
MTT步骤如下：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
注意事项：（1）选择适当得细胞接种浓度。
（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。
在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。
（3）设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。
mtt 法
mtt 法
MTT法，即麻醉、体位、时间法，是临床常用的评估和管理术语，其目的是确保手术患者在手术过程中得到最佳的麻醉效果，减少手术过程中的危险因素，提高手术成功率和患者康复率。
麻醉是指通过药物或其他方法，使患者失去疼痛感觉和意识。
在手术前，麻醉师会对患者进行详细的麻醉评估，包括患者的身体状况、过敏史、用药史、家族病史等，以确定最合适的麻醉药物和剂量。
在手术过程中，麻醉师会不断监测患者的生命体征，如心率、血压、呼吸等，以确保患者在手术过程中的安全性。
体位是指手术患者在手术过程中的姿势。
正确的体位可以使手术过程更加顺利，同时减少手术风险。
例如，对于背部手术，患者应该采取平躺的姿势，以保持脊柱的稳定性。
对于腹部手术，患者应该采取半坐位或头低脚高的姿势，以减少手术过程中的出血量。
时间是指手术过程中的时间安排。
手术时间应该合理安排，避免手术时间过长或过短。
手术时间过长会增加手术风险和并发症的发生率，而手术时间过短则可能导致手术效果不佳。
因此，麻醉师和外科医生应该根据手术的复杂程度和患者的身体状况，合理安排手术时间。
除了麻醉、体位、时间外，MTT法还包括其他因素的考虑，例如手术器械和设备的准备、手术室的环境和卫生等。
这些因素的合理考
虑和管理，可以最大程度地保证手术的安全性和成功率，同时提高患者的康复率和生活质量。
MTT法是手术过程中重要的管理方法，麻醉师和外科医生应该认真考虑和实施，以确保手术的安全性和成功率。
同时，患者也应该积极配合，遵从医生的建议和指导，以获得最佳的手术效果和康复效果。
MTT方法总结
MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。
formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm 和570nm处进行比色。
所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。
2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。
MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。
(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。
终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO振荡10min，使结晶物充分溶解。
(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。
以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生线。
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个人总结的MTT方法，希望和园友分享下，如果有错误或误解请大胆指出，你们的回复和建议是我前进的动力~~~
谢谢！！
药物MTT实验步骤(贴壁细胞)----个人改进版
by sssholy （2012-10-22）
1. 边缘孔用无菌PBS充填。
收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度为50000个/ml，每孔加入100ul细胞悬液(每孔5000个细胞)。
注：⑴每次加入细胞都使枪头贴着孔底边缘(最好相同位置)，缓慢加入100ul细胞悬液。
孔加入顺序：可从上到下，从左到右依次加入。
⑵为了保证细胞密度均匀，最好每加3-5列细胞混匀一下细胞悬液，避免因重力沉降导致细胞密度不均。
⑶每块96孔板加完细胞后，应拿起板子前后左右水平摇晃几下（勿旋转摇晃），使细胞均匀分散。
⑷一般设6个复孔（B-G行），对照孔非常重要，且变异大，故设2列（2，3列为对照孔），4-10或4-11列为给药孔。
⑸边缘孔用无菌PBS充填，2-11列均可加入细胞。
因为要设置调零孔（即不加细胞孔），所以可将第11列设为调零孔，也可将第12列的无菌PBS孔在第2天加药时改为调零孔。
2. 细胞放入培养箱培养，待贴壁后第二天给药（通常前一天下午或晚上铺板，第2天上午给药）。
给药方法：先配好药（用EP管配好药），再拿出96孔板，弃去原有培养液（可不用PBS洗，太麻烦了），加入药物。
注：⑴MTT加药时都是先配药再弃去原培养液，最后加入药物。
切勿先弃去原有培养液再配药，因为配药一般要花较长时间，若先弃去培养液再配药会导致细胞无营养液体而死亡。
⑵药物是用母液溶于无血清培养基配成工作液，事先算好对照孔，药物孔，调零孔如何配制，
如何设置加药顺序。
一般越靠中央的孔变异越小，故最重要的给药孔一般放在最中间，次要孔放边缘，调零孔可用第11或12列。
⑶如果某个给药孔需加入2种药物，一般需要一种药物先预处理1-2h（预处理药物可用Ep
管配好后再分别加入各孔），1-2h再加入另一种药物（直接加入各孔）。
3.细胞放入培养箱培养24h（或其他指定时间）。
4. 药物作用结束后，每孔加入20ul---MTT(5mg/ml)，培养3-4h。
若药物能与MTT反应，可先弃去原培养液，再加入含MTT的培养液（无血清培养液：MTT=5：1配制）。
注：MTT使用前预先解冻。
MTT对光敏感，故一般保存于负20℃，配好5mg/mlMTT后我习惯分装于EP管中。
5.终止培养，小心吸去孔内培养液。
每孔加入150ul---DMSO（DMSO可预先算好所需体积加入15ml离心管中）,37℃温箱孵育10分钟或摇床低速振荡10分钟。
之后用酶标仪检测OD—490nm（也有测570nm的）各孔的吸光度(A)值。
6.同时设置调零孔（无血清培养基, MTT, DMSO）,对照孔（细胞，最大浓度的药物溶解介质，无血清培养基, MTT, DMSO）。
7.细胞活力（cell viability）：
细胞活力（cell viability of control）=（药物组A值-调零孔A值）/(对照孔A值-调零孔A值）*100%
药物MTT实验步骤----原版：。