Carnoy固定液
人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析
人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析一、实验背景1、Carnoy固定液：固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。
单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混合的固定液。
由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称其为卡诺氏固定液。
Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15min至24h，冰箱、室温均可。
必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。
2、低渗液（hypotonic solution）低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的溶液，渗透压低于组织液，与外周血混在一起时，水分迅速进入细胞，使其膨胀，甚至破裂，获得分散良好的染色体分裂象。
常见的低渗液：水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾（0.65mol/L）、氯化钾（0.075mol/L）等。
低渗效果取决于低渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。
低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使黏附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形态。
实验室中一般选用0.075mol/L KCl为低渗液，其优点有：①染色体轮廓清楚，可染色性强，染色时间短。
②用于显带染色时能充分显示带型特点。
低渗处理为37℃，25～30min，以预实验条件为准。
2、肝素N-硫酸和艾杜糖醛酸含量较多的一种糖胺聚糖，由D-β-葡糖醛酸(或L-α-艾杜糖醛酸)和N-乙酰氨基葡糖形成重复二糖单位组成的多糖。
肝素是一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。
2、PHA植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞—淋巴细胞。
是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还可以刺激机体产生非特异性抗体。
卡诺氏固定液
固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。
单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混和的固定液。
由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称的卡诺氏固定液是效果良好的固定液。
Carnoy固定液（甲醇:冰乙酸=3:l）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15分钟至24小时，冰箱、室温均可。
必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。
水稻根尖染色体标本制备作者: biozxp 发布日期: 2006-4-04 查看数: 22 出自: 1.取材：选取水稻种子，充分浸种后，将它们摆在铺有滤纸的培养皿内，在约28℃条件下发芽培养，当胚根长至1～1.5cm时，剪下备用。
2.预处理压片法：采用0.1％秋水仙素处理2h左右去壁低渗法可采用以下四种方法处理处理方法0.002mol/L8-羟基喹啉α－溴萘饱和溶液低温（－4℃）卡诺氏Ⅰ固定液处理时间（h）1 24 24 24注：卡诺氏Ⅰ固定液乙醇：冰醋酸（3：1）3.固定卡诺氏Ⅰ固定液，固定时间以不超过24h为宜。
经过固定的材料如不及时使用，可经90％酒精换到70％酒精各半小时，再换入一次70％酒精，在0～4℃冰箱内备用。
去壁低渗法a.将3固定的材料用DDW洗净后，0.075mol/LKCL溶液室温条件下处理约30min。
b.酶解去壁吸取低渗液，加入1％混合酶液（1％果胶酶与1％纤维素酶的混合液，均为Sigma公司），28℃左右，酶解4.5～5h.酶解过程中，将材料瓶轻轻摇动1～3次，使材料与酶液充分接触。
c.后低渗吸取酶液,用DDW冲洗材料2～3次，然后在DDW中停留30min。
d.重固定吸取低渗液后,加入新配制的卡诺氏Ⅰ固定液，固定时间约20min。
e.标本制备吸取固定液后，将根尖捣碎,再滴入新鲜固定液3～5滴，制成细胞悬液，充分搅匀。
Carnoy固定液使用说明
Carnoy固定液Carnoy Fixative Solution编号名称规格单位北京华越洋WG04553Carnoy固定液100ml，500ml瓶Carnoy固定液用途：Carnoy氏液是由乙醇，氯仿和乙酸按6:3:1的比例混合而来的混合型固定液。
该液渗透快速，固定只需1-2小时。
固定后可以直接用95%乙醇脱水，固定核酸和糖原的效果最好，常用于组织化学。
保存条件：RT，避光保存，有效期一年。
Carnoy固定液固定时的注意事项：(1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。
(2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。
(3)固定的时间要合适：与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。
经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。
经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。
Carnoy固定液固定的条件：(1)迅速渗入组织，杀死原生质。
在杀死的短时期中，细胞形态不致有所变化。
(2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。
(3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。
(4)使细胞内的成分凝固或沉淀。
(5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。
(6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使组织变硬，具有一定的硬度。
(8)固定以后能起到保存的作用。
(9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。
华越洋Carnoy固定液其他相关固定液：通用组织细胞固定液Champy固定液Helly固定液AAF固定液Bouin固定液戊二醛固定液Zetterqvist固定液Carnoy固定液Brasil固定液Dafano固定液Gendre固定液Methacarn固定液A-F固定液。
Carnoy固定液新用途的探讨
作切 片 ，进行 常规染色 、酶组 织化 学染 色 ，光镜 下观 察 ，并对 第 １、３周 的标 本 进 行 透射 电镜观 察 。 结果 Ｃａｍｏｙ液
和 ２０％和 ３５％三 氯醋酸均 可引起 颊囊 上皮 的坏 死 、脱 落 ，形 成溃 疡 ，深 达基 层 。术 后 ３周 ，脱 落坏 死 组织 区被 临近
上皮 和 （或 ）瘢 痕组织修 复 。结论 Ｃａｍｏｙ固定 液 具 有较 强 的 固定 作 用 和穿 透力 ，其 能导 致 正 常 生长 的囊 壁 衬 里
上皮 的坏死 脱落 ，组织 坏死脱 落区 可被 临近上 皮和 （或 ）瘢痕 组 织修 复 ，可试 用 于 临床 治疗 反 复 发 作 的尖 锐湿 疣 、
收稿 日期 ：２００７—０３—２７ 作 者 单 位 ：河 南 科 技 大 学 医 学 院 。河 南 洛 阳 ４７１００３ 作 者 简 介 ：付 银 锋 （１９６４一），男 ，河 南 洛 阳人 ，实 验 师 ，从 事 病 理 学 实 验
教 学 和 技 术 工作 。
酸 均可 引起 颊囊 上 皮 的 坏死 、脱 落 ，形 成 溃 疡 ，其 穿 透深 度 约 ０．３ ｍｍ，超 过黏 膜 下 层 深 达 基 层 。术 后 ３ 周 ，处理 面颊 囊 上 皮 重 新 形 成 ，胶 原 纤 维 明显 增 生 ， 成 纤维 细胞 增 多 。 术后 ６周 ，小 鼠颊 囊 组 织 恢 复 正 常 。 ２．２ 酶 组 织化学 反应 术 后 ３周 ，酶 组 织化 学 反应 也 在此 期 内重 新 出现 。 ２．３ 透 射 电镜观 察 术 后 １周 ，处 理 面 上皮 为 无结 构 的 电子密 度增 高 区 ，基底 膜 连 续性 中 断 ，桥 粒 和半 桥粒消 失 。术后 ３周 ，基底 膜 完 整 ，桥 粒 和半 桥 粒恢 复 ，细胞 器 呈异 常改 变 ，线 粒体 肿胀 ，嵴 变短或 消失 。 ３ 讨论
常用细胞固定剂及其优缺点比较
常常使用细胞固定剂及其优缺点比较之袁州冬雪创作1、95%酒精：最常常使用的细胞学固定液，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，但核蛋沉淀后，能溶于水，因此，经95%酒精固定的涂片，染色前没有需要颠末水洗.此固定液适用于苏木素-伊红染色和巴氏染色.固定时间根据标本的分歧，时间也不尽相同，一般标本固定时间为15-30分钟，痰标本需要更长一些时间.颠末95%酒精固定的标本，细胞核保管较好，布局清晰，颜色鲜艳.如果在95%酒精液内加入聚乙二醇更佳，可以呵护细胞免受空气干燥后的人工假象.2、乙醚酒精液（1：1）：其效果与95%酒精相似，但由于乙醚有很强的吸水性和特有的刺激性气味，容易挥发，长期低浓度吸入，有头痛、头晕、疲倦、嗜睡、蛋白尿、红细胞增多等不良反应.长期皮肤接触，可发生皮肤干燥、皲裂.所以现在已经逐渐被95%酒精所代替.3、甲醇：固定时间快，细胞收缩小，细胞核保管较好，布局清晰，染色鲜艳.常作为穿刺细胞涂片的固定液.对抗原保管较好，可作为细胞涂片免疫组化的固定液.缺点是具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对中枢神经有一定的伤害.甲醇的毒性与其代谢产品甲醛和甲酸的蓄积有关.以前认为毒性作用主要为甲醛所致, 甲醛能抑制视网膜的氧化磷酸化过程,使膜内不克不及合成ATP,细胞发生变性,最后引起视神经萎缩.近些年研究标明,甲醛很快代谢成甲酸,急性中毒引起的代谢性酸中毒和眼部损害，主要与甲酸含量相关. 4、冰醋酸：5%水溶液可作固定用.不克不及沉淀白蛋白，但能沉淀核蛋白.渗透性强，固定快，能使红细胞膨胀而破碎，常与其它液体配合使用.5、无水酒精：对糖原保管较好，容易使细胞收缩，其性能与95%酒精相似，很少单独使用，一般只用于糖原的固定.6、丙酮：为易挥发的无色液体，有刺激性气体.可以使蛋白质沉淀，渗透性强，细胞收缩严重，对核的固定差.很少用于惯例细胞学的固定.广泛用于酶组织化学中的各种酶的固定，也有人用于抗原的保管，作为细胞涂片免疫组化的固定液.丙酮具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对肝、肾及中枢神经有一定的伤害.7、Carnoy 固定液：配方：无水乙醇60ml，氯仿30ml，冰醋酸10mlCarnoy液能固定胞浆和胞核，尤其适宜于染色体等.常常使用于糖原及尼氏体的固定，由于冰醋酸能溶解红细胞并可防止细胞由酒精引起的过渡收缩，对固定有血的标本和显示DNA、RNA效果很好.缺点是每次固定后固定液内有大量的红细胞碎片和细胞脱落，必须及时过滤，否则容易造成污染.其次，氯仿具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对肝、肾及中枢神经有一定的伤害.8、10%中性缓冲甲醛液：配方1：40%甲醛10ml，0.01mol/L pH7.4的PBS90ml.配方2：40%甲醛120ml，蒸馏水880ml，磷酸二氢钠（NaH2PO4;H2O）4g，磷酸氢二钠（Na2HPO4）13g.10%中性缓冲甲醛液对大多数抗原保管较好，是免疫组织化学最常常使用的固定液，组织穿透性好，组织收缩较小.但此液体不适合固定湿固定的涂片，可作为干固定涂片和细胞蜡块的固定液.甲醛也具有挥发性和毒性.大量吸入会出现呼吸道的严重刺激和水肿、眼刺痛、头痛，也可发生支气管哮喘.常常吸入少量甲醛，能引起慢性中毒，出现粘膜充血、皮肤刺激症、过敏性皮炎、指甲角化和脆弱、甲床指端疼痛等.全身症状有头痛、乏力、胃纳差、心悸、失眠、体重减轻以及植物神经紊乱等.。
carnoy固定液的作用原理
carnoy固定液的作用原理Carnoy固定液是一种常用于生物学和组织学实验中的固定剂。
它的作用原理是通过改变细胞和组织的结构，使其保持原始形态和结构，防止其在实验过程中的变形和腐败。
下面将详细介绍Carnoy固定液的作用原理及其在实验中的应用。
Carnoy固定液由乙酸、甲酸和乙醇组成，其具有较强的固定作用。
乙酸和甲酸能够使细胞和组织中的蛋白质发生交联反应，形成稳定的蛋白质网状结构，从而固定细胞和组织的形态。
乙醇则能够使细胞和组织中的脂质发生沉淀，进一步增强固定效果。
在实验中，Carnoy固定液通常用于固定细胞和组织样品，以便进行后续的染色、显微观察和分析。
固定液的选择对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
Carnoy固定液具有以下几个优点，使其成为常用的固定剂之一：1. 优异的固定效果：Carnoy固定液能够迅速穿透细胞和组织，将其内部的结构进行有效地固定，保持其原始形态和结构。
相比其他固定液，Carnoy固定液具有更高的固定效率和更好的保留细胞和组织结构的能力。
2. 快速固定速度：Carnoy固定液具有较快的固定速度，通常只需数分钟至十几分钟即可完成固定。
这对于需要迅速进行实验的研究人员来说非常重要，能够节省宝贵的时间。
3. 适用于多种实验：Carnoy固定液适用于多种细胞和组织的固定，包括动物组织、植物组织和微生物等。
无论是常规染色、免疫组化、原位杂交还是电镜等实验方法，Carnoy固定液都能够提供良好的固定效果。
4. 保存时间长：Carnoy固定液固定的细胞和组织样品可以保存较长时间，不易发生变形和腐败。
这对于需要进行长期保存或远程运输的样品非常重要，能够保证实验结果的可靠性。
尽管Carnoy固定液具有许多优点，但在实际应用中也存在一些注意事项。
首先，Carnoy固定液具有较强的毒性，使用时需要注意安全。
其次，不同类型的细胞和组织对Carnoy固定液的适应性不同，需要根据实验的需要选择合适的固定液。
一些固定剂的配方及性能介绍
一些固定剂的配方及性能介绍固定，就是用某种方法以最快的速度将细胞杀死并保持组织及细胞原有的形态结构及其组成。
固定在组织制片中极为重要，因为机体死后血液循环停止，细胞逐渐死亡，如不立即处理，则细胞内的酶（水解酶）会使蛋白质分解为氨基酸渗出细胞，使细胞溶解破坏，组织变形，在无冰藏的条件下，更可因其病原微生物的迅速繁殖而腐败，组织结构破坏，不利于形态学的诊断。
组织固定的目的为1、迅速防止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，以保持和细胞与正常生活时的形态相似；2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶解物质，以保持它原有的结构与生活时相仿；3、使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的折光率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察；4、固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增加组织硬度，便于制片；5、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有的形态结构；经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辨认。
为了能够达到固定的目的，固定剂必须具备以下的性质和条件：1、迅速渗入组织而固定原生质，使短期解剖的组织细胞形态不至于有较大变化；2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定；3、使组织细胞中不至于因固定引起人为的改变；4、在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理，而使固定后的原生质变形；5、尽可能避免使组织膨胀或收缩（不致改变原生质原来的体积）；6、能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或沉淀下来；7、增加细胞内含物的折光度，易于鉴别，增加媒染作用和染色作用；8、使细胞变硬，适于切片，但又不使材料太坚硬或松脆；9、使组织充分固定，便于保存。
[1][2]下面我们介绍中华医学会病理分会推荐的几种常用固定剂的性能[3]：1、4%中性甲醛（10%中性福尔马林）固定液配方：甲醛（40%）100ml，无水磷酸氢二钠6.5g，磷酸二氢钠4.0g，蒸馏水900ml。
卡诺氏液的作用
卡诺氏固定液(Carnoy's Fluid) 适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖,花药压片及子房石蜡切片等.有极快的渗透力,根尖材料固定15—20min即可,花药则需1h左右,此液固定最多不超过24h,固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止;如果材料不马上用,需转入70%酒精中保存.固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。
配方:无水酒精3份:冰醋酸1份或无水乙醇6份，氯仿3份，冰醋酸1份。
龙胆紫，其1～2％溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。
龙胆紫为一种碱性阳离子染料，因其阳离子能与细菌蛋白质的羧基结合，影响其代谢而产生抑菌作用。
它能抑制革兰氏阳性菌，特别是葡萄球菌、白喉杆菌，对白色念珠菌也有较好的抗菌作用。
它杀菌力强，对组织没有刺激性，也没有毒性和副作用。
醋酸洋红常被用作核、染色体的固定和染色剂。
在“观察植物细胞有丝分裂”（即“观察根尖分生区组织细胞”）时，对染色体进行染色，需要用碱性染液，此时可以使用醋酸洋红或龙胆紫染液。
改良苯酚品红染色液对果蝇唾液腺染色体的染色效果与醋酸染洋高中生物试验中试剂和药品的作用如下：1、斐林试剂作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。
还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。
如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。
2、班氏尿糖定性试剂使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。
3、双缩脲试剂作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。
也可用于鉴定多肽。
4、苏丹Ⅲ作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。
5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。
能杀死细胞固定。
6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。
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北京吉美生物技术有限公司
Carnoy固定液
产品简介：
固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。
固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。
固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
Jimei Carnoy固定液(Carnoy，s Fluid)又称卡诺氏固定液，主要由乙醇、乙酸等混合而成。
适用于一般动物组织和细胞的固定，常用于动植物压片及石蜡切片等，有极快的渗透力，固定最多不超24h。
其特点是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。
推荐用于RNA和DNA染色的组织固定，亦用于糖原染色的组织固定，能够使糖原呈细微颗粒状。
由于该液穿透力强，亦可固定外膜致密不宜渗透的组织。
组织固定后暂时不用，可置于70%乙醇中保存。
操作步骤（仅供参考）
1、一般小块组织固定30~40min。
稍大块组织2~4h。
如果组织块大，可适当延长固
定时间，但不宜超过24h。
注意事项：
1、Carnoy固定液对人体有一定的损害，请小心操作，不宜用于固定脂类染色的组织。
2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。
3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10：1。
4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。
5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。