第四章色层分析法1
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生物分离工程-色层分离(一)
2 色层分离的分类
按溶质分子与固定相相互作用机理 ➢吸附层析（范德华力，氢键，静电力，共价力） ➢分配层析（溶质在两液相间分配系数不同） ➢凝胶过滤（分子大小与形状）
实验技术分类 ➢低压（小于0.5 Mpa) ➢中压 (0.5-5 Mpa) ➢高压 (5-40 Mpa) ➢电泳 (溶质在电场中移动）
➢性质： （1）亲水性比琼脂糖高（羟基数多） （2）化学稳定性及热稳定性好 （3）孔度与机械强度与交联度有关 （4）用于凝胶过滤分子筛 ➢应用：水溶液中分离蛋白质等
5 层析介质
---常用的层析介质
聚丙烯酰胺
➢性质： 1. 烯酰胺与交联剂N, N’-甲叉双丙烯酰胺共聚 2. 烷烃骨架与酰胺侧链 3. 控制交联剂比例可控制网格孔度 4. 亲水好，但不如多糖介质 5. 机械强度差 ➢应用： （1）凝胶过滤 （2） 电泳介质
流动相的移动距离＝ V/Am
Am Rf = Am K d As
5 基本概念
溶出体积
溶出体积VR :在柱色层分离中，使溶质从柱中流出时所通过的流动 相的体积
Vs 和 Vm 分别为固定相和流动相的总体积
滞留时间（一种溶质色谱柱所需的时间）
ν为洗脱剂的空塔速度 ；A 柱的截面积 Qe 洗脱剂的流量
5 基本概念
➢ 阻滞因子 分配层析溶质移动速度与理想流动相移动速度（ 距离）比值
5 基本概念
➢ 溶出体积 在柱色层分离中，使溶质从柱中流出时所 通过的流动相体积
➢ 分辨率 两峰之间的距离与两峰宽的平均值之比
➢ 理论塔板 流动相与固定相平均浓度达传质平衡时量之 比
5 层析介质
---常用的层析介质 琼脂糖
琼脂糖的基本结构单位和亲水性凝胶结构 a 琼脂糖结构 b 亲水性凝胶结构
第四章色层分析法1
建议标准：不挥发性有机残留物的检查可参照
美联邦条例第170-199部分3卷21条（1998年修
订）；参照《日本药典》对塑料容器质量控制
的有关指标（电导率、易氧化物、酸洗脱液、
荧光及紫外吸收）。
2019年11月8日星期五
色层分析法 第 33 页
吸附树脂的安全性
化学稳定性 交联三维网状结构＝〉机械稳定性
聚酰胺分子内存在着很多的酰胺键，可与 酚类、酸类、醌类、硝基化合物等形成氢键，因 而对这些物质有吸附作用。各种化合物因其与聚 酰胺形成氢键能力的不同，吸附能力也就不同， 因此可以得到分离。
2019年11月8日星期五
色层分析法 第 26 页
一般讲来 ，具有以下规律：
◆能形成氢键基团较多的溶质，其吸附能力较 大；
XAD-1 XAD-2 XAD-4 Xad-7
XAD-9
苯乙烯 苯乙烯 苯乙烯 α -甲基丙烯酸甲酯
亚砜
二乙烯苯
二乙烯苯
二乙烯苯
双（α -甲基丙烯酸） 乙二醇酯
非极性 非极性 非极性 中极性
极性
XAD-10
丙烯酰胺
极性
XAD-12
氧化氮类
强极性
Diaion 系列
HP-10
苯乙烯
二乙烯苯
非极性
HP-20
2019年11月8日星期五
色层分析法 第 21 页
活度级别
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
2019年11月8日星期五
Al2O3 ０ ３ ６
１０ １５
含水量（%）
硅胶 ０ ５
１５ ２５ ３８
色层分析法 第 22 页
（3）羟基磷灰石
化学式[Ca5(PO4)3OH]2，简称HA。 国外的Bio－Rad公司生产的HA有三种规格，分 别适用于不同条件。由于HA的吸附容量高，稳 定性好（在T<85℃，PH5.5~10.0均可使用）。 HA的Ca2＋基团和生物表面的负电荷基团的相 互反应，在用HA分离生物分子过程中起着重要 的作用。HA的PO43-基团与生物分子表面的阳 电荷基团的相互反应，起着次要的作用。
层析技术讲义
层析技术讲义层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），它是在1903-1906年由俄国植物学家M. Tswett首先系统提出来的。
他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不同颜色的谱带或称色谱图（Chromatogram）。
当时这种方法并没引起人们的足够注意，直到1931年将该方法应用到分离复杂的有机混合物，人们才发现了它的广泛用途。
随着科学技术的发展以及生产实践的需要，层析技术也得到了迅速的发展。
为此作出重要贡献的当推英国生物学家Martin和Synge。
他们首先提出了色谱塔板理论。
这是在色谱柱操作参数基础上模拟蒸馏理论，以理论塔板来表示分离效率，定量的描述、评价层析分离过程。
其次，他们根据液－液逆流萃取的原理，发明了液－液分配色谱。
特别是他们提出了远见卓识的预言：一、流动相可用气体代替液体，与液体相比，物质间的作用力减小了，这对分离更有好处；二、使用非常细的颗粒填料并在柱两端施加较大的压差，应能得到最小的理论塔板高(即增加了理论塔板数)，这将会大大提高分离效率。
前者预见了气相色谱的产生，并在1952年诞生了气相色谱仪，它给挥发性的化合物的分离测定带来了划时代的变革；后者预见了高效液相色谱（HPLC）的产生，在60年代末也为人们所实现，现在HPLC已成为生物化学与分子生物学、化学等领域不可缺少的分析分离工具之一。
因此, Martin和Synge于1952年被授予诺贝尔化学奖。
如今的色层分析法经常用于分离无色的物质，已没有颜色这个特殊的含义。
但色谱法或色层分析法这个名字仍保留下来沿用。
现在我们简称为层析法或层析技术。
层析法的最大特点是分离效率高，它能分离各种性质极相类似的物质。
而且它既可以用于少量物质的分析鉴定，又可用于大量物质的分离纯化制备。
因此，作为一种重要的分析分离手段与方法，它广泛地应用于科学研究与工业生产上。
第四章色层分析法1
薄层层析：固定相在玻璃板、铝膜等支 持物上铺成薄层的层析分离。
色层分析法 第6页
2019年4月4日星期四
根据分离的原理分类
类型 原理 吸附力，疏水力和静 电力 固定相 硅胶Al2O3 、活性炭、羟基 磷灰石 硅胶、纤维素、滤纸、硅藻 土 带配基的琼脂糖、葡萄糖以 及硅胶等 交联葡聚糖、琼脂糖 树脂、离子型纤维素、葡聚 糖等离子交换剂 常用操作方式 柱层析、薄层层析
2019年4月4日星期四
色层分析法
第 23 页
在使用HA作为固定相基质时，有几点 应注意：
i) HA系干粉末时，要先在蒸馏水中浸泡，使其 膨胀度（水化后所占有的体积）达到2～ 3mL/g后，再按1:6体积加入缓冲液（如 0.01mol/L NaP(磷酸钠缓冲溶液)，PH6.8）悬 浮，以除去细小颗粒。 ii) HA悬浮液须用漩涡振荡器混合，若用磁棒 或玻璃棒搅拌时，HA的晶体结构会受破坏。
色层分析法
第 32 页
树脂的前处理
市售的树脂常含有未聚合的单体、致孔剂、分 散剂等，使用前需除去其中可能有毒性的有机 残留物。 前处理工艺合格的指标：醇洗脱液加水不显浑 浊；洗脱液蒸干后无残留物。 建议标准：不挥发性有机残留物的检查可参照 美联邦条例第170-199部分3卷21条（1998年修 订）；参照《日本药典》对塑料容器质量控制 的有关指标（电导率、易氧化物、酸洗脱液、 荧光及紫外吸收）。
非极性
500-600
2019年4月4日星期四
色层分析法
第 29 页
单体
交联剂
极性
孔径
比表面m2/g
HP-40 HP-50 GDX-104 GDX-401 GDX-501 GDX-601 Duolite S-30 Lewapol G7318
色层分析法 第6页
2019年4月4日星期四
根据分离的原理分类
类型 原理 吸附力，疏水力和静 电力 固定相 硅胶Al2O3 、活性炭、羟基 磷灰石 硅胶、纤维素、滤纸、硅藻 土 带配基的琼脂糖、葡萄糖以 及硅胶等 交联葡聚糖、琼脂糖 树脂、离子型纤维素、葡聚 糖等离子交换剂 常用操作方式 柱层析、薄层层析
2019年4月4日星期四
色层分析法
第 23 页
在使用HA作为固定相基质时，有几点 应注意：
i) HA系干粉末时，要先在蒸馏水中浸泡，使其 膨胀度（水化后所占有的体积）达到2～ 3mL/g后，再按1:6体积加入缓冲液（如 0.01mol/L NaP(磷酸钠缓冲溶液)，PH6.8）悬 浮，以除去细小颗粒。 ii) HA悬浮液须用漩涡振荡器混合，若用磁棒 或玻璃棒搅拌时，HA的晶体结构会受破坏。
色层分析法
第 32 页
树脂的前处理
市售的树脂常含有未聚合的单体、致孔剂、分 散剂等，使用前需除去其中可能有毒性的有机 残留物。 前处理工艺合格的指标：醇洗脱液加水不显浑 浊；洗脱液蒸干后无残留物。 建议标准：不挥发性有机残留物的检查可参照 美联邦条例第170-199部分3卷21条（1998年修 订）；参照《日本药典》对塑料容器质量控制 的有关指标（电导率、易氧化物、酸洗脱液、 荧光及紫外吸收）。
非极性
500-600
2019年4月4日星期四
色层分析法
第 29 页
单体
交联剂
极性
孔径
比表面m2/g
HP-40 HP-50 GDX-104 GDX-401 GDX-501 GDX-601 Duolite S-30 Lewapol G7318
第四章色层分析法1
类型 吸附层析
原理
吸附力，疏水力和静 电力
固定相 硅胶Al2O3 、活性炭、羟基
磷灰石
常用操作方式 柱层析、薄层层析
分配层析
分配系数、溶解度
硅胶、纤维素、滤纸、硅藻 纸层析、柱层析、
土
薄层层析
亲和层析
生物分子亲和力
带配基的琼脂糖、葡萄糖以
及硅胶等
薄层层析、柱层析
凝胶层析 离子交换层析
排阻效应 离子间作用力
抗污染性强；
价格便宜。
2020年5月26日星期二
色层分析法 第 14 页
吸附剂的多孔结构，粒度和粒子形状是影响色 层系统特性的基本因素。
2020年5月26日星期二
色层分析法 第 15 页
几种常用的固体吸附剂
吸附剂
特性大
孔径dp Å
硅胶 亲水无定形 40-80
Al2O3 亲水无定形
聚合物
----
20-80 -----
硅胶具有微酸性，可用于分离酸性和中性物质， 如有机酸、氨基酸、甾体激素、类脂，萜类及 色素等物质，硅胶用量一般是样品量的
３０～３６倍。
2020年5月26日星期二
色层分析法 第 20 页
（2）氧化铝
Al2O3是由Al(OH)３脱水制得，Al2O3表面存在铝羟基Al－ＯＨ， 由于羟基的Ｈ键作用而能吸附其它物质。
2020年5月26日星期二
色层分析法 第 13 页
2．吸附剂的选择
高选择性以实现很好分离；
高容量以减少吸附剂的使用量；
对于快速吸剂具有很好的动力学和传递特性；
具有化学和热稳定性，在流动相中不溶解以保持吸附剂特性；
具有一定的机械强度和惰性，防止破碎和腐蚀；
色层分析法学习
第8页/共129页
色层分析法/共129页
色层分析法
二、分配柱层析 分配柱层析是利用各组分在两种不相混溶的溶剂中的 分配系数不同而得到分离，它相当于一种连续性的溶剂抽 提法。 1．分配系数K 一定量的溶质在两种不相溶的溶剂中达到平衡时，溶质在 两种溶剂中的浓度比值为一常数，此常数称为分配系数。
0-14
第21页/共129页
核苷酸类物质 分离提纯等
上海化工 学院
（美） Amberlite
IRA-400
色层分析法
产品 牌号
交换 基团
出
厂 离 子 形
形 状
粒度 （目
）
水分 （% ）
视比重 （克/毫
升）
式
弱酸 101× 128
（724 ）
— COOH
（甲 基丙 烯酸 型）
—
H型
球 状
1650
≤60
第6页/共129页
色层分析法
用作吸附剂的材料很多，可分为无机吸附剂与有机吸 附剂，常用的无机吸附剂有氧化铝、碳酸钙、氧化钙、氧 化镁、氧化锌、磷酸氢钙、硅酸、活性炭等。有机附吸附 剂有蔗糖、乳糖、淀粉、菊根粉、纤维素等。按其吸附力 的大小分为弱、中、强三类，见表6-1。
表6-1 吸附剂按吸附力分类
③ Zn2+＞Cu2+＞Ni2+＞Co2+＞Fe2+＞Ba2+＞Sr2+＞Ca2+＞ Mg2+
弱酸性阳离子交换树脂对氢离子的亲和力特别高，因 此再生为氢型时仅需很少量的酸。
第23页/共129页
色层分析法
强碱性阴离子交换树脂对各种离子的亲和力次序如下： 柠檬酸根＞SO42-＞C2O42-＞I-＞NO3-＞CrO42-＞Br-＞SCN＞Cl-＞HCOO-＞OH-＞F-＞CH3COO弱碱性阴离子交换树脂对氯氧根离子有较高的亲和力。 对各种酸的亲和力次序如下： 芳香磺酸＞柠檬酸＞铬酸＞硫酸＞酒石酸＞草酸＞磷 酸＞砷酸＞钼酸＞硝酸＞氢碘酸＞氢溴酸＞硫氰酸＞盐酸 ＞氢氟酸＞甲酸＞乙酸＞碳酸 离子交换柱层析法就是利用各种离子对离子交换树脂 的亲和力的不同而达到分离的目的。
色层分析法/共129页
色层分析法
二、分配柱层析 分配柱层析是利用各组分在两种不相混溶的溶剂中的 分配系数不同而得到分离，它相当于一种连续性的溶剂抽 提法。 1．分配系数K 一定量的溶质在两种不相溶的溶剂中达到平衡时，溶质在 两种溶剂中的浓度比值为一常数，此常数称为分配系数。
0-14
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核苷酸类物质 分离提纯等
上海化工 学院
（美） Amberlite
IRA-400
色层分析法
产品 牌号
交换 基团
出
厂 离 子 形
形 状
粒度 （目
）
水分 （% ）
视比重 （克/毫
升）
式
弱酸 101× 128
（724 ）
— COOH
（甲 基丙 烯酸 型）
—
H型
球 状
1650
≤60
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色层分析法
用作吸附剂的材料很多，可分为无机吸附剂与有机吸 附剂，常用的无机吸附剂有氧化铝、碳酸钙、氧化钙、氧 化镁、氧化锌、磷酸氢钙、硅酸、活性炭等。有机附吸附 剂有蔗糖、乳糖、淀粉、菊根粉、纤维素等。按其吸附力 的大小分为弱、中、强三类，见表6-1。
表6-1 吸附剂按吸附力分类
③ Zn2+＞Cu2+＞Ni2+＞Co2+＞Fe2+＞Ba2+＞Sr2+＞Ca2+＞ Mg2+
弱酸性阳离子交换树脂对氢离子的亲和力特别高，因 此再生为氢型时仅需很少量的酸。
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色层分析法
强碱性阴离子交换树脂对各种离子的亲和力次序如下： 柠檬酸根＞SO42-＞C2O42-＞I-＞NO3-＞CrO42-＞Br-＞SCN＞Cl-＞HCOO-＞OH-＞F-＞CH3COO弱碱性阴离子交换树脂对氯氧根离子有较高的亲和力。 对各种酸的亲和力次序如下： 芳香磺酸＞柠檬酸＞铬酸＞硫酸＞酒石酸＞草酸＞磷 酸＞砷酸＞钼酸＞硝酸＞氢碘酸＞氢溴酸＞硫氰酸＞盐酸 ＞氢氟酸＞甲酸＞乙酸＞碳酸 离子交换柱层析法就是利用各种离子对离子交换树脂 的亲和力的不同而达到分离的目的。
层析法-理论ppt课件
方法：
(1) oligo(dT)-纤维素层 析柱法
(2) oligo(dT)-纤维素液 相结合离心法
(3)磁珠分离法
oligo(dT)-纤维素层析柱法
磁 珠 分 离 法
配体与载体结合
(固相化)
亲和层析
装柱
的基本过程
(亲和层析柱)
解吸附 洗柱
亲和吸附
(生物高分子与配体专一结合)
配体与载体的联接方法
固定相——滤纸上的吸附水 流动相——溶剂(乙醇、丙醇、丙酮及与水不相溶
的溶剂)
分离示意图
层 析 纸
层析缸
溶剂前沿
y x2
x1 起始线
(原点)
展开剂
Rf > 0.02 ，A 、B可分离. 与标样比较可定性鉴定
. 如果两种氨基酸的迁移速率相近，
或者氨基酸的Rf值相同，如何来分
离？
氨基酸的Rf值
展开剂 正丁醇+吡啶+水
名称
分离原理
固定相只能与一种待分离
亲和层析法 组份专一结合，以此和无 亲和力的其它组份分离
层析法的分类
• 按操作形式不同分类
名称
操作形式
柱层析法 固定相装于柱内，使样品沿着 一个方向前移而达分离
纸层析法 用滤纸作液体的载体，点样后 用流动相展开，使各组份分离
将适当的高分子有机吸附剂制成 薄膜层析法 薄膜，以类似纸层析方法进行物
加入样品 层析后
实验：胡萝卜的 柱层析分离法
柱层析示意图
薄层吸附层析
( Thin layer absorption chromatography)
薄层吸附层析是将吸附剂 均匀地在玻璃板上铺成薄层， 再把样品点在薄层板上，点样 的位置靠近板的一端。然后将 板的这端浸入适当的溶剂(流 动相)中，使溶剂在薄层板上 扩散，并在此过程中通过吸附 →解吸→再吸附→再解吸的反 复进行，而将样品各个组分分 离出来。
第四章色层分析法1
常用的吸附剂有Al2O3，硅胶， 羟基磷灰石，聚酰胺等。
2019/11/19
18
（1）硅胶
硅胶是由聚硅酸脱水制得的颗粒状吸附剂
2019/11/19
19
活化：在１０５～１１０℃加热３０min活化 不同形式（H/G/F） 粘合剂（煅石膏：牢度差，不能用于分离无机 物；羧甲基纤维素：牢度好，不能用腐蚀性显 色剂；淀粉：不能用于分离有机物）
（adsorption chromatography）
1.原理
2.吸附剂的类型及其选择
3.流动相及其选择
2019/11/19
8
吸附
指在固体或液体内部或表面的选择性传递。 被吸附的物质称为溶质，固体材料称为吸附剂。
2019/11/19
图15.1
9
吸附层析
混合物随流动相通过由吸附剂组成的 固定相时在固定相和流动相作用下发生 吸附、脱附、再吸附、再脱附的反复过 程。
XAD-9
苯乙烯 苯乙烯 苯乙烯 α -甲基丙烯酸甲酯
亚砜
二乙烯苯
二乙烯苯
二乙烯苯
双（α -甲基丙烯酸） 乙二醇酯
非极性 非极性 非极性 中极性
极性
XAD-10
丙烯酰胺
极性
XAD-12
氧化氮类
强极性
Diaion 系列
HP-10
苯乙烯
二乙烯苯
非极性
HP-20
苯乙烯
二乙烯苯
非极性
HP-30
苯乙烯
二乙烯苯
中药提取液－通过吸附树脂－吸附上有效成分的树脂
－洗脱－洗脱液－回收溶液－药液－干燥－半成品
由于吸附和筛选原理，有机化合物根据吸附力的不同 及分子量的大小，在吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而 分开
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吸附等温线：在一定温度下，某种组分在吸附
剂表面达平衡状态时在两相中浓度的相对关系 曲线。
吸附等温线的斜率KD表示分配系数，Cs表示 溶质在固定相中的浓度，Cm表示溶质在流动相 中的浓度达到平衡时在固定相中的浓度
2020年10月19日星期一
色层分析法 第温线
20-80 -----
表面积Sg m2/g
300-500 100-350 80-700
颗粒密度ρp g/cm
1．09
1．25 ----
25oC,4.6mmHg 下吸附水能力
wt%(干重) 11
7
----
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 16 页
活化
吸附剂一般可分为极性和非极性两类。
极性吸附剂包括氧化物、氢氧化物和盐，在吸
吸附
指在固体或液体内部或表面的选择性传递。 被吸附的物质称为溶质，固体材料称为吸附剂。
2020年10月19日星期一
图15.1
色层分析法 第 9 页
吸附层析
混合物随流动相通过由吸附剂组成的 固定相时在固定相和流动相作用下发生 吸附、脱附、再吸附、再脱附的反复过 程。
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 10 页
交联葡聚糖、琼脂糖
树脂、离子型纤维素、葡聚 糖等离子交换剂
柱层析 柱层析、薄层层析
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 7 页
一．吸附层析
（adsorption chromatography）
1.原理
2.吸附剂的类型及其选择
3.流动相及其选择
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 8 页
硅胶具有微酸性，可用于分离酸性和中性物质， 如有机酸、氨基酸、甾体激素、类脂，萜类及 色素等物质，硅胶用量一般是样品量的
３０～３６倍。
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 20 页
（2）氧化铝
Al2O3是由Al(OH)３脱水制得，Al2O3表面存在铝羟基Al－ＯＨ， 由于羟基的Ｈ键作用而能吸附其它物质。
常用的吸附剂有Al2O3，硅胶， 羟基磷灰石，聚酰胺等。
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 18 页
（1）硅胶
硅胶是由聚硅酸脱水制得的颗粒状吸附剂
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 19 页
活化：在１０５～１１０℃加热３０min活化 不同形式（H/G/F） 粘合剂（煅石膏：牢度差，不能用于分离无机 物；羧甲基纤维素：牢度好，不能用腐蚀性显 色剂；淀粉：不能用于分离有机物）
第三章 色层分析法
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 1 页
色层分析法提纲
吸附层析 分配层析 亲和层析 凝胶层析 实验技术
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 2 页
●概述
色层分析法最早始于1900年。
1931年,R.Kuhn 等人分离复杂的有机混合物
1941年, 分配层析概念以及液-液分配层析的塔 板理论。
1944年, 纸层析。 50年代开始, 出现了气相层析、液相层析、高
效液相层析、薄层层析、离子交换层析、凝胶 层析、亲和层析等,层析法和其它技术的联用。
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 3 页
茨维特的实验
石油醚
碳酸钙
色层分析法是由流动相，带着被分离的 物质流经固定相，在移动过程中，各种 溶质受到固定相不同程度的作用，从而 使试样中的各种组分分离。
附过程中，离子与偶极、偶极与偶极的相互作 用起主导作用。
非极性吸附剂如活性碳，硅胶等，吸附作用主
要是色散力作用的结果。
影响吸附剂性质因素：化学结构、吸附剂的溶
剂化作用以及吸附剂的预处理、吸附剂的物理 状态
2020年10月19日星期一
色层分析法 第 17 页
在选择吸附剂时，一般是根据吸附剂和被吸附 物质理化性质进行的。极性强的吸附剂易吸附 极性强的物质、非极性的吸附剂易吸附非极性 的物质。但是为了便于解吸附，分离弱极性的 组分选用极性强的吸附剂，分离极性较强的组 分应选用极性小的吸附剂。
类型 吸附层析
原理
固定相
常用操作方式
吸附力，疏水力和静 硅胶Al2O3 、活性炭、羟基 柱层析、薄层层析
电力
磷灰石
分配层析
硅胶、纤维素、滤纸、硅藻 纸层析、柱层析、
分配系数、溶解度
土
薄层层析
亲和层析
生物分子亲和力
带配基的琼脂糖、葡萄糖以
及硅胶等
薄层层析、柱层析
凝胶层析 离子交换层析
排阻效应 离子间作用力
Ａl2O3可分为中性、酸性、碱性三种。
中性氧化铝适用于醛、酮、酯、内酯化合物及某些苷的分离； 酸性氧化铝适用于酸性化合物，如酸性色素、某些氨基酸， 以及对酸稳定的中性物质的分离； 碱 性Ａl2O3适用于分离碱性化合物如生物碱、醇以及其它中 性和碱性物质。 一般讲，能用酸性或碱性氧化铝分离的物质 也可 用中性的氧化铝分离。 一般Ａl2O3用量为样品量的5～２０倍。
1．原理
吸附层析是通过样品在固定相和流动相之间的 吸附、脱附作用而实现分离的，这种吸附作用 是一种物理吸附，通常是单分子层或双分子层 或多分子层。
包括几种作用力，被分离样品与吸附剂之间相 反电荷基团与基团之间的静电引力，氢键、偶 极分子之间定向力及范德华力等。
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按固定相的装填方式分类
柱层析：固定相装填在管中成柱形，在 柱中进行的层析分离；
纸层析：利用滤纸作为固定相的层析分 离；
薄层层析：固定相在玻璃板、铝膜等支 持物上铺成薄层的层析分离。
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根据分离的原理分类
抗污染性强；
价格便宜。
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吸附剂的多孔结构，粒度和粒子形状是影响色 层系统特性的基本因素。
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几种常用的固体吸附剂
吸附剂
特性大
孔径dp Å
硅胶 亲水无定形 40-80
Al2O3 亲水无定形
聚合物
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2．吸附剂的选择
高选择性以实现很好分离；
高容量以减少吸附剂的使用量；
对于快速吸剂具有很好的动力学和传递特性；
具有化学和热稳定性，在流动相中不溶解以保持吸附剂特性；
具有一定的机械强度和惰性，防止破碎和腐蚀；
易于充填或铺层；
不会与欲分离试样和流动剂发生化学反应；