寒兰组培苗牛根培养的多网子正交试验研究

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兰花组织培养和分子生物学研究进展

研究者们一般很少用花梗节间段作为外植体。鲁雪华、郭文杰等在２００２年成功地用蝴蝶兰的花梗节问段诱导出原球茎，并且通过实验表明花梗节间段形成类原球茎的频率明显高于其它外植体（茎尖、根尖）。苏加乐等也成功利用蝴蝶兰的花梗节间段高效诱导出原球茎和增殖口。。１．１．５根作为外植体
Ｓｔｅｗａｒｔ等用树兰（Ｅｐｉｄｅｎｄｒｕｍ）的根首次成功地培养出了原球茎和从愈伤组织分化出１株苗。后来，根的诱导相继在不同兰花中获得了成功。徐宏英等用大花蕙兰的幼根成功地进行组织培养，来检测其快速繁殖的影响因素。６。。但由于兰花的根部是共生菌根，所以根部作为外植体较难灭菌，在组织培养的过程中较容易污染。１．２组织培养基和添加物研究１．２．１组织培养基研究
在自然条件下兰花种子虽多，但由于其不具有发育完全的胚，且种皮致密、透性差或种皮中含有抑制物使种子很难萌发。自ＮｏｅｌＢｅｒｎａｒｅｄ在１８９９年创立了兰花种子共生萌发法后，研究者们接着发现大部分兰花种子也可以通过无菌萌发的方式进行，即非共生萌发。兰花种子的非共生萌发已在蝴蝶兰、石斛兰、文心兰等兰花中取得成功。２００５年中国科学院昆明研究所首次利用种子成功的诱导出云南野生拖鞋兰和独蒜兰。由于种皮致密等原因，对部分兰花种子的预处理也有利于兰花种子的萌发。田梅生等用剪刀将四季兰种皮剪破后种子的萌发率大大提高。１．１．４花梗节问作为外植体
收稿日期：２００８—０８—０４；修回日期：２００８—０９—２１作者简介：丁秋露（１９８６一），女，专业方向植物组织培养和分子生物学，Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｉｕｌｕ２０７＠ｓｏｈｕ．ｅｏｍ；通讯作者：赵品军，Ｅ—ｍａｉｌ：ｈａｎｊｕｎｚｈａｏ＠１６３．ｃｏｎ。基金项目：教育部科学技术研究重点项目（２０６０６６）；安徽省教育厅自然科学研究重点项目（２００６ＫＪ０６１Ａ）

兰花组培技术研究

厂园艺与种苗
＼，
兰花组培技术研究
魏光平
（山东省莱芜市林业和城乡绿化局山东省莱芜市２７１１００）
摘要：兰花具有淡雅的香气，能够改善室内湿度，同时是我国传统的名花，是君子的代表。当前兰花已经逐渐进入到
家庭中，市场上兰花销售量逐渐增多，为了满足市场需求，兰花培育和繁殖技术不断发展。本文将针对兰花组培技术展开
择中，应当根据兰花的特性和环境确定基质种类。通常苔藓和泥肥，２－３周后，待新根长出，才能施肥。一般以１５００—２０００倍水液
碳是兰花移栽基质必要成分，该基质的持水能力强，将ｐＨ值控性速效肥料每１５－２０ｄ浇一次。当夏季气温高于３０ｃ以上或冬季
制在微酸性，通常为３．８－４．５之间。比如洋兰组培常选用苔藓为进入休眠状态不宜施肥。
１．２根
无根苗和有根苗。在种植前应当先在水中浸润１ｄ的花盆，然后
因为组培苗的生长是在不同于自然外界环境，长此以往导致晾干并保证花盆无菌，然后在底层放置碎砖，再放入树蕨根、水苔
根系功能不够完善，缺乏良好的吸收功能，导致组培面一旦移植等，铺平后挖出小洞并小心将小苗放入其中，然后固定。之后，洒
经过半日的炼苗后可以进行组培苗移栽。移栽中，用小竹签
地贮存水分，加上缺乏完善的疏导系统，很容易因为供水不足出从瓶中轻轻移出组培苗，要注意保护嫩芽和根系组织，用清水洗
现萎蔫死亡的情况。
净组培苗根部和基部培养基并晾干，将组培苗分成两类，分别为

兰花组织培养和分子生物学研究进展

Ｋｅｗｏｄ：ｏｃｉｙｒｒｈｄ；ｔｓｅｃｌｒｉｕｕｔｅ；ｍｏｅｕａｉｌｇｓｕｌｃｌｒｂｏｏｙ；ｇｎｔｒｎｆｒｔｎｅｅｉｔｓｍａｉｃａｏｏ
兰花是整个兰科植物（ｒｉａｅｅ的总称。兰科Ｏｃｄｃａ）ｈ
物中最高度演化的一科，６个亚科７５属２００余有２５０种，泛分布于全球各地。兰花在中国约有１０个属广７
１０２０余种，分布较为广泛，几乎全国各省都有。其中，青藏高原就有９９属４４种及９个变种，东有７７广１属２８种一０。兰花不仅具有极高的观赏价值，还具有独特的食用和药用价值。兰花的根、、、、叶花果种子均有很高的药用价值。印度人曾经用兰花ＥｉｓｉｌｒｐｉＬｎｅｏｓｄｙ治疗唇疮，同时其还可以舒缓牙龈和口腔黏膜的不适。不仅
年来发展迅速，对兰花组织培养中原球茎的诱导和培养基选择的国内外研究进行了综述；并对近年来应用分子标
记、转基因等分子生物学技术研究兰花的遗传多样性、系统分类和基因功能进行综述。
关键词：兰花；组织培养；分子生物学；转基因
２ｏｌｇｆｉｃｅｃ，ＡｈｉＮｒａｎｖｒｉ，Ｗｕｕ２１０ｍｌｉｅｓｙｅＬｅＵｔｈ４００，Ｃｉａｈｎ）
Ａｂｓｒｃｔａｔ：Ｏｒｈｉｓｔｎｅｏｈａｇｓｏｒｎｇｐａｔｆｍｉｅ．Ｔｈｖｌｅｏｒｈｄｉｃｅｔｆｃｒｓａｃｎｃｎｏｈｓｂｅｃｄｉｈｅｏｆｔｅｌｒｅｔｆｗｅｌｉｌｎａｌｓｉｅａｕｆｏｃｉｎｓｉｎｉｅｅｒｈａｄｅｏｍｙａｅｎｉｐｉｒｔｅｔｏ．Ｏｒｉｉｓｅｃｈｕｅｈｓｂｅｖｌｐｅｕｃｌ．Ｔｈｒｇｅｓｉｒｈｉｉｓｕｌｅｓｃｓｔｒｇｎｏｒｔ．ａｄｍｏｅａｔｎｉｎｃｈｄｔｓｕｕｒａｅｎｄｅｅｏｄｑｉｋｙｅｐｏｒｓｎｏｃｄｔｓｕｅｃｔｕｈａｈｅｏｉｆｐｏｏｕｒｉ

兰花组织培养技术研究

• 周全，余平（2009)用素心春兰进行实验，先用液体培养后转入固体培养有利于春兰根状茎新生长点的产生，采用固体培养的重量增殖倍数最高，而用液体培养的效果最差。
4植物生长调节剂对兰花组培的影响
• 常用的外源生长物质主要是生长素类（IAA、 IBA、NAA和2,4-D等）和细胞分裂素类（BA、KT和ZT等）。
• 黄磊等（2004）用春兰和大花蕙兰（C. hybrids）的杂交种子，经非共生萌发得到了无菌试管苗。
种子消毒的方法
• 先用镊子取出花粉块，轻轻放在柱头上。授粉成功后，子房逐渐膨大，结果。剪下果实。用75%浸泡30S,倒人次氯酸钠溶液消毒20MIN，蒸馏水洗净4次,切开果实,播在培养基上，进行无菌繁殖，3-4个月就可发芽。
• 石乐娟（2006）以茎尖诱导产生的春兰‘绿云’(Cymbidium goeringii‘Ltiyun’)腹轮艺品种的类原球茎为材料进行实验。
培养基 Culture medium
根状茎增殖倍数 Muhiplication ratio
1／2MS(固体Solid 3．333±0．50 state)
茎尖消毒方法
• 先在栽培2、3年的兰株根部．切取2～3 cm的生长芽。用流水冲洗20 min。在温度为22～25℃的无菌组培室里。把最外面的l～2片苞叶去掉，放在次氯酸钠溶液中浸泡l5 min，灭菌。然后剥离。切割成2～5 mm的茎尖，接种到准备好的培养基上，移至培养场所。3~4个月后发出根状茎。
种子成熟度对发芽的影响
• 郑琪，赵虎等（2007年）用春兰（小打梅）×春兰（绿壳素）、进行实验，发现未成熟种子的发芽速度最快，快的30 d发芽，最慢的60 d发芽均比同组合的成熟种子提早发芽。

建兰与寒兰杂交后代试管花诱导及其形成过程的形态学及细胞学观察

建兰与寒兰杂交后代试管花诱导及其形成过程的形态学及细胞学观察传统育种方法中，杂交是一种常用的手段。

通过杂交，可以获得具有更好性状的后代，并且可以进一步进行选择和繁育，达到改良品种的目的。

而在现代生物技术的应用中，试管花诱导是一种将花器官的发育过程移至体外环境中的方法，可以在无性花期利用体外培养技术进行花器官的诱导和发育。

本次研究主要观察了建兰与寒兰杂交后代试管花诱导及其形成过程的形态学及细胞学观察，以下将详细介绍研究内容。

首先，选择建兰和寒兰作为研究材料，分别进行花器官的处理和培养。

首先，分离建兰和寒兰的花蕾，并去除外部的花瓣和花萼。

然后，将花蕾置于含有植物生长调节剂的培养基中，进行试管花诱导。

在培养的过程中，观察并记录了花器官的形态变化和细胞的增殖情况。

在试管花诱导的过程中，观察到杂交后代花器官的形态学变化。

首先，花蕾开始肿大，并逐渐形成一个较大的花瓣结构。

而在花器官的发育过程中，花瓣的形状和颜色也发生了变化，出现了一些与建兰和寒兰不同的特征。

同时，花瓣的表面也开始出现细胞伸长和分化的现象，形成了细长的纤维状结构。

这些形态的变化表明，试管花诱导过程中，建兰与寒兰的特征在后代中发生了融合和混合。

除了形态学的观察之外，还对试管花中的细胞学变化进行了观察。

使用光学显微镜和电子显微镜对试管花中的细胞进行观察，并进行了细胞核的染色和染色体的观察。

观察结果显示，试管花中的细胞核数量和结构发生了变化，具有建兰和寒兰特征的细胞核混合在一起。

同时，染色体也发生了重组和重排的现象，进一步证实了建兰与寒兰进行杂交后代试管花诱导过程中的基因重组和混合现象。

综上所述，本次研究通过形态学和细胞学的观察，揭示了建兰与寒兰杂交后代试管花诱导及其形成过程中的形态学和细胞学变化。

研究结果表明，在试管花诱导的过程中，建兰与寒兰的特征发生了融合和混合，形成了具有新的特征的后代。

这些结果对于了解花的形态发育和杂交育种的机制具有重要意义，也为进一步利用试管花诱导技术改良品种提供了参考。

兰花多倍体育种研究进展_金草在线-中国金线莲行业站

兰花多倍体育种研究进展_金草在线-中国金线莲行业站兰科植物种类繁多，是有花植物中最大的家族之一，仅次于菊科。

其中，具有一定观赏价值的兰科植物统称兰花。

在世界各地育种家的不懈努力下，兰花已跻身于世界主流观赏花卉的行列。

目前，花育种仍以传统的杂交育种为主，但随着现代生物技术的发展，基于细胞水平、分子水平的新育种技术不断涌现。

作为生物技术育种手段之一的多倍体育种具有诸多其他育种手段不可替代的优势，并且越来越受到们的重视。

一、兰花多倍体育种的意义1、提高兰花的观赏价值花朵是兰花的主要观赏部位，改良花朵的外部形态是兰花育种工作的主要目标。

而染色体组加倍的植物往往表现出器官的“巨大性”。

通过多倍体诱导的方法可以培育出花朵巨大，花色浓郁，质地厚重的兰花新品种。

同时，多倍体育种可以使花植株粗壮、叶片宽阔，从而进一步提高花的整体观赏价值。

2、克服远缘杂种不育性在兰花的杂交育种工作中，为了获得更多优良性状，通常会使用远缘杂交的方法来培育新品种。

但由于两个亲本染色体数目不同等原因导致杂种F1细胞在减数分裂时染色体无法联会。

因此，远缘杂交的后代往往是不育的。

通过对杂种F1进行染色体组加倍，使其细胞在减数分裂时能够正常联会，从而克服远缘杂种的不育性。

3、利用多倍体作为遗传媒介染色体加倍可以克服杂种不育性，将多倍体作为遗传育种的媒介已在育种工作中普遍应用。

例如，提高花的抗病性、抗寒性等是兰花育种工作的重要目标之一。

在育种工作中，需要将原生种的优良抗性基因导入栽培种。

利用诱导多倍体的方法克服杂种后代不育性，并结合杂交、回交等方法可培育出带有优良抗性基因的新品种。

二、多倍体诱导技术在兰花育种中的研究进展1、兰花多倍体育种现状目前，石斛兰、大花蕙兰、蝴蝶兰、文心兰等的多倍体育种已有涉及，并获得了一定的成果。

李涵等使用秋水仙素诱导二倍体齿瓣石斛，成功获得四倍体植株；张莹等使用秋水仙素诱导二倍体石斛杂交品种Den.utopia‘Messenger’×Den.whit-erabbit‘Sakurahime’获得四倍体植株；杨丽娟等使用秋水仙素诱导二倍体大花蕙兰品种野红宝石冶获得四倍体植株；崔广荣等使用秋水仙素诱导蝴蝶兰二倍体品种Phalaenopsis Tsuei Foa Lady获得成功；崔广荣等使用秋水仙素诱导二倍体文心兰品种“金西”获得成功。

兰友走访-致力于兰花种质资源收集和学术研究的陈波先生（三）拾伍

兰友走访-致力于兰花种质资源收集和学术研究的陈波先生（三）拾伍（三）四、提倡兰花专业学术研究在兰花中，寒兰花守的美在线条与飘逸。

那细长的外瓣展开平肩或飞肩精气神特别佳，花形大，舌头大是寒兰中最为常见的显现形式。

一般的花朵直径都能达7-8厘米，最长者达到10厘米以上。

另外，花朵之间的排序疏朗有致朝向各异洒脱耐看。

花朵数量至少4朵，10朵左右为常见，最多见过20朵以上的。

花莛细长，骨感强硬，有赤绿之分，小花柄长，故花守转茎特佳。

一莛花扶摇直上随风摇曳，宛若凌波仙子，空灵飘逸，这就是寒兰之美。

寒兰的花色亦丰富，紫、绛紫、绿、红、黄、黑、白都有出现，其舌头除了大的优点尚有多种形状如：大圆舌、大柿子舌、大铺舌、龙吞舌、如意舌、卷舌、拖舌等。

寒兰中目前有几只绿蕙就是配有雪白的大圆舌，副瓣平伸出去，花形大，其花绽放时美得让人屏住呼吸不忍惊扰。

目前，舌面是以起绒为最高品位，紫红为贵，鲜艳为佳，凝重为优。

舌面的颜色有纯红、纯紫、绿绿、纯白和黄苔等。

散斑形态较为丰富其形点状，竖条状，如品字，如山川，亦有象形出现。

由于舌面较为阔大故表现较为丰富，故寒兰的舌头是他兰无法比拟的，因此说围绕舌头进行审美鉴赏很有必要。

寒兰叶姿飘逸度极佳，有直立、上垂、半垂、甩尾，株形都以紧凑为主，给人以一处挺拔感较强之意。

其叶有宽有窄，其形亦是多样，有承露尾叶，有鱼肚叶和“V”形叶面或平面叶，叶质细糯，光泽有亮有哑，有深绿和浅绿之分。

寒兰分四季种，其中是以秋寒兰和冬寒兰的香味为最，春寒兰和夏寒兰次之。

秋寒兰和冬寒兰放香是以低温刺激芳香源分泌的特点，往往初开时香味不足，绽放越久香味越浓郁，常有花开凋谢了还余香阵阵，故有遗香之称，由于其放香是遇低温越冷越香的特点，故称之为冷香。

另外，秋寒兰和冬寒兰花期绽放是在低温区，温度越低凋谢就越慢相应地花期就会越长，故香味存留时间相应地就会拉长。

寒兰的香味虽有冷香遗留的特点，但味别却是具有上乘的清幽之质。

在兰花中其香味和春兰、送春同列最高级别，如果把放香量的浓郁程度进行评比那么秋、冬寒兰是有过之而无不及。

几种中国兰种子试管培养根状茎发生的研究

３
摘耍
对蕙兰和墨兰的种子进行解剖学观察，可以看到种皮由一层透明的细胞组成，种胚为发
育不完全的球形胚，胚内不舍淀粉，仅台腊类作为储存营养物质．试昔培养条件下，球形胚顶端细胞分裂．胚体积增大，胀破种皮，形成类原球茎．其顶端分生组轵细胞继续分裂．形成根状茎．
ｄｅｍａｌａｎｄｃｏｒｔｉｃａｌｃｅｉｌｓｃａｎｂｅｄｉｖｉｄｅｄａｎｄｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏｌａｔｅｒａｌｍｅｒｉｓｔｅｍｕｎｄｅｒｈｏｍｍａｅＬ＇ｃａｌｍｅｎｔ．Ｔｈｅｎａｐｉｃａｌａｎｄｌａｔｅｒａｌ８ｋｍａｒｅｄｉｆｅｔ￣ａｔｉａｔｅｄｉｎｔｏｌｅａｒｂｕｄ．ＡｄｖｅｎｉｔｉｔｏｕｓｒｏｏｔｉＢｄｉｆｅｒｏａｔｉａｔｅｄｆｒａｍｅｐｉｄｅｒ－
取材．
１．２实验方法
形态解剖学观察材料固定于Ｆ从液中，ｌ经酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋后切片（厚
ｌＯ／ａｎ），番红一固绿染色后，用树脂胶封片，显微镜下观察并照相‘ 】．
组织化学观察材料固定于卡诺固定液中，经脱水、透明、石蜡包埋后切片（厚１０ｔａｎ），观察
ＣｈｅｎＪｉｎｙｏｎｇ

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配方，为逐步建立稳定的高频再生系统、现无毒工厂实
国主要分布在福建、浙江、江西、湖南、东等地．广四川及
云贵高原时有发现。寒兰是珍贵的观赏花，｛在自｝于士然状态下繁殖闲难，传统栽培靠分株繁聃，期长，故周繁殖率低ｕ。从１６９０年Ｍｏｅ开创兰花快速组织培养ｒｌ技术以来，花的快速繁殖尤其在中兰的组织培养方兰
ｆｕｔｏｔｎｎｎｏｔｅｅｄｏｔｒｇＧａｔｉｎ ‘ ｉｋ ’ｗａｉｎｆａｔ（ｒｉｓｆｉｇａｄｔｈｎｆｓｏａｅＰｃｉｔｉＮｉａａｅｖｙｔｓｓｇｉｃｎｌＰ＜００一ｈｇｅｈｎ ‘ ｉｇｕｌ；ｉｙ．１ｉｈｒｔａＰｎｇｏｉ ’
５ｃｌ叶浓绿，势良好，ｎ，长符合生根要求，以进行生根可
培养。１１３实验地点在新疆林业科学研究院植物组织培．．养实验室。
１２试验方法．
要从事植物生理生态等研究工作。
基金项目：国家“４ ” 划资助项目（０４４３。９８计２００２）
化、规模化快速培育优良种卣提供科技支撑。
１材料与方法
１１材料的获取．１１１材料．．寒兰（燕品种）根组培苗。紫无利用植物组织培养技术，过继代经１１２获取的方法．．
法上有许多突破。以往关于国兰的快繁研究多集巾在
的离体快繁技术体系，有关寒兰的组织培养却鲜有报
道。该试验通过对无毒寒兰苗培养基中不同激素配比
生根壮苗影响的研究，筛选出有利于牛根壮苗的培养基
第一作者简介：闽敏（９０）女，黄１８一，乌鲁木齐人，助理研究员，现主
北方园艺２９１：～５ｏ（５５０，３）
・验研究・试
寒兰组培苗生赧培养的多因子正交试验研究
黄闽敏，刘晓芳，曹青爽
（疆林业科学院测试『心，新１１新疆乌鲁木齐８００）３００
摘
要：应用正交试验设计对寒兰组培苗的生根培养进行研究。结果表明：兰组培苗生根寒
的最佳培养基为花宝２号培养基＋ＮＡ０１ｎ＋ＩＡ０５１＋香蕉５／，中培养基种Ａ．ｌＬＲ．１Ｌｇｌｇ０ｇＬ其
类和天然复合物对其影响最大，过方差穷析达到了极显著水平。通

关键词：兰；根培养；交试验寒生正中图分类号：８．１Ｓ６３６文献标识码：Ｓ６２３；０．Ａ寒兰（ｙｂｄｕａｒ￣Ｍａｉｏ属兰科兰属，我Ｃｍｉｉｍｋｔａｋｎ）ｌｚ在文章编号：０１００（０９０－０５－０１０－０９２０）４０３３
ＰＩＡＯｉｏｇ．Ｙ — ｎＺＨＡＯ．ｎｈａ，ＵｌＩａｕＷＲｏｎ－ｈｇｚｅ
（ｒｕｔｒｌｏｌｇｆｎｉｉｅｓｔ，Ｌｏｇｉｇ，ｉｎ１３０Ｃｈｎ）ＡｇｉｌｕａＣｌｅｏｂａＵｎｖｒｉｃｅＹａｎｙｎｎＪｌ３４０，ｉａｉ
收稿日期：（］— １－０２Ｊ８１２（
ＣｈｎｅｉｅｔｃｍｐｓｔｎＥｎｙｅＤｕｉｇＳｏａｅｏａｒｉｓａｇｎＰｃｉＤｅｏｏｉｉｚｍｒｎｔｒｇｆＰｅｒＦｕｔｎｏ
对春兰、兰、兰和墨兰等组织培养，且建立了相应剑蕙并
培养后获取。继代培养：＋Ｂ．ｇＬ＋ＮＭＳＡ１０ｒ／ａＡＡ００ｇＬ培养基中加蔗糖３／琼脂５ｇＬｐ值．１ｒ／，ａ０ｇｉ、／，Ｈ调至５８．。将初代培养后的小苗在无菌条件下转接到继代培养基中进行继代培养；培养４在０ｄ后，高达３苗～
ＡｂｔａｔＣｏｐｒｄｔｅｖｒｅｙｏｅｔｎｄｃｍｐｓｔｏｎｙｅｄｒｎｒｉｓｆｅｉｇｓａｅｉＷＯ ‘ ｎｇｏｉｎ ‘ ｉ — ｓｒｃ：ｍａｅｈａｉｔｆｐｃｉｅｏｏｉｉｎｅｚｍｕｉｇｆｕｔｏｔｎｎｔｇｎｔＰｉｇｕｌ’ａｄＮｉａｔｋａｐｃｅｈｔｈｖｉｆｒｎｔｒｇｏｅｔｌａｄｉｖｓｉａｅｈｃｉｉｙｃａｇｎｐａｅｔｎｄｃｍｐｓｔｎｅｙｅ ’ｓｅｉｓｔａａｅｄｆｅｅｔｓｏａｅｐｔｎｉ，ｎｎｅｔｇｔｄｔｅａｔｔｈｎｅｉｅｒｐｃｉｅｏａｖｏｉｉｎｍｏｚｄｕｉｇｓｏａｅｓａｅＴｈｅｕｔｈｗｅｈｔｔｅｐｌｇ１ｃｕｏａｅ（ｒｎｔｒｇｔｇ．ｅｒｓｌｓｓｏｄｔａｈｏｙａａｔｒｎｓＰＧ）ａｔｖｔｓｉｃｅｓｄｉｗｏｓｅｉｓｄｒｎｃｉｉｙｗａｎｒａｅｎｔｐｃｅｕｉｇ