NKCP精制纳豆菌培养物
日本从2000年起开始展开了21世纪增进国民健康运动(健康...
高纯度纳豆菌培养物 NKCP开发NKCP的背景日本从2000年起开始展开了21世纪增进国民健康运动（健康日本21）。
此运动的理念特征在于，除了强调通过增强体质来延长寿命以外，还提倡要重视提高生命的质量即QOL。
用通俗的话来讲，就是“健康长寿”。
而血栓形成是妨碍“健康长寿”的重大风险因素。
在日本人的三大死因之中，心脑血管疾病占了30%左右。
也就是说，起因于当代日本人生活方式的血栓占了较大的比例。
另外，一旦血栓形成，即使免于死亡也会留下严重的后遗症,有的需要长期卧床，甚至由此导致终身卧床不起。
我们平时经常体验到的肩膀酸痛、习惯性头痛、手脚发冷、头晕等不仅在一定程度上降低了QOL，而且被认为与易形成血栓的血液状态有关。
我们认为，降低血栓形成的风险、稳定血液的凝固和纤溶状态，从而防止血管阻塞，将有利于提高健康质量、延长寿命。
这才是真正有意义的增进国民健康。
开发NKCP的经过我们着眼于日本传统食品“纳豆”中含有的作用于血液纤溶与凝固系统的成分，从而研究开发出了NKCP。
有报告认为，这种成分是由纳豆生产过程中使用的纳豆菌（B. subtilis natto）所产生的、能够分解缩氨酸的一种蛋白质。
由此可见，经常吃纳豆能够降低血栓形成的风险。
但是，如果出于增进健康而摄取纳豆的话，以下几点需要改进：1) 因为纳豆具有独特的风味，所以受个人嗜好的影响较大；2) 有研究证明因其含有大量的促进凝血的维生素K2，所以对血液抗凝剂有拮抗作用；3) 市场上的纳豆制品中的有效蛋白质含量参差不齐。
由此，我们扬长避短，在提高纳豆实用性的基础上开发出了一种新型食品素材，高纯度纳豆菌培养物<NKCP>。
NKCP是在大豆成分构成的液体培养基中对纳豆菌进行培养，然后通过部分精制加工，使纳豆的气味、菌体以及维生素K2的含量减少到没有问题的程度。
同时，NKCP的缩氨酸分解蛋白酶能够控制在一定含量。
本纳豆菌培养物及其制造方法已经作为第3532503号专利登记注册。
纳豆激酶
纳豆激酶纳豆激酶(nattokinase简称NK)是一种枯草杆菌蛋白激酶，是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌(Bacillus subtilisl natto)产生的一种丝氨酸蛋白酶。
具有溶解血栓，降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用。
1980年在纳豆中被发现，由275个氨基酸按照固定排列方式组成，分子量是27724，有分解血栓的独特功能，活性效果用固有单位Fu表示。
目录1概述医学实验神奇之处作用研究药理作用含量标识2理化特点3选择方法4剂型对比5服用方法服用禁忌注意事项6调控机制7分解血栓8理化特性9分子改造10主要功能概述纳豆激酶的发现来自著名的"两点半实验"须见洋行博士1980年的一天，从事溶解血栓药物研究工作的日本心脑血管专家须见洋行博士，他突然想起纳豆不是纤维蛋白发酵的吗？而血栓最顽固的部分就是纤维蛋白，于是，下午两点半时，须见洋行博士把纳豆中提取的物质加入到人工血栓中。
原本准备第二天看结果的，但5点半的时候，一次偶然的察看，奇迹发生了，血栓居然溶解了2厘米，而平常用尿激酶做溶血栓的实验溶解2厘米需要近两天的时间，也就是说纳豆发酵物溶解血栓的速度是尿激酶的19倍之多。
于是，就将纳豆的这种强力溶栓物命名为纳豆激酶Nattokinase，简称NK，这就是震惊世界的溶血栓药物研究史上有名的“下午两点半”实验。
医学实验日本生物科学研究所与韩国首尔延世大学研究院心脑血管疾病中心共同研究关于纳豆激酶对高血压的效果。
该研究报告的结论是：“总之，纳豆激酶会导致收缩压和舒张压下降。
这个结果表明增加纳豆激酶的摄入，可能对于预防和治疗高血压起着重要的作用。
”该研究报告被国际权威学刊SCI收录(《Japanese society of hypertension》VOL.31NO.8.August，2008ISSN0916_9636)。
日本生物科学研究所与印度孟买市TNMC&BYLNair医院共同进行的急性脑中风患者应用纳豆激酶+低分子肝素+抗凝药物治疗的综合临床研究。
纳豆菌的提取和纳豆的制作
3.在大豆被蒸熟前,在浅盘中铺好锡箔纸，用筷子等 尖细物在锡箔上打多个气孔，灭菌备用。搅拌时 要用的橡胶手套也要用开水灭菌。
4.大豆蒸熟后,不开蒸锅的盖子，直接倾去锅内的水。 将蒸锅的大豆无菌转移到灭菌盆或罐内，立即盖 盖，以免杂菌污染。
实验日程安排
• 第一周：配置牛肉膏蛋白胨培养基，酪蛋白培养基各250ml;100ml无 菌水；包好12个培养皿，6个试管；高压蒸汽灭菌
• 第二周：制备纳豆的稀释液10-2、10-3、10-4，利用涂布平板法对菌进 行培养
• 第三周：对培养出的细菌镜检，将枯草芽孢杆菌进行筛选，接种到酪 蛋白平板上进行筛选
纳豆菌的分离提取步骤
• 菌株分离：取上述品种的纳豆若干粒，放入装有 25mL 无菌水和十余颗玻璃珠的锥形瓶中，室温 下浸提。振荡多次，获得菌悬液，以十倍稀释法 稀释至10-2，10-3，10-4，涂布于牛肉膏蛋白胨 培养基。放入恒温培养箱中，30℃培养24h。
• 镜检：确定培养出的微生物的形态特点。
实验原理
食品纳豆中含有的纳豆菌，主要指枯草芽 孢杆菌（Bacillus natto），在通过其发酵 大豆的过程中，通过枯草芽孢杆菌对蛋白 质和糖类特别的直接利用功能，在枯草芽 孢杆菌的生长过程中，又利用大豆本身的 营养成分，分泌和合成了很多种酶类、维 生素、氨基酸及其它只有纳豆特有的营养 素和生理活性物质，使得发酵后的大豆中 更富营养，称之为纳豆。
5. 在已灭菌的杯中用10ml开水溶解盐（约0.1%）、糖（约 0.2%）和0.01%纳豆菌，如果觉得体积太小，不易均匀喷洒于 大豆中，也可用20—30ml的水，注意水的多少会影响纳豆的粘 滞性和嚼感，将混合液喷洒于大豆中搅拌均匀。 6. 把接种好的大豆均匀地平铺于灭好菌的锡箔纸上，厚约2— 3cm，不宜太厚。将锡箔纸折过来（或用另一种锡箔纸）铺盖 于豆层上面。然后在上面再铺接种好发酵剂的大豆，厚约23cm，上面也盖上一层纱。注意：如果发酵中勇气不好，做出 的纳豆会以苦，如果勇气太大，纳豆表面会过干，不利于充分 发酵。发酵环境的湿度要高。 7. 37—42摄氏度培养20—24h。也可以在30摄氏度以上的自 然环境中发酵，时间适当延长。当发酵完时，纳豆基本上做成 了，揭掉锡箔纸或纱时，会看到豆子表面部分发灰折色，室内 漂满纳豆的芳香。稍有氨味是正常的，但氨味过于强烈，则有 可能有杂菌生长了。
纳豆激酶分离纯化及体外溶栓和溶血作用研究
纳豆激酶分离纯化及体外溶栓和溶血作用研究纳豆是日本的传统大豆发酵食品，由纳豆芽孢杆菌发酵而成，在日本已食用近千年。
1987年，须见洋行等经过对上百种食物的筛选，首次发现纳豆含有溶解血栓纤维蛋白的成分，并命名为纳豆激酶(nattokinase,NK)。
研究表明，NK 是纳豆发酵过程中纳豆芽孢杆菌分泌的一种丝氨酸蛋白酶[1]。
进一步的研究表明，NKc具有很强的体内外溶栓作用，与传统的容栓剂相比，NKc具有易提取、成本低廉和能口服吸收溶栓等优点，因而可能成为新一代的溶栓药物[2-4]。
为了对NKc的开发提供理论依据，本实验室在研究NKc纤溶活性之后，进一步对其体外溶栓和溶血作用进行研究。
1 材料与方法1.1 材料菌株：为本实验室自日本纳豆分离纯化菌种，保存于养琼脂斜面，营养琼脂配方为：细菌培养用胰蛋白胨(bacto-tryptone)，1%；细菌培养用酵母抽提物(b acto-yeast extract)，0.5%；NaCl,0.5%；细菌培养用琼脂粉(bacto-agar powd er)，1.5%PH7.2。
纳豆、纳豆提取液：按文献[5]介绍方法制备。
血平板：用生理盐水配制1%琼脂，加入新鲜脱纤兔血，混匀倾注平板，冷却凝固即成。
主要试剂：凝血酶、纤维蛋白原、标准尿激酶（中国药品生物制品检定所）；蚓激酶(30×104 U•粒-1，北京百奥药业有限责任公司)；牛血清白蛋白(上海生化试剂公司)；低相对分子质量标准蛋白质(兔磷酸化酶：Mr97.4×103,牛血清白蛋白：Mr66.2×103,兔肌动蛋白：Mr43.0×103,牛碳酸酐酶：Mr31.0×103,胰蛋白酶抑制剂：Mr20.1×103,鸡蛋清溶菌酶：Mr14.4×103)（上海生化试剂公司）；其他试剂均为国产分析纯。
1.2 方法1.2.1 NKc分离纯化纳豆提取液经35%～75%饱和度硫酸铵分段盐析，离心收集沉淀，用50mmol•L-1磷酸缓冲液（PH 7.4）溶解，充分透析后获得纳豆激酶粗酶（NKc），再经Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱（1.0cm×60cm）层析，分管收集纤溶活性较高部分，脱盐，冷冻干燥后获得层析纯纳豆激酶（NKc），SDS-PAGE电泳检测纯度。
纳豆菌的分离筛选鉴定及其特性研究
纳豆菌的分离筛选鉴定及其特性研究纳豆菌的分离筛选鉴定及其特性研究引言：纳豆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的芽孢形成细菌，广泛存在于土壤和水环境中。
它是一种重要的生物资源，被广泛应用于食品工业、农业生产、环境保护等领域。
纳豆菌能够分泌多种酶和代谢产物，具有抗菌、抗氧化、生物降解、益生菌等功能。
因此，研究纳豆菌的分离筛选鉴定及其特性对于充分发挥其应用潜力具有重要意义。
一、纳豆菌的分离筛选方法1. 样品收集：采集土壤和水样等样品，需避免污染和持续日晒等因素对采样造成的影响。
2. 纳豆菌的分离：将样品分别加入含适当营养物质的富养培养基中，利用稀释平板法或滤膜法，分离得到单菌落，进一步培养纳豆菌。
3. 分离纯化：将分离得到的单菌落进行传代培养，并以菌落形态、生理生化特性等为指标，通过不同培养基的筛选纯化纳豆菌。
4. 纳豆菌的形态鉴定：通过显微镜观察纳豆菌的形态特征，包括菌体形状、边缘、表面和内部结构等。
5. 纳豆菌的生理生化特性鉴定：包括产气性、嗜热耐酸性、氨基酸代谢能力、酶活性等指标的检测。
二、纳豆菌特性的研究1. 高抗菌活性：纳豆菌分泌的抗菌物质能够抑制多种病原菌的生长，包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
这一特性使得纳豆菌在食品工业中能够被应用于食品保鲜和乳酸菌发酵等领域。
2. 抗氧化能力：纳豆菌的代谢产物具有明显的抗氧化活性，能够清除自由基，减少氧化应激对细胞的损伤。
这一特性使得纳豆菌在化妆品、保健品等领域具有广阔的应用前景。
3. 生物降解能力：纳豆菌能够分解植物纤维素、蛋白质等复杂有机物，具有很强的生物降解能力。
这使得纳豆菌在环境保护方面可以被应用于废弃物处理、土壤修复等领域。
4. 益生菌效应：纳豆菌能够促进人体肠道中有益菌的生长和代谢，改善肠道微生物平衡，提高人体免疫力，对于调节肠道健康具有重要作用。
结论：纳豆菌具有多种重要特性，包括抗菌、抗氧化、生物降解和益生菌等。
通过分离筛选和鉴定纳豆菌的方法，能够为其应用领域的拓展提供有效的技术支持。
2008 纳豆菌高产培养基的成分优化
３．０
２．５
２．０
１％大 豆 蛋 白 胨
１．５
３％大 豆 蛋 白 胨
１．０
５％大 豆 蛋 白 胨
７％大 豆 蛋 白 胨 ０．５
０ ０ ６ １２ １８ ２４ ３０ ３６ 培 养 时 间／ｈ
图 ４ 氮源浓度对菌种生长的影响 Ｆｉｇ．４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
一般来说， Ｇ＋对镁离子的需要量比 Ｇ－ 大。本试 验菌株为革兰氏阳性菌（ Ｇ＋） ， 因此， ＭｇＳＯ４ 浓度是 影响菌种生长的因素之一。 ２．５．２ Ｋ２ＨＰＯ４ 和 ＫＨ２ＰＯ４ 浓度 将基础种子培养 基 中 的 ０．５％ ＮａＣｌ 用 不 同 浓 度 比 的 Ｋ２ＨＰＯ４ 和 ＫＨ２ＰＯ４ 代替， 其它 成 分 不 变 ， 接 种 培 养 ， 每 隔 ２ ｈ 测定其生物量并绘制生长曲线 （ 见图 ６） 。由图 ６ 可 知 ， Ｋ２ＨＰＯ４ 与 ＫＨ２ＰＯ４ 的 适 宜 浓 度 比 为 １∶１， 在 培 养 １２ ｈ 时 达 到 最 大 生 长 量 ， 其 ＯＤ６００ 值 为 ２．２２２， 明显优于其它浓度比的， 且提前 ２ ｈ 达到最 大生长量。
豆粕粉
硝酸铵 ０．５
０ ０ ４ ８ １２ １６ ２０ ２４ 培 养 时 间／ｈ
图 ２ 氮源种类对菌种生长的影响 Ｆｉｇ．２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒｏｗｔｈ
生物量（ ＯＤ６００） 生物量（ ＯＤ６００）
２．３ 碳源浓度对菌种生长的影响 培 养 基 中 大 豆 蛋 白 胨 质 量 分 数 固 定 为 １％，
分不变， 接种培养， 每隔 ２ ｈ 测定生物量并绘制生 长曲线。由图 ２ 可知， 大豆蛋白胨作为种子培养基 的氮源优于其它种类的氮源。菌种对无机氮源利 用 速 度 较 慢 ， 对 豆 粕 粉 的 利 用 速 度 更 慢 ， 其 ＯＤ６００ 一直处于较低的水平。
纳豆菌的分离筛选与鉴定[1]
![纳豆菌的分离筛选与鉴定[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/8cd0e5fb04a1b0717fd5dd47.png)
沈列的鉴定 .............................................................................................. 20
5.4 本实验的优缺点 ........................................................................................................ 20
第 3 章 实验方法 ................................................................................................................. 9
3.1 菌种分离 ..................................................................................................................... 9 3.2 菌种初筛 ..................................................................................................................... 9 3.3 菌种复筛 ..................................................................................................................... 9 3.4 固态发酵感观评价...................................................................................................... 9
纳豆激酶发酵培养基的优化
纳豆激酶发酵培养基的优化姓名: 黄江坤班级：制药132学号：201304040225纳豆激酶发酵培养基的优化一、菌种选择选用纳豆枯草杆菌为发酵菌种二、纳豆菌的特性纳豆菌，通常为（0.7-0.8）um×(2.0-3.0)um,革兰氏阳性。
生长在葡萄糖琼脂的细胞原生质染色均匀。
芽孢椭圆形或柱状，中生或偏中生，即使孢囊膨大，也不显著，有鞭毛，能运动。
生长温度最高为45-55℃，最低为5-20℃。
孢子耐热性强。
三、纳豆激酶基因的表达NK基因起始密码子为GTG,其上游1b7p处为核糖体结合位点AAAGGAG,SD序列上游为刀T含量高达2%的转录调控区域,1143bp的阅读框架编码29个氨基酸的信号肚,77个氨基酸的前导肽及275个氨基酸的成熟肽。
结构基因的3末端为连续3个终止密码子TAA、TAG、TAA,终止密码子之后一段序列可形成茎环结构,即因子非依赖性终止顺序。
NK的最初产物是381氨基酸的蛋白前体。
其中N端的1一23氨基酸残基是信号肽,24一106氨基酸残基是前导肽。
蛋白前体切除N 端的106个氨基酸残基成为275氨基酸残基的成熟纳豆激酶;而去掉信号肽的产物(含前导肽和成熟肽)称为纳豆激酶酶原。
信号肽包含一个带3个正电荷的亲水氮端以及一段不带电荷的疏水残基序列,其功能是使NK正常分泌出胞外,其切割位点位于Ala一Glu一Aal保守序列之后。
信号肽与成熟肽之间具有的前导肽具有帮助NK正常折叠形成活性构象的功能,目前己发现一些与NK基因同源的枯草杆菌素蛋白及链激酶有与此相似的前肽区域。
四、纳豆激酶的蛋白质结构及生化性质：纳豆激酶（NK）是一种丝氨酸蛋白酶，由275个氨基酸组成的单链多肽结构。
NK肽链无二硫键,活性中心在Asp32,His64和Ser221,与底物结合部位在Serl25,Lenl26和Glyl27处。
NK与大多数枯草杆菌蛋白酶在核苷酸序列上和肽链链氨基酸组成上具有高度同源性,它与B.subtilis1168产生的枯草杆菌蛋白酶E仅有13个核苷酸不同,在肽链组成上仅有2个氨基酸不同,它们成熟肽链一级结构的相同性为99.5%;纳豆激酶等电点为pH8.6,纳豆激酶在pH6.0一12.0范围内稳定,pH低于5.0则不稳定。
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NKCP精制纳豆菌培养物精制纳豆菌培养物＜NKCP ＞是我们着眼于日本传统发酵食品纳豆的健康增进作用所研发的一款功能性食品素材。
通过对纳豆菌培养物进行精制，基本去除了纳豆特有的气味及维生素K2，使其成为一种食用方便、且具有高度通用性的功能性食品素材。
NKCP中含有可发挥功效的纳豆菌所分泌的蛋白质（纳豆菌生成蛋白质）。
动物及人体试验结果均表明，持续摄取NKCP可有效维持健康的血液状态。
同时，其安全性也已得到验证。
在日本人的死亡原因中，因心脏病及脑血管疾患而死亡的比率约占30%，所以预防心脏病与脑血管疾患就显得非常重要，这对实现壮年期死亡减少也不例外。
此外，一旦患上此类疾患，即使最终能够免于死亡，也依然可能留下严重的后遗症，从而导致健康寿命缩短、生活质量极度下降。
研究结果表明，此类缺血性心脏病及脑血管疾患多起因于现代日本人生活方式所导致的血栓形成。
近年来的研究进一步发现长时间乘坐飞机后发病的、被称为“经济舱综合症”的“旅客血栓症”是由静脉血管产生的血栓堵塞了肺动脉而造成的“肺动脉血栓栓塞症”所致，且该病症除了乘坐飞机以外，还会在长时间驾车等行为后发病。
此外，就日常生活事例而言，肩部酸痛、脚部浮肿等可能也是因血液粘度上升而造成的末梢循环不良所致。
因此，若能保持血液凝固与纤溶的平衡、预防血栓形成，将会有助于延长健康寿命。
NKCP是我们着眼于日本传统食品“纳豆”所开发的食品。
据报告表明，纳豆中含有可作用于血液纤溶系统，发挥溶解血栓作用的物质，该些物质是纳豆菌（B. subtilis natto）所产生的、具有蛋白分解效能的蛋白质。
在另一方面，在最近的研究中发现，纳豆菌除了产生作用于纤溶系统的物质，还产生抑制血液凝固的物质。
这一发现表明，经常食用纳豆就有可能降低血栓形成的风险。
但是，由于纳豆具有独特的风味、摄取量也会因个人嗜好而异，且因与凝血相关的维生素K2的含量高，对血液抗凝剂有拮抗作用，加上市场上出售的纳豆产品中所含的人体有益物质的量也是大相径庭，要长期保持适当的摄取量存在着相当大的难度。
我们扬长避短，在提高纳豆实用性的基础上开发了食品素材、精制纳豆菌培养物＜NKCP＞。
NKCP 采用含有大豆成分的液体培养基，通过自行开发的方法对纳豆菌进行培养和精制加工，在浓缩有效成分的同时不但彻底去除了纳豆菌，还将纳豆特有的气味及维生素K2含量去除至可正常摄取的范围。
此外，将NKCP 中作用于抗凝及纤溶系统的成分的含量调配在一定范围内。
血液凝固、纤溶系统由复杂的生化反应构成，具有即使活化一个因子也不会导致系统失衡的结构。
这表示血液凝固、纤溶系统不易发生异常，但反之，若一旦失衡则易于形成血栓，再要将失衡的系统恢复至平衡状态则极其困难。
换言之，这意味着一旦形成血栓就非常难以溶解。
由此可见，有效预防血栓形成较溶解血栓更为重要。
NKCP 具有以下目前已知的作用。
① 已确认NKCP 在体外及体内均具有抑制血栓形成的作用。
② 已确认NKCP 在体外及体内均具有降低血液粘度的作用。
③ 已确认NKCP 在体外具有溶解血栓的作用。
NKCP 通过抑制血栓形成及血液粘度上升，将易于凝固的血液维持在正常状态，帮助血液在体内各个部位畅通无阻地循环流通。
同时，口服NKCP 可为血栓创造一个易于溶解的体内环境。
连续摄取NKCP 的效果凝固活性凝固活性纤溶活性纤溶活性连续摄取NKCP恢复原有的凝固 纤溶系统的平衡（1）关于NKCP所具有的功能要降低血栓形成的风险，以下几点至关重要。
1）使血液不易凝固、2）保持正常的血液粘度、3）溶解已凝固的血液（血栓）。
我们在纳豆菌（B. subtilis natto）所分泌产生的物质NKCP中发现了具有以上3大功能的物质。
（2）功能性相关学术数据１）使血液不易凝固的作用①NKCP对人体血液的抗凝作用在从签署了知情同意书的健康志愿者身上抽取的3ml静脉血中添加30μL的对象物质并翻转混合，然后在37℃的温度条件下加热250秒钟，使用乳胶免疫测定装置，对其离心上清中表示血栓形成程度的纤维蛋白单体（FM）进行了测定。
结果表明，添加用于对照的生理盐水时的FM值为160±29.3μg/mL，添加肝素钠（0.5IU/mL）时的FM值为6.0±1.1μg/mL。
NKCP自最终浓度0.005mg/mL起出现剂量依赖性FM减少的现象，FM 值在浓度为0.05mg/mL时显示较低数值，之后未发现FM随NKCP的浓度增加而减少的倾向。
NKCP与纳豆激酶含有物质的抗凝作用NKCP纳豆激酶含有物质浓度(mg/ml)2006年第54 届流变学研讨会独协医科大学法医学教室②NKCP 对大鼠血栓形成模型的抗凝作用我们通过血栓形成模型对NKCP 的抗凝作用进行了研讨。
通过损伤大鼠腹部降主动脉血管内皮细胞引发血小板凝集，由此诱发血栓形成。
采用in situ loop 法制成血栓模型2小时后，将NKCP注入十二指肠内，在注入6 小时后抽取腹主动脉血液，然后分别测定活化部分凝血活酶时间（APTT）及凝血酶原时间（PT）以作为内因性和外因性凝血功能的指标。
测定结果是，注入生理盐水的Control组的APTT为33.5±2.4秒，而NKCP100mg/kg组为52.0±4.5秒、250mg/kg组为63.3±2.9秒，结果表明，NKCP的注入显著地延迟了凝血时间。
PT的测定结果是，Control组为16.7±0.5 秒、NKCP100mg/kg 组为20.6±0.9秒、250mg/kg组为21.3±1.7秒，与APTT 相似，通过PT的结果也同样观察到了凝血时间的显著延迟。
由此可见，NKCP 具有抑制血栓形成的作用。
NKCP对大鼠血栓形成的抑制效果大和药品株式会社研究开发部2）防止血液粘度上升的作用关于NKCP 对人体血液粘度相关作用的研讨我们将已签署知情同意书的8名健康成人男子作为试验对象，让其单次服用1250mg 的安慰剂及 NKCP ，然后在摄取后的240分钟内按时间推移进行采血，由此测定血液粘度的变化。
血液粘度是采用一杉等人的方式，通过振动式粘度计进行测定的。
结果表明，NKCP 组在摄取105及180分钟后的血液粘度较摄取前均呈现出显著下降的变化。
此外，与安慰剂组相比，NKCP 组的血液粘度在摄取180分钟后也呈现出显著下降的变化。
摄取NKCP 时血液粘度的时间推移变化#： 采用邓肯多重比较法得出的与基准线间的差异，p<0.05 *： 采用配对t 检验得出的NKCP 与安慰剂间的差异，p<0.05独协医科大学 法医学教室血液粘度NKCP(n=8) 安慰剂(n=6)45分钟 105分钟 180分钟 240分钟3）溶解血栓的作用①NKCP 对人工血栓的溶解作用在含有人工血栓的生理盐水中加入少量NKCP，几分钟后血栓即开始溶解，3小时后血栓几乎完全被溶解。
(各枚照片的左侧为作为对照的生理盐水，右侧为加入了NKCP的生理盐水)10分钟后1小时后3小时后(取出至培养皿中的状态)J.Pharmacol Sci 99, 247-251(2005)②口服NKCP 对体内血栓溶解模型的作用在食饵中分别加入0.2%及1%的NKCP，然后使用激光照射大鼠肠系膜微血管使其形成人工血栓以建立实验性动脉血栓模型，用此模型研究摄取14周后的血栓溶解作用。
从形成人工血栓起，随着时间的推移测定血栓的大小，对血栓溶解作用进行了评估。
结果表明，与非投与组相比，NKCP经口投与组对内在性血栓溶解活性具有显著的剂量依赖性促进作用。
该作用相当于0.2mg/kg的组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）的功效。
根据用于试验的大鼠体重及摄取量，摄取含有0.2%及1%NKCP的饲料分别被推算为相当于约160mg/kg/天及800mg/kg/天的剂量。
NKCP的血栓溶解作用标准饲料值对相的小大栓血经过时间(分)*p<0.05Pathophysiol Haemost Tromb 2003;33：138-143③血栓溶解相关的源自纳豆菌的蛋白酶我们认为，NKCP对血栓的溶解作用主要源自纳豆菌所产生的蛋白质（Bacillopeptidase F）。
Bacillopeptidase F由与纳豆菌同属一个种的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）产生，并已被确定为分泌于菌体外的5种蛋白酶之一（表1）。
表1 Bacillus subtilis向细胞外分泌的酶1）Journal of Bacteriology, Vol. 172, pp. 1019-1023, 1990.2）The Journal of Biological Chemistry, Vol. 265, pp. 6845-6850, 1990.3）Journal of Bacteriology, Vol. 172, pp. 1470-1477, 1990.4）Experientia, Vol. 43, 1110-1111, 1987.5）The Journal of Biological Chemistry, Vol. 276, pp. 24690-24696, 2001.6）Mol Gen Genet 1990 May; 221(3)：486-90（3）临床试验实绩①关于纳豆菌由来蛋白质对人体血液凝固纤溶系统的影响我们请23名包括存在血栓症危险的代谢性疾病患者在内的普通成人连续2个月摄取NKCP250mg，然后分别对第1个月及第2个月的凝血、纤溶系统参数进行了测定，同时也对试验对象的自觉症状进行了调查。
结果表明，ELT在第1个月及第2个月较摄取前显著减少，同时，t-PA在摄取2个月后的测定时显著上升，虽然纤溶系统出现了亢进，但ELT及t-PA的测定值均在正常范围内。
此外，尽管FDP在开始摄取的1个月后出现了显著减少，但在2个月后的测定时又回到了摄取前的相同数值。
在自觉症状方面，与摄取前相比，肩部酸痛症状在第1个月及第2个月均得到显著改善。
摄取NKCP后的纤溶·凝固参数的变化（23名）数据表示的是平均值±标准偏差采用邓肯多重比较法对显著性差异进行检验：*p<0.05，**p<0.01摄取NKCP后的自觉症状的变化数值表示的是患者数。
采用多重比较法对显著性差异进行检验日本生物流变学学会杂志第18卷（1）2004①肽酶活性测定法（合成基质法）将发色合成基质S-2251（H-D-缬氨酰-L-亮氨酰-L-赖氨酰-对-硝基苯胺二盐酸盐）作为基质，在37℃的温度条件下反应后，测定405nm的吸光度。
将1分钟游离出对硝基苯胺1nmol时的酵素活性定义为1unit。
②纳豆菌生成蛋白质测定法（ELISA法）采用ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）法对具有肽酶活性的纳豆菌生成蛋白质进行定量测定。