生化方法学及仪器应用
生理生化分析
生理生化分析生理生化分析是一种广泛应用于医学、生物学、化学和其他相关学科领域的技术，用于研究和理解生物体的生物化学反应、代谢过程和功能。
通过对生物体内生化物质的成分、结构、功能及其相互作用进行分析，可以揭示生物体的生理状态、疾病诊断和治疗方案。
一、生理生化分析的意义生理生化分析是揭示生物体内各种物质和分子相互作用的重要手段。
通过分析生物体内的蛋白质、核酸、糖类等生化物质的含量、结构和功能，可以了解其代谢过程、反应机制以及生物体在不同生理状态下的差异。
这对于深入研究生物体的基本生命过程、发掘新的治疗方法具有重要的意义。
二、生理生化分析的方法生理生化分析涉及到多种实验方法和仪器设备，常用的方法包括：1. 分光光度法：通过物质对特定波长的光的吸收、发射或散射来确定其浓度或结构。
例如，紫外-可见吸收光谱法可以用于测定蛋白质、核酸和药物的浓度。
2. 气相色谱法：通过气相色谱仪对物质进行分离、检测和定量分析。
该方法对于分析有机化合物、药物代谢产物等具有很高的灵敏度和分辨率。
3. 液相色谱法：通过液相色谱仪对物质进行分离和分析。
可以通过改变柱材料、溶剂组成和流速等条件，实现对多种生化物质的分离和定量分析。
4. 质谱分析法：通过质谱仪对物质的质量-电荷比进行检测和分析。
质谱分析可以用于确定物质的分子结构、元素组成，以及定量分析等。
5. 核磁共振法：通过核磁共振仪对物质的核自旋和能级进行检测和分析。
核磁共振技术在蛋白质、核酸结构研究和药物设计中具有重要应用。
三、生理生化分析在医学领域的应用生理生化分析在医学领域具有广泛的应用，常见的应用包括：1. 临床诊断：通过检测血液、尿液等生物样本中的生化物质的含量和状态，可以辅助医生进行疾病的诊断和治疗。
例如，血糖检测可用于糖尿病的诊断和治疗监测。
2. 肿瘤标志物检测：通过检测血液或其他生物样本中的特定蛋白质、核酸等生化物质，可以辅助肿瘤的早期筛查和诊断。
常见的肿瘤标志物包括癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等。
生化检验操作规程
生化检验操作规程一. 血脂血糖1.胆固醇(1）方法学：胆固醇氧化酶法(2）实验仪器：上海科华卓越330全自动生化分析仪(3) 试剂成分：R1-胆固醇酯酶,抗坏血酸氧化酶，过氧化物酶，ESPAS，R2-胆固醇氧化酶，4-氨基安替比林(4)操作流程：开机->进入主程序->开始->杯空白测定->正常->将待测管放入样品盘检测孔中（如1孔）->进入样品界面->在界面左侧输入相应起始样品号（如1号）以及相应起始杯号（如1杯）->在右侧检测项目界面中选择“胆固醇”->点击下方申请测试->开始测试->加样针吸取样品管内血清3μL于比色盘的1号比色杯中->试剂针吸取胆固醇 R1试剂250μL于1号比色杯中->搅拌器搅拌混匀->37℃恒温5分钟->试剂针再吸取胆固醇 R2试剂125μL于1号比色杯中->搅拌器再次搅拌混匀->37℃恒温5分钟后比色测定->结果数据传至主程序开始菜单内的报告列表界面->检测完毕->在报告列表输入检验报告单相关信息->点击右下方打印报告->签字审核后发单。
(5）注意事项：①保证比色盘与试剂盘的洁净，定期检查。
每日检查试剂剩余量，及时补足。
②注意主程序界面内的试剂盘的温度变化，一旦持续增高，则考虑冷冻剂问题，予以更换。
③保证样品的良好待检状态，样本为血清，肝素或EDTA抗凝血浆，若当时不能检测则可2℃～8℃冷藏保存。
过度溶血的宜重新取血，若无法重新取血的应在检验报告单上注明，脂血的样本也应在检验报告单上标注，并且稀释后再行检测，黄疸的应先做空白对照，再行检测并将结果减去空白对照后再行出单。
④每日跟随样品进行质控检测绘出质控图，观察质控值是否在2SD以内，3SD为失控限，以便据此观察机器与试剂的状态是否在控。
⑤注意试剂的效期问题，定期检查试剂是否变质，保证试剂在有效期内使用。
生理生化技术在医学研究中的应用
生理生化技术在医学研究中的应用随着科技的不断发展，生理生化技术在医学研究中的应用越来越广泛。
生理生化学是生命科学研究的重要组成部分，它主要研究人体生命系统中分子、细胞、组织和器官等方面的生物学现象。
这些技术经过不断的创新和优化，已经成为医学研究的基础和关键性手段，对各种疾病的诊断和治疗起到了至关重要的作用。
一、生理生化技术生理生化技术利用先进的仪器和设备对人体内部和外部的生命现象进行分析和检测，这些现象包括物质的代谢、细胞的功能、信号传递和基因表达等。
其中最常用的技术包括：蛋白质组学、基因组学、代谢组学、蛋白质质谱分析、高通量测序等。
蛋白质组学是研究蛋白质分子、它们的功能、相互作用和代谢途径的科学。
通过分离、鉴定蛋白质，可以更好地研究生物体的内部机理和成分，从而为疾病的诊断和治疗提供重要的信息。
基因组学则主要研究基因的表达和编码方式，以及这些基因在人体内的生物学功能。
代谢组学是研究代谢物在人体内分布、转化和代谢的科学，它可以更加深入地了解代谢物在人体内所起的作用和影响。
同时，代谢组学也是一种综合分析方法，它能够揭示细胞和器官在代谢方面的差异和相互关系。
高通量测序在当前的医学研究中起到了重要的作用。
它可以通过测定DNA序列的方法，快速地分析大量的生物样本，包括病原菌、人体细胞、微生物和疾病样本等。
这样就可以更快速、准确地发现病因和诊断疾病。
二、生理生化技术在医学研究中的应用非常广泛，用于从研究分子水平到整个人体系统水平的各个方面。
下面我们将介绍它们在关键领域中的应用情况。
1. 疾病预防和诊断生理生化技术可以用于疾病的预防和诊断。
通过测量人体内特定的生理生化指标，我们能够更好地了解人体的健康状况和发现潜在的疾病。
常用于这种目的的生理生化技术包括血液生化指标、尿液及其他分泌物分析以及基因测序等。
通过这些技术的运用，我们能够快速检测出相应的疾病，并进行及时治疗。
2. 疾病治疗生理生化技术在疾病治疗方面也起到了至关重要的作用。
医学检验仪器学知识点总结
医学检验仪器学知识点总结一、医学检验仪器学简介医学检验仪器学是临床医学中的一个重要分支，它主要研究的是不同类型的医学检验仪器，包括其原理、操作方法、使用范围、维护等方面的知识。
医学检验仪器学的发展与医学检验技术的进步密切相关，它为临床诊断提供了可靠的实验依据，有助于提高临床医生的工作效率和诊断准确性。
二、医学检验仪器的分类医学检验仪器可以根据其功能和应用领域进行分类。
主要有生化分析仪器、免疫分析仪器、血液分析仪器、细胞分析仪器、微生物分析仪器等多种类型。
1. 生化分析仪器生化分析仪器是用于检测体液中生化指标的仪器，广泛应用于临床诊断、疾病监测等领域。
它可以测定血清、尿液、脑脊液等体液中的生化指标，包括葡萄糖、肌酐、尿素氮、血脂、肝功能指标、电解质等。
2. 免疫分析仪器免疫分析仪器是用于检测人体内免疫反应的仪器，主要包括化学发光免疫分析仪、酶联免疫分析仪、流式细胞仪等。
它可以检测体液中的抗体、抗原、免疫球蛋白等指标，用于诊断感染性疾病、自身免疫疾病等。
3. 血液分析仪器血液分析仪器是用于检测血液成分的仪器，包括血细胞分析仪、凝血分析仪等。
它可以测定血红蛋白、白细胞计数、血小板计数、凝血功能等指标，用于诊断贫血、白血病、凝血功能障碍等疾病。
4. 细胞分析仪器细胞分析仪器是用于检测体液中细胞数量、形态、功能等指标的仪器，包括流式细胞仪、细胞计数仪等。
它可用于检测血液、体液、脑脊液中的细胞数量、分类、形态等信息，用于诊断肿瘤、感染、免疫性疾病等。
5. 微生物分析仪器微生物分析仪器是用于检测体液、组织、环境中微生物的仪器，主要包括培养仪、鉴定仪、敏感度测试仪等。
它可以检测致病微生物的类型、数量、药敏情况，用于感染性疾病的诊断和治疗。
三、医学检验仪器的原理不同类型的医学检验仪器具有不同的工作原理，但大部分仪器的基本原理是利用光学、电化学、生物化学等技术测定样本中的生化指标。
以下是几种常见医学检验仪器的原理介绍：1. 生化分析仪器的原理生化分析仪器采用光学、电化学、酶学等技术对体液中的生化指标进行定量测定。
生化分析技术与分析方法
生化分析技术与分析方法生化分析技术是指应用生化学、分子生物学等原理和技术，对生物体内分子、细胞及其组织和器官进行分析的一种技术。
生化分析技术的目的是研究生物体内分子、细胞及其组织和器官的结构、功能、代谢和调节等生理和病理过程。
生化分析技术有许多种类，其中主要包括光谱分析技术、色谱分析技术、质谱分析技术、电泳分析技术、生物传感器技术和免疫学技术等。
下面简要介绍几种常见的生化分析技术和方法。
光谱分析技术光谱分析技术是指利用物质的吸收、发射、散射等光学特性，对物质的结构、组成、性质等进行分析的一种方法。
光谱分析技术主要包括紫外光谱、红外光谱、拉曼光谱和核磁共振光谱等。
其中，紫外光谱是一种常用的方法，可以用于检测DNA、RNA等生物大分子的含量和质量。
红外光谱则可以用于检测细胞膜、酶、蛋白质等生物分子的结构和组成。
拉曼光谱则可以用于分析药物、生物大分子的结构和组成等。
核磁共振光谱则可以用于观察细胞内各种分子的运动和分子间的相互作用等。
色谱分析技术色谱分析技术是指按照不同物质在某种载体或柱子上的分配、吸附或沉淀等特性，将混合物分离为单一物质的一种方法。
色谱分析技术包括气相色谱、液相色谱和超高效液相色谱等。
其中，液相色谱是一种应用最广泛的方法，可以检测并分离大部分生物分子。
液相色谱又可分为高效液相色谱（HPLC）、离子交换色谱（IEC）、凝胶过滤色谱（GF）等。
HPLC是一种灵敏度高、分离效果好的分析方法，可用于检测DNA、RNA、蛋白质、酶等生物大分子。
IEC则可用于分离不同电荷的生物分子，GF则可用于分离不同大小的生物分子。
质谱分析技术质谱分析技术是指利用物质在电磁场中的离子化和分子裂解等特性，对物质的质量、结构、分子量、元素组成等进行分析的一种方法。
质谱分析技术包括质谱法、时间飞行质谱（TOF-MS）、离子陷阱质谱（IT-MS）等。
其中，质谱法是一种常用的方法，可用于检测试剂、药物、天然产物等生物分子的结构和组成。
生化项目检测原理
生化项目检测原理
生化项目检测原理是通过分析和测量生物体内特定分子或化学反应产物的变化来判断生物体内某种物质的存在或水平。
下面将介绍几种常见的生化项目检测原理。
1. 光度法：利用物质对特定波长的光吸收或透射的特性来测量物质的浓度。
通常会使用比色皿、分光光度计等仪器进行测量。
2. 电化学法：利用物质在电势差作用下的氧化还原反应特性来测量物质的浓度。
常见的电化学方法包括电解法、电极反应法、电化学免疫法等。
3. 发光法：利用物质在特定条件下发生化学反应产生光的特性来测量物质的浓度。
常见的发光方法有化学发光、酶标仪法等。
4. 色谱法：通过样品在固定相和流动相间相互作用的特性来进行物质分离和测定。
常见的色谱方法有气相色谱法、液相色谱法等。
5. 免疫学原理：利用抗原和抗体之间的特异性结合反应来检测物质的存在或水平。
常见的免疫学方法有酶联免疫吸附测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等。
以上是几种常见的生化项目检测原理，通过不同的检测方法可以实现对不同物质的快速、准确测量，从而为临床诊断提供有力支持。
生化分析及其在医学中应用
生化分析及其在医学中应用生化分析是一种重要的分析化学技术，用于研究生物分子和化学反应。
它包括分析生物体中的化学物质，如蛋白质、碳水化合物和核酸等，以及患者的生理状态和药物治疗的效果等。
生化分析在现代医学中发挥着重要的作用，包括疾病诊断、治疗和监测。
一、生化分析的基本原理1. 核酸分析核酸是生物体内的一类大分子，包括DNA和RNA。
核酸分析是研究DNA和RNA的结构、功能和变异等的技术。
常用的核酸分析方法包括PCR、南方杂交和序列分析等。
PCR技术是一种快速扩增DNA的方法。
它主要包括三步：变性、退火和扩增。
通过PCR技术可以扩增出少量DNA片段，从而检测DNA序列变异、基因突变和遗传病等。
南方杂交是一种检测DNA序列的方法，主要用于检测DNA重复序列和突变等。
南方杂交需要将DNA固定在载体上，进行杂交反应后再用放射性示踪试剂检测DNA序列。
序列分析是一种分析DNA序列的方法，可以测定DNA序列的基本信息、修饰和变异等。
序列分析所需的DNA样品可以来自血液、组织和体液等。
2. 蛋白质分析蛋白质是生物体内的一种重要分子，具有多种生物学功能。
蛋白质分析是研究蛋白质结构、功能和变异等的技术。
常用的蛋白质分析方法包括SDS-PAGE、Western blot和质谱分析等。
SDS-PAGE是一种蛋白质分离技术，可以将蛋白质按分子量大小分为不同的带。
该技术需将蛋白质样品加入聚丙烯酰胺凝胶中，然后进行电泳分离。
SDS-PAGE可以用于确定蛋白质分子量和纯度。
Western blot是一种检测蛋白质的方法，即蛋白质印迹法。
它需要将蛋白质样品与抗体结合，然后用酶标记的二抗检测蛋白质。
Western blot可以用于检测蛋白质表达水平和定量。
质谱分析是一种分析蛋白质的方法，可以测定蛋白质的分子量、结构和修饰等。
常用的质谱分析方法包括MALDI-TOF和ESI-MS 等。
二、生化分析在医学中的应用生化分析在医学中有着广泛的应用，从疾病诊断到药物治疗和监测等方面都涉及到了生化分析技术。
检验科生化学常见检测与分析方法
检验科生化学常见检测与分析方法生化学是一门研究生物体内化学变化及相互关系的科学。
在检验科中，生化学是一项重要的技术领域，用于检测和分析样本中的化学成分和反应。
本文将介绍一些生化学常见的检测与分析方法。
一、色谱法色谱法是一种常见的分离和检测技术，广泛应用于生化学领域。
其中，气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）是两种常见的色谱方法。
1. 气相色谱法气相色谱法是将气体或者挥发性液体样品通过色谱柱进行分离和检测的方法。
该方法适用于分离和检测样品中的挥发性有机化合物和气体。
它的原理是通过样品在高温下蒸发，然后被带动进入色谱柱中。
在色谱柱中，不同物质由于相互作用力的差异而分离，最终通过检测器检测。
气相色谱法常用于环境监测、食品安全等领域。
2. 液相色谱法液相色谱法是将溶解在溶剂中的样品通过色谱柱进行分离和检测的方法。
该方法适用于分离和检测样品中的非挥发性有机化合物和离子。
它的原理是将样品溶解在流动相中，通过色谱柱的分离作用，不同物质在色谱柱中的停留时间不同，从而实现分离和检测。
液相色谱法常用于药物分析、食品成分分析等领域。
二、光谱法光谱法是一种通过物质对光的吸收、散射或者发射来进行分析的方法。
常见的光谱方法包括紫外可见光谱法（UV-Vis）、红外光谱法（IR）和质谱法（MS）。
1. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是一种用于测定物质在紫外和可见光波段吸收特性的方法。
该方法适用于分析样品中的有机物、无机物和生物分子等。
紫外可见光谱法的原理是通过物质对紫外或者可见光的吸收来得到样品的吸收光谱，进而推断出样品中的成分和浓度。
紫外可见光谱法在药物分析、环境监测等领域得到广泛应用。
2. 红外光谱法红外光谱法是一种用于测定物质在红外光波段吸收特性的方法。
该方法适用于分析样品中的有机物和无机物等。
红外光谱法的原理是通过物质对红外光的吸收来得到样品的红外光谱，进而推断出样品中的分子结构和化学键的类型。
红外光谱法在药物研发、聚合物材料分析等领域具有重要应用价值。
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生化方法学及仪器应用生化检测方法及仪器应用两点法：测定酶反应开始后某一时间内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量以求取酶反应初速度的方法。
终点法：通过测定酶反应开始到反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量，以求出酶活力的方法，亦称平衡法。
速率法：是指连续测定(每15秒~1分钟监测一次)酶反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间的变化来求出酶反应的初速度的方法，即连续监测法。
一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
（两点法）3．连续监测法（速率法）对于酶活性测定一般应选用连点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
3．反应温度一般有30℃、37℃可供选择，通常固定为37℃。
4．主波长主波长（primary wavelength）是指定一个与被测物质反应产物的光吸收有关的波长。
5．次波长次波长（secondary wavelength）是在使用双波长时，要指定一个与主波长、干扰物质光吸收有关的波长。
6．反应方向反应方向（response direction）有正向反应和负向反应两种，吸光度增加为正向反应，吸光度下降为负向反应。
7．样品量样品量（sampling volum）一般是2μl～35μl，以0.1μl步进，个别分析仪最少能达到1.6μl。
可设置常量、减量和增量。
8．第一试剂量第一试剂量（first regengt volum）一般是20～300μl，以1μl步进。
9．第二试剂量第二试剂量（second regengt volum）一般也是20～300μl，以1μl步进。
10．总反应容量总反应容量（total reacting volum）在不同的分析仪有一个不同的规定范围，一般是180～350μl，个别仪器能减少至120μl。
总反应容量太少无法进行吸光度测定。
11．孵育时间孵育时间（incubate time）在终点法是样品与试剂混匀开始至反应终点为止的时间，在两点法是第一个吸光度选择点开始至第二个吸光度选择点为止的时间。
12．延迟时间延迟时间（delay time）在连续监测法中样品与反应试剂（第二试剂）混匀开始至连续监测期第一个吸光度选择点之间的时间。
13．连续监测时间连续监测时间（continuous monitoring time）在延迟时间之后即开始，一般为60～120s，不少于4个吸光度检测点（3个吸光度变化值）。
14．校准液个数及浓度校准曲线线性好并通过坐标零点的，可采用一个校准液（calibrator）；线性好但不通过坐标零点，应使用两个校准液；对于校准曲线呈非线性者，必须使用两个以上校准液。
每一个校准液都要有一个合适的浓度。
15．校准K值或理论K值通过校准得到的K值为校准K 值（calibrate coefficient）或由计算得出的K值为理论K值。
16．线性范围即方法的线性范围（linearity range），超过此范围应增加样品量或减少样品量重测。
与试剂/样品比值有关。
17．小数点位数检测结果的小数点位数（decimal point digit）。
（二）备选分析参数这类分析参数与检测结果的准确性有关，一般来说不设置这类分析参数，分析仪也能检测出结果，但若样品中待测物浓度太高等，检测结果可能不准确。
1．样品预稀释设置样品量、稀释剂量和稀释后样品量三个数值，便可在分析前自动对样品进行高倍稀释。
2．底物耗尽值底物耗尽值（substrate exhaust limit）在负反应的酶活性测定中，可设置此参数，以规定一个吸光度下降限。
若低于此限时底物已太少，不足以维持零级反应而导致检测结果不准确。
3．前区检查免疫比浊法中应用，以判断是否有抗原过剩。
将终点法最后两个吸光度值的差别（ΔA）设置一个限值，如果后一点的吸光度比前一点低，表示已有抗原过剩，应稀释样品后重测。
4．试剂空白吸光度范围超过此设定范围表示试剂已变质，应更换合格试剂。
5．试剂空白速率连续监测法中使用，是试剂本身在监测过程中没有化学反应时的变化速率。
6．方法学补偿系数用于校准不同分析方法间测定结果的一致性，有斜率和截距两个参数。
7．参考值范围对超过此范围的测定结果，仪器会打印出提示。
（三）某些参数的特殊意义1．最小样品量最小样品量是指分析仪进样针能在规定的误差范围内吸取的最小样品量。
一般分析仪的最小样品量是2μl，目前也有小至1.6μl的。
在样品含高浓度代谢产物或高活性酶浓度的情况下往往需采用分析仪的最小样品量作为减量参数，从而使分析仪检测范围（与线性范围不同）的上限得以扩大。
2．最大试剂量方法灵敏度很高而线性上限低的检测项目，如血清白蛋白的溴甲酚氯法测定，以往手工法操作时样品量10μl，试剂量4ml，这样试剂量/样品量比例（R/S）为200，线性上限则为60g/L。
此法移植到分析仪上后，R/S却很难达到200，致使线性上限变低。
因此对这类检测项目最大试剂量非常重要。
3．弹性速率在酶活性测定中，当酶活性太高，在连续监测期中已不呈线性反应时，有些仪器具有弹性速率（flexrate）功能，能自动选择反应曲线上连续监测期中仍呈线性的吸光度数据计算结果，使酶活性测定的线性范围得以扩大。
如AST可从1000U/L扩展至4000U/L，从而减少稀释及重测次数、降低成本。
4．试剂空白速率当样品中存在胆红素时，胆红素对碱性苦味酸速率法或两点法测定肌酐有负干扰。
因为胆红素在肌酐检测的波长505nm有较高光吸收，而且胆红素在碱性环境中可被氧化转变，因而在肌酐反应过程中胆红素的光吸收呈下降趋势。
若在加入第一试剂后一段时间内设置试剂空白速率，因为此段中苦味酸尚未与肌酐反应，而胆红素在第一试剂的碱性环境中已同样被氧化转变，因而以第二试剂加入后的速率变化，减去试剂空白速率变化，便可消除胆红素的负干扰，见图7-8。
二、单波长和双波长方式（一）概念采用一个波长检测物质的光吸收强度的方式称为单波长(mono-wavelength)方式。
当反应液中含有一种组分，或在混合反应液中待测组分的吸收峰与其它共存物质的吸收波长无重叠时，可以选用。
在吸光度检测中，使用一个主波长和一个次波长的称双波长方式。
当反应液中存在干扰物的较大吸收、从而影响测定结果的准确性时，采用双波长方式更好。
（二）双波长的作用双波长(di-wavelength)测定优点是①消除噪音干扰;②减少杂散光影响;③减少样品本身光吸收的干扰。
从光源，到比色杯、单色器、检测器的整个光路系统中，均存在着随时间发生变化的不稳定的检测信号，即噪音，而双波长检测是同时进行的，两种波长检测产生的噪音基本上相同，因而能消除噪音干扰。
当样品中存在非化学反应的干扰物如甘油三酯、血红蛋白、胆红素等时，会产生非特异性的光吸收，而干扰测定结果的准确性。
采用双波长方式测定可以部分消除这类干扰，提高检测的准确性。
（三）次波长的确定方法当被测物的主波长确定之后，再选择次波长。
如根据甘油三酯等干扰物吸收光谱特征，选择次波长，使干扰物在主、次波长处有尽可能相同的光吸收值，而被测物在主、次波长处的光吸收值应有较大的差异。
一般来说，次波长应大于主波长100nm。
以主波长与次波长吸光度差来计算结果。
（四）双波长的具体应用对于某些反应速度快且无法设置为两点终点法的分析项目，尤其是单试剂分析中，可以利用双波长的方式来部分消除样品本身的光吸收干扰。
目前用单试剂法测定的项目应用双波长的为血清总蛋白（双缩脲法）主波长500nm，次波长576nm；血清白蛋白（溴甲酚氯法）主、次波长分别为600和700nm；钙（偶氮砷Ⅲ法）主、次波长分别为 660、770nm；磷（紫外比色法）主、次波长为340、405nm，镁（二甲苯胺蓝法）主、次波长为505和 600nm。
三、单试剂和双试剂方式反应过程中只加一次试剂称单试剂方式，加两次试剂便为双试剂方式。
目前的生化分析仪大多可用双试剂方式分析，其优点是：①可提高试剂的稳定性，多数双试剂混合成单一工作试剂时，其稳定时间缩短；②能设置两点终点法，来消除来自样品本身的光吸收干扰；③在某些项目检测时能消除非特异性化学反应的干扰。
如血清ALT测定，血清中的内源性丙酮酸及其它酮酸也可与试剂中的指示酶（乳酸脱氢酶）起反应，使结果偏高。
若先加入缺乏α-酮戊二酸的第一试剂，使其它酮酸与指示酶反应之后再加入含有α-酮戊二酸的第二试剂，启动真正的ALT酶促反应生成丙酮酸，而丙酮酸与乳酸脱氢酶的反应消耗的NAD＋能真正反映ALT的活性，从而消除以上副反应的影响。
四、测定过程的自动监测各种自动生化分析仪或多或少都具有对测定过程进行各种监测的功能，以便在没有人"监督"化学反应的情况下提高检测的准确性。
高档分析仪的监测功能更强。
1．试剂空白监测每种试剂都有一定的空白吸光度范围，试剂空白吸光度的改变往往提示着该试剂的变质：如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因酚被氧化为醌而变为红色；碱性磷酸酶、γ－谷氨酰转移酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或硝基苯胺而变黄；有些试剂久置后变浑浊。
这些情况均可使空白吸光度升高。
丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应检测项目，其试剂在放置过程中空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降等。
试剂空白的测定方法有两种：①每瓶试剂在使用前通过对试剂空白校准来确定试剂空白吸光度，这种方式适用于先取样品后加试剂的分析仪。
②每个样品测定前均检测试剂空白吸光度，适用于先加试剂后取样品的分析仪。
2．试剂空白变化速率监测一些酶试剂在反应温度下不稳定，其空白吸光度可随着时间逐渐发生变化，这种变化的主要原因与工具酶或辅酶的纯度有关，且因试剂的组成和生产厂家的不同而不同。
这种变化会影响测定结果的准确性，一般使结果偏高。
如果设置此项监测，分析仪在结果计算时会自动减去试剂空白变化速率。
在以监测NAD（P）H减少为指示反应的酶活性测定中，空白速率可监测并消除由NADH自身氧化所造成的吸光度下降；在色素原为底物的酶活性测定中，空白速率可监测并消除底物自身分解造成的吸光度升高。
有关空白速率监测在胆红素对碱性苦味酸速率法测定肌酐负干扰消除中的作用，已如前述。