叶绿素a的测定(B)

叶绿素a的测定(B)

叶绿素是植物光合作用中的重要光和色素。通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况。在环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化的指标之一。

1.水样的采集与保存

可根据工作的需要进行分层采样或混合采样。湖泊，水库采样500ml，池塘300ml，采样量视浮游植物的分布量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000ml。采样点及采样时间同“浮游植物”。

水样采集后应放置在阴凉处，避免日光直射。最好立即进行测定的预处理，如需经过一段时间（4～48h）方可进行预处理，则应将水样保存在低温（0～4℃）避光处。在每升水样中加入1%碳酸镁悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。水样在冰冻情况下（-20℃）最长可保存30d。

2.仪器设备

（1）分光光度计

（2）真空泵

（3）离心机

（4）乙酸纤维滤膜（孔径0.45um）

（5）抽滤器

（6）组织研磨器或其他细胞破碎器

（7）碳酸镁粉末

（8）90%丙酮

3.试验程序

(1)以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。倒入定量体积的水样进行抽滤，抽滤时负压不能过大（约为50kpa）。水样抽完后，继续抽1～2min，以减少滤膜上的水分。如需短时期保存1～2d时，可放入普通冰箱冷冻，如需长期保存（30d），则应放入低温冰箱（-20℃）保存。

(2)取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6～8h后放入组织研磨器中，加入少量碳酸镁粉末及2～3ml90%的丙酮，充分研磨，提取液绿色a。用离心机（3000～4000r/min）离心10min。将上清液倒入5ml或10ml容量瓶中。

(3)再用2～3ml的90%的丙酮，继续研磨提取，离心10min，并将上清液再转入容量瓶中。重复1～2次，用90%的丙酮定容为5ml或10ml，摇匀。

(4)将上清液在分光光度计上，用1cm光程的比色皿，分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90%的丙酮做空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。

4.计算方法

叶绿素a的含量按如下公式计算

[11.64×(D663-D750)—2.16×（D645-D750）+0.10×（D630-D750）].V1叶绿素a（mg/m3）= ----------——-—————————————-----------------------———V.δ

式中：V——水样体积（L）

D——吸光度

V1——提取液定容后的体积（ml）

δ——比色皿光程（cm）