HA、Hase、RGD及Integrinβ1 asODN阻断胃癌细胞系SGC7901粘附、侵袭ECM的体外实验研究
中国医科大学
硕士学位论文
HA、Hase、RGD和Integrinβ1 asODN阻断胃癌细胞系SGC7901粘
附、侵袭ECM的体外实验研究
姓名：孙宏
申请学位级别：硕士
专业：肿瘤学
指导教师：徐惠绵
2002.2.1
中文摘要
前言
腹膜转移是进展期胃癌根治术后最常见的复发形式，是导致死亡的重要原因。衙究表明，多种粘附分子介导的癌细胞与细胞外基质（ＥＣＭ）相互作用是诱发侵袭和转移的前提条件，其中ＣＤ４４和ＩｎｔｅｇｒｉｎｆＭ是介导胃癌侵袭和转移的主要和独立的粘附分子。ＣＤ４４是一类细胞表面糖蛋白，发挥多种生理及病理作用，它可以特异性识别其配体透明质酸（ＨＡ），影响肿瘤侵袭和转移。ＨＡ是基本结构单一的糖胺多糖，是ＥＣＭ的主要结构分子，其表达与肿瘤细胞行为间有一定的联系。ＩｎｔｅｇｒｉｎＢｌ是由理、ｐ亚单位通过二硫键形成的异质性二聚体跨膜糖蛋白，可以与ＥＣＭ成分及细胞骨架结合而形成配体一Ｉｎｔｅｇｒｉｎｐｌ一细胞骨架跨膜信息系统，介导肿瘤细胞的粘附和转移，主要机制是识别ＥＣＭ蛋白上的ＲＧＤ重复序列。ＲＧＤ是由精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸残基构成的三肽，是纤连蛋白（ＦＮ）等ＥＣＭ蛋白的功能结构。）本研究从ＣＤ４４和Ｉｎｔｅｇｒｉｎｐｌ人手，重点探讨不同水平联合阻断胃癌高转移细胞系ＳＧＣ７９０１粘附、侵袭ＥＣＭ的效果，旨在探寻阻断治疗的可行途径。
／实验材料
以人胃癌细胞系ＳＧＣ一７９０１为研究对象。主要仪器包括：超净工作台，ｃ０：培养箱，Ｂｏｙｄｅｎ小室，低温超速离心机，ＰＣＲ仪，电泳仪，凝胶自动成像仪，ＦＣＭ等。主要试剂包括：ＤＭＥＭ培养基，Ｍａｔｒｉｇｅｌ，ＨＡ，Ｈａｓｅ，ＲＧＤ肽，抗ＣＤ４４及Ｉｎｔｅｇｒｉｎ｛３１单抗，ＦＩＴＣ一山羊抗小鼠ＩｇＧ，硫代磷酸修饰的寡核苷酸（ＯＤＮ）序列，ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＲｅａｇｅｎｔ，ＴＲＩＺＯＬＲｅａｇｅｎｔ，ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍＡ３５００，
ＴａｑＤＮＡ合成酶，Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ删Ｓ－ｐＫｉｔ，Ｍ，ｒｒ及ＤＡＢ显色液。
实验方法
ＳＧＣ７９０１常规培养。间接免疫荧光法测定ＳＧＣ７９０１细胞表面ＣＤ４４与Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１蛋白表达；单独及联合ＨＡ、Ｈａｓｅ和ＲＧＤ分别处理ＳＧＣ７９０１，ＭｒＩＴ法和Ｂｏｙｄｅｎ小室模型分别测定其粘附力和侵袭力，同时观察细胞形态；硫代磷酸修饰的ＯＤＮ以脂质体为载体转染ＳＧＣ７９０１，以Ｂｉｏｔｉｎ标记的Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ａｓＯＤＮ配合免疫化学方法观察转染后其在细胞内的分布；ＲＴ—ＰＣＲ及ＦＣＭ分别测定Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ｍＲＮＡ和蛋白水平变化。统计分析采用ＳＰＳＳｌ０．０软件行ｔ检验。
实验结果
１．人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１的确有ＣＤ４４与ＩｎｔｅｇｒｉｎｔＢｌ蛋白的表达；２．单独使用Ｈａｓｅ及ＲＧＤ肽均明显抑制ＳＧＣ７９０１的粘附力（Ｐｆ＜０．００１），效果优于ＨＡ（Ｐ＜０．０５），对侵袭力的抑制也均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；不同顺序应用ＨＡ和Ｈａｓｅ，以Ｈａｓｅ＋ＨＡ组效果更好（Ｐ＜０．００１），联合三者对粘附的抑制效果优于任何单独应用一个因素及联合ＨＡ和Ｈａｓｅ两者（Ｐ＜０．００１）；３．形态学观察发现，粘附实验中处理组的粘附细胞数形态较圆，而未处理组的部分细胞已经开始铺展；侵袭实验中，未处理组ＳＧＣ７９０１细胞穿过人工基底膜后，表现出纤维母细胞样形态，伸出数目不等、形态各异的伪足，而处理组细胞形态较圆，伪足数目相对较少；４．Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ａｓＯＤＮ转染ＳＧＣ７９０１后１ｈ，胞浆及胞核内可见均匀分布的浅棕色颗粒，随着时间的延长，颗粒颜色不断加深；ＲＴ—ＰＣＲ结果显示４８２ｂｐ处条带不同程度变浅，ＦＣＭ示Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１蛋白表
?２－
达曲线明显左移，提示Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ｍＲＮＡ及蛋白表达有不同程度的降低；５．粘附和侵袭实验证明，Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ａｓＯＤＮ转染ＳＧＣ７９０１后显著降低其粘附力及侵袭力（Ｐ＜ｏ．００１），抑制率分别为５４％和７６％，效果明显优于随机序列（Ｐ＜０．００１）。
讨论
癌的侵袭和转移是一个多因素、多步骤、多阶段的复杂过程。参与调节的因子中ＣＤ４４和Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１是两个独立作用的因子。本研究在多水平联合阻断胃癌的粘附和侵袭，以探寻其对阻断胃癌粘附和侵袭ＥＣＭ的疗效。结果发现，胃癌高转移细胞系ＳＧＣ７９０１不仅表达ＣＤ４４和Ｉｎｔｅｇｒｉｎ［３１蛋白，而且二者都是功能性蛋白。以不同顺序联合应用二者以Ｈａｓｅ＋ＨＡ组效果较好，联合三者阻断的效果优于任何单一因素及联合应用ＨＡ和Ｈａｓｅ，究其原因系ＣＤ４４和Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１是两个独立作用的粘附因子，同时阻断可有加和作用，提示联合应用粘附抑制剂是胃癌抗粘附治疗的一个新的着眼点。用硫代磷酸修饰的Ｉｎｔｅｇｒｉｎ［３１ａｓＯＤＮ以脂质体为载体转染ＳＧＣ７９０１，可见其顺利进入细胞，均匀分布于胞浆及胞核，ＳＧＣ７９０１的Ｉｎｔｅｇｒｉｈｉ３１ｍＲＮＡ和蛋白表达均下降，对ＥＣＭ的粘附和侵袭也下降，效果均优于随机序列。上述结果提示Ｉｎｔｅｇｒｉｎ［３１ａｓＯＤＮ可能在胞浆和胞核中同时起作用，通过多种机制引起ＳＧＣ７９０１Ｉｎｔｅｇｒｉｎ［３１ｍＲＮＡ及蛋白表达下降，在此基础上，降低其粘附力和侵袭力，证实了以脂质体为载体转染硫代磷酸修饰的Ｉｎｔｅｇｒｉｎ／３１ａｓＯＤＮ具有良好的生物学活性，为迸一步研究Ｉｎｔｅｇｒｉｎ［３１ａｓＯＤＮ的抗转移作用提供了一定的实验依据。
小结
本研究从ＣＤ４４和Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１人手，通过不同水平联合阻断胃
?３?
癌高转移细胞系ＳＧＣ７９０１粘附、侵袭ＥＣＭ，探讨阻断治疗的可行途径。间接免疫荧光法测定ＳＧＣ７９０１细胞表面ＣＤ４４与Ｉｎｔｅｇｒｉｎｆ３１蛋白表达；单独及联合ＨＡ、Ｈａｓｅ和ＲＧＤ分别处理ＳＧＣ７９０１后ＭＩＴ法和Ｂｏｙｄｅｎ小室模型分别测定其粘附力和侵袭力，同时观察细胞形态；硫代磷酸修饰的ＯＤＮ转染ＳＧＣ７９０１细胞，免疫化学方法观察其在细胞内的分布，ＲＴ—ＰＣＲ及ＦＣＭ分别测定Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ｍＲＮＡ和蛋白水平的变化。结果发现人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１的确有ＣＩＭ４与Ｉｎｔｅｇｒｉｎ［３１蛋白的表达；单独使用ＨＡ、Ｈａｓｅ及ＲＧＤ肽均降低ＳＧＣ７９０１细胞的粘附力和侵袭力；处理组和未处理组细胞形态也有不同；不同顺序应用ＨＡ和Ｈａｓｅ，以Ｈａｓｅ＋ＨＡ组效果更好，联合三者对粘附的抑制效果优于任何单独应用一个因素及联合ＨＡ和Ｈａｓｅ两者（Ｐ＜０．００１），提示联合应用粘附抑制剂是胃癌抗粘附治疗的一个新的着眼点；Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ａｓＯＤＮ转染ＳＧＣ７９０１后均匀分布于胞浆及胞核，引起Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ｍＲＮＡ及蛋白表达不同程度降低，粘附力及侵袭力亦降低，效果均优于随机序列，从而证实了以脂质体为载体转染硫代磷酸修饰的ＩｎｔｅｇｆｉｎＪ３１ａｓＯＤＮ具有良好的生物学活性，为进一步研究ＩｎｔｅｇｒｉｎＪ３１ａｓＯＤＮ的抗转移作用提供了一定的实验依据。卜、
结论
１．人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１表面表达功能性ＣＩＭ和ＩｎｔｅｇｒｉｎＪＭ蛋白。
２．单独和联合使用ＨＡ、Ｈａｓｅ和ＲＧＤ均不同程度抑制ＳＧＣ７９０１细胞对ＥＣＭ的粘附和侵袭，以联合三者阻断效果为优。
３．ＩｎｔｅｇｒｉｎＪ３１ａｓＯＤＮ转染ＳＧＣ７９０１后可降低其ｍＲＮＡ及蛋白表达水平，从而降低其对ＥＣＭ的粘附和侵袭，效果优于随机序列。
４．联合ＨＡ、Ｈａｓｅ和ＲＧＤ或应用ＩｎｔｅｇｒｉｎｆｌｌａｓＯＤＮ都是阻断
?４．
人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１粘附、侵袭ＥＣＭ的可行途径。
关键词：胃癌；ＳＧＣ７９０１；粘附；侵袭；透明质酸；透明质酸酶；
ＲＧＤ：ＣＤ４４；Ｉｎｔｅｇｒｉｎ［３１；反义寡核苷酸
?５?
ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＣｅｌｌＡｔｔａｃｈｍｅｎｔａｎｄＩｎｖａｓｉｏｎｏｆＨｕｍａｎＧａｓｔｒｉｃＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｌｉｎｅＳＧＣ７９０１ｔｏＥＣＭｂｙ
ａｎｄＩｎｔｅｇｒｉｎ［３１ａｓＯＤＮＨｙａｌｕｒｏｎｉｃＡｃｉｄ，Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ＲＧＤ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｉｎｔｒｏｄｕｃｆｉｏｎ
Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍｅｔａｓｔａｓｉｓｉｓｔ｝ｌｅｃｏｍｍｏｎｅｓｔｆｏＩＴｎｏｆｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅａｎｄｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔｃａｕｓｅｏｆｄｅａｔｈｏｆａｄｖａｎｃｅｄｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒａｆｔｅｒｒａｄｉｃａｌｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ．ＩｔｈａｓｂｅｅｎｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃａｎｃｅｒｃｅＨｓａｎｄｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ（ＥＣＭ），ｗｈｉｃｈｉｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｖａｒｉｏｕｓａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｐｒｅｒｅｑｕｉｓｉｔｅｓｆｏｒｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，ａｍｏｎｇｗｈｉｃｈＣＤ４４ａｎｄＩｎｔｅｇＴｉｎＢｌａｒｅｔｗｏｍａｉｎａｎｄｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｆａｃｔｏｒｓ．ＣＤ４４ｉｓａｆａｍｉｌｙｏｆｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓｏｎｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅａｎｄｐｌａｙｓｖａｒｉｏｕｓｒｏｌｅｓｉｎｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓ，ｉｎ－ｃｌｕｄｉｎｇｔｕｍｏｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，ｂｙｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇｉｔｓｌｉｇａｎｄ，ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ（ＨＡ），ｗｈｉｃｈｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＥＣＭ．ＩｎｔｅｇｒｉｎＢｌｉｓａｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｄｉｍｍｅｒｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｄａｎｄＢｓｕｂｕｎｉｔ，ｉｔＣａｎｂｉｎｄＥＣＭ
ａｎｄｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎａｔｔｈｅｓａｎｌｅｔｉｍｅｔｏｆｏｒｍａｌｉｇａｎｄ—ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｉｎｔｅｇｒｉｎｌ３１一ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎｃｏｍｐｌｅｘ，ｍｅｄｉａｔｉｎｇｔｈｅａｄｈｅｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓ—ｔａｓｉｓｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ．’ｎｌｅｍａｉｎｌｉｇａｎｄｏｆＩｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ｉｓＲＧＤ．ａｔｒｉ—ｐｅｐｔｉｄｅｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆＡｒｇ——Ｇｌｙ—－Ａｓｐａｎｄｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｆｉ—ｂｒｏｎｅｃｔｉｎ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｔｈｅａｎｔｉ—ａｄｈｅｓｉｖｅａｎｄａｎｔｉ—ｉｎｖａｓｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆＨＡ，Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ（Ｈａｓｅ），ＲＧＤａｎｄＩｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ａｎｆｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ（ａｓＯＤＮ）ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｉｎｄａｆｅａｓｉｂｌｅｍｅａｎｓｏｆｂｌｏｃｋｉｎｇｔｈｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆ
ｃａｎｃｅｒ．
ｇａｓｔｒｉｃ
?６?
ＭａｔｅｒｉＭｓ
ＨｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｌｉｎｅＳＧＣ７９０１．ＴｈｅｍａｉｎａｐｐａｒａｔｕｓｉＤｅｌｕｄｅｉｎｃｕｂａｔｏｒ，Ｂｏｙｄｅｎｃｈａｍｂｅｒ，ＦＣＭ，ＰＣＲａｎｄｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｐｐａｒａ－ｔｕｓｅｔｃ．ＴｈｅｍａｉｎａｇｅｎｔｓｉｎｃｌｕｄｅＤＭＥＭ，Ｍａｔｒｉｇｅｌ，ＨＡ，Ｈａｓｅ，ＲＧＤ，ｍＡｂ，ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ（ＯＤＮ），ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＲｅａｇｅｎｔ，ＴＲ—ＩＺＯＬＲｅａｇｅｎｔ，ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍＡ３５００，ＴａｑＤＮＡｓｙｎ—ｔｈｅｔａｓｅ．Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ“Ｓ—ＰＫｉｔｅｒｅ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ
ＳＧＣ７９０１ｗｅｒｅｃｕｈｕｒｅｄｒｏｕｔｉｎｅｌｙｗｉｔｈＤＭＥＭｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｂｙ１０％ＦＣＳ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＤ４４ａｎｄＩｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ｏｎｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｉｎｄｉｒｅｃｔｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．ＡｆｔｅｒＳＧＣ７９０１ｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｏｒｖａｒｉｏｕｓｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆＨＡ，ＨａｓｅａｎｄＲＧＤ，ｔｈｅｉｒａｄｈｅｓｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｔｏＥＣＭｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＭＴｒａｎｄＢｏｙｄｅｎｃｈａｍｂｅｒｍｅｔｈｏｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｌｓｏｏｂ—ｓｅｒｖｅｄ．Ｎｅｘｔ，ＯＤＮｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＳＧＣ７９０１，ｔａｋｉｎｇｌｉｐｏｓｏｍｅａｓｖｅｃｔｏｒ．ＴｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＯＤＮｗａｓｒｅｃｏｒｄｅｄｂｙｉｍｍｔｍｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｄｅｔｅｒ－ｍｉｎｅｄｂｙＲＴ—ＰＣＲａｎｄＦＣＭ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｌｌｔｈｅｄａｔａｗｅｒｅａｎａ—ｌｙｚｅｄｂｙＳＰＳＳｌ０．０ｓｏｆｔｗａｒｅ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ
１．ＨｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＳＧＣ７９０１ｄｉｄ
ＣＤ４４
ｅｘｐｒｅｓｓ
ａｎｄＩｎｔｅｇｒｉｎｔ３１ｐｒｏｔｅｉｎｏｎｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅ．２．ＨａｓｅｏｒＲＧＤａｌｏｎｅｃｏｕｌｄ
?７?
ｂｌｏｃｋｔｈｅａｄｈｅｓｉｏｎｏｆＳＧＣ７９０１ｔｏＥＣＭ（Ｐ＜０．００１），ｂｅｔｔｅｒｔｈａｎＨＡｄｉｄ（Ｐ＜Ｏ．０５），ｔｈｅｉｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｎｔｈｅｉｎｖａｓｉｏｎｔｏＥＣＭａｌｓｏｈａｄｓｔａ－ｔｉｓｆｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．ＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＨＡａｎｄＨａｓｅｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｅｑｕｅｎｃｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄａｂｅｔｔｅｒｒｅｓｕｌｔｉｎＨａｓｅ＋ＨＡｇｒｏｕｐｔｌｌａｎｉｎＨＡ＋Ｈａｓｅｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｃｏｍｂｉｎａ‘ｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｆａｃｔｏｒｓｗａｓｂｅｔｔｅｒｔｈａｎａｎｙｏｎｅｏｆｔｈｅａｂｏｖｅｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．００１）．３．Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｎｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅａｄｈｅ—ｓｉｖｅｃｅｉｌｓｉｎｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｋｅｐｔｒｏｕｎｄｗｈｉｌｅｓｏｍｅｏｆｔｈｏｓｅｉｎｕｎｔｒｅａｔｅｄ
ｇｒｏｕｐｈａｄｓｐｒｅａｄｏｕｔｏｎＭａｔｒｉｇｅｌ；ｉｎｉｎｖａｓｉｏｎａｓｓａｙ，ｃｅＨｓｉｎｕｎｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｐｒｅｓｅｎｔｅｄａｆｉｂｒｏｉｄｆｅａｔｕｒｅｗｉｔｈｐｓｅｕｄｏｐｏｄｏｆｖａｒｉｏｕｓｎｕｍｂｅｒａｎｄｓｈａｐｅ，ｗｈｉｌｅｔｈｏｓｅｉｎｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｋｅｐｔｒｏｕｎｄｗｉｔｈｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｆｅ—ｗｅｒｐｓｅｕｄｏｐｏｄ．４．ＡｆｔｅｒＩｎｔｅｇｒｉｎＪ３１ａｓＯＤＮｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＳＧＣ７９０１ｉｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｅｖｅｎｌｙｉｎｃｙｔｏｐｌａｓｍａｎｄｎｌ＿ｌｅｌｅｕ．ｓ．ＰＣＲａｎｄＦＣＭｒｅｖｅａｌｅｄａｗｅａｋｅｎｅｄｂａｎｄｏｎ４８９ｂｐａｎｄａｓｈｉｆｔ—ｌｅｆｔｃａｌｖｅ，ｒｅ—
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇａｄｅｃｒｅａｓｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩｎｔｅｇｒｉｎＢｌｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ．５．Ａｄｈｅｓｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎａｓｓａｙａｌｓｏｐｒｅｓｅｎｔｅｄａｄｅ—
ｃｒｅａｓｅ，ｗｉｔｈｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｒａｔｅｏｆ５４％ａｎｄ７６％．Ｔｈｅｅｘｔｅｎｔｏｆｄｅ—
ｃｒｅａｓｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙＩｎｔｅｇｒｉｎｐｌａｓＯＤＮｗａｓｌａｒｇｅｒｔｈａｎｔｈａｔｂｙｔｈｅｒａｎ－ｄｏｍＯＤＮ（Ｐ＜０．００１）．
Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ
Ｔｈｅｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｃａｎｃｅｒｉｓａｍｕｌｔｉ—ｆａｃｔｏｒ．ｍｕｌｔｉ—
ａｎｄｍｕｌｔｉ—ｓｔａｇｅｐｒｏｃｅｓｓ，ａｎｄＣＩＭ４ａｎｄＩｎｔｅｇｒｉｎ［３１ａｒｅｔｗｏｉｎ－ｓｔｅｐ
ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｆａｃｔｏｒｓｔｈａｔｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｉｓｐｒｏｃｅｓｓ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｉｎ－ｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｔｈｅａｎｔｉ—ａｄｈｅｓｉｖｅａｎｄａｎｔｉ—ｉｎｖａｓｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆＨＡ，Ｈａｓｅ，ＲＧＤａｎｄＩｎｔｅｇｒｉｎｌＭａｓＯＤＮｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｉｎｄａｆｅａｓｉｂｌｅｉｎｃａ／ｉｓｏｆｂｌｏｃ．ｋｉｎｇｔｈｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ．Ｗｅｆｏｕｎｄｔｈａｔ
．８．
ＳＧＣ７９０１ｄｉｄｅｘｐｒｅｓｓＣＤ４４ａｎｄＩｎｔｅｇｒｉｎｐｌｐｒｏｔｅｉｎｏｎｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅａｎｄ
ｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｂｏｔｈＤｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ．Ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆ
ｃｏｍｂｉ‘ｏｆｔｈｅＬｈｒｅｅｆａｃｔｏｒｓｗａｓｂｅｔｔｅｒｔｈａｎａｎｙｏｎｅｏｆｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｏｒａ
ｔｈｅｆａｃｔｔｈａｔｎａｔｉｏｎｏｆｔｗｏｆａｃｔｏｒｓ，ｔｈｅｒｅａｓｏｎｆｏｒｗｈｉｃｈｍｉｇｈｔｌｉｅｉｎ
ＣＤ４４ａｎｄＩｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ａｒｅｔｗｏｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｆａｃｔｏｒｓ，ｗｈｅｎｂｏｔｈｏｆｔｈｅｍ
ｂｅｍａｄｅ，ｗｅｒｅｂｌｏｃｋｅｄａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ａｎａｕｇｍｅｎｔｅｄｅｆｆｅｃｔｍｉｇｈｔ
ｗｈｉｃｈｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔａｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｅｖｅｒａｌａｎｔｉ—ａｄｈｅｓｉｖｅａｇｅｎｔｓｍｉｇｈｔｂｅａｎｅｗｔａｒｇｅｔｉｎｔｈｅａｎｔｉ—ａｄｈｅｓｉｖｅｔｈｅｒａｐｙｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ．ＡｆｔｅｒＩｎｔｅｇｒｉｎ６１ａｓＯＤＮｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＳＧＣ７９０１ｉｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｅ?ｖｅｎｌｙｉｎｃｙｔｏｐｌａｓｍａｎｄｎｕｃｌｅｕｓ，ｉｎｄｕｃｉｎｇａｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩｎｔｅ两ｈｉ３１ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎａｓｗｅｌｌａｓｉｎａｄｈｅｓｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｔｏ
ＯＤＮ．Ｔｈｅａｂｏｖｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇ—ＥＣＭ，ｗｉｔｈａｇｒｅａｔｅｒｅｆｆｅｃｔｔｈａｎｒａｎｄｏｍ
ｇｅｓｔｅｄｔｈａｔＩｎｔｅｇｒｉｎｐｌａｓＯＤＮｍｉｇｈｔａｃｔｂｙｍｕｌｔｉｐｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｉｎｃｙ‘ｔｏｐｌａｓｍａｓｗｅｌｌａｓｉｎｎｕｃｌｕｓ，ｔｈｕｓｓｈｏｗｅｄａｓａｔｉｓｆｙｉｎｇｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖ—ｉｔｙ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｌａｙａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＩｎｔｅ西ｎｔ３１ａｓＯＤＮ．
Ｓｕｍｍａｒｙ
Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．ｗｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｔｈｅａｎｔｉ—ａｄｈｅｓｉｖｅａｎｄａｎｔｉ—ｉｎｖａ—ｓｉｒｅｅｆｆｅｃｔｏｆＨＡ，Ｈａｓｅ，ＲＧＤａｎｄＩｎｔｅｇｒｉｎＢｌａｓＯＤＮｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｉｎｄ
ｍｅａｎｓｏｆｂｌｏｃｋｉｎｇｔｈｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｅ—ａｆｅａｓｉｂｌｅ
ｅｒ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＤ４４ａｎｄＩｎｔｅｇｒｉｎｌ３１ｏｎｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅｗｅｒｅｄｅｔｅｒ。ｍｉｎｅｄｂｙｉｎｄｉｒｅｃｔｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．ＡｆｔｅｒＳＧＣ７９０１ｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｏｒｖａｒｉｏｕｓｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆＨＡ，ＨａｓｅａｎｄＲＧＤ．ｔｌｌｅｉｒａｄｈｅｓｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｔｏＥＣＭｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＭｔｉｔａｎｄＢｏｙｄｅｎｃｈａｍｂｅｒ
ｒｅｃｏｒｄｅｄ．Ａｆ－ｍｅｔｈｏｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｃｅＨｓｗｅｒｅａｌｓｏ
ｔｅｒＯＤＮｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＳＧＣ７９０１，ｔａｋｉｎｇｌｉｐｏｓｏｍｅａｓｖｅｃｔｏｒ，
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过表达CCR3的人胃癌细胞株的建立
过表达CCR3的人胃癌细胞株的建立 目的建立过表达CCR3人SGC7901胃癌细胞细胞株，为后续CCR3在胃癌转移的研究奠定基础。方法分离正常人外周血单个核细胞，提取总RNA，PCR 扩增CCR3基因CDS序列，连接至质粒pEFP-N1，进行CCR3基因的克隆，构建含有CCR3基因的pEFP-N1-CCR3重组质粒。重组质粒通过脂质体转染法对人SGC7901胃癌细胞进行转染。结果Realtime-PCR及Westernblot证实CCR3基因能够在人SGC7901胃癌细胞中正确表达。结论成功建立稳定表达CCR3基因的SGC7901胃癌细胞株，为研究CCR3在胃癌细胞株转移中的机制奠定了基础。 标签：CCR3；SGC7901细胞；胃癌转移 趋化因子受体（Chemokine receptor）是表达在一些特定的细胞表面的G蛋白偶连的七跨膜域受体[1]。这些受体与细胞外的配体趋化因子结合。与特异的趋化因子结合后，趋化因子受体引发钙离子内流而产生细胞趋化反应，从而诱导细胞到生物体的特定部位。CCR3在胃癌远端迁移上到底扮演什么样的角色也未完全清楚。目前，将外源性CCR3基因转入人胃癌细胞使其过度表达未见报道。本实验尝试构建含有CCR3的重组质粒pEFP-N1-CCR3并转染至人SGC7901胃癌细胞，并检测转染后SGC7901细胞CCR3的表达情况。 1资料与方法 1.1一般资料 1.1.1质粒菌株和慢病毒包装细胞pEFP-N1慢病毒穿梭载体，psPAX2和pMD2G包装质粒，大肠杆菌DH5。人SGC7901胃癌细胞，生长培养基为高糖DMEM培养基，含10%胎牛血清。 1.1.2 主要试剂及引物Lipofectine2000转染试剂盒；T4连接酶；质粒抽提试剂盒；限制性内切酶EcoRI和BamHI；胎牛血清；CCR3一抗；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG。 1.2人SGC7901胃癌细胞的培养人SGC7901胃癌细胞常规培养于含10%胎牛血清的DMEM高糖的完全培养基中，置于37℃，5%CO2孵育箱中贴壁培养， 0.25%胰酶3d传代换液一次。 1.3 pEFP-N1-CCR3的构建及鉴定 1.3.1 CCR3的CDS序列扩增取健康人外周血，淋巴细胞分离液分离单个核细胞并抽提总总RNA，在Pubmed中的nucleotide上查询CCR3的CDS编码区并设计克隆引物，并在克隆引物中加入BglII和EcoRI酶切位点，用taq聚合酶扩增CCR3的CDS序列，
胃癌分级分期
《胃癌研究总则》第1版于1963年由日本胃癌研究会(JapaneseResearchSocietyforGastricCancer，JRSGC)出版。《日本胃癌分级》英文版第2版是基于日文版第13版修订而成的，其目的是为胃癌的临床、病理描述提供一个通用的语言，有助于提高胃癌的诊断和治疗水平。 (一)总则 所见用大写字母表示：T(肿瘤侵犯深度)、N(淋巴结转移)、H(肝转移)、P(腹膜转移)和M(远处转移)。字母后标以阿拉伯数字表示每种所见的范围。不明确病例以“X”表示。所见分成四个类别，即临床、手术、病理的和最终所见，分别用加在大写字母前的小写字母c、s、p 和f表示。 至于同时多原发癌，以侵犯胃壁最深的肿瘤为准。 1．临床所见：诊断评价中的任何所见，包括诊断性腹腔镜，都被定义为临床所见。记录为cT2、cNl、cM0、Ⅲ期c。 2．手术所见：任何术中所见，包括冰冻切片、细胞学以及切除标本的大体检查，都被定义为术中所见。治疗性腹腔镜的结果也包括在术中所见之中。 3．病理所见：内镜、腹腔镜或手术切除所得材料任何镜下所见都被定义为病理所见。4．最终所见：基于临床、手术和病理的综合所见被定义为最终所见。当手术和病理所见相矛盾时，以病理所见为准。 (二)原发病变 1．肿瘤位置每个原发病变都应记录其二维的最大值。 解剖上胃可分为三个部分：上(U)、中(M)和下(L)区。如果多于一个区受累，所有受累的分区都要按受累程度描述，肿瘤主体所在的部位列在最前，如LM或UML。肿瘤侵及食管或十二指肠的，分别记作E或D。 胃的横断面可分为四等分：小弯和大弯，前壁和后壁，全周的受累记作“Circ”。 残胃癌的记录要求按下列三个项目以连字符相连：①上次胃切除的原因：良性病变(B)、恶性病变(M)或未知的(X)。②上次胃切除术至当前诊断之间相隔年数(未知：X)。③肿瘤在残胃的位置：吻合处(A)、胃缝合线(S)、胃的其他位置(O)或整个残胃(T)。扩散至食管(E)、十二指肠(D)或空肠(J)也应记录。 例如：B-20-S；M-09-AJ。 如果可能，上次胃切除术的切除范围和重建术式也应记录。 2．大体分型：原发肿瘤的大体分型应与T分级一并记录。 例如内镜诊断：cT0Ⅱa，T1。 0型：表浅、平坦型肿瘤伴或不伴微小的隆起或凹陷。 0Ⅰ型：隆起型。 0Ⅱa型：表浅隆起型。 0Ⅱb型：平坦型。 0Ⅱc型：表浅凹陷型。 0Ⅲ型：凹陷型。 注： (1)在合并两种以上亚型时，面积最大的一种写在最前，其他依次后排，如Ⅱc＋Ⅲ。 (2)0Ⅰ型和0Ⅱa型鉴别如下： 0Ⅰ型：病变厚度超过正常粘膜厚度的2倍。 0Ⅱa型：病变厚度不到正常粘膜厚度的2倍。 1型：息肉型肿瘤，与周围粘膜有明显界限，通常基底较宽。 2型：溃疡型肿瘤，边缘隆起，基底与健胃界限清楚。
URI促进胃癌细胞阿霉素耐药性和细胞迁移
江苏大学硕士学位论文 目录 第一章绪论 (1) 1.1URI基因 (1) 1.2URI与多种恶性肿瘤之间的关系 (2) 1.2.1URI与肝癌 (2) 1.2.2URI与卵巢癌 (3) 1.2.3URI与多发性骨髓瘤 (4) 1.2.4URI与宫颈癌 (4) 1.3胃癌复发转移与预后 (5) 1.4结语 (7) 第二章URI干预胃癌细胞的构建 (8) 2.1实验材料和仪器 (8) 2.1.1实验试剂 (8) 2.1.2实验耗材 (9) 2.1.3实验仪器 (10) 2.1.4相关试剂的配制 (11) 2.2方法 (12) 2.2.1细胞复苏 (12) 2.2.2细胞传代 (13) 2.2.3细胞转染 (13) 2.2.4荧光定量PCR分析 (15) 2.2.5蛋白印记法检测相关蛋白的表达 (18) 2.2.6统计学分析 (21) 2.3结果 (21) 2.3.1Western blotting分析四株胃癌细胞URI的表达 (21) 2.3.2qRT-PCR检测干预胃癌细胞URI在mRNA水平的表达 (21) 2.3.3Western Blotting检测干预胃癌细胞URI的蛋白水平 (23) 2.4讨论 (25) 第三章过表达或敲低URI影响胃癌细胞增殖以及对阿霉素的抵抗 (26) 3.1实验材料和相关仪器 (26) XI
URI促进胃癌细胞阿霉素耐药性和细胞迁移 XII 3.1.1实验试剂 (26) 3.1.2实验耗材和仪器 (26) 3.1.3阿霉素储存浓度的制备 (26) 3.2方法 (27) 3.2.1CCK-8试剂盒检测细胞活力 (27) 3.2.2检测干预后MGC-803和HGC-27细胞对阿霉素的抵抗 (27) 3.2.3统计学分析 (28) 3.3实验结果 (28) 3.3.1过表达和敲低URI对MGC-803和HGC-27细胞增殖的影响 (28) 3.3.2干预URI影响胃癌细胞对阿霉素的耐药性 (29) 3.4讨论 (32) 第四章阿霉素处理下URI对胃癌细胞凋亡的作用及机制 (34) 4.1实验材料和仪器 (34) 4.1.1实验试剂 (34) 4.1.2主要耗材 (34) 4.1.3实验仪器 (34) 4.2实验方法 (35) 4.2.1免疫印迹法 (35) 4.2.2流式细胞仪检测细胞凋亡 (35) 4.2.3统计学分析 (35) 4.3实验结果 (35) 4.3.1URI调控阿霉素作用后细胞凋亡相关蛋白的表达 (35) 4.3.2URI调控阿霉素诱导的细胞凋亡 (37) 第五章URI对胃癌细胞迁移的影响及机制 (40) 5.1实验材料和仪器 (40) 5.1.1实验试剂 (40) 5.1.2实验耗材 (40) 5.1.3实验仪器 (40) 5.2实验方法 (40) 5.2.1Transwell小室实验 (40)
胃癌的发病机制及预防
胃癌的发病机制及预防 姓名：孟慧佳学号：2011013281 班级：生物工程111 正文： 胃界于食道和十二指肠之间，是消化道最宽大的部分，它的形状和位置随内容物的多寡和体位变化而改变。胃分4个部分，靠近食道的部分是贲门部，胃上部膨大部分是胃底部，自胃底部往下是胃体部，靠近十二指肠的部分叫幽门部。 在胃内壁上覆盖着一层厚约0.3-1.5毫米的胃黏膜，胃黏膜上生长着三种腺体：即贲门腺、胃底腺和幽门腺。三种腺体加起来的数量是惊人的，每天分泌的胃液的数量约有1500-2500毫升，贲门腺和幽门腺主要分泌黏液，起到保护胃黏膜的作用。胃酸的强刺激和胃蛋白酶的强消化力，都不能破坏胃黏膜，主要就是因为黏液总是先于胃酸和胃蛋白酶分泌出来，并均匀地布散到胃壁上的缘故。胃黏膜的这种巧妙的自我保护功能，是令人叹为观止的大自然的杰作之一。 胃的功能有：1．存放食物。液体食物在胃里停留时间很短，油脂性食物在胃里停留时间较长，混合性食物在胃里停留时间约4-6个小时。 2．胃蛋白酶可消化食物中的蛋白质。 3．制造内因子及吸收维生素B2。 4．胃酸可杀灭随食物进到胃里的细菌。 胃内有食物时，胃的蠕动方向是由贲门向幽门进行，当胃内容物排空后、血糖也消耗到较低水平时，胃会由幽门向贲门方向逆性蠕动，这叫饥饿蠕动，使人产生饥饿感。 胃癌介绍： 恶性肿瘤胃癌起源于胃壁最表层的粘膜上皮细胞，可发生于胃的各个部位（胃窦幽门区最多、胃底贲门区次之、胃体部略少），可侵犯胃壁的不同深度和广度。癌灶局限在粘膜内或粘膜下层的称为早期胃癌，侵犯肌层以深或有转移到胃以外区域者称为进展期胃癌。肉眼或胃镜观察胃癌有多种形态，如表浅型、肿块型、溃疡型、浸润型、溃疡癌（为慢性胃溃疡癌变）。显微镜放大观察癌细胞有多种类型（组织学分类），如腺癌（占约90%，包括乳头状腺癌、管状腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌）、腺鳞癌、鳞状细胞癌、未分化癌、类癌。更细微的癌细胞内部的分子结构也有很多差异，因此，虽都称为胃癌，即使肉眼和显微镜下所见类型是相同的，但个性仍有很大差异，目前并不知晓究竟有多少个性独特的胃癌。 胃癌的发病机制： 正常胃粘膜上皮细胞是由原始新生细胞（干细胞）不断分裂生长分化而来，何时生长何时死亡都是受机体控制的，不会疯狂失控生长。干细胞都有各种原癌基因和抑癌基因，绝大多数情况下原癌基因的特性不表达出来，不会形成致癌物质，因此也就不能发育成胃癌细胞。 有胃癌家族史者原癌基因可能更容易表达出来，这就是遗传的因素。除了遗传等内在因素外，还有很多外在的致癌因素，如上述高危人群面临的各种非遗传因素，也可直接诱发或长期破坏胃粘膜屏障使促癌物质更易诱发干细胞癌基因表达或基因突 变而产生致癌物，使新生不成熟的原始细胞不能分化成具有正常功能的胃粘膜上皮细胞，而是变成各种分化程度不良且生长失控的非正常细胞。 若机体的免疫监测功能正常，往往可以清除少量的异常细胞，但当长期心里状态不佳引起内分泌系统异常及免疫功能长期低下、或异常细胞由于某种未知原因逃逸了机体的免疫监测，则异常细胞最终发展成机体无法控制其生长的胃癌细胞，完成癌变过程。
胃癌MKN45细胞培养液上清对腹膜间皮细胞损伤的实验研究_那迪
胃癌MKN45细胞培养液上清对腹膜间皮细胞损伤的实验研究 那迪，刘福囝，姜成钢，徐昊，王振宁，徐惠绵 Experimental study on destruction of gastric cancer MKN45cells culture medium to peritoneum mesothelial cells Na Di，Liu Funan，Jiang Chenggang，Xu Hao，Wang Zhenning，Xu Huimian Department of Oncology，The First Affiliated Hospital，China Medical University，Liaoning Shenyang110001，China．【Abstract】Objective:To examine the mechanism by which the gastric cancer cells lead to early peritoneal metas- tasis．Methods:HMrSV5cells were co－incubated with the supernatants of gastric cancer cells．Morphological chan- ges of HMrSV5cells were observed．The cell damage was quantitatively determined by MTT assay．The apoptosis of HMrSV5cells was observed under transmission electron microscope．Acridine orange/ethidium bromide－stained con- densed nuclei was detected by fluorescent microscopy and flow cytometry．The expressions of Bcl－2and Bax was im- munochemically evaluated．Results:Conspicuous morphological changes of apoptosis were observed in HMrSV5cells 24h after treatment with the supernatants of gastric cancer cells．The supernatants could induce apoptosis of HMrSV5 cells in a time－dependent manner．The supernatants could up－regulate the expression of Bax and suppress that of Bcl－2in HMrSV5cells．Conclusion:Gastric cancer cells can induce the apoptosis of HPMCs through supernatants in the early peritoneal metastasis．The abnormal expressions of Bcl－2and Bax may contribute to the apoptosis． 【Key words】peritoneal carcinomatosis;stomach neoplasms;mesothelial cell;apoptosis Modern Oncology2013，21(02):0235－0238 【摘要】目的：建立胃癌腹膜转移早期间皮细胞的损伤模型，探讨胃癌腹膜转移早期癌细胞对间皮细胞的损 伤与细胞凋亡的联系，以及凋亡程度与相关蛋白表达。方法：将人胃癌细胞培养液上清，与人腹膜间皮细胞 系HMrSV5共培养。观察间皮细胞形态、增殖改变，透射电镜观察细胞凋亡，流式细胞仪和荧光染色判断凋亡 比例。免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl－2和Bax表达情况。结果：接触胃癌培养液上清24h后，间皮细胞 大片脱落并出现典型凋亡表现。胃癌细胞的分泌物明显抑制间皮细胞的生长。胃癌细胞培养液上清可诱导 间皮细胞凋亡、抑制细胞增殖，呈程度－时间依赖性地抑制间皮细胞抗凋亡蛋白Bcl－2的表达；并能增加促 凋亡蛋白Bax表达。结论：胃癌细胞在腹膜转移早期可以通过其分泌物诱导间皮细胞损伤、凋亡，凋亡机制与 Bcl－2和Bax的失调有关。提示保护间皮细胞，抗间皮细胞凋亡在胃癌腹膜转移治疗中可能有一定应用价 值。 【关键词】腹膜癌转移；胃癌；间皮细胞；细胞凋亡 【中图分类号】R730．23；R735．2【文献标识码】A DOI：10．3969/j．issn．1672－4992．2013．02．04 【文章编号】1672－4992－（2013）02－0235－04 临床上腹膜转移是胃癌根治术后面临的棘手问题。腹膜为癌细胞转移提供了所需的炎性介质，在癌腹膜转移早期，由癌细胞，成纤维细胞，间皮细胞等分泌的细胞因子作用于间皮细胞，使间皮细胞在形态结构功能上发生改变，为腹膜转移提供“土壤”［1］。在对癌细胞浸润间皮组织的研究中，Buck等把癌细胞接种到间皮细胞受损的小鼠腹腔内后， 【收稿日期】2012－08－22 【修回日期】2012－09－21 【基金项目】国家自然科学基金资助项目（编号：81071956） 【作者单位】中国医科大学附属第一医院肿瘤外科，辽宁沈阳 110001 【作者简介】那迪（1982－），男，辽宁人，主治医师，博士，主要从事胃癌腹膜转移研究。E－mail：dawangmo@yahoo．cn 观察到癌细胞在受损区域迅速种植生长，而间皮细胞完好的小鼠却很少发生转移［2］。目前的研究发现，在癌细胞黏附到间皮细胞之前，间皮细胞就已经发生了改变：间皮细胞变圆或半圆形，进而细胞脱落导致间皮下结构暴露，形成裸区，癌细胞进而黏附种植［3－5］。我们认为间皮细胞的上述损伤改变与癌细胞诱导的细胞凋亡相关。基于上述假设，我们拟建立胃癌细胞黏附到间皮细胞之前所释放的细胞因子对腹膜间皮细胞的损伤模型，并检测细胞凋亡是否参与了上述损伤。 1材料与方法 1．1实验材料 试剂：FCS、DMEM、Bcl－2，Bax抗体及二抗、MTT、吖啶橙、溴乙啶（AO/EB）、PI均购自Sigma公司。细胞系：人胃癌细胞株MKN45由中国医科大学细胞生物学教研室提供。人 · 532 · 现代肿瘤医学2013年02月第21卷第2期MODERN ONCOLOGY，Feb.2013，VOL.21，NO.02
早期胃癌大体分型的详细介绍
早期胃癌大体分型的详细介绍 早期胃癌的分型我们可以在很多网上资料和书籍上看到，但是绝大多数都是不一样的，这个患者带来了非常大的麻烦。★西安国医肿瘤医院★专家为大家详细介绍早期胃癌大体分型，以及各个分型之间的关系。 （一）早期胃癌大体类型及其特征 早期胃癌病变范围大小不等，以直径10一40cm最为多见（占60%以上），其大体类型有隆起型、表浅型和凹陷型三大类。 1隆起型（protruded，I型） 肿瘤明显高于周围正常胃黏膜（隆起高度超过正常黏膜厚度的2倍以上），常为有蒂或广基，癌组织局限于黏膜或黏膜与黏膜下层。此型最为少见，约占4%左右。 2表浅型（auperficial，Ⅱ型） 肿瘤较平坦，无明显隆起或凹陷，可进一步分为三个亚型：表浅隆起型(elevated，Ⅱa)，此类肿瘤呈平盘状，稍高于周围正常黏膜，但隆起高度不超过正常黏膜厚度的2倍，此型约占73%；表浅平坦型（flat，Ⅱb），无肉眼可见的隆起或凹陷，黏膜无明显异常，可稍显粗糙，此型约占105%；表浅凹陷型（depressed，Ⅱc），病灶呈浅表凹陷，但深度只限于黏膜层内，形成癌性糜烂，此型最为常见，占39.5%。 3凹陷型（excavated，m型） 肿瘤所在部位明显下陷，形成深达黏膜下层的溃疡，此型仅次于Ⅱc型，约占23%。 以上三大类五种类型的复合型常见，如浅表凹陷型(Ⅱc)肿瘤中心形成溃疡(Ⅲ型)，则定义为Ⅱc+m型，此种复合型较为常见，约占10%，而其他复合型只占6%。 WHO工作小组还将限于黏膜层的早期胃癌分为小黏膜癌((4cm)和浅表性癌(>4cm)。两者可完全位于黏膜内或局灶浸润黏膜下层。当黏膜下层广泛浸润时，称为穿透变型（penetrating variant，Pen），包括Pen A和Pen B两个亚型。Pen A 的边缘呈挤推式，Pen B则在多处穿透黏膜肌层。Pen A癌比Pen B癌少见。当肿瘤同时存在以上两种生长方式时，称为混合性变型（mixed variant）。
CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药
CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比 星的耐药 作者：吴达龙睢凤英张成文吕焕章 【摘要】目的: 探讨氯喹衍生物CQ11对耐长春新碱(vincristine, VCR)人胃癌多药耐药(multidrug resistance, MDR) 细胞株SGC7901/VCR的耐药逆转作用。方法：将SGC7901和SGC7901/VCR细胞分别与各种浓度的多柔比星(doxorubicin, DOX)和/或CQ11在体外共同培养，采用MTT法检测其细胞毒作用；采用荧光分光光度计测定细胞内DOX蓄积量。结果：SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的37.5倍。1.0、2.5 和 5.0 mol/L的CQ11分别使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到 2.2倍(P<0.01)、5.5倍(P<0.01) 和14倍(P< 0.01)。DOX蓄积实验表明，CQ11能显著增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积，而对SGC7901细胞内DOX蓄积无明显影响。结论：通过增加细胞内DOX蓄积量，CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性 【关键词】多药耐药; 氯喹; 胃癌; 逆转剂 肿瘤多药耐药(multidrug resistance, MDR)指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐药性，同时对其它结构上无关、作用机理各异的抗肿瘤药物也产生交叉耐药性［1］。MDR是一种独特的广谱耐药现象，
是导致化疗失败的重要原因，许多天然来源的抗肿瘤药物如长春新碱(vincristine, VCR)、紫杉醇等及蒽环类抗癌抗生素如多柔比星(doxorubicin, DOX)、柔红霉素都极易发生MDR［1~3］。MDR主要的耐药机理为多药耐药基因mdr1扩增及其蛋白产物P-糖蛋白(permeability glycoprotein, Pgp)过表达。作为一个ATP依赖性的药物转运泵，Pgp能主动将疏水性抗肿瘤药物泵出胞外, 从而减少细胞内药物蓄积, 增加药物外排［3］。MDR逆转剂，如维拉帕米和环孢菌素A，能与Pgp结合，抑制Pgp的药物外排功能，增加耐药细胞内抗肿瘤药蓄积，从而恢复细胞对抗肿瘤药的敏感性。然而，大量的临床研究结果表明，上述肿瘤MDR逆转剂由于体内毒性大，体内难以达到有效逆转浓度［3］。因此积极寻找高效低毒的新型MDR逆转剂，已成为肿瘤MDR研究的热点。 氯喹 CQ11 图1 氯喹和氯喹衍生物CQ11的化学结构 CQ11是以抗疟药氯喹的结构母核为基础, 经侧链改造而获得的新化合物(化学结构见图1)，由本课题组合成。本研究以耐VCR人胃癌MDR细胞株SGC7901/VCR为体外模型，研究CQ11对SGC7901/VCR 细胞的体外MDR逆转效应。
胃癌细胞凋亡相关基因
胃癌细胞凋亡基因 西安国医肿瘤医院研究人员通过大量的研究分析发现，胃癌细胞凋亡是有相关基因控制的，目前发现的有以下三个基因：bcl-2基因、Bax和Fas/FasL。下面来详细介绍： 1.bcl-2基因 bcl-2基因编码26kD的膜蛋白，是第一个被确认有抑制凋亡作用的基因。bcl-2基因激活、过表达可抑制细胞凋亡，从而使细胞增殖和凋亡不平衡，而且会使具有遗传改变又得不到修复的细胞免于死亡而进入细胞循环，多种遗传成分改变可导致肿瘤的发生。因此，bcl-2在肿瘤发生发展中起着重要的作用。 乳腺癌中，高表达的Bcl-2与乳腺癌细胞凋亡指数呈负相关，而且与有丝分裂指数呈正相关，提示在细胞增殖活跃期，Hcl-2阳性细胞凋亡减少，即Bcl-2过表达影响了细胞凋亡。Nakamum检测了肠型胃癌、胃腺瘤、肠化生及非化生胃黏膜，发现在肠化生中Bcl-2蛋白表达量最高(77.1%)，胃腺瘤(37.5%)和肠型胃癌(10.8%)中较低。 因而认为，Bcl-2蛋白的过表达主要是在胃癌的早期阶段起作用，使转化细胞逃避凋亡，以进一步积累其他基因的异常。Lauwers采用单克隆抗体124检测正常、伴有肠化生的萎缩性胃炎及异型增生胃黏膜，发现正常胃黏膜仅在胃小凹与腺体交接处增生的干细胞中有Bcl-2蛋白的微表达，而在肠化生黏膜的过增生区域及胃小凹表面分化不良的细胞中均可检测到Bcl-2，这些分化不良的细胞正是胃癌癌前病变的一个特征。 因此推测，胃黏膜受损后增生加快，导致一些分化不良的细胞出现，这些分化不良的细胞又因Bcl-2蛋白的过表达而逃避凋亡，呈现生长优势，细胞寿命延长，基因变异积累的机会增加，为进一步向恶性细胞转化提供了条件。 2.Bax Bax是第一个被分离到的Bcl-2家族成员之一，与Bcl-2的同源区主要集中在BH1和BH2区。Bax的功能与Bcl-2相对，可促进细胞的凋亡。Bax与Bcl-2在体内的表达呈部位互补形式。Bcl-2倾向于分布在生长细胞、增殖细胞，而Bax倾向于分布在终末分化细胞、退化细胞，在凋亡旺盛的细胞中表达更强。 国外Komatauin报道，在胃黏膜癌变的早期阶段，即已发生Bax的表达异常。
胃癌流行病学
胃癌的流行病学状况 胃癌 5 年生存期仅20% 胃癌在全世界范围内是发病率最高的癌症之一。胃癌的 5 年相对生存期在 20%左右，男性的发病率是女性的 1.5～2.5 倍。大约 90%的胃癌属于腺癌，可分为两个主要类型：（ 1）肠型胃癌，分化较好，在男性、老年患者中更常见。肠型胃癌在高风险地区中占主导地位，比如东亚、东欧、中南美洲等地区。（ 2）弥漫型胃癌，分化不好，在男性与女性中发病率更接近，在年轻患者中更常见。弥漫型胃腺癌的地区分布更均匀，与 A 型血及遗传关系密切。近几十年来肠型胃癌的发病率明显下降，带动了胃癌的整体发病率的降低，而弥漫型胃癌发病率却上升了。 50岁～80 岁，胃癌的发病率随着年龄的增加而显著升高 胃癌的发病率随着年龄的增加而显著升高，以男性胃癌发病率为例， 45～54 岁发病率为 70/10 万， 55～64 岁阶段为 145.7/10 万， 65～74 岁为 264.3/10 万。发病的高峰年龄在 50岁～80 岁。 全球胃癌发病状况 90 万 vs 70 万——全球每年 90 万胃癌新患者，同时有 70 万人死于胃癌 2002 年全球每 10 万名男性发生胃癌的的人数为 22 人，女性为 10.4 人；死亡率在男性中为每 10 万人 16.3 人，女性为 7.9 人。 2002 年全世界估计有 90 万胃癌新患者（其中男性为 60 万，女性为 33 万），同时有 70 万人死于胃癌（男性为 45 万人，女性为 25 万人）。男性中，胃癌的发病率仅次于胃癌和前列腺癌，而死亡率仅次于肺癌居第二位。在女性中，胃癌的发病率居第五位，排在乳腺癌、宫颈癌、肺癌和肠癌之后。 按地理分布，有三分之二的胃癌分布在日本、中国、韩国、中南美洲、东欧和中东的部分地区，在北美、澳大利亚和新西兰、北欧和印度的发病率较低。发达国家的胃癌的发病率和死亡率在近几十年有显著下降了，美国在 20 世纪 50 年代年死亡率约为 22/10 万， 90 年代下降至 3.7/10 万以下。日本近年来亦有明显下降趋势，这得益于采用 X 线钡餐检查或胃镜定点筛查，大大提高了早
胃癌干细胞
润文宝 | 日期：2011-06-25 胃癌干细胞的研究进展 恶性肿瘤的克隆性增殖生长、维持及转移潜能取决于一群数量稀少、具有自我更新(self-renewal)潜力的细胞群体——肿瘤干细胞(Cancer stern cell，CSC)。目前肿瘤的放射和化学治疗对细胞周期活跃的肿瘤细胞具有较强的杀伤作用，但不能根除细胞周期相对沉默的肿瘤干细胞，这可能是肿瘤复发的主要原因。胃癌对人类健康危害极大。研究胃干细胞及胃癌干细胞发生、发展的分子和细胞学机制，发现相关的特异分子靶点和针对这些靶点的药物，将为胃癌相关基础研究及临床靶向治疗提供新的切人点。 一、肿瘤干细胞学说的提出 肿瘤组织与胚胎组织间具有相似性，肿瘤可能起源于胚胎样组织。肿瘤细胞与胚胎干细胞及成体干细胞间存在许多相似性。近年来提出的肿瘤干细胞学说认为，肿瘤组织中存在极少量细胞，具有无限自我更新和高度增殖能力以及多种分化潜能，能产生不同表型的肿瘤细胞，使肿瘤在体内不断扩大或转移形成新的肿瘤。1994年分离获得的人髓系白血病干细胞证明了肿瘤干细胞的客观存在，之后又相继从乳腺癌、脑肿瘤和前列腺癌组织中分离并培养出各种肿瘤干细胞，证实了实体肿瘤干细胞的存在。 二、胃干细胞、炎性反应与胃癌的发生 胃干细胞是具有自我更新和复制能力的原始细胞，属于成体干细胞，通过向祖细胞分化。进一步分化形成胃的各种腺体细胞，维持胃黏膜更新及组织内环境稳定。由于缺乏特异性标志和理想的分离纯化技术，故目前对胃干细胞的研究较少。有研究证实G蛋白偶联受体(Lgr5)表达于胃腺体底部细胞中，通过分化细胞学示踪实验发现，胃腺体细胞均来自于Lgr5阳性的细胞。另有研究通过结合转基因技术和绿色荧光蛋白示踪技术，成功示踪了数量极少的胃祖细胞，这些细胞正常情况下呈静息状态，当受到炎性刺激时，祖细胞发生对称分裂，进行数量扩增，同时还可进行不对称分裂分化为各种腺体细胞。胃干细胞受到持续的炎性刺激、自身抗体或其他因素作用时可发生肠上皮化生，此过程可能是组织细胞干细胞水平分化异常所致。胃干细胞可产生胃型和肠型细胞，胃癌表型表达的异质化反映了胃祖细胞向这两个方向分化的内在潜能。已有研究证实幽门螺杆菌通过对胃上皮干细胞的影响和作用，在慢性萎缩性胃炎向胃腺癌的转化过程中起关键作用。小鼠胃上皮祖细胞系(mGEP)能支持胃癌相关幽门螺杆菌的吸附。对感染后的mGEP进行基因芯片表达谱分析显示。mGEP代谢和信号传导路径发生改变，氨基酸代谢的免疫过氧化物酶抗体路径(IPA)表达上调，多胺合成相关的限速酶鸟氨酸脱羧酶1(Odel)表达明显上调，该酶与胃肠型化生及慢性胃炎到胃癌的转化相关；抗酶抑制剂(Azinl)的表达亦显著上调。该蛋自在人胃癌组织中高表达，并与Odcl的表达量和活性相关。慢性炎性刺激使得胃上皮干细胞发生转化进展，促进肿瘤形成和进展。有研究称肿瘤为“不可治愈的炎性反应。慢性炎性反应能
术前化疗对进展期胃癌细胞凋亡的影响
术前化疗对进展期胃癌细胞凋亡的影响 梁 辉1,陈国玉1,俞学明1,冯振卿 2 (1.南京医科大学第一附属医院,江苏南京210029;2.南京医科大学病理教研室,江苏南京210029) 摘要:[目的]研究术前化疗对进展期胃癌细胞凋亡的影响。[方法]21例胃癌患者术前静脉滴注52氟尿嘧啶150m g /k g ?d ,术中取胃癌组织标本,应用3′2OH 末端标记法(T UNE L )检测细胞的凋亡率(AI ),与非化疗组比较。[结果]术前应用52Fu 组总的T UNE L 指数为(8.6±3.8)%,对照组总的标记指数为(5.4±2.6)%,差异有显著性(P <0.05);52Fu 诱导作用与细胞分化有关。52Fu 诱导胃癌细胞凋亡有剂量依赖性。[结论]术前应用52Fu 辅助化疗可明显诱导进展期胃癌细胞凋亡,具有一定的临床应用价值。 关键词:胃肿瘤;细胞凋亡;药物疗法;氟尿嘧啶中图分类号:R735.2文献标识码:A 文章编号:1671-170X (2001)04-0231-02 T he E ffect of Preo p erative Chem othera py on Cell A p o p tosis in Advanced G astric Carcinoma LIANG Hui ,CHEN G uo 2y u ,Y U Xue 2m in g ,et al. (The Fir st A ff iliated H os p ital o f Nan j in g M edical Univ er sit y ,Nan j in g 210029,China ) 收稿日期:2001-03-27 目前临床胃癌仍以中晚期为主,为提高胃癌的 切除率,改善预后,临床上倡导以手术为基础的综合治疗,其中术前化疗受到广泛关注,术前化疗主要用于中晚期胃癌,而化疗药物对于肿瘤细胞的作用主要是通过诱导癌细胞凋亡的途径。体外细胞培养验证了多种药物和理化因素可诱导胃癌细胞凋亡,术前应用52氟尿嘧啶(52Fu )诱导进展期胃癌细胞凋亡国内未见报道。本研究探讨其诱导凋亡的规律,报道如下。 1 材料与方法 1.1 一般资料 2000年1月～2000年12月收治的胃癌患者,随机进入术前化疗组(术前化疗+根治术)21例。化疗组中男性15例,女性6例,平均年龄54.6岁。对于肝肾功能异常,恶液质,未能根治以及重度贫血,年龄>70岁的患者不入组。 所有病人术前均经病理确诊,术后有病理诊断, 临床资料完整,均为腺癌。 52Fu 应用方法:按150m g /k g ?d 计算用量,以0.25g 为最小剂量单位,静脉滴注至术前一天,病人最长滴注5天。 1.2DNA 原位末端标记法(T UNE L ) [1] 术中标本切下后即取癌组织,以10%中性甲醛固定,石蜡包埋,切片厚度4μm 。试剂盒购自博士德公司,严格按说明操作。1.3凋亡指数计算(AI ) 随机记数5个高倍镜的肿瘤细胞共500个,计算每100个细胞中阳性细胞数即凋亡指数(AI )。1.4统计学方法 各组数值以均数±标准差(x ±s )表示,显著性检验采用t 检验。 2 结果 2.1 胃癌组织细胞凋亡的观察 HE 染色下,凋亡细胞散在分布于胃腺上皮内,表现核固缩、碎裂。末端标记后,凋亡细胞核呈棕色或棕褐色,多位于核膜上,或形成凋亡小体,部分胞 Abstract :[Pur p ose ]T o stud y the effect of p reo p erative chem othera py on cell a p o p tosis in advanced g astric carcinom a.[M ethods]52Fu 150m g /k g ?d w as adm inistered intravenoul y p reo p eration 21p atients.T he a p o p tosis index of g astric carcinom a cells w as evaluated b y in situ T UNE L and com p ared betw een p re -and non 2chem othera py g rou p .[Results]T he AI w as (8.6±3.8)%in p re 2chem othera py g rou p and (5.4±2.6)%in control g rou p .T here w as si g nificant difference betw een tw o g rou p s (P <0.05).T he induction of a p o p tosis b y 52Fu w as associated w ith dosa g e and g rade.[C onclusions]T his stud y su gg ests that the a p o p tosis m a y be induced b y p reo p erative adm inistration 5 2Fu in advanced g astric carcinom a which has the value of clinical a pp lication. K e y w ords :g astric neo p lasms ;a p o p tosis ;dru g thera py ;fluorouracil
莪术醇对人胃癌细胞凋亡、MMP2、NO影响的初步
·论著·2012年12月第9卷第34期 中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD 胃癌在我国是最常见的恶性肿瘤之一，手术是其最有效 的治疗方法，对于术后复发失去再次手术机会的及晚期胃癌 患者，化疗仍是最有效的手段之一，但其疗效不尽人意，因为在消灭肿瘤细胞的同时，受其毒副作用影响而表现出较差的预后。因而寻求一种新的治疗方案迫在眉睫。肿瘤的靶向治疗基于分子水平，通过抑制相关蛋白或基因在信号转导通路、血管生成等途径发挥较强的抗肿瘤作用，且细胞毒性作莪术醇对人胃癌细胞凋亡、ＭＭＰ２、ＮＯ影响的初步探讨 徐立春陈海燕文洁陶亚玲 扬州大学医学院肿瘤防治研究中心，江苏扬州225001 [摘要]目的初步探讨莪术醇（Curcumol ）对人胃腺癌细胞（SGC-7901细胞）凋亡、基质金属蛋白酶（MMP2）、一氧化氮（NO ）的影响。方法将莪术醇溶于无水乙醇中，初始浓度为9mg/mL ，设实验1、2、3、4、5组，莪术醇的浓度分别是 7.5、15、30、60、120μg/mL ，并以含1%无水乙醇的培养液为对照组。采用台盼蓝（Trypan blue ）、噻唑蓝（MTT ）法检测SGC-7901细胞的活性及莪术醇对SGC-7901细胞抑制增殖的影响；用流式细胞仪（FACSCalibur ）检测莪术醇对SGC-7901细胞的凋亡率；用蛋白质印迹法检测莪术醇作用于SGC-7901细胞后，其MMP2的表达情况；NO 试剂盒检测莪术醇作用SGC-7901细胞后的细胞培养液上清的NO 含量。结果30μg/mL 的莪术醇在药物浓度与抑制肿瘤生长方面效果较佳，与对照组比较，其抑制肿瘤细胞增殖差异有统计学意义（P <0.05）；莪术醇实验组能促进细胞凋亡，与对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）；莪术醇实验组作用细胞后，其MMP2蛋白表达明显下降，与对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）；实验研究表明，随着莪术醇实验组浓度的增加，其细胞培养液上清中的NO 含量逐渐降低，与对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）。结论30μg/mL 的莪术醇浓度是最佳药效组，它能显著抑制SGC-7901细胞的增殖，明显促进肿瘤的细胞凋亡，显著抑制MMP2的表达，降低细胞培养液上清中的NO 含量，从而发挥系列抗肿瘤作用。本研究从细胞分子水平探讨莪术醇治疗胃癌可能存在的部分机制，为临床应用莪术醇及其衍生物或结构类似物治疗胃癌提供理论与试验依据。 [关键词]莪术醇；SGC-7901；凋亡；基质金属蛋白酶；一氧化氮 [中图分类号]R000[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）12（a ）-0018-04 Preliminary discussion on effect of curcumol in apoptosis,MMP2and NO in SGC-7901cells XU Lichun CHEN Haiyan WEN Jie TAO Yaling Cancer Prevention Research Center,Medical College of Yangzhou University,Jiangsu Province,Yangzhou 225001,China [Abstract]Objective To discuss the effects of Curcumol on the apoptosis,MMP2and NO of human gastric cancer cells (SGC-7901cells).Methods Curcumol was dissolved in dehydrate alcohol and the initial concentration of Curcumol was 9mg/mL.Group 1,group 2,group 3,group 4and group 5were set up as experimental groups.The Curcumol concentrations were set as follows:7.5,15,30,60,120μg/mL,control group contained 1%dehydrate alcohol (dissolvent compare).The Trypan blueand method was used to analyze the cytoactive of SGC-7901;MTT assay was performed to study the inhibitory rate of SGC -7901cells proliferation;the metastasis of SGC -7901was described through the scratches experiment;the apoptosis rate were detected by FACSCalibur and the expression of Matrix metalloproteinase 2(MMP2)were detected by Western Blot.The content of NO in cell culture medium was detected by NO kit.Results Curcumol had a good effect on drug concentration and restrain the tumor growth in 30μg/mL,and compared with controls,it had significant difference in restrain the proliferation of tumor cell (P <0.05);Curcumol could promote the apoptosis,it showed significant difference when compared with controls (P <0.05);Curcumol could make the expression of MMP2protein descend to varying de -grees,it had significant difference when compared with controls (P <0.05);this research showed with the increasing of the concentration of curcumol,the content of the NO in the supernate gradually reduced,it had significant difference when compared with controls (P <0.05).Conclusion Curcumol in 30μg/mL is the best efficacy group,it can significantly inhib -it the proliferation of SGC-7901cell,significantly promote the tumor cell apoptosis,significantly inhibit the expression of MMP2,reduce the content of NO in supernate,and express the series antitumor function.This study discusses the possible mechanism of curcumol cure the stomach cancer from cell and molecular level;provide the basis in theory and experiment for clinical application that Curcumol and its derivatives or structure analogues treat stomach cancer. [Key words]Curcumol;SGC-7901;Apoptosis;MMP2;NO [基金项目]江苏省医学卫生重点基金资助项目（编号：K200511）。 [作者简介]徐立春，研究员，教授，主要从事肿瘤防治基础与临床方面的 研究。18