石油发酵产蛋白酶菌株Pseudomonas aeruginosa Nu53-1减毒的研究
微生物学智慧树知到答案章节测试2023年武汉科技大学
第一章测试1.一种新的瘟疫正在全球蔓延，它是由病毒引起的（）。
A:艾滋病B:鼠疫C:霍乱D:天花答案:A2.柯赫提出了证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则（）。
A:菌种原则B:柯赫原则C:免疫原理D:巴斯德原则答案:B3.国际通用的细菌命名法是（）。
A:古英文命名法B:德文双名法C:拉丁文双名法D:中文命名法答案:C4.微生物在整个生物界的分类地位，无论是五界系统，还是三域系统，微生物都占据了（）的“席位”。
A:少数B:不太多C:绝大多数D:非常少数答案:C5.细菌分类中，模式菌株是（）的模式。
A:属B:种C:目D:科答案:B6.在微生物分类中Amoeba属于（）。
A:原生生物界B:真菌界C:病毒界D:原核生物界答案:A7.可以产生青霉素的微生物学名是（）。
A:Aspergillus nigerB:Saccharomyces cerevisiaeC:Bacillus subtilisD:Penicillium chrysogenum答案:D8.产生伴孢晶体的微生物学名是（）。
A:Escherichia coliB:Bacillus thuringiensisC:Pseudomonas aeruginosaD:Saccharomyces cerevisiae答案:B9.我国学者汤飞凡教授的（）分离和确证的研究成果，是一项具有国际领先水平的开创性成果。
A:鼠疫杆菌B:天花病毒C:沙眼病原体D:结核杆菌答案:C10.微生物基因组序列分析表明，在某些微生物中存在一些与人类某些遗传疾病相类似的基因好，因此可以利用这些微生物作为（）来研究这些基因的功能，为认识庞大的人类基因组及其功能做出重要贡献。
A:模式生物B:供体C:突变材料D:受体答案:A11.巴斯德不仅用曲颈瓶实验证明微生物非自然发生，推翻了争论已久的“自生说”，而且做了许多其他重大贡献，例如证明乳酸发酵是由为何物引起的，首次制成狂犬疫苗，建立了巴氏消毒法等。
微生物发酵生产脂肪酶的研究进展
微生物发酵生产脂肪酶的研究进展脂肪酶是一种催化脂肪水解的酶，在食品、医药、洗涤等行业具有广泛的应用。
微生物发酵生产脂肪酶是一种可持续、高效、环保的生产方法，近年来受到越来越多的关注。
本文将对微生物发酵生产脂肪酶的研究现状和进展进行综述。
一、常用生产菌株1、真菌Aspergillus niger、Aspergillus oryzae、Rhizopus oryzae、Rhizomucor miehei等真菌已经被广泛用于脂肪酶的生产，这些菌株生长快，环境适应性强，能够在贫瘠的培养基上生长，同时也有高水平地产酶能力。
2、细菌Pseudomonas aeruginosa、Bacillus subtilis、Escherichia coli等细菌也是常用的脂肪酶产生菌株。
相比于真菌，细菌生长更快，能够利用廉价原料生产酶，具有成本低、效率高的优势。
Pseudomonas aeruginosa可以在低pH、低氧的条件下仍有很好地产酶能力，Bacillus subtilis也可以在含大量盐和大分子多糖的条件下生长，并且不需要经常移植，因此被广泛用于工业生产中。
Escherichia coli是一种常见的大肠杆菌，发酵条件相对简单，同时也具有高产酶能力的优点。
二、生产方法微生物发酵生产脂肪酶可以利用固态和液态发酵两种方法进行。
1、固态发酵固态发酵是指微生物在不含或添加少量水的条件下在固体底物上生长繁殖的过程。
固态发酵具有低成本、低能耗等优点，因此被广泛用于脂肪酶的生产。
6%豆腐渣和啤酒酵母配成的混合物是常用的培养基，长时间的固态发酵可以提高酶活力和酶产量。
同时，加入不同的辅料如磷酸盐、酵母提取物、麦芽粉等也可以提高酶活力。
不同的细菌和真菌对液态培养基的需求是不同的，产酶高峰期也会有所不同。
一般而言，前期生长过程中需要较多的氮源，并需要一定量的葡萄糖，而后期需要适度减少氮源以提供产酶所需的碳源。
液态发酵产酶能力高，且过程易于控制，因此被广泛用于脂肪酶生产中。
产脂肪酶菌株的筛选鉴定及响应面法
摘要本文开展了产脂肪酶菌株的筛选鉴定及响应面法优化发酵工艺试验,确定得到的高产脂肪酶菌株为Youzh-1,对其进行16S rRNA 测序分析,确定其为荧光假单胞菌,在单因素试验的基础上采用响应面法对Youzh-1的发酵工艺进行进一步优化设计,得到最佳发酵工艺为葡萄糖添加量18.825g/L 、牛肉膏添加量25.98g/L 、温度41℃、pH 值6。
在此条件下测得脂肪酶活力为79.87U/mL ,较理论值87.19U/mL 减少了8.39%,证明模型可靠。
关键词脂肪酶;菌株;筛选;鉴定;响应面法;发酵工艺;优化中图分类号TQ925.6文献标识码A 文章编号1007-5739(2022)12-0165-06DOI :10.3969/j.issn.1007-5739.2022.12.046开放科学(资源服务)标识码(OSID ):Screening and Identification of Lipase-producing Strain and Optimization of FermentationProcess by Response Surface MethodologyQIN Hao LIU Kai DENG Wenxi LI Shan YU Shuping WANG Mengyuan GUO Donghui *(College of Life Sciences,Shandong First Medical University,Tai ′an Shandong 271016)Abstract In this paper,the screening and identification of lipase -producing strain and the optimization of fermentation process by response surface methodology were researched.The obtained high lipase-producing strain was Youzh-1,which was determined to be Pseudomonas fluorescens by 16S rRNA sequencing analysis.On the basis of the single factor experiment,the response surface methodology was used to further optimize the fermentation process of Youzh-1.The optimum fermentation process was obtained as follows:the addition of glucose was 18.825g/L,the addition of beef extract was 25.98g/L,the temperature was 41℃,and the pH value was 6.Under these conditions,the lipase activity was measured to be 79.87U/mL,which was 8.39%lower than the theoretical value (87.19U/mL),which proved that the model was reliable.Keywords lipase;strain;screening;identification;response surface methodology;fermentation process;optimization产脂肪酶菌株的筛选鉴定及响应面法优化发酵工艺秦昊刘凯邓文玺李珊于淑萍王梦圆郭东会*(山东第一医科大学生命科学学院,山东泰安271016)脂肪酶在人们的生产生活中发挥着重要作用[1]。
原油降解菌株Pseudomonas.aeruginosa AS1生理生化性质及分类研究
原油降解菌株Pseudomonas.aeruginosa AS1生理生化性质及分类研究梁凯强;贾东林;侯亚妮;王飞;惠鑫;马志峰【摘要】原油降解菌株AS1筛选自延长油田油水样,对延长轻质原油具有良好降解能力,通过生理生化指标和16SrDNA基因序列分析进行了菌种鉴定,原油降解菌株AS1的16SrDNA基因序列与Pseu-domonas aeruginosa的相似度为99.1％,因而将其命名为P.aeruginosa AS1.该菌株的最适生长温度为37℃,能以延长轻质原油、液体石蜡为唯一碳源生长,并能合成鼠李糖脂类生物表面活性剂,该表面活性剂对柴油、煤油和原油等均有很好的乳化效果,在常温下形成EI24值为100％的乳状液.鉴于P.aeruginosaAS1的良好生物属性,该菌株有进一步进行微生物矿场试验的潜力.【期刊名称】《内蒙古石油化工》【年(卷),期】2011(000)020【总页数】4页(P120-123)【关键词】原油降解菌株;Pseudomonas aeruginosa;生物表面活性剂;EI24【作者】梁凯强;贾东林;侯亚妮;王飞;惠鑫;马志峰【作者单位】陕西延长石油(集团)有限责任公司研究院,陕西西安710075;陕西延长石油(集团)有限责任公司瓦窑堡采油厂,陕西子长717400;陕西延长石油(集团)有限责任公司瓦窑堡采油厂,陕西子长717400;陕西延长石油(集团)有限责任公司瓦窑堡采油厂,陕西子长717400;陕西延长石油(集团)有限责任公司瓦窑堡采油厂,陕西子长717400;陕西延长石油(集团)有限责任公司瓦窑堡采油厂,陕西子长717400【正文语种】中文【中图分类】TE357.9微生物提高石油采收率(M icrob ial Enhanced O il Recovery,M EOR)是目前国内外发展迅速的一项提高原油采收率的技术,被视为一种很有潜力的采油方法。
其主要方法是将地面分离培养的微生物菌液(外源微生物)和营养液注入油层,或单纯注入营养液激活油层内源微生物,使其在油层内生长繁殖,利用微生物及其代谢产物对油藏原油、地层产生作用,提高原油的流动能力,或改变液流方向,从而提高采收率[1]。
玉米糖化物发酵产微生物胞外多糖的研究
玉米糖化物发酵产微生物胞外多糖的研究玉米糖化物是极受欢迎的甜味剂，也是一类多糖物质，最近也受到越来越多的关注。
玉米糖化物发酵过程可以用来制备多发酵产物，其中一类叫做微生物胞外多糖（EPS）。
本文旨在探讨玉米糖化物发酵产微生物胞外多糖的研究。
首先，应该提到的是玉米糖化物发酵涉及的微生物。
目前发现的玉米糖化物发酵所涉及的微生物有枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas putida）、大肠杆菌（Escherichia coli）等等。
它们的发酵产物是细菌的链状多糖（polysaccharides），称为微生物胞外多糖（EPS）。
其次，本文将论述玉米糖化物发酵产微生物胞外多糖的过程。
玉米糖化物发酵可以分为三个阶段：第一阶段是活化阶段，其中玉米糖化物被分解，形成糖苷和果糖；第二阶段是发酵阶段，细菌将果糖转化为多糖；第三阶段是收获阶段，即将微生物胞外多糖从发酵液中提取。
在这三个阶段之间，还有其它一些因素会影响玉米糖化物发酵，比如温度、pH值、氧含量等。
接下来，本文将介绍玉米糖化物发酵产微生物胞外多糖的优势。
首先，微生物胞外多糖具有众多优势，比如营养、凝胶形成能力、抗氧化活性、抗菌活性、保湿能力等。
其次，玉米糖化物发酵可以以环保的方式提取出高品质的微生物胞外多糖。
此外，微生物胞外多糖还可以用作药物载体，可以增强药物的有效性，提高治疗效率。
最后，介绍一下玉米糖化物发酵产微生物胞外多糖的应用。
由于其高品质，微生物胞外多糖可以用作食品添加剂、生物材料等。
此外，微生物胞外多糖也可作为医药中药成分，可用于治疗各种疾病。
综上所述，玉米糖化物发酵产微生物胞外多糖备受关注，它具有众多优势，可用于食品添加剂、生物材料、医药中药等领域。
希望本文能够给读者提供一定的参考。
欧洲药典EP8.0 2.6.1无菌检验 sterility中英文翻译
2.6.1. STERILITY2.6.1 无菌检查法The test is applied to substances, preparations or articles which, according to the Pharmacopoeia, are required to be sterile. However, a satisfactory result only indicates that no contaminating micro-organism has been found in the sample examined in the conditions of the test.本检查方法适用于按照药典要求应当无菌的原料、制剂或其他物质。
但是，如果按照本无菌检查法的结果符合要求，仅表明在该检查条件下未发现微生物污染。
PRECAUTIONS AGAINST MICROBIAL CONTAMINATION微生物污染防范The test for sterility is carried out under aseptic conditions. In order to achieve such conditions, the test environment has to be adapted to the way in which the sterility test is performed. The precautions taken to avoid contamination are such that they do not affect any micro-organisms which are to be revealed in the test. The working conditions in which the tests are performed are monitored regularly by appropriate sampling of the working area and by carrying out appropriate controls.无菌检测试验应在无菌的条件下进行。
假单胞菌属Pseudomonas Migula的检验
假单胞菌属Pseudomonas Migula的检验Gˉ，直或微弯的杆菌，0.5-1.0×1.5-5.0μm。
多单在。
不产芽孢。
以单极或数根极毛运动，有的种还具短波长的侧毛。
严格需氧。
不能在酸性下（pH4.5）生长，多数种不需要有机生长因子。
化能异养，有的种利用H2或CO为能源兼性化能自养。
接触酶阳性, 产生各种水溶性色素。
自然界分布极广，土壤、淡海水、污水、动植物体表等均存在。
引起疾病(Pseudomonas Disease)的有绿脓杆菌、荧光假单胞菌、鳗败血假单胞菌和恶臭假单胞菌等。
（一）铜绿假单胞菌（P. Aeruginosa）原称绿脓杆菌。
在自然界分布广泛，为土壤中存在的最常见的细菌之一。
各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有本菌存在。
易从外伤、烧伤及尿道感染的标本分离。
本菌存在的重要条件是潮湿的环境。
1 形态及染色特征铜绿假单胞菌为非发酵革兰氏阴性菌，菌体细长，长短不一，呈球杆状或线状，成对或短链状排列。
菌体一端单鞭毛，暗视野或相差显微镜下可见细菌运动活泼。
2 生长特性专性需氧，生长温度25~42℃，最适25~30℃，4℃不生长，42℃可生长，可用以鉴别该菌。
普通培养基上生长18~24h可见扁平、湿润的菌落，能产生水溶性的色素，如绿脓素（pyocynin）与带荧光的水溶性荧光素（pyoverdin）等，使得培养基呈亮绿色。
血琼脂平板生长可见菌落周围有溶血环，菌落呈金属光泽；液体培养基呈浑浊状生长，液体表面形成菌膜，培养基底部生长不良。
3 生化特点该菌氧化酶阳性，能氧化分解葡萄糖、木糖，产酸不产气，但不分解乳糖和蔗糖。
液化明胶、可分解尿素，还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气。
吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。
4 抗原性与分型该菌含O抗原（菌体抗原）及H抗原（鞭毛抗原）。
O 抗原包含两种成分：一种是其外膜蛋白，为保护性抗原；另一种是脂多糖，有特异性。
O抗原可用以分型。
生物采油解堵剂中产蛋白酶菌株的筛选及培养条件优化
作者简介 ： 左佳敏（ ９ ３ ， ， １ ８ 一） 女 硕士研究生 ， 主要从 事天然 产物 资源化学方面 的研究
・
９ ・ ６
第 ２ 期
左佳 敏 等 ： 物 采 油解 堵 剂 中 产 蛋 白 酶 菌株 的 筛选 及 培养 条 件 优 化 生
１ １ ２ 培养 基 ．＿
无 机 营养 液 （ ／ ） Ｎａ １ ． ； ｇ Ｌ ： Ｃ ０ ＮＨ４ １ ． ； Ｓ ． ２ Ｋ２ Ｏ ・Ｈ２ ． ； ＮＯ ． ； ３ Ｃ １ Ｍｇ Ｏ４ ０ ； ＨＰ ４ ３ Ｏ ０ ２ Ｎａ ３０ ２ ＫＨ２ Ｏ ０ ０ Ｐ ４
１ 材 料 与方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 菌株 ． ．
从 大 庆油 田原 油样 品 中筛选 得到 菌种 ， 经部 分生 理 生化实 验及 １ Ｓｒ ６ ＤＮＡ鉴 定 为铜绿 假单 胞菌 ．
收 稿 日期 ：０ ２—０ ２１ ２—２ ； ８ 编辑 ： 志平 任 基 金 项 目 ： 宁 省 工 业 攻 关 计划 项 目（０ ９２ ０ ３ 辽 ２０ ２ ３０ ）
酪素 培养 基［ （ ／ ： ｇ Ｌ） ＫＨ２ Ｏ４ ． ６ Ｍｇ Ｏ ． ； ｎ １ ０ ０ ４ Ｎ Ｃ ． ６ ＮａＨＰ ４ ７ Ｏ １ Ｏ ； Ｐ ３ ； Ｓ ４０ ５ Ｚ Ｃ ２ ． １ ； ａ １ １ ； ２ Ｏ ・ Ｈ２ ． ７ ０ ０ Ｃ Ｃ ２ ． ０ ； ｅ Ｏ ． ２ 干酪 素 ４ 琼 脂 ２ ． ； 离子 水 １０ ０ｍＬ ｐ ６ ５ ． ． ａ １００ ２ Ｆ Ｓ ４ ０ ； ０ ； ０ ０去 ０ ； Ｈ ． ～７ ０ 以上 培养 基使 用前 在 １ １℃ 、 ． ａ ２ ０ １ＭＰ 条件 下 灭菌 ３ ｉ． ０ｒ ｎ ａ
大
庆
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１ ２
０． ５ ５ ０． ５ ７
１． ８丫 １ － ０ ０３ ２． ３丫 １ － ０ ０１
ｌ Ｐ 为样品中未检出回 ） ｏ 复子的样品的比例： ３ ）按公式 ａ 一（ ２（ Ｐ）Ｎ 计算０ 二 ｌ ）１ ｏ／ ｎ ｎ
２ ）按公式 ， （ ／ ２ｌ（ａ １ ２ ＝ Ｎ ｌ ） ＣＮ ｌ ）计算； ａ ｎ ｎ ｎ
的浊度也要低一些。
蛋白酶的摇瓶发酵试验表明，若以对照菌
４
裹 ３ ｕ３１与 Ｂ ２－５毒力比较 Ｎ ５－ ６５２
Ｘ２ －２ ６ ５ ５
攻量，亡／ Ｌ 击（｝数 数 Ｄ 亿死 总 ５ ０
， ‘ ，・ ｝ ５／ ５ ４ ５ ／ ‘５ ／ ｛ １ ９ 亿 ８． ５ ２ ８ ６． １ ４ ３．
６． ７ ３． ３５
５
「 」 赵云泉等：１７．同上 ｐ ２ ２ ９９ ，． ａ ８ （ 三）在筛选０吟缺陷型的过程中， 如果采 「 １ ａｂｒＥ Ｄ ｅ ａ ： ９２ Ｐ ｏ， ｌＡ ａ． ３ Ｇ ｒｅ ． ｔ １５． ｃＮ ｔ ｃｄ Ｓｉ ， ． ｌ ｒ ａ ． ｃ ． 用青霉素浓缩法，当在添加青霉素的同时再添 Ｔ． Ａ．３ ７ Ｓ． ， ８：６ ３ ９． ４ ａ ｅ Ｂ ｏ ｌ ｌ ９０ Ｐｏ． ． ． ． ｍ ｔ ： ｒ ｏ ｘ 加混合氨基酸时， 碱基类缺陷型比例大大提高。 ［ ］ Ｓｍｕｌ Ｆ ｒ ａ ｅ ａ． １６． ｃＳｃ Ｅ ｐ 刀ｉｌａ ｄ ｅ．１ ３ ２ ：３９ ｏ ｎ Ｍ ｄ， （ ） ５ ． ． ０ 鉴于营养缺陷型在微生物遗传研究及其在发酵 ［５］ Ｌｅｉｅ Ｈ． ａ ｄ ． Ｍａ ｒｒ ９ ８ Ｊ Ｉ ｖｎ ， Ｂ ｎ Ｒ Ｌ ． ． ｕ ｅ ：１５ ． ｍ－ ．
衰 ２ 添加混合氮基酸 后对 碱基缺陷型 出现率的影响 添加混合氨 基酸 （ 毫 克／ 毫升）
０ １． ５
缺 陷型 株数
３１ ４ １ ３ ６
各类缺陷型 出现率（ ％） 碱 基 氨基酸｝ 二＊， 双缺
了１ 二〔‘ 七 石 戈了
未 鉴定
０
１ ３ ５． ９ ６ ７．
８ １ ０． １． ６ ２． ０ 。 ｛ ０． ６
完全恢复了。Ｆｒ ｓ和 Ｒｗ ｙ， ｕｅ ｎｓ ｏｌｔ 在鼠伤寒沙 ｅ９
门氏菌进行种内的毒力转导，以两株由非等位 （ 嚏吟 型菌株Ｂ２ ２和Ｎ ５ １ 的突变所引起的嗓吟缺陷型作为受体，以另一 一） 缺陷 ６５ 。 ｕ３ － － 相比， 毒力下降８倍， ６ 我们另一部分工作中用灭 株具有典型毒力的菌株作为供体，当它们被转 活 铜 色 毛 菌６ 测 Ｌ５ １８ ｃ 导成原养型时，毒力也即恢复。我们曾用筛得 的 绿 极 杆 ． 得 Ｄ为２．亿２ １ ｏ ９ ） 而 Ｂ ２－５ ６５２ 的活菌攻击 Ｌ Ｓ也已达 １． Ｄ。 ８ ５亿， 的漂吟缺陷型 Ｂ２－５攻击家兔并检 查体 内 ９ ６５２ 两者相当接近， 说明毒力下降是明显的。 各主要器官的感染情况， 当其与以 Ｎ ５－ ｕ３１攻 对于病原菌的嚓吟缺陷型减毒的机制，已 击的家兔相比，发现缺陷型菌株所引起的感染 有不少研究。一般认为在人或动物体内游离存 明显地减轻， 这可能也与 Ｂ ２－５未能在体内 ６５２ 在的嘿吟类物质很少，故嚷吟缺陷型在体内不 大量繁殖有关。 （ 二）嚷吟缺陷型菌株 Ｂ２－５突变标记 ６５２ 易获得繁殖所必需的营养物质，从而降低了毒 力， 但是一旦获得嚏吟，其毒力就会恢复。Ｆ－ 稳定， ｏ 产蛋白酶活力略高于亲株， 满足了预定的 ｒａ 等〔 ｍｌ ‘ ， 用通过自发突变分离到的伤寒沙门氏 要求 。
０ 倍中止反应。 １ 毫升中 取 ５ 止后的菌液， 定的危害。 因此， 近年来对于它的危害已日益 释 １０ ７ －８ 被人重视。为了保证生产和产品使用 的安全， 于 ３℃下增殖培养 ， 小时，用缺氮的基本
对菌种进行减毒是必要的。
目前已有许多减低细菌毒力的方法广泛地 被用来制备减毒活菌苗，其中通过筛选嘿吟缺
实验编 号 样品 数 （ ） 每一 样品的 Ｃ 总菌 数 （ ） Ｎ
２ ０ ２ ０ １． ２义 １ ＇ ５ ００ ０． ６丫 １ ＇ ７ ００
每一样品 的回 复子数 （ ｒ ）
３ ０ ４ ２ ０ ０
有 回复子 的样品数
９ ５
Ｐ ＇ ｏ
结
１ ＞ ＇
果
２ ） ＇ ５． ５Ｘ １ －＇ ０ ０ ４． ６火 １ －ｒ ０ ｏ
（ 一）嗦吟缺陷型菌株的筛选 １出发菌株 ． 铜绿色极毛杆菌 Ｎ ５－０ ｕ３１ ２培养基 ． （） １基本培养基（ ） 葡萄 ｍｍ ： 糖１ 克，ＫＨ Ｏ ７ ，Ｐ ， 克，Ｋ ２Ｏ ２ ＨＰ ， 克，柠檬酸 三 钠 ・２ ， ０ 克，Ｍ Ｓ ， ２ ０ 克， ＨＯ ． ５ 宫Ｏ ＂ Ｏ ． ７ Ｈ １
Ｌ Ｙ ｙｎ ｅ ａ． Ｉｖｓｇｔ ｎ ｎ ｅ ｔ ｎ ａｉ ｉ ａｇ ｌ ｎｅｔ ａｉ ｏ ｔ Ａｔ ｕｔ ｎ ｕ ｔ ： ｉ ｏ ｈ ｅ ｏ ｏ ａ ｏｅ ａｅ ｒｄ ｃｎ Ｓｒｉ Ｐｅｄ ｍｏａ ａｒ－ ｆ ｒｔｉ ｓ－ ｏｕｉｇ ａｎ ｕ ｏ ｎｓ ｕ Ｐ ｎ ｐ ｔ ｓ ｅ ｇｎ ｓ Ｎｕ － ｔａ Ｕ ｉｚｓ ａ ａｅ Ｃ ｒｏ ｒｏａ ５ １ ｔ ｌ ｅ Ｎ ｌ ｎ ａ ａｂ ｎ ３ ｈ ｔｉ －ｋ ｓ
所示。
从表 １ 可知添加混合氨基酸后缺陷型出现 率也有明显提高。 表２ 说明添加混合氨基酸后所检出的缺陷
型几乎全部都是碱基缺 陷型。 （ 二）嚷吟缺陷型产蛋白酶情况
比较 ａ ｂ 。 ， 三条生长曲线可以看出， ， 嚓吟
缺陷型 Ｂ ２－ ５在 ＭＭ液中不能生长 ， ６５ ２ 培养 ７ ２
小时浊度仍为零。 而在 ＭＭ中 添加腺嚓吟后 就能生长， 但与 Ｎ ５－ 相比， ｕ３１ 延滞期要稍长一 些， 生长上升速度要稍慢一些， 生长达到平衡时
以腹腔注射方式攻击， 注射体积为每只０ 毫 ． ５
升。观察 ３ 天死亡情况， 并计算 Ｌ ５ Ｄｏ ｏ （ 四）生长曲线 Ｎ ５－ 产生的蛋白酶活力为 １０ ｕ３ １ ０多，以４ 株 ２ 嚷吟缺陷型与其相比，按蛋白酶活力相对值分 布范围如图 １ 所示。
取培养２ 小时的斜面， ４ 用基本培养液制成
６０ ０ 细胞／ 毫升左右的悬浮液， 以 １与 ３ 之 再 ０ 比分别接种到基本培养液， 然后， 补加 ０ ０ 沁 ．１ ０ 腺凛吟， ８ 下振荡培养 ７ 小时， ２℃ ２ 间隔一定时 间取样， ２ 用７ 型分光光度计在波长为 ６０ｍ下 ６ｎ Ｍ定浊度， 以此代表细菌之生长程度。 （ 五）回复突变率的测定 将斜面上生长 ２ 小时的菌苔用生理 盐 水 ４ 制成浓度为 １Ｘ１５ ０细胞／ 毫升的悬液， 以每管 ０ ． ５毫升接到 ２ 支装有 ２ 毫升肉汤培养液的 ０ ． ５ 刻度离心管中， ７ 培养 ２ 小时， ３℃ ４ 然后用生理
由表４ 可以看出，ｏ吟缺陷型 Ｂ２－５ ｆ ， ６５２ 的 回复突变率在１ Ｘ － 到 ， Ｘ － （ ． １ ＇ ． １ ｔ 每一 ８ ０ ０ ５ ０ ｏ
细胞、 每一代） 之间。 讨 论
菌营养缺陷型进行毒力研究， 发现需要色氨酸、
半眺氨酸的菌株未能减毒。当在用此减毒菌株 攻击小白鼠的同时注射 １ 毫克黄漂吟， ０ 毒力又
遗传
１ Ｒ Ｄ Ｔ Ｓ ｅ ｉｇ ２ ６ ＂ － ６ ８ １ Ｅ Ｉ Ａ （ ｉｎ ） （ ） ３ Ｅ Ｂｊ １ ０ ９
石 油 发酵 产 蛋 白酶 菌 株
Ｐｅ ｏｏ ｓ ｇ ｏ Ｎ ５ １ 毒 研 ｓｄ ｎ ａ ｕｎａ ３ 减 的 究 ｕ ｍ ａ ｅ ｉｓ ｕ － ｒ
李 阳 倪 池） 陈 钮） 黄 玉） 育 秋１ １ 耀１
一 １．３６
０／ ５ ０／ ５
５／５ ０．２２ 亿
Ｎｕ５ － ３ １
｛“ ・ ５ ６ ／ ” ５ １。 ｝‘ ・ “ ， ５ ｝。 ・ ‘ ／ ，｝‘ ５
｝０５ ／ ． 一 ５ ０ ： ８
（ 五）回复突变率的测定 二次实验结果列于－ ｋ４ ０
表４ ６５２ Ｂ ２－５暇岭 块陷标记的回复突变率
培养基平板上， 以点种法检出缺陷型， 用划线法 进行缺陷型的初步鉴定，最后以生长谱法鉴定 缺陷型的营养需要。根据青霉素浓缩缺陷型的 机理， 为了淘汰不需要的氨基酸缺陷型， 在添加 青霉素的同时， 每毫升还补加了 １ 毫克 混合 ． ５ 氨基酸。混合氨基酸由 １ 种主要氨基酸 混合 ５
而成。
材 料 和 方 法
陷型而达到减毒效果的已有一些实例。不同
的作者已分别在筛选肺炎克氏杆 菌［、 号弧 ３逗 １ 菌（ 假鼻疽假单胞杆菌１ ４ １ ５ ３ 的嚓吟缺陷型方面取 得了减毒的效果。考虑到筛选嚓吟缺陷型容易 着手，同时Ｒ吟类物质在发酵生产上也容易满 Ａ 足。 因此， 我们选择了这一方法进行减毒试验。
培养基离心洗涤二次， 并制成悬浮液， 饥饿培养 ２ 小时。离心后， ４ 菌体被重新悬浮于含有青霉 素的基本培养基中（ 青霉素Ｇ钾， 浓度为６５ ２－ ５ ０ 单位／ ，０ ０ 毫升） 培养过夜， 将菌液涂布于完全
Ｓ ｕｒｅ Ｆｅ ｍ ｅ ａ ｉｎ ｏ ｃ ｉ ｎ ｒ ｎｔｔｏ
ｌ ）为本校微生物专业 七二届学生，
３
（ 二）蛋白酶活力测定 在 ｐ ．（ Ｈ８ 硼酸一 ５ 氯化钾缓冲液） ３℃的 和 ０ 反应温度下按福林酚试剂法进行测定。 （ 三）毒力测定 采用 １－２ 克的雄性小白鼠。每组 ５ ６ ０ 只，
（ 旦大学生物系 ， 复 上海）
（ Ｈ） ０ １ 优质琼脂 １ －１ ％， Ｎ ，Ｓ ４ ２ 克， ． ． 加蒸馏 ２ ５ ００ ０ ５ 厘米２ ２ 分 灭菌 ０ 中， 获得一株能利用重油作为碳源发酵产蛋白 水定容至 １０ 毫升， ．公斤／ ２ 完全培养基 （ Ｍ） Ｎａｌ Ｃ ： Ｃ ５ 克，蛋白 酶的 绿色极毛杆菌 （ｓｄ ｏ ｓ ｇｏ 钟。（） 铜 Ｐｕｏ ｎ ａｕｎａ ｅ ｍ ａ ｅ ｉｓ ｒ ０ 牛肉膏 ５ 酵母膏 ５ 琼脂 ２ ％， 克， 克， ． ０ ６１１ ．）１ 。此菌株经亚硝基孤 及紫 外 线诱 变处 陈 １ 克， ００毫升， Ｈ ２ １公升／ ｐ ７ ， ． 厘米２ 理，选出了产酶较高的变异株 Ｎｕ３１ 该菌 加水定容至 １０ ５－。 产生的蛋白酶经试验表明在皮 革脱毛上具有良 灭菌 巧 分钟。 ３诱变 ． 诱变剂亚硝基呱由本校遗传学 好的性能。 ４ 菌苔 铜绿色极毛杆菌属于条件致病菌。此菌在 研究所合成。取培养 ２ 小时的斜面一支， Ｈ ５ ． ０细 人的口腔、 皮肤和肠道等处均可发现， 对人体的 用 ｐ ７ 的磷酸缓冲液制成浓度为 ５Ｘ １８ 胞／ 毫升的悬浮液。加亚硝基呱到最终 浓度 为 致病力很弱， 大多属继发性感染， 偶然也可单独 １０ ０ 微克／ 毫升。３℃ 保温 ３ 分钟， ０ ０ 以肉汤稀 致病。它对于烧伤、 放射治疗、 化疗病人等有一 我们在石油发酵蛋白酶产生菌的筛选工作