微生物学实验理论及思考题
微生物实验思考题
微生物实验思考题微生物学实验是生物学实验中较为复杂和繁琐的一类实验，它涉及到的实验类型和实验方法较多，而且每一种实验类型和实验方法都有其自身的特点和操作要求。
本文将从以下几个方面对微生物学实验中的一些常见问题进行思考和探讨。
一、实验前的准备工作在进行微生物学实验之前，我们需要做好充分的准备工作。
要了解实验的目的、要求和原理，确定所需的实验器材和试剂，并准备好相应的实验用品。
要对实验场所进行清洁和消毒处理，确保实验环境的无菌性。
要根据实验要求选择合适的菌种和培养基，并进行必要的预处理。
二、实验过程中的注意事项1、菌种保藏：在进行微生物学实验之前，需要对菌种进行保藏。
保藏方法应根据菌种的性质和实验要求进行选择。
常用的保藏方法有甘油管藏法、沙土管藏法、液体石蜡法等。
保藏过程中需要注意防止杂菌污染和防止菌种变异。
2、培养基的制备：制备培养基是微生物学实验中的一项基本操作技能。
在制备培养基时，需要注意根据菌种的营养需求和实验要求选择合适的配方和配制方法。
同时，要注意对培养基进行灭菌处理，确保无菌性。
3、接种与培养：在接种和培养过程中，需要注意无菌操作和防止杂菌污染。
接种时需要根据实验要求选择合适的接种方法和接种量，并注意对菌种进行纯化处理。
培养过程中需要注意控制温度、湿度、光照等环境因素，以保证微生物的正常生长和繁殖。
4、观察与记录：在观察和记录过程中，需要注意对微生物的生长情况、形态特征、生化反应等进行仔细观察和记录。
这些信息对于后续的数据分析和实验结果解释非常重要。
5、数据分析与总结：在完成实验后，需要对实验数据进行统计和分析，并将分析结果进行总结。
数据分析可以借助专业的统计软件进行，如SPSS、Excel等。
总结时需要注意对实验结果进行客观评价，并提出改进意见和建议。
三、实验后的整理与思考完成微生物学实验后，需要对实验场所进行清洁和消毒处理，并对实验器材和试剂进行整理和存放。
需要对实验数据进行整理和分析，并将分析结果进行总结和评价。
西北大学微生物学_黄建新_思考题
思考题第一篇微生物学第一章绪论1. 什么是微生物？它包括那些类群？特点有哪些？2．微生物学中有哪几项技术是独特的？他们对微生物学发展有何贡献？3．为什么说巴斯德和柯赫是微生物学的奠基人？4．试述微生物学在生命科学中的重要地位？5．你认为现代微生物学的发展有哪些趋势？第二章细胞型微生物形态与结构1．培养条件对微生物个体的大小有哪些影响？你是否能很快的在显微镜下区分同为单细胞的细菌和酵母菌？2．什么是肽聚糖？化学结构如何？G+菌和G－菌的肽聚糖结构有何不同？3．比较放线菌、酵母菌、霉菌细胞壁结构及化学组成并指出它们原生质体的制备方法。
4．试述细菌芽孢抗热性机理？5．比较细菌、放线菌、酵母、霉菌的繁殖方式有何特点？6．为什么把古细菌和真细菌在进化谱系上和真核生物相互并列？二者在细胞形态、结构、组成上有异同吗？7．G+菌和G－菌各自细胞壁独特的组成是什么？他们分别主要由什么成分构成？对细菌各有何生理功能？第三章病毒1．什么是病毒?它与其他微生物有什么区别?2．病毒复制循环可分为哪几个阶段?各个阶段的主要过程如何?3．何谓温和噬菌体和溶源性?细菌被溶源化的机理是什么?4．何为一步生长曲线?它可分为几个时期,简述各期特点.第四章微生物的营养1.微生物营养类型有几种?划分依据是什么?举例各种类型的几个代表.2.微生物吸收营养方式有几种?各种菌的特点是什么?3.何谓选择培养基、鉴别培养基；请各举一例说明其用途。
4.采用什么方法能分离到能分解并利用苯作为碳源和能源物质的细菌纯培养物？第五章微生物的代谢1．化能异养微生物的生物氧化中，***脱氢和产酸途径只要有哪些,比较各途径的主要特点。
2．何谓呼吸、有氧呼吸、无氧呼吸及发酵。
试比较它们的异同点？3．请你利用各微生物的生理生化反应特性将大肠杆菌、志贺氏菌和产气杆菌区分开？（说明原理）4．为生物合成代谢所需的基本要素是什么？他们在不同的微生物中从何而来？5．什么是硝化作用。
微生物理论思考题总结河南科技大学
微生物学思考题总结一、名词解释1.病毒：病毒是在活细胞内增殖、遗传和变异的非细胞结构的微生物，是目前已知的体积最微小、结构最简单的生命形式2.包涵体:病毒感染细胞后在细胞的细胞核和胞浆内形成的圆形或椭圆形的斑块，称为包涵体3.噬菌斑；在涂有敏感宿主细胞的固体培养基表面，接种的噬菌体反复侵染和裂解大量细胞后，在菌苔上形成的具有一定形状、大小和边缘的透明区域4.病毒粒子：成熟的或结构完整的有感染性的病毒个体5.主动运输：当细胞内的营养物质浓度低于细胞外若干倍时，这些营养物质在能量的作用下通过逆浓度梯度向细胞内运送的过程6.基因转位：由复杂运输酶系统参与的既需要载体蛋白又需要消耗能量的一种特殊主动运送方式7.复制周期：在寄主活细胞中，以自身核酸为模板利用寄主细胞的原料、能量和生物合成场所，合成病毒核酸、蛋白质等成分，然后在寄主细胞的细胞质或细胞核内装配成许多新的、成熟的病毒体，再以裂解宿主细胞、出芽或其他方式释放到细胞外，又开始另一个感染周期，这整个过程称为复制周期。
8.细胞病变效应：病毒在细胞内增殖并对细胞产生毒害，引起细胞变形、坏死、破裂等，进而导致细胞死亡的现象。
9.合胞体：在病毒感染细胞后，相邻细胞间的细胞膜溶解，若干个细胞融合入形成具有多个核的大融合细胞10.干扰现象：两种病毒共同感染一种细胞时，可能产生一种病毒增殖抑制另一种病毒增殖的现象，称为干扰现象【干扰现象是由于前一种病毒在细胞内增殖时产生了干扰素】11.干扰素：脊椎动物受到病毒感染后产生的一种能够干扰病毒增殖的蛋白质，当释放到细胞外时，具有保护其他未感染细胞免受病毒感染的作用。
12.种：微生物分类上的一个基本分类单位。
是一大群表型特征（形态和生理方面）高度相似、亲缘关系极其接近，与同属内其他种有明显差别的菌株的总称。
13.亚种：当某一个种内的不同菌株存在少数明显而稳定的变异特征或遗传形状，而又不足以区分成新种时，可以将这些菌株细分成两个或更多的小的分类单元——亚种14.型：当同种或同亚种内不同菌株之间的性状差异不足以分为新的亚种时，可以细分为不同的型15.菌株；一种微生物不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌株。
微生物学实验思考题
1.用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比.2.列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。
为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作答：使用高倍镜和油镜时镜头距离标本较近，而粗调节器的调节幅度较大，粗调节器的误操作会使镜头大幅度向标本移动，很容易损坏标本和镜头。
一般先用低倍镜找到物象后换到高倍镜，就只需要用细调节器了。
3.什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。
利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。
4.影响xx分辨率的因素有哪些？答：物镜的NA值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长5.根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。
都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。
答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000倍的物镜看，感觉还很小。
病毒那就要用电子显微镜看了。
6.哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节7.进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题?答：着色不均，染色效果不好。
阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌8.革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色?答：不可以。
微生物学复习思考题
微⽣物学复习思考题《微⽣物学》复习思考题第1章绪论1.名词解释：微⽣物，微⽣物学2.⽤具体事例说明⼈类与微⽣物的关系。
3.微⽣物包括哪些类群？它有哪些特点?4.为什么说巴斯德和柯赫是微⽣物学的奠基⼈?5.试根据微⽣物的特点，谈谈为什么说微⽣物既是⼈类的敌⼈，更是⼈类的朋友？6.简述21世纪微⽣物学发展的主要趋势。
第2章原核微⽣物1.名词解释：肽聚糖、溶菌酶、核区、异形胞2.根据⾰兰⽒阳性细菌与⾰兰⽒阴性细菌细胞壁通透性来说明⾰兰⽒染⾊的机制。
3.什么是芽孢？它在什么时候形成？试从其特殊的结构与成分说明芽孢的抗逆性。
渗透调节⽪层膨胀学说是如何解释芽孢耐热机制的？4.⽴克次⽒体有哪些与专性活细胞内寄⽣有关的特性？它们有什么特殊的⽣活⽅式？⾐原体与⽴克次⽒体都为专性活细胞内寄⽣，两者有何差别？5.螺旋体和螺旋菌有何不同？6.什么是缺壁细菌？试简述四类缺壁细菌的形成、特点和实践意义。
7.举例说明细菌的属名和种名。
8.试述古⽣菌和细菌的主要区别。
9.试根据细菌和古⽣菌细胞结构的特点，分析并举例说明为什么它们能在⾃然界中分布泛。
10.细菌（狭义）、放线菌、霉菌、酵母在繁殖⽅式上各有什么特点？第三章真核微⽣物1.名词解释：真菌、霉菌、酵母菌、真酵母、假酵母。
2.举例说明霉菌与酵母菌与⼈类的关系。
3.试列表说明真核微⽣物与原核微⽣物的主要区别。
4.试图⽰真核⽣物“9+2型”鞭⽑的横切⾯构造，并简述其运动机理。
5.细菌(狭义)、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落有何不同？6.试⽐较细菌(狭义)、放线菌、酵母菌和霉菌细胞壁成分的异同，并讨论它们的原⽣质体的制备⽅法。
7.丝状真菌的营养菌丝和⽓⽣菌丝各有何特点？它们可以分化出哪些特殊结构？8.试述真菌的孢⼦类型和特点。
第4章病毒1. 名词解释：病毒粒⼦、烈性噬菌体、温和噬菌体、溶源性转变、前噬菌体、溶源性细菌、裂解量、类病毒、朊病毒。
2. 病毒区别于其他⽣物的特点是什么? 根据你的理解，病毒应如何定义?3. 试述病毒的主要化学组成及其功能。
微生物思考题 (2)
玻璃容器（如U形管）。
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实验步骤：1、将两种合适的多重营养缺陷型突变株在 基本培养基中混合培养，若在基本培养基是长出了重 组菌落，则发生了遗传转移； 在混合培养期间加入适量DNase，如果在基本培养基上 无重组菌落出现，则遗传转移过程是转化；若仍然长 出重组菌落，则原因可能是接合作用或转导； U形管使用只能持留细菌的滤板，臵于培养基适当距离 的上方，不与培养基接触，滤板是放臵一种突变菌， 培养基是接种另一种突变菌，如果无重组菌落出现， 则为接合作用；如果出现重组菌落，则原因是转化或 转导； U形管使用能够持留细菌和细菌病毒的滤板，若培养基 是无重组菌落出现，则是转导或接合；若仍有重组菌 落出现，则原因是转化。
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用紫外线照射该菌株，一段时间后进行镜检，
若是由于溶源性菌裂解所致，则平板上出现噬 菌斑或液体培养基变澄清；若不是，则无明显 现象。
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第九章 微生物遗传 思考题
1、 如果二个不同营养缺陷标记（a－b－c+d+和a+b+c－d－）
的菌株经混合后能产生在基本培养基平板上生长的原养 型重组菌株，请设计一个实验来决定该遗传转移过程是 转化、转导还是接合?
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通过涂布平板法将发酵菌体悬液均匀涂布在培
养基上进行培养。过一段时间后溶源菌就生长 成菌落。 （1）如果含有溶源性菌，由于在溶源菌细胞 分裂过程中有极少数个体会自发裂解（最好用
微生物学课程思考题
微生物学课程思考题《微生物学》课程复习思考题绪论1.什么是微生物？它包括哪些类群？2.人类迟至19世纪才真正认识微生物其中主要克服了哪些重大障碍？3.微生物有哪五大共性？其中最基本的是哪一个？为什么？4.什么是微生物学？学习微生物学的任务是什么？5. 用一个具体事例说明人类与微生物的关系，为什么说微生物是人类的敌人，更是我们的朋友？（建议将一些具体事例延伸成为展板制作的题目）6. 为什么微生物能成为生命科学研究的“明星”?7. 为什么说巴斯德和柯赫是微生物学的奠基人?（请不要简单罗列二个人的工作，而应该对他们的工作及意义进行评论）第一章1.试图示G+和G-细菌细胞壁的主要构造井简要说明其异同。
2.试图示肽聚糖的模式构造，并指出G+和G-细茵肽聚糖结构的差别。
3.试述革兰氏染色法的机制并说明此法的重要性。
4.渗透调节皮层膨胀学说是如间解释芽袍耐热机制的？5.裂异形胞原体与始体．类支原体，浚酶体袍囊，磁小体。
第二章1.试解释菌物、真菌、酵母茵、霉菌和章菌。
2.试简介菌丝、茵丝体、菌丝球、真酵母、假酵母、芽痕、蒂痕、真菌丝、假菌丝等名词。
3.霉菌的营养菌丝恻气生菌丝各有何特点？它们分别可分化出哪些特化构造？4.试列表比较各种真菌胞子的特点。
5.细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类微生物的菌落有何不同？为什么？第三章1.什么是真病毒？什么是亚病毒？2.病毒的一般太小如何？试图示病毒的典型构造。
3.病毒粒有哪几种对称形式？每种对称又有几类特殊外形？试各举一例。
4.什么叫烈性噬菌体？简述其裂解性生活史。
5.什么是一步生长曲线？它可分几期？各期有何特点？6.试解释溶源性、溶源菌、温和噬菌体。
第四章1.什么叫能源？试以能源为主、碳源为辅对微生物的营养类型进行分类。
2.什么叫生长因子？它包括哪几类化合物？微生物与生长因子的关系有哪几类？试举例加以说明。
3.什么叫水活度（a）？它对微生物的生命活动有间影响？对人类的生产实践w和日常生活有何意义？4.什么是选择性培养基？试举一例并分析其中的原理。
微生物学
微生物学思考题1.用一个具体事例说明人类与微生物的关系，为什么说微生物是人类的敌人，更是人类的朋友?答：因为微生物既可以促进人类社会的发展，也可以破坏生态环境，影响身体健康。
比如，很多菌种的次级代谢产物是对人类疾病非常有用的抗生素，如绿色丝状菌产生的青霉素，一些微生物被广泛应用于工业发酵，生产乙醇、食品及各种酶制剂等，一部分微生物能够降解塑料、处理废水废气等等，并且可再生资源的潜力极大，称为环保微生物。
由于微生物生长周期短，繁殖迅速等特点，被用于遗传育种上，具有重要意义。
但是，生物对人类最重要的影响之一是导致传染病的流行。
在人类疾病中有50％是由病毒引起，有些微生物是腐败性的，即引起食品气味和组织结构发生不良变化，微生物能够致病，能够造成食品、布匹、皮革等发霉腐烂。
在疾病的预防和治疗方面，人类取得了长足的进展，但是新现和再现的微生物感染还是不断发生，像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治疗药物。
一些疾病的致病机制并不清楚。
大量的广谱抗生素的滥用造成了强大的选择压力，使许多菌株发生变异，导致耐药性的产生，人类健康受到新的威胁。
一些分节段的病毒之间可以通过重组或重配发生变异，最典型的例子就是流行性感冒病毒。
所以，微生物是人类的敌人，更是人类的朋友。
2.为什么微生物能成为生命科学研究的“明星”？答：因为微生物的个体较小，体内结构单一，易于筛选，可以轻松滴完成对它的功能和结构的改造，生命活动的规律，大都是在研究微生物的过程中首先被阐明的，微生物学为分子遗传学和分子生物学的创立、发展提供了基础和依据，而且是它们进一步发展的必要工具，微生物的多样性为人类了解生命起源和生物进化提供了依据，微生物学是基因工程乃至生物工程的主角。
所以，它必然成为生命科学研究的明星。
3.为什么说巴斯德和柯赫是微生物学的奠基人？答：巴斯德：（1）彻底否定了“自生说”。
从此建立了病原学说，推动了微生物学的发展。
（2）免疫学——预防接种。
为人类防病，治病做出了巨大贡献。
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实验一显微镜的使用及微生物大小测定的方法二、基本原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
其中油镜的放大倍数最大，对微生物学最为重要。
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。
微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具—测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。
其中镜台测微尺并不直接用来测量细胞大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
目镜测微尺每小格所代表的实际长度因显微镜的不同放大倍数而异，因此用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微格数，即可计算出细胞的实际大小.两重合线间镜台测微尺格数×10目镜测微尺每格长度=两重合线间目镜测微尺格数思考题1、用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？答（1）应先用摖镜纸将镜头摖干净，以防止实验的污染。
使用油镜时，应先用低倍镜再用高倍镜，然后再是油镜，用完之后也要用摖镜纸将油镜摖掉。
（2）滴加香柏油（3）作用是增加折射率，即增加了显微镜的分辨率，油的折射率和分辨率成反比，同时与波长成正比。
2、影响显微镜分辨率的因素有哪些？答：显微镜的分辨率指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力，最小分辨距离越小，分辨率越高，最小可分辨率距离=λ／2NA且NA=n.sin,所以，分辨率由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定，当然还有介质的折射率。
3、为什么要换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？答：不同放大倍数，目镜测微尺每小隔所代表实际长度不一样，必须用镜台测微尺进行重新校正，这样目镜测微尺测量的长度才是目前状态的准备长度。
4、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一微生物的大小时，其测定的结果是否相同？为什么？答：相同的，不同的放大倍数，目镜测微尺每小格所代表实际长度不一样，必须重新校正，才能得到目前状态的准确长度。
实验二显微镜直接计数法二、基本原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），其优点是直观、快速、操作简单。
目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器及Hawksley 计菌器等。
利用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。
此法是将单细胞微生物的悬液或孢子悬液，注入血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中。
在显微镜下进行计数的，由于加盖盖玻片之后的血球计数板的计数室的容积是一定的（0.1mm3，万分之一毫升），所以可根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算单位体积内的微生物总数目，包括死菌和活菌。
六、思考题根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？答：①操作时没有先盖盖玻片再加悬液导致体积不准确。
避免：先盖盖玻片再滴加悬液②细胞：多稀释溶液③溶液不均匀避免：滴加溶液前混匀悬液实验三二、基本原理微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。
玻璃器皿的形状和包装方法要求能防止污染杂菌为准；玻璃器皿的洗涤方法根据实验目的、器皿的种类、所盛的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。
清洗后的玻璃器皿、经包装后即可进行干热灭菌。
干热灭菌有火焰烧灼灭菌和热空气灭菌两种（P59）。
火焰烧灼灭菌适用于载玻片、试管口、玻棒、接种工具和金属用具如镊子等的灭菌。
通常所说的干热灭菌是在电烘箱内利用高温干燥空气使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
而细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固变越快，反之反之。
与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160－170℃），时间长（1-2h）.但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
此法适用于玻璃器皿如吸管和培养皿等的灭菌。
培养基、橡胶制品、塑料制品、衣物等不能用干热灭菌。
思考题1、为什么在吸管的包装时要在其粗端吸管口塞上一小段棉花？答：以免使用时将杀菌吹入其中或不甚将微生物吸出管外。
2、在干热灭菌操作过程中应注意哪些问题，为什么？答：①物品不要摆的太拥挤，以免妨碍空气流通，灭菌物品不要直接触电热干燥箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。
②干热灭菌的过程中，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。
电热干燥箱具有可以观察的窗口，灭菌的过程中玻璃温度较高，注意避免烫伤。
③电热干燥箱内温度内的温度未降到70℃以前，切勿自行打开箱门，以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。
3、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度高，时间长？答：细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，环境和细胞水的含量越大，则蛋白质凝固就越快，反之，含水量越少，凝固就越慢。
所以干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度更高，时间更长。
实验四、二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
其配方为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000ml，pH 7.4~7.6。
其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量的琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
任何一种培养基，一经制成就应及时彻底灭菌，以备培养微生物使用，一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌法。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能逸出，灭菌锅内的压力增加，使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
注意点细节：（4）升压、保压和降压：关闭排所阀后，锅内压力开始上升。
当压力升到所需压力（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃20分钟）时，控制热源，维持压力到所需时间后，停止加热，待压力降至接近”0”时，打开排气阀排气。
注意不能过急地排气，否则会由于锅内压力突然下降而造成锅内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，和使棉塞沾染培养基而发生污染。
（5）无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24~48小时，经检查无菌生长，可保存备用。
思考题1、培养微生物的培养基应具备哪些条件？为什么？答：碳源：提供微生物营养碳素（碳架）氮源：提供微生物生长、繁殖所需氮元素无机盐：大量元素：细胞内的成分、渗透压成分、稳定PH、酶的激活剂Mg2+；微量元素：酶的激活剂，特殊分子或结构生长因子：一种微生物正常代谢必不可少，且不能由简单碳源、氮源合成的有机物，一般需要量很少，在微生物体能的功能主要是辅酶或辅基水：在生命过程中必不可少2、在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题？答：1、当然是注意浓度配比不要搞错2、很多培养基的加料顺序有讲究，否则会有沉淀产生3、有些培养基会有不溶物质，分装前应摇匀4、不要忘了调节pH值（一般细菌都需要，酵母可能自然pH就行，不过不一定）5、加热溶解时尽量不要煮沸，会损失营养物质3、培养基配制完后，为什么要及时灭菌？若不能及时灭菌，应如何处理？答：培养基里含有丰富的氮源，碳源，微量元素等等。
如果不立即灭菌，那么，就会长菌。
你可能会认为再灭菌不就可以了？！但是，很多的微生物，特别是真核微生物在生长的时候会改变溶液的PH，同时灭菌后细胞破碎，带入新的氨基酸，蛋白等，这些都是试验不稳定的因素。
如果不能立刻灭菌，应该在配置培养基的时候直接称取粉末，不加入水溶解，可在室温保存。
如果加入的是液体的，已经配置好的培养基，应该在4度并保存，但时间不宜过长。
4、高压蒸汽灭菌中为什么要把冷空气排净，为什么在灭菌后不能骤然快速降压？答：在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全是极为重要的，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。
如果骤然快速降压，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。
实验五二、基本原理将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定经及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。
接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠。
影响下一步工作的进行。
微生物的培养特征是指微生物在固体、半固体和液体培养基中生长后所表现出的群体生长特征。
不同的微生物有其固有的培养特征，这些特征可以作为不同种类微生物的鉴别特征之一，并能为识别纯培养是否被污染作为参考。
了解它们的培养特征、掌握其生长规律对识别、控制和利用微生物具有重要价值。
固体培养基又分平板和斜面两种形式。
在平板上主要观察菌落表面结构、形态及边缘状况（如P75图C）斜面上主要观察菌苔的形态。
思考题：1、用斜面检测微生物的培养特征接种时，为什么不要划多条线或蛇形，而只要划一条直线？答：用斜面接种微生物是为了能挑去微生物培养的单菌落，若划多条线或蛇形容易形成菌苔，失去斜面的培养意义。
2、接种环(针)接种前后灼烧的目的是什么？为什么在接种前一定要将其冷却？如何判断烧过的接种环已冷却？答：①为了消毒灭菌芽孢等，消灭可能引起污染的一切生物体；②若没有冷却的话，接种的微生物也会被灼烧致死，所以一定要冷却；③一般用接种环在玻璃器皿的上盖内侧接触一会（大约5s），然后用接种环接触培养基，培养基没有被烫坏，没有冷热物接触而发出滋滋声，就认为已冷却，可以接种了。
3、试述如何在操作中贯彻无菌操作的原则？答：在超净工作台中无菌操作或在酒精灯附近操作，且接种前后接种环都需要过火并灼烧成红色。
试管口（接种管）开关试管帽前后也需过火，若为平板培养则倒平板过程前后培养基的开口处都要在火焰中过一下。
接种完毕后，接种环仍需要过火消毒。
在个人操作时尽量挽起衣袖，双手用70%酒精消毒，并戴上手套操作。
实验六二、基本原理革兰氏染色将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的，革兰氏阳性细菌细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂质量低，用乙醇脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫——碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。