Pathways in Human Cancer 超高分辨率
单酰甘油脂肪酶调节促进癌症发病的一
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Tumor cells display progressive changes in metabolism that correlate with malignancy, including development of a lipogenic phenotype. How stored fats are liberated and remodeled to support cancer pathogenesis, however, remains unknown. Here, we show that the enzyme monoacylglycerol lipase (MAGL) is highly expressed in aggressive human cancer cells and primary tumors, where it regulates a fatty acid network enriched in oncogenic signaling lipids that promotes migration, invasion, survival, and in vivo tumor growth. Overexpression of MAGL in nonaggressive cancer cells recapitulates this fatty acid network and increases their pathogenicityphenotypes that are reversed by an MAGL inhibitor. Impairments in MAGL-dependent tumor growth are rescued by a high-fat diet, indicating that exogenous sources of fatty acids can contribute to malignancy in cancers lacking MAGL activity. Together, these findings reveal how cancer cells can co-opt a lipolytic enzyme to translate their lipogenic state into an array of protumorigenic signals
DAPI染色液说明书
DAPI染⾊液说明书DAPI染⾊液产品简介：DAPI染⾊液(DAPI Staining Solution)是经过精⼼优化⼏乎适⽤于所有常见细胞和组织细胞核染⾊的染⾊液。
DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也称DAPI dihydrochloride，分⼦式为C16H15N5 ·2HCl ，分⼦量为350.25 ，CAS Number 28718-90-3。
DAPI是⼀种可以穿透细胞膜的蓝⾊荧光染料。
和双链DNA结合后可以产⽣⽐DAPI⾃⾝强20多倍的荧光。
和EB(ethidium bromide)相⽐，对双链DNA的染⾊灵敏度要⾼很多倍。
DAPI染⾊常⽤于细胞凋亡检测，染⾊后⽤荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
DAPI也常⽤于普通的细胞核染⾊以及某些特定情况下的双链DNA染⾊。
DAPI的最⼤激发波长为340nm，最⼤发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最⼤激发波长为364nm，最⼤发射波长为454nm。
本DAPI染⾊液可以直接⽤于固定细胞或组织的细胞核染⾊。
保存条件：-20℃避光保存，⼀年有效。
注意事项：本DAPI 染⾊液的浓度经过碧云天的优化，确保可以满⾜各种常规染⾊的需要。
如需使⽤特定浓度的DAPI，请选购碧云天的DAPI(C1002)。
荧光染料都存在淬灭的问题，建议染⾊后尽量当天完成检测。
为减缓荧光淬灭可以使⽤抗荧光淬灭封⽚液。
抗荧光淬灭封⽚液(P0126)可以向碧云天订购。
DAPI对⼈体有⼀定刺激性，请注意适当防护。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴⼀次性⼿套操作。
使⽤说明：1.对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。
随后如果需要进⾏免疫荧光染⾊，则先进⾏免疫荧光染⾊，染⾊完毕后再按后续步骤进⾏DAPI染⾊。
如果不需要进⾏其它染⾊，则直接进⾏后续的DAPI染⾊。
2.对于贴壁细胞或组织切⽚，加⼊少量DAPI染⾊液，覆盖住样品即可。
安罗替尼对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响及机制
安罗替尼对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响及机制邓双年1，李娟2，李辉31 临汾市人民医院肿瘤科，山西临汾 041000；2 临汾市人民医院消化科；3 临汾市人民医院胸外科摘要：目的 探究安罗替尼对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响及机制。
方法 体外培养人胃癌AGS 细胞，取第3代对数生长期AGS 细胞，分为对照组（不做干预）、实验组（2 µmol /L 安罗替尼组、4 µmol /L 安罗替尼组、8 µmol /L 安罗替尼组）和抑制剂组［4 µmol /L 安罗替尼＋10 µmol /L 转化生长因子-β1（TGF -β1）/Smads 信号通路抑制剂LY2109761］，干预24 h 。
为避免细胞死亡太多干扰实验，抑制剂组选取4 µmol /L 安罗替尼作为最适浓度加入10 µmol /L TGF -β1/Smads 通路抑制剂LY2109761进行后续实验。
用CCK -8法、倒置显微镜、Transwell 小室及Western blotting 法对细胞活力、细胞形态、迁移、侵袭能力及上皮间质转化（EMT ）、TGF -β1/Smads 信号通路相关蛋白表达进行检测。
结果 与对照组相比，4、8 µmol /L 安罗替尼组细胞活力降低（P 均<0.05）。
实验组人胃癌AGS 细胞生长受到抑制，迁移、侵袭能力及TGF -β1、p -Smad3、N -钙黏蛋白（N -cadherin ）、波形蛋白（Vimentin ）、纤维黏连蛋白（FN ）蛋白表达降低（P 均<0.05），Smad7和E -钙黏蛋白（E -cadherin ）蛋白表达升高，且呈浓度依赖性（P 均<0.05）；与4 µmol /L 安罗替尼组相比，抑制剂组细胞生长受抑，细胞迁移、侵袭能力及TGF -β1、p -Smad3、N -cadherin 、Vimentin 、FN 蛋白表达进一步降低（P 均<0.05），Smad7和E -cadherin 蛋白表达进一步升高（P 均<0.05）。
补骨脂乙素通过多途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞死亡
乳腺癌在女性恶性肿瘤中发生率位于第1位，其病死率在癌症相关死亡中位于第2位，严重危害着女性的健康和生命［1］。
目前，虽然乳腺癌的临床治疗取得了一定的效果，但还存在一些不足和难题，如手术的创伤、化疗的不良反应以及靶向药物昂贵的治疗费用等［2］。
因此，寻找和研制一种安全、有效及经济的乳腺癌治疗药物是医药工作者的使命。
天然产物具有结构新颖、多靶点及低毒性的优势，已逐渐成为抗肿瘤新药研发的重要来源之一［3-4］。
补骨Isobavachalcone induces cell death through multiple pathways in human breast cancer MCF-7cellsZHANG Yuxin 1,GAO Meijia 2,ZHU Meilin 2,LI Hongmei 2,MA Tao 2,WU Chengzhu 21School of Laboratory Medicine,2School of Pharmacy,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China摘要：目的探究补骨脂乙素（IBC ）对人乳腺癌MCF-7细胞死亡的作用及其可能机制。
方法使用不同浓度IBC 处理MCF-7细胞24、48、72h 后，用MTT 法检测IBC 对MCF-7细胞增殖的影响；将MCF-7细胞设置10、20、40μmol/L IBC 处理组，用Annexin V-FITC/PI 双染结合流式细胞仪、荧光显微镜检测IBC 对MCF-7细胞凋亡的影响；免疫印迹法检测凋亡、自噬相关蛋白（Bax 、Bcl-2、Akt 、p-Akt 、p62、LC3）表达的变化；透射电镜观察40μmol/L IBC 处理MCF-7后的细胞亚显微结构；利用JC-1试剂盒、ATP 试剂盒和活性氧试剂盒检测IBC 对细胞线粒体功能的影响。
结果MTT 实验结果显示，IBC 具有抑制MCF-7细胞增殖的作用，并呈现浓度和时间依赖性，其作用24、48、72h 的IC 50值分别为38.46、31.31、28.26μmol/L 。
Shh基因与消化道肿瘤的关系
Shh基因与消化道肿瘤的关系赵华【摘要】Hedgehog( Hh ) signaling pathway is a very important pathway, the abnormal expression of which has far-reaching impact on cell growth, development, proliferation and differentiation. It can cause a variety of malignancies. Sonic hedgehog( Shh )gene is core of Shh signaling pathway, which can be used as diagnostic and prognostic evaluation index of some tumors. Studies have shown that Hh pathway were expressed in multiple tumors such as esophageal cancer,gastric cancer,medulloblastoma,and prostate cancer etc. ,closely related to the occurrence,development and metastasis of the tumors.%Hedgehog(Hh)信号通路是一条非常重要的转导途径,其异常表达将对细胞的生长、发育、增殖及分化产生深远的影响,可导致多种恶性肿瘤的发生.Sonic Hedgehog(Shh)基因是Shh信号通路的核心,该基因可作为某些肿瘤的诊断及预后评价的指标.研究显示Hh信号通路在食管癌、胃癌、髓母细胞瘤、前列腺癌等多种肿瘤中表达,且与肿瘤的发生、发展及转移密切相关.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2013(019)002【总页数】3页(P234-236)【关键词】Shh信号通路;Shh基因;消化道肿瘤【作者】赵华【作者单位】蚌埠医学院第一附属医院口腔科,安徽,蚌埠,233000【正文语种】中文【中图分类】R735Hedgehog(Hh)基因是1980年由Nusslein-volhard和Wieschaus在果蝇中发现的，其编码一种高度保守的分泌型糖蛋白，果蝇只存在一种Hh基因，而人类存在三种，分别为Sonic Hedgehog(Shh)、Indian Hedgehog(Ihh)和Desert Hedgehog(Dhh)，分别编码相应的蛋白，即Shh、Ihh和Dhh蛋白［1］。
人巨噬细胞极化相关长链非编码rna表达谱筛选及研究
摘要摘要目的：利用高通量长链非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNA）芯片检测不同极化类型人巨噬细胞中lncRNA与mRNA表达谱变化，初步探讨lncRNA核富集转录本1（NEAT1）对巨噬细胞极化的影响。
方法：1.磁珠分选法纯化人外周血单核细胞，经体外培养分化为原代人单核细胞来源的巨噬细胞。
以20 ng/ml IFN-γ及100 ng/ml LPS刺激巨噬细胞18 h将其诱导成M1型巨噬细胞模型，以20 ng/ml IL-4刺激巨噬细胞18 h将其诱导成M2型巨噬细胞模型。
利用酶联免疫法（ELISA）法检测细胞培养上清中IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α、CCL17和CCL18的浓度；RT-PCR检测M1型巨噬细胞标志物（CXCL10、CXCL11、Nos2）和M2型巨噬细胞标志物（CCL17、CCL18、CCL22）的mRNA表达；流式细胞术检测巨噬细胞CD86和CD206表达，以验证M1、M2细胞是否诱导成功。
2. 利用高通量Arraystar human lncRNA芯片比较未极化巨噬细胞（M0）、M1和M2之间lncRNA和mRNA表达谱差异。
对差异表达的mRNA分别进行GO分析和KEGG pathway分析。
选取6个差异表达lncRNA进行RT-PCR检测，验证芯片结果的准确性。
3. 以IL-4刺激M1型巨噬细胞，以IFN-γ及LPS刺激M2型巨噬细胞，检测M1、M2型巨噬细胞相关分子，验证M1、M2细胞重极化模型是否诱导成功。
采用RT-PCR检测lncRNA NEAT1在M1/M2重极化过程中的表达变化。
4. 设计并合成针对NEAT1基因的siRNA及无关序列，转染巨噬细胞，48 h 后，以IFN-γ及LPS诱导巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化，以IL-4诱导巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化，采用ELISA检测细胞因子IL-12及IL-10的分泌量；RT-PCR检测M1、M2巨噬细胞相关分子表达。
肝癌转移相关转录因子与研究和意义
２．转录因－ＴＳｐｌ与人肝癌转移潜能关系的实验分析结果２．１．不同转移潜能人肝癌细胞系转录因子Ｓｐｌ活性差异的验证应用ＥＭＳＡ法检测在Ｈｅｐ３Ｂ、ＭＨＣＣ９７Ｌ、ＭＨＣＣ９７Ｈ三种转移潜能不同的人肝癌细胞核中转录因子Ｓｐｌ的活性差异以验证转录因子活性芯片的结果。
结果表明随肝癌转移潜能升高（Ｈｅｐ３Ｂ＜ＭＨＣＣ９７Ｌ＜ＭＨＣＣ９７Ｈ），Ｓｐｌ活性均显著增强。
与转录因子活性芯片检测的差异趋势是一致的（见图２）。
图２ＥＭＳＡ验证转录因子Ｓｐｌ在转移潜能不同的人肝癌细胞的活性差异２．２．不同转移潜能人肝癌细胞的Ｓｐｌ蛋白表达量及磷酸化水平：转录因子蛋白表达量及表达后的修饰（如磷酸化）均可影响转录因子的活性，因此应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｓｐｌ，磷酸化Ｓｐｌ（ｐ．Ｓｐｌ）在三种不同转移潜能的人肝癌细胞系（Ｉ－－Ｉｅｐ３Ｂ、ＭＨＣＣ９７Ｌ和ＭＨＣＣ９７Ｈ）中的表达及磷酸化水平的差异。
结果表明随肝癌细胞转移潜能的升高（Ｈｅｐ３Ｂ＜ＭＨＣＣ９７Ｌ＜ＭＨＣＣ９７Ｈ），Ｓｐｌ的表达量也随之增高，而Ｐ．Ｓｐｌ的表达差异更显著（见图３），这提示Ｓｐｌ蛋白表达量和磷酸化均可影响Ｓｐｌ活性，而磷酸化水平可能是更为主要的因素。
图３Ｓｐｌ在转移潜能不同的人肝癌细胞的表达及磷酸化情况３．ＲＮＡ干扰效果鉴定３．１．转染效率检测用脂质体将ＳｐｌｓｉＲＮＡ转染ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞的同时，设置一个平行的未转染组和一个阴性对照组。
对照组也用脂质体转染带荧光标记的非特异性ｄｓＲＮＡ，对照ｄｓＲＮＡ转染后除作为转染过程的对照外，还可以在荧光显微镜下观察转染的效率。
转染对照ｄｓＲＮＡ１８ｈ后，分别在普通光镜下和荧光显微镜下观察细胞，发现两显微镜下的同一视野内细胞数目形态相同，即光镜下看到的同一视野的全部细胞在荧光显微镜下均带有绿色荧光，表明转染效率几乎为１００％（见图５）。
图５转染荧光标记的阴性对照ｄｓＲＮＡ后转染效率的观察Ａ：普通光学显微镜下；Ｂ：荧光显微镜下３．２．ＳｐｌｓｉＲＮＡ转染ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞后ＳｐｌｍＲＮＡ水平检测ＳｐｌｓｉＲＮＡ转染ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞２４小时后，用Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ检测ｍＲＮＡ的抑制效果。
基于磁共振高分辨T2WI影像组学预测直肠癌新辅助治疗后病理完全反应的研究
•论著•基于磁共振高分辨T2W I影像组学预测直肠癌新辅助治疗后病理完全反应的研究陆海迪沈浮陆建平郝立强海军军医大学附属长海医院医学影像科，上海200433通信作者：郝立强，Email:hao_liqiang@139. com【摘要】目的探讨基于磁共振高分辨T2W I影像组学方法对预测直肠癌新辅助治疗后病理完全反应（p C R)的价值。
方法回顾性分析我院2018年1月至2019年3月新辅助治疗前接受磁共振高分辨T2W I成像检查并经病理证实的80例直肠癌患者，在高分辨T2W I图像上手动勾画病灶容积感兴趣区（V0I)后提取影像组学特征，采用最小绝对值收缩算子（L A S S O)算法进行降维，筛选对肿瘤P C R有价值的特征，利用R a n d o m算法将数据随机分为训练集U =64)与测试集（《 = 16)进行机器学习，建立决策树（D T)、逻辑回归（L R)、随机森林（R F)、极限梯度增强树（X G B〇〇s t)4种机器学习模型并绘制R0C曲线，分别计算A U C、敏感性、特异性及95%C/，采用D e L o n g检验比较R0C曲线差异。
结果80例直肠癌患者p C R 15例，占18. 75% ;非P C R 65例，占81.25%。
共提取1 409个影像组学特征，经L A S S O算法降维后筛选出8个最有价值的特征。
测试集D T、L R、R F、X G B〇〇st 4种分类器模型的A U C分别为0. 870、0. 801、0. 912、0. 945，其中X G B o o s t分类器模型的A U C最大，与D T、L R、R F分类器模型相比较，差异具有统计学意义(/)=0.008;/?=0.006;户=0.009);其他3种模型两两比较，差异均无统计学意义（户||1^ =0.083;P DT.LR =0• 113;P m..KK =0. 879)。
4种分类器模型敏感性分别为 78. 57%、64. 29%、78. 57%、85.71%，特异性分别为 95. 38%、84. 62%、92. 31%、98. 46%，95% C/分别为 0. 775〜0. 935、0. 696〜0. 882、0. 827〜0.964、0. 870〜0. 984。