免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上应用
一种胶乳增强免疫比浊试剂、稳定方法及应用与流程
一种胶乳增强免疫比浊试剂、稳定方法及应用与流程1胶乳增强免疫比浊试剂的介绍胶乳增强免疫比浊试剂是一种常用于免疫学实验中的试剂，它可以被用来检测特定抗原或抗体的存在，尤其是在生物医学和生命科学领域中应用广泛。
该试剂由胶体金、珠光体、荧光素、光散射物等成分组成，能够通过增强散射和吸收等光学效应，从而提高检测的灵敏度和可信度，并且还能够保证试剂稳定性和可重复性。
2胶乳增强免疫比浊试剂的稳定方法为了保证胶乳增强免疫比浊试剂的稳定性，通常采用以下方法：2.1抑制氧化反应某些成分在氧化反应的作用下会失去活性，因此可采用添加还原剂来抑制氧化反应。
通常使用亚硫酸钠、硫代硫酸钠等还原剂，可以有效地抑制氧化反应。
2.2控制温度和光照温度和光照会对试剂的稳定性产生影响，因此需要控制环境温度和光照强度。
通常把试剂置于暗处或遮光袋中，避免直接照射光线。
2.3添加保护剂添加保护剂能够保护试剂免受外界环境的影响，一些常用的保护剂有甘露醇、丙二醇、山梨醇等。
这些保护剂能够减轻试剂在储存和运输过程中受到的压力，从而延长试剂的使用寿命。
3胶乳增强免疫比浊试剂的应用流程胶乳增强免疫比浊试剂的应用流程包括以下几个步骤：3.1试剂前处理使用前，需要将胶乳增强免疫比浊试剂离心，将沉淀物均匀悬浮于试剂中。
3.2样品处理制备样品液，通常需要对样品进行稀释、加热、离心等操作，以获得更加准确的测量结果。
3.3加试剂将胶乳增强免疫比浊试剂加入样品中，混合均匀后进行孵育。
3.4测量结果测量反应产物的比浊度、荧光强度等参数，并进行数据分析和结果判定。
4胶乳增强免疫比浊试剂的应用胶乳增强免疫比浊试剂的应用范围非常广泛，通常用于以下方面：4.1检测抗体和抗原胶乳增强免疫比浊试剂可以用于检测特定抗体或抗原的存在，常常被应用于医学诊断、生物工程等领域。
4.2生化分析胶乳增强免疫比浊试剂能够用于测定肽、多肽、蛋白质、脂质等生化物质的存在和浓度。
4.3分子识别胶乳增强免疫比浊试剂可以用于基因测序和DNA分析等领域，为了识别特定的分子，可以在试剂中加入标记物质并进行检测。
捷门D-二聚体测定试剂盒-D-dimer（胶乳免疫比浊法）说明书
D-二聚体测定试剂盒－D-dimer （胶乳免疫比浊法）说明书通用名称：D-二聚体测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）包装规格：a)试剂1：1×15mL 试剂2：1×5mL b)试剂1：2×45mL 试剂2：2×15mL c)试剂1：4×60mL 试剂2：4×20mL d)试剂1：2×60mL 试剂2：2×20mL预期用途用于体外定量测定人血浆中D-二聚体的含量。
D-二聚体主要反映纤维蛋白溶解功能。
只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶解活动，D-二聚体就会升高；D-二聚体是深静脉血栓(DVT),肺栓塞(PE)，弥散性血管内凝血(DIC)的关键指标。
[1]测定D-二聚体常用于产科疾病、血管病变等疾病中的辅助诊断。
检验原理样本中D-二聚体与其相应胶乳抗体在液相中结合，形成抗原抗体复合物，产生浊度。
浊度的高低与样本中D-二聚体的含量成正比。
主要组成成份试剂1主要组份磷酸盐缓冲液30mmol/L表面活性剂及稳定剂试剂2主要组份磷酸盐缓冲液30mmol/L 抗体致敏胶乳 2.8mg/mL 表面活性剂及稳定剂注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
储存条件及有效期试剂原包装：（2～8）℃储存，有效期为12个月。
开口后的试剂在仪器仓中可稳定30天。
适用仪器日立7020、7600-110，贝克曼AU5400，东芝TBA-120，迈瑞BS-400全自动生化分析仪。
样本要求新鲜不溶血血浆，2～8℃可稳定1天。
检验方法使用全自动生化分析仪时基本参数及操作：测定温度37℃吸光度范围0-2.5A 比色杯光径 1.0cm 波长600nm 测定模式终点法定标方式SPLINE 试剂1180μL试剂260μL样本15μL操作流程图：试剂1+样本试剂2600nm测定0秒300秒320秒600秒计算方法采用合适的非线性模式，如SPLINE 拟合多点定标的校准曲线；样品含量值通过校准曲线得出。
汇总：全自动生化分析仪的分析参数设置
汇总：全自动生化分析仪的分析参数设置自动生化分析仪是一种把生化分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、恒温反应、自动监测、数据处理以及实验后清洗等步骤进行自动化操作的仪器，它完全模仿并代替了手工操作，目前已经成为医疗机构进行临床诊断所必可不少的仪器之一。
它的应用大大提高了生化检验的准确性、精密度和工作效率，适应了临床医学发展对检验医学的要求，然而这一切不仅需要生化分析仪的技术基础，也需要仪器内每个项目都有一组最优化的分析参数。
并且目前大多数生化分析仪为开放式，封闭式的仪器一般也会另外留一些检测项目的空白通道由用户自己设定分析参数，因此我们有必要了解生化分析仪各个分析参数的基本含义以及设置方法。
1.试验名称常以项目的英文缩写来设置，如总蛋白设置为TP，白蛋白设置为AL等。
2.方法类型生化分析仪常用的方法有终点法、连续监测法、比浊法等，根据被检物质的检测原理等选择其中一种分析方法。
2.1终点法又称为平衡法，是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小对物质进行定量分析的一类方法，有一点终点法和两点终点法两类。
一点终点法的特点是使用一种或两种试剂，当待测物与试剂反应达到终点时，测定混合溶液的吸光度来计算待测物的浓度，该法常用的有总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法、葡萄糖氧化酶法等，手工操作的大多数方法都是一点终点法。
两点终点法也称固定时间法，如果是单试剂分析，当测定波长同干扰物质的吸收光谱有重叠时，通过选用两点终点法可消除样品空白引起的干扰，其分析过程是在样品与试剂混合后经过一段延滞期读取一个点A1，一定时间后再读取A2，然后比较标准和测定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待测物的浓度。
肌酐苦味酸法就是一个典型的单试剂两点法的例子。
如果是双试剂分析，选用二点终点分析法除了可消除样品空白引起的干扰外，还可消除内源性干扰物质的干扰，其分析过程是加入试剂1后读取A1，加入试剂2后读取A2，A1相当于读出样品空白值，A2才是实际呈色反应，然后比较标准和测定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待测物的浓度。
全自动生化仪免疫比浊法检测血清白蛋白的方法学评价
全自动生化仪免疫比浊法检测血清白蛋白的方法学评价目的使用免疫比浊法对血清白蛋白（ALB）测定的方法学进行评价。
方法根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）的标准，对免疫比浊法测定血清白蛋白的精密度、线性范围、回收率及准确性等指标进行测试，同时与溴甲酚绿法进行相关性的比较。
结果精密度批内CV55 g/L）进行比较。
不同水平血清白蛋白的检测结果比较见表3。
结果表明两法差异无统计学意义（P > 0.05），直线回归方程Y =1.05X +5.56（Y：免疫比浊法；X：溴甲酚绿法），F = 103.3，r = 0.926，提示两法有良好的相关性。
2.6 干扰试验取一份混合血清（血清白蛋白为50.7 g/L）分别加入不同浓度血红蛋白、胆红素和脂肪乳剂（以TG浓度表示），分别测定血清白蛋白值。
结果显示，TG≤23.0 mmol/L，Hb≤50 g/L，TBIL≤400 μmol/L时对本法无显著干扰。
3 讨论ALB是血浆中含量最多、功能最重要的一种蛋白质。
它广泛地存在于人体的血液、淋巴、肌肉组织中，属于非专一性的运输蛋白，其含量的测定对临床疾病的诊断、治疗、预后判断都具有非常重要的意义，其测定结果的准确性也因此而受到广泛的重视[5]。
长期以来，溴甲酚绿（bromcresol green，BCG）染料结合法测定ALB广泛应用于临床，目前国内大多数医院仍然沿用这一方法，但该法会因BCG与非ALB类蛋白质非特异性结合，使得其检测特异性一直以来不是很理想。
因此，近年来外国某些公司开发出来的白蛋白高特异性免疫比浊法就受到了高度关注[6-7]。
免疫比浊法也称浊度法，属于散射光谱分析，是在比色的基础上发展起来的，其测定理论、方法、计算等许多方面和比色法相似，但本质上又有区别[8]。
最近几年免疫比浊开始应用于临床体液中白蛋白含量检测的领域。
再由于配合全自动生化分析仪的优势，白蛋白的检测基本能够实现高速、灵敏和自动化。
浅谈免疫比浊法技术优势
浅谈免疫比浊法技术优势孙立芳;赵静【摘要】目的:了解免疫透射比浊法和免疫散射比浊法的优缺点.方法:通过检测免疫透射比浊法和免疫散射比浊法的灵敏度和精密度及比较两者的优缺点.得知两者的优势.结果:免疫透射比浊法比免疫散射比浊法具有很多优势.结论:免疫透射比浊法比免疫散射比浊法具有很多优势.但免疫透射比浊法存在灵敏度较低的问题,至开发出了胶乳增强技术,抗原抗体结合发生凝聚反应,这种技术变非均相反应为均相反应,大大的提高了灵敏度,这就使该技术有更好的应用优势.【期刊名称】《中国民康医学》【年(卷),期】2012(024)023【总页数】3页(P2870-2872)【关键词】免疫透射比浊;免疫散射比浊;优势【作者】孙立芳;赵静【作者单位】烟台市心理康复医院,山东,烟台,265200;烟台市心理康复医院,山东,烟台,265200【正文语种】中文【中图分类】R446.6比浊法也称浊度法，属于散射光谱分析，是在比色的基础上发展起来的，其测定理论、方法、计算等许多方面和比色法相似，但本质上又有区别［1］。
各种浊度都没有特异(吸收光谱)，只是悬液中的粒子将入射光散射(遮挡)，致使透光度减弱。
浊度法分正免疫透射比浊测定技术和免疫散射比浊测定技术，是目前检测人血清中特定蛋白的2种常用方法。
目前以散射比浊为原理的特定蛋白分析仪已在医学检验领域普遍使用。
人们传统地认为散射比浊法要比透射比浊法更灵敏，准确度高，包括许多教科书也这样述说。
20世纪70年代起出现了微量免疫沉淀测定法，即免疫透射比浊测定和免疫散射比浊［1］，自此免疫比浊测定逐渐被广泛应用于临床体液中蛋白质含量检测的领域。
近几年来，免疫透射比浊测定技术被广泛使用在全自动生化分析仪上，实现高速、灵敏和自动化。
一束光线通过有悬浮质点的胶体溶液时，会产生丁铎尔现象，这是胶体粒子散射光的结果。
粒子被光照射后而发光，同时受到散射和吸收两个因素的影响而使透射光的强度相应减弱，这一现象主要取决于粒子的大小，即当粒子直径大于入射光波波长的一半(半波长)时，就发生散射现象。
胶乳透射免疫比浊法-国家食品药品监督管理总局
目前胱抑素 C 含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的
— 1 ——
免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色法、 单向免疫扩
散法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等，
免疫比浊法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。 其中透射
免疫比浊法可适用于半自动生化分析仪、 全自动生化分析仪， 散
用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据， 并依据产品
的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件， 不涉及
注册审批等行政事项， 亦不作为法规强制执行， 如有能够满足法
规要求的其他方法， 也可以采用， 但应提供详细的研究资料和验
证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
的变化，加入标准溶液后样品总浓度必须在试剂检测线性区间
内）或纯品，每个浓度重复检测 3 次，按公式（ 2）计算回收率，
结果应符合产品技术要求性能指标的要求。
R=[C ×（V 0+V ）－ C0×V 0） ] / （ V ×CS）×100% 式中：
（ 2）
R —回收率；
V —加入标准溶液的体积；
V 0 —人源样品的体积； C —人源样品加入标准溶液后的检测浓度；
6840。
二、注册申报资料要求
（一）综述资料
综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、
生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等
内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》 （国家食品药品监
督管理总局令第 5 号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资
料要求和批准证明文件格式的公告》 （国家食品药品监督管理总
意义。
注：若注册申报产品声称临床意义超出此内容范围， 应提供
乳胶比浊法测定全程CRP的性能评价[权威资料]
![乳胶比浊法测定全程CRP的性能评价[权威资料]](https://img.taocdn.com/s3/m/0e3988e17d1cfad6195f312b3169a4517723e5b9.png)
乳胶比浊法测定全程CRP的性能评价【摘要】目的：对一种乳胶比浊法测定全程CRP的试剂盒进行性能评价。
方法：采用日立7600全自动生化分析仪，对乳胶比浊法检测全程CRP的试剂盒分别进行不精密度、不准确度、线性范围、检测最低限、干扰试验的验证。
结果：全程CRP批内CV<3.5%，批间CV< 5.5%。
不准确度试验表明：选择浓度范围0.2-11.5mg/L的40份标本，全程CRP 试剂盒与超敏CRP相关性良好（R2=0.09998，P<0.05）；选择浓度范围在2.5-320mg/L的40份标本，全程CRP与普通CRP的相关性良（R2=0.09996，P<0.05）。
全程CRP试剂盒线性范围可达0.1-350.0mg/L，检测最低限为0.1 mg/L。
当样品中血红蛋白达<4820mg/L，胆红素<500 mg/L，甘油三酯<5.5mmol/L均不干扰测定结果。
结论：乳胶比浊法测定全程CRP具有准确度高、稳定性好、抗干扰能力强、成本低、快速方便等特点，适宜于在临床推广。
【关键词】C反应蛋白；乳胶比浊法【】R446 【】A 【】1004-7484（2013）06-0467-01CRP是肝脏合成的一种急性时相反应蛋白，因能与肺炎球菌细胞壁C多糖结合而得名。
正常人血清含量极微，但在组织损伤、恶性肿瘤、心肌梗死、败血症等疾病时含量可迅速升高，CRP被认为是监测感染最好的广谱性标志物[1-2]。
而且低水平的CRP还应用于冠心病、脑卒中、周围血管栓塞等疾病诊断和预测，是独立于脂类之外的危险因子[3]。
近些年CRP的测定方法主要有酶联免疫法、速率比浊法、胶乳凝集法以及胶乳超敏比浊法等，出现了普通CRP和超敏CRP检测，两者实属同一种物质，但因其线性范围和灵敏度不同，临床多采用两种试剂检测其含量，费用高，操作比较繁琐。
日立和光最新研制出乳胶比浊法测定全程CRP试剂盒，具有宽检测范围和高灵敏度的优点，完全覆盖普通CRP和超敏CRP 检测范围，可广泛满足临床需求。
免疫比浊法D二聚体测定在全自动生化分析仪上的使用
CV(% )
3. 6
3. 9
4. 1 4. 3 4. 5
二、结果可接受范围 在线性范围内 ( 60 g /mL ) 的线性良好, Y = 1. 007X - 0. 253 6, r2 = 0. 999, 结果见图 1。
图 1 D 二聚体稀释线性
三、干扰物质的影响 将游离型胆红素 ( 320 m o l/L )、结合型胆红素 ( 370 m ol /L )、乳糜 ( 21. 2 m g /L ) 和类 风湿 因子 ( RF) ( 500 U /mL ) 同时加入含纤维蛋白原和相关 物 质 的 血 浆中, 使 纤 维 蛋白 原 的 终 浓度 为 500 m g /L、可溶性纤维蛋白为 60 g /mL、D 单体为 60 g /mL[ 3] , 再检测添加前后 D 二聚体测定值的 变化率, 结果分别为 95. 5% 、95. 2% 、95. 3% 。 四、前带反应 取浓度为 260 g /mL的样本分别作 1 8、2 8、3 8、4 8、5 8、6 8、7 8稀释, 使用本试剂检测 观察其前带现象, 到 160 g /mL为止为直线, 其后 显示有减低的倾向。结果见图 2。 五、相关性 选 用 8 个 不同 浓 度 ( 0. 0、1. 9、5. 2、10. 3、 20. 5、30. 0、41. 2、58. 0 g /mL ) 的标 准品 使用 本
图 2 D 二聚体前带现象
试剂检测, r2 = 0. 999 7, Y = 1. 004 8X - 0. 045 4, 相关性较好。
六、回收率测定 经过试验, 计算该试剂在各浓度段的回收率 均 > 95% , 平均为 97. 23% 。
讨论
D 二 聚体 检 测方 法 有 乳 胶 法 、酶 联 免疫 吸 附 试验 ( EL ISA ) 和免疫比浊法 [ 4 ] 。其中胶乳增强免 疫比浊法是近年逐渐在全自动生化分析仪上开始 使用的方法, 其反应原理是采用纳米技术的乳胶 粒子包被 D二聚体单克隆抗体, 经我们的实际研 究显示, 该法的性能较好。当血清中含有 D 二聚 体时产生特异的抗原抗体反应, 从而引起反应系 统中吸光度的增加, 由此定量测定出血清中 D二 聚体的含量。使用方便, 操作简单, 可适用于各种 生化分析仪, 并可实现定量测定, 满足了临床急诊 需要, 值得在各大中型医院中推广使用。
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用已知浓度的标准参考品建立标准曲线，测出待测抗 原的含量。
透射比浊法主要用于生化分析仪。
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透射免疫比浊
免疫复合物直径为35～lOOnm，这一范围要求近紫外光处 入射光发出最大的干扰(最大吸收峰)，选择290～410nm 波长测定最佳。
由于抗原抗体结合后在短时间内(<19s)只能形成小复合 物，无法进行比浊，需要等几分钟到数小时(>19s)形成 可见的复合物，才能进行比浊。
免疫比浊技术中散射比浊法目前均用获国家食品药 品监督管理局（SFDA）批准进口的自动化分析仪器 和配套的各种检测项目的专用试剂。
透射比浊法（生化分析仪）可用国产试剂。
2020/11/3
——全国临床检验操作规程 第3版
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透射还是散射
散射比浊
专用仪器 专用配套试剂 原装进口试剂昂贵
透射比浊
生化分析仪 开放试剂 （可用国产试剂）
最早应用的免疫沉淀反应是Ouchterlony在1948年建立 的琼脂双向扩散法。
1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单 向（辐射状）免疫扩散技术。
Laurell等1966年建立了电免疫扩散法，使报告结果的
时间由单向免疫扩散法的≥24h缩短到4-5h。
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为解决快速反应及微量化的要求，建立了免疫胶 乳浊度法（immunolatex turbidimetry）。
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免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
其基本原理是： a) 将特异性抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒
上，当遇到相应抗原时，则使胶乳颗粒发生凝集。 b) 单个胶乳颗粒在入射光波之内，不阻碍光线透过；两
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免疫比浊
1967年由Richie首次报告，20世纪70年代逐步完善， 80年代初期初步应用临床常规检查。
抗原抗体在液相（特殊的缓冲液）中快速结合，形成 抗原抗体复合物，反应液出现浊度。
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免疫比浊
液相中抗原与抗体的反应结果与两者的浓度比例有关。 抗原或抗体显著过量时，都只能生成少量的可溶性免疫 复合物，分子极小，不适于免疫比浊法检测。
a) 速率法和终点法测定； b) 速率法的灵敏度和特异性优于终点法；终点法
的稳定性较好；
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透射还是散射
目前，由于技术的发展，两种比浊法的灵敏度和特异 性已接近，而全自动生化仪的自动化程度和精密度要 胜于专用散射比浊仪，透射免疫比浊法在临床上的应 用日益广泛。生化分析仪通过免疫比浊法技术，架起 了现代生化检验和现代免疫技术的桥梁。
该技术的关键在于两个方面： 首先是选择适用的胶乳，其大小（直径）要稍小于
波长。用500nm波长者，选择100nm颗粒较适合；用 585nm波长者，则选用100～200nm颗粒为好。目前多 用200nm的胶乳颗粒。 其次，胶乳与抗体结合时用化学交联虽好，但失活 也较严重；一般用吸附法即可。
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为了提高复合物形成速度，加入促聚剂，如4％聚乙二醇
(MW：6000～8000)，可使复合物形成在3～10min完成。
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免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
比浊法中，少量的小的抗原抗体复合物极难形成 浊度，除非放置较长时间；如形成较大的复合物 ，则抗原和抗体用量也较大，显然不符合微量化 的要求。
个或两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过光减少。 c) 免疫微球凝聚的程度为被测物浓度的函数，由此可测
出标本中待测物的含量。
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(a)带抗体的胶乳在1个波长之内可透过光线
(b)结合后，则形成光线衰减
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免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
免疫比浊技术要求溶液中抗体要保持中等过量，此时免 疫复合物（immunecomplex，IC）仍是可溶性的。
在这种情况下，抗原与抗体的反应遵循质量作用定律（ Ag+Ab＝Ag.Ab），形成IC的量是抗原或抗体的函数。
当抗体固定时，IC的量与抗原的量成正比。
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散射比浊、透射比浊 光路图
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免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）源自2020/11/318
免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
免疫化学是免疫学技术和生物化学技术的结合。既具
有免疫学抗原抗体结合的特异性，又具有生物化学反
应动力学特点。
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透射免疫比浊
可溶性抗原与其特异性抗体，在一定缓冲液中形成的 复合物，经一段时间聚合后出现浊度，人射光在渗过 反应液时，由于溶液内IC粒子对光线的反射和吸收， 引起透射光减少，可用吸光度A表示。
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免疫比浊
经典的免疫沉淀试验通常是在抗原与相应抗体反应的 终点判定结果，存在费时、操作繁琐、敏感度低（10 ～100mg/L）、不能自动化等缺陷。
根据沉淀反应时，抗原抗体结合后可使反应系统透光 度发生改变，建立了以测定透光度为特征的微量免疫 沉淀测定法法，既免疫浊度测定技术。
2020/11/3
免疫胶乳浊度分析在自动生化分 析仪上的应用
免疫比浊回顾 免疫胶乳浊度分析（immunolatex turbidimetry） 在生化分析仪上进行测定的有关问题
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免疫比浊
免疫检测的基础
抗原抗体间的特异性反应
手工操作 核心—基础 自动化分析
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免疫比浊
免疫比浊技术是在免疫沉淀反应（Precipitation）检测 法的基础上建立的。
平光线 IC
光 射 散
θ
NEPHELOMETRIC DETECTOR
透射光+散射光
LIGHT SOURCE
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FILTER
REACTION CUVETTE
TURBIDIMETRIC DETECTOR
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透射还是散射
目前，国内开展的各项免疫检验，均求使用国家食 品药品监督管理局（SFDA）准入和批准的仪器和试 剂。这样做不仅能使各项检查更加统一，规范，各 实验室之间检查结果更具可比性，而且也可避免很 多不必要的医疗纠纷。