如何使用Image-Pro Plus分析划痕实验

划痕攻略之如何使用Image-Pro Plus分析划痕实验划痕实验大家做了不少，但是如何能快速地将实验结果量化呢？今天给大家介绍如何用Image-Pro Plus分析划痕实验。

我们先回顾一下划痕实验的实验原理和步骤
实验原理：细胞划痕法是测定肿瘤细胞的运动特性的方法之一，是在体外培养的单层细胞上划痕致伤，观察肿瘤细胞的迁移情况。

实验步骤：1、培养板接种细胞之前先用marker笔在6孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一个视野）。

2、细胞消化后接入6孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时
可培养一段时间至铺满板底）。

3、细胞铺满板底后，用10μL枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量
保证各个划痕宽度一致。

4、吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎
片。

5、加入含有4μg/m L丝裂霉素（防止细胞增殖过快）的完全/基础培
养基，拍照记录。

6、将培养板放入培养箱培养，不同时间点取出拍照。

7、Image-Pro Plus分析实验结果。

划痕实验的结果是以照片的形式呈现的，那么如何将这一大批的图片进行量化呢？下面我给大家介绍一下运用Image-Pro Plus来分析划划痕实验结果。

我用的是Image-Pro Plus 6.0版本（需要的小伙伴可以私信拿安装包）
1.首先打开Image-Pro Plus，在File菜单栏下的open那里选择你要分析的图片或者把你要分析的图片直接拖入软件中（fig.1）。

Fig.1
2.选择工具栏里的计算和测量工具即红色箭头所指（Fig.2）
Fig.2
3.在count/Size小窗口里选择measure下拉栏里的select measurements 选择我们要分析的面积（Area）和宽度（Box width）（Fig.3）
Fig.3
4.选择划痕面积的工具有三种（红圈出部分），可根据实验情况选择一种进行分析（fig.4）。

Fig.4
4.1第一种方法，在工具栏里选择矩形，直接圈出划痕面积（Fig.5）。

此方法较适用于细胞划痕平整，细胞尚未开始迁移的实验结果。

Fig.5
4.2第二种方法，在工具栏里选择圆形，圈出划痕面积(圆形叠加的方法
选择工具栏的下拉栏里的Add再把圈圈移至需要圈的位置就可以了此方法较麻烦，每增加一个圈圈就需要重复一次此步骤)（Fig.6），此方法较适用于划痕边缘不整齐或中间有部分已经愈合的实验结果。

Fig.6
4.3 第三种方法，在工具栏里点击再用鼠标点击划痕的任意位置，调整至所圈面积最合适为止（Fig.7）。

此方法最为简便，但是只适用于细胞形态明显的细胞，对于一些细胞轮廓较虚的细胞很难识别。

Fig.7
5.根据第四步的方法圈好划痕的面积后，在count/Size小窗口里选择Edit下拉栏里的convert AOI to object(Fig.8)，就可以把圈出来的地方转化成面积和宽了。

选择View里的measurement data(Fig.9)，就能看到我们想要的数据啦(Fig.10)。

6.简单五步就能快速地将划痕结果量化了，惊不惊喜，意不意外。

用得到的面积除以宽度就能得到迁移距离，迁移率=（0h的迁移距离-其他时间点迁移距离）/0h迁移距离，轻松搞定划痕实验啦。

Fig.8
Fig.9
Fig.10。