血清乳酸脱氢酶同工酶测定
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简介：
LDH5最多，而肺、脾、胰、甲状腺、肾上 腺和淋巴结等组织中以LDH3最多。后来从 睾丸和精子中发现了LDHx，其电泳迁移率 介于LDH4和LDH5之间。LDH是由H(心肌型) 和M(骨骼肌型)两类亚基组成，分别形成 LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、 LDH4(HM3)、LDH5(M4)。
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临床意义：
血清LDH4>LDH5较为常见。 肾皮质以LDH1 和LDH2含量较高，肾髓质以LDH4和LDH5活 性较强。患急性肾小管坏死、慢性肾盂肾 炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时， 血清LDH5均可增高。 肺含LDH3较多，肺 部疾患时血清LDH3常可升高。肺梗塞时 LDH3和LDH4相等，LD
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正常值： DH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5。
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相关检查： 血清乳酸脱氢酶（LDH）、血清α-羟丁酸 脱氢酶（α-HBDH）、乳酸脱氢酶同工酶、 乳酸脱氢酶(LDH,LD)。
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临床意义：
肠梗阻等。 肌营养不良病人肌肉中LDH1、 LDH2明显增高，LDH5显著下降;而血清则 相反，LDH1、LDH2明显减少，LDH4、LDH5 显著，表明血清LDH同工酶主要来自肌肉 组织。煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1、 LDH2下降，LDH4、LDH5升高。
实验7 琼脂糖凝胶电泳法测定血清乳酸脱氢酶同工酶
（4）恶性贫血 溶血性疾病、幼红细胞贫血症LD活性极度 升高，伴有LD1明显升高，LD1＞LD2。
（5）骨骼肌损伤时LD4和LD5可发生增高。
[注意事项]
1．红细胞中LD1、LD2活性很高，因此必须避免标本溶血。 2．LD4与LD5对热很敏感，因此底物-显色液的温度不能过
6．区带观察 观察显色的区带情况（数目、深浅等）。 7．定量 将各区带切开，分别装入试管中，加入400g/L尿素
4ml，于沸水浴中加温5min，取出冷却后以 575nm波长比色。 空白管取大小相同但无同工酶区带的凝胶，用上述相同的方 法处理。比色后根据各管吸光度值计算各同工酶的百分含量。
[计算]
A总＝A1+A2+A3+A4+A5 式中，A1～A5为各同工酶区带的吸光度。 各同工酶百分率（%）为：
实验7 琼脂糖凝胶电泳法分离（测定） 血清乳酸脱氢酶同工酶
[原理]
乳酸脱氢酶（LD）广泛存在于人体各组织细胞中，以 肾、心肌、肌肉、肝、红细胞含量最多。LD是由两种不同 亚基（M和H）组成的四聚体，共有5种同工酶形式，按电 泳的快慢命名为LD1、LD2、LD3、LD4和LD5。
5种同工酶大体可分为三大类：第一类以LD1为主，主 要存在于心肌，含量最多，可占总LD的50%左右；第二类 以 LD5 为 主 ， 以 横 纹 肌 为 代 表 ， 肝 脏 中 也 有 ； 第 三 类 以 LD3为主，存在于脾、肺。各组织LD同工酶的类型、含量 均有所差异。LD同工酶的测定相对于总活性的测定更具有 组织器官特异性，灵敏度也更高。
高（<50℃），否则易使其变性失活，不能显色。 3．LD4和LD5对冷不稳定，易发生失活，故最好采用新鲜标
乳酸脱氢酶LDH检测在临床应用论文
乳酸脱氢酶LDH检测在临床的应用摘要：目的：关键词：【中图分类号】r446.19【文献标识码】b【文章编号】1672-3783（2012）10-0161-01乳酸脱氢酶英文名称： ldh正常范围：血清 100～300u/l；尿 560～2050u/l；脑脊液含量为血清的1/10。
检查介绍：乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。
乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高，乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶。
几乎存在于所有组织中。
同功酶有五种形式，即ldh-1（h4）、ldh-2（h3m）、ldh-3（h2m2）、ldh-4（hm3）及ldh-5（m4），可用电泳方法将其分离。
ldh同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。
正常人血清中ldh2>ldh1。
如有心肌酶释放入血则ldh1>ldh2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。
临床意义：（1）急性心肌梗塞发作后，早期血清中ldh1和ldh2活性均升高，但ldh1增高更早，更明显，导致ldh1/ldh2的比值升高。
（2）肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时ldh5都会升高。
（3）患活动性风湿性心脏病、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血、肾坏死等病ldh1也可升高。
（4）恶性病变时ldh3常增高。
血清乳酸脱氢酶（ldh）同工酶测定及意义人组织中的乳酸脱氢酶（ldh）用电泳法可以分离出5种同工酶区带，根据其电泳迁移率的快慢，依次命名为ldh1，ldh2，ldh3，ldh4，ldh5。
不同组织的乳酸脱氢酶同工酶分布不同，存在明显的组织特异性，人心肌、肾和红细胞中以ldh1和ldh2最多，骨骼肌和肝中以ldh4和ldh5最多，而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等组织中以ldh3最多。
后来从睾丸和精子中发现了ldhx，其电泳迁移率介于ldh4和ldh5之间。
ldh是由h（心肌型）和m（骨骼肌型）两类亚基组成，分别形成ldh1（h4）、ldh2（h3m）、ldh3（h2m2）、ldh4（hm3）、ldh5（m4）。
乳酸脱氢酶(ldh)正常值范围
乳酸脱氢酶(ldh)正常值范围
乳酸脱氢酶是观察心肌疾病、肝胆疾病等的重要指标之一，正常值范围是109-245U/L。
如果乳酸脱氢酶数值偏高，则需要警惕肝脏疾病、心脏疾病等，及时去医院咨询进行进一步检查确定数值增高的病因，数值偏低则不需要过度担心。
乳酸脱氢酶是催化乳酸和丙酮相互转化的同工酶，存在于肝脏、心脏、肾脏中。
乳酸脱氢酶偏低有可能是因为内分泌失调或者由过于劳累、睡眠不好、心情不好等原因引起，乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重，经过调理即可恢复。
但是如果出现乳酸脱氢酶偏高就要引起重视了，常见原因如下：
1、乙肝患者血清中乳酸脱氢酶含量就会出现增高，这
是由肝细胞受损引起的。
2、肌营养不良的患者血清中可以观察到偏高的乳酸脱
氢酶。
3、肝脏疾病、肺部疾病、心脏疾病、肾脏疾病等都可
能会引起乳酸脱氢酶偏高。
血清乳酸脱氢酶LDH测定
血清乳酸脱氢酶LDH测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，LDHNADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。
L-乳酸 + NAD+丙酮酸 + NADH + H+3 标本：3.1 病人准备：无特殊。
3.2 类型：血清或EDTA血浆。
3.3 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<2%。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司LDH试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成氯化钾 190mmol/L 试剂1（R1）乳酸62.5mmol/LTris缓冲液 100mmol/L试剂2（R2）NAD+ 30mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 4.1.2试剂准备试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的LDH校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
乳酸脱氢酶同工酶1偏高的原因
乳酸脱氢酶1 (Ldh1) 是一种同工酶，主要参与线粒体中乳酸的代谢。
当乳酸脱氢酶1偏高时，可能是由于以下原因：
1.肌肉损伤：肌肉损伤或运动过度会导致肌肉组织中乳酸的增加，乳酸脱氢酶1水
平也会增加。
2.疾病：乳酸脱氢酶1水平偏高可能是肝硬化、心肌病、肺纤维化等疾病的一种表
现。
3.肿瘤：乳酸脱氢酶1偏高可能是肿瘤组织中乳酸代谢异常的结果，也可能是肿瘤
组织破坏导致的。
4.毒性反应：一些药物或化学物质可能会导致肝脏或肌肉组织中乳酸脱氢酶1水平
增高。
5.酒精性肝病：长期酗酒可导致肝细胞损伤，引起肝脏功能障碍，导致乳酸脱氢酶1
水平升高。
6.生活方式因素：抽烟、高脂肪饮食、缺乏运动等生活方式因素也可能导致乳酸脱
氢酶1水平增高。
需要注意的是，乳酸脱氢酶1偏高的原因是多种多样的，需要结合临床症状和其他检查结果进行判断。
血清乳酸脱氢酶及其同工酶联合检测在诊断儿童难治性肺炎支原体肺炎中的应用价值
血清乳酸脱氢酶及其同工酶联合检测在诊断儿童难治性肺炎支原体肺炎中的应用价值陈 浩（常州市儿童医院重症医学科，江苏 常州 213000）[摘要]目的：探讨并分析血清乳酸脱氢酶（LDH）及其同工酶联合检测在诊断儿童难治性肺炎支原体肺炎（RMPP）中的应用价值。
方法：选取2015年1月至2019年10月常州市儿童医院收治的78例肺炎支原体肺炎（MPP）患儿作为研究对象。
将其中32例RMPP患儿设为观察组，将其中46例非RMPP患儿设为对照组。
对两组患儿血清LDH及其同工酶〔包括乳酸脱氢酶同工酶1（LDH1）、乳酸脱氢酶同工酶2（LDH2）、乳酸脱氢酶同工酶3（LDH3）、乳酸脱氢酶同工酶4（LDH4）和乳酸脱氢酶同工酶5（LDH5）〕的水平均进行检测，然后比较其检测结果。
结果：观察组患儿血清LDH 的水平高于对照组患儿，差异有统计学意义（P＜0.05）。
观察组患儿血清LDH1、LDH2、LDH4和LDH5的水平均高于对照组患儿，差异有统计学意义（P＜0.05）。
两组患儿血清LDH3的水平相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。
结论：联合检测LDH及其同工酶的水平对诊断儿童RMPP具有一定的参考价值。
[关键词]乳酸脱氢酶；乳酸脱氢酶同工酶；儿童难治性肺炎支原体肺炎[中图分类号]R446 [文献标识码]B [文章编号]2095-7629-（2021）01-0125-02肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是指由肺炎支原体（mycoplasma pneumonia，MP）感染引起的一种肺炎。
儿童是MPP的高发群体。
难治性肺炎支原体肺炎（refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia，RMPP）是指病程较长（多超过3周）、病情较重（可出现肺外并发症）且使用大环内酯类抗生素进行治疗效果不佳的一类MPP。
目前，国内外关于RMPP的诊断尚未形成统一的标准[1]。
乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程(SOP)
乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程（SOP）一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中乳酸脱氢酶（LDH）的活性。
二、临床意义（一）概述乳酸脱氢酶（LDH），又称L－乳酸－NAD+氧化还原酶，酶编号为EC 1.1.1.27，分子量约为34000道尔顿。
LDH是一种细胞质酶，存在于所有组织细胞中。
由于组织中的LDH 浓度比血浆高约500倍，即使组织的轻微损伤也将导致血清中活性的明显增高，在肝、心肌、骨骼肌和肾中发现高度组织特异性活性的酶。
（二）临床意义乳酸脱氢酶增高主要见于心肌梗死、肝炎、肺梗死、某些恶性肿瘤、白血病等。
某些肿瘤转移所致的胸腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。
目前，常用于心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
（三）医学决定水平170U／L:此值在参考范围以内，等于或低于此值可排除许多与LDH升高有关的疾病，而考虑其他的诊断。
此值还可作为病人自身的对照，用来与以前或将来的测定值作比较。
300U／L：高于此水平时，应考虑到可能引起LDH升高的各种疾病，如心肌梗塞、肝病变、传染性单核细胞增多症、进行性肌营养不良等。
因此，应作其他各种试验，以作出明确诊断。
血清溶血可使测定值增高，应予以注意。
500U／L：高于此值，常见于巨幼细胞性溶血，急性白血病、慢性粒细胞性白血病、转移癌和肝昏迷等，此时应作其他多种检测来作出正确诊断。
三、检验原理L-乳酸＋NAD+−−LDH丙酮酸＋NADH＋H+−→NADH的生成速率与样品中LDH活性成正比，在340nm波长处，通过连续监测吸光度的上升速率(△A／min)，即可计算出样品中LDH的活性。
四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
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血清乳酸脱氢酶同工酶测定
（醋酸纤维素薄膜电泳法）
[原理]
先将血清在醋酸纤维素薄膜进行电泳使乳酸脱氢酶的同工酶分离，然后在薄膜上进行酶反应，显色试剂中包括有底物（乳酸）、NAD+、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）和碘硝基四唑蓝（INT），NAD+和PMS起递氢作用，INT最后接受氢被还原生成紫色的甲臜类化合物。
其反应如下：
LD
乳酸+NAD+丙酮酸+NADH2
NADH2+PMS NAD++PMSH2
PMSH2 +INT PMS+INTH2
[试剂]
1．PH8.6巴比妥缓冲液（离子强度0.05）：称取巴比妥钠10.3g，巴比妥1.84g，溶于热的蒸馏水中，冷后加蒸馏水至1L。
2．0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液：称取磷酸二氢钾2.16g，磷酸氢二钠
（Na2 HPO4.2H2O）30.13g, 溶于蒸馏水中，并稀释至1L。
3．0.5mol/L乳酸钠溶液：吸取60%DL—乳酸钠溶液9.25ml,加蒸馏水至100ml。
4．显色试剂：临用前配制下列试剂：
（1）1mg/ml吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）水溶液；
（2）辅酶Ⅰ（NAD+）10mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液1ml；
（3）碘硝基四唑蓝[氯化2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-苯基四唑]（INT）12mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液3ml中；
（4）0.5 mol/L乳酸钠溶液1ml。
其中（2）、（3）、（4）混合后为甲液，（1）为乙液；用时以甲液∶乙液=20∶1混合。
应用前，将上述溶液充分混和；但PMS水溶液加入量为0.2ml，且应待其他三种溶液混和后再加。
4．洗脱液：正丙醇9份与二甲亚砜1份混匀即可。
2 5． 2%醋酸：2ml 醋酸加水至100ml 。
[主要仪器]
1. 恒温水浴箱
2. 电泳仪和电泳槽
3. 醋酸纤维素薄膜
4. 载玻片
5. 镊子
6. 培养皿
[操作步骤]
1. 取8×2cm 薄膜一条，于无光泽面的一端2cm 处轻轻用铅笔画一直线（点样线），并在另一端上写上姓名，注明正极。
2. 将标记好的薄膜浸于巴比妥缓冲液，待完全浸透后，取出夹于滤纸中，吸去多余缓冲液。
用微量滴管取血清5μl 均匀滴加在点样线上，待血清渗入膜后，将膜贴在支架上。
点样端放在负极。
3. 平衡5分钟后，打开电源，电压调至90—110V,电流0.4—0.6mA/cm 宽，通电30—60分钟后关闭电源。
4. 电泳结束前5分钟，开始按每条0.5ml 的量配制混合显色液。
取混合显色液0.2ml 滴于载玻片上，用镊子另取醋纤膜（4×2cm ）一条置于显色液上，两面吸透后，立即将电泳结束后的醋纤膜取下，采用“滚动”手法小心覆盖在浸有显色液的醋纤膜上（点样面向下）。
注意：这一步骤不能产生气泡，否则气泡处呈白斑，两条膜相贴时不能拖拉，以免图像模糊。
5. 将载玻片置于湿盒内，放在56℃水浴箱内孵育5-10分钟。
6. 将显色后的醋纤膜揭下，放入2.5 %醋酸溶液中固定5分钟，取出吸干，观察结果。
[结果与计算]
1．同工酶分离的电泳图谱（图15）：
54 3 2 1
— +
2．计算：
吸光度值总和T=A1+A2+A3+A4+A5，LD同工酶各部分百分数为：
LD1%=A1/T×100% LD2%=A2/T×100%
LD3%=A3/T×100% LD2%=A4/T×100%
LD5%=A5/T×100%
[注意事项]
1. 醋纤膜含水量不大，56℃温育期间易干涸，所以应放在有盖容器中，器皿底部垫有湿润的纱布或滤纸。
2. 缓冲液也可配制成含1%琼脂的乳酸锂缓冲液，在玻板上浇一层琼脂凝胶上，再将吸收呈色液的醋纤膜小心覆盖其上，此法温育时间可以较长，醋纤膜不易干涸，且底色明显比不用琼脂的为浅。
3．由于红细胞内LD活性较血清内约高100倍，所以，标本不能溶血，溶血者LD1恒定升高。
参考值：
LD1：24% ~34% LD2：35%~44 LD3：19%~27%
LD4：0~5% LD5：0~2%。
3。