DNA提取方法

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提取dna方法

提取dna方法

提取dna方法
DNA提取的方法主要有以下几种:
1. 物理法:包括机械粉碎、超声波处理和玻璃片研磨等。

这些方法可以破坏细胞结构,释放出DNA。

2. 化学法:包括碱变性法和尿素变性法等。

这些方法通过改变DNA的理化性质使其解链,从而易于被提取出来。

3. 生物酶法:包括蛋白酶K法和纤维素酶法等。

这些方法利用特定的酶来降解蛋白质和纤维素等物质,从而释放出DNA。

4. 基因工程法:通过构建表达载体并导入宿主细胞中,使目的基因在宿主细胞内得到表达,从而产生可溶性或不可溶性的DNA片段。

5. 其他方法:包括电泳分离法和超速离心法等。

这些方法可以通过分离和纯化DNA片段来实现对DNA的提取。

需要注意的是,不同的方法和材料可能存在不同的风险和注意事项,因此在提取DNA时应该遵循正确的操作规程,确保安全和有效。

提取dna的方法及原理

提取dna的方法及原理

提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作,它是获取DNA样本的过程。

DNA提取的方法有很多种,下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。

1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。

其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分(如蛋白质)之间的亲和性差异。

在高盐环境下,DNA更容易溶解而不与蛋白质结合,从而实现DNA的提取。

具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。

2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。

其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异,将DNA从细胞中分离出来。

具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。

3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。

其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。

DNA样本在经过一系列处理后,通过硅胶柱,DNA能够与硅胶颗粒结合,而杂质则被洗脱。

最后,通过洗脱DNA,即可获得高纯度的DNA。

硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单,适用于分子生物学研究和临床诊断。

4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。

其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性,实现DNA的选择性吸附和洗脱。

具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。

除了上述常用的DNA提取方法外,还有其他一些特殊的DNA提取方法,如酶解法、离心法、凝胶切割法等。

这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。

总结起来,DNA提取的方法多种多样,选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。

无论采用哪种方法,都需要严格控制实验操作,以确保提取到高质量的DNA样本。

DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果,因此在进行DNA提取时,需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素,以获得可靠且高纯度的DNA。

DNA和RNA提取方法及原理

DNA和RNA提取方法及原理

DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法及原理:1.酚/氯仿法:酚/氯仿法是最常用的DNA提取方法之一、其原理是通过酚类物质将细胞质膜破坏,使DNA从细胞内溶解出来,然后利用氯仿的重度稠化剂作用,将DNA上层的蛋白质、脂类等杂质与下层的DNA分离。

2.盐溶液法:盐溶液法是一种温和的DNA提取方法,适用于多种植物和动物样品。

其原理是将样品细胞裂解后,加入高浓度盐溶液中,通过离心分离出DNA上层液相。

3.硅胶柱法:硅胶柱法是一种高效纯化DNA的方法,可去除杂质并提高DNA的纯度。

该方法利用硅胶柱对DNA进行吸附,去除杂质,然后通过洗脱得到纯净的DNA。

这种方法常用于分离较小的DNA片段。

4.酶解法:酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法,通过特定的酶切酶对细胞膜进行消化,将DNA释放出来。

常用的酶解酶有蛋白酶K和蛋白酶E等。

RNA提取方法及原理:1.酚酸法:酚酸法是最常用的RNA提取方法之一、它基于RNA和DNA的相对稳定性差异,利用酚酸破坏细胞膜、沉淀RNA,然后利用酚酸与蛋白质和DNA 形成复合物,分离RNA。

2.硅胶柱法:硅胶柱法也适用于RNA提取。

与DNA的硅胶柱法不同的是,RNA在硅胶柱上结合后会进行一系列的洗脱步骤,除去污染物。

该方法能有效去除DNA、蛋白质、盐和其他杂质。

3.离心收集法:离心收集法是一种简便、快速的RNA提取方法。

根据RNA在水相中的溶解性,通过离心将细胞裂解液中的RNA分离出来,然后加入酒精沉淀纯化。

4.硅酸盐法:硅酸盐法是一种特异性较高的RNA提取方法,通过利用试剂中的硅酸盐吸附RNA,并在洗涤步骤中去除杂质,从而得到纯净的RNA。

DNA的提取方法

DNA的提取方法

DNA的提取方法DNA提取是在分子生物学研究和临床诊断中非常重要的步骤。

DNA提取的目的是获取足够纯净的DNA样本,以供后续实验和分析使用。

这篇文章将介绍几种常用的DNA提取方法。

1.高盐法:高盐法是最常用的DNA提取方法之一、它通过加入高盐浓度的缓冲液来破坏细胞膜并释放DNA。

首先,待提取的细胞或组织样本被收集并转移到离心管中。

接下来,加入裂解缓冲液,通常含有高浓度的盐并对抗离子泵,从而使细胞膜破裂并释放DNA。

裂解后,使用酒精或酚/氯仿萃取法来分离DNA与其他细胞组分。

最后,通过旋转沉淀法或乙醇沉淀法从溶液中提取DNA。

2.CTAB法:CTAB法是一种适用于植物和真菌等高纤维、低DNA含量的样品提取方法。

CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)作为一种阴离子表面活性剂,可以结合在DNA和脂质上,并形成沉淀,从而使DNA分离出来。

首先,样本被粉碎并浸泡在CTAB缓冲液中,含有CTAB、盐和EDTA等。

接下来,DNA与其他细胞组分一起沉淀,通过聚乙二醇进行沉淀,并通过离心分离。

然后,洗涤DNA沉淀并通过乙醇沉淀法或旋转沉淀法提取DNA。

3.柱式纯化法:柱式纯化法是一种用于高质量DNA提取和纯化的流程。

该方法基于DNA与硅胶膜吸附和洗脱的原理。

首先,细胞或组织样品经过裂解后,溶液经过去蛋白酶和去RNA酶处理。

然后,将样品通过柱子,DNA与硅胶膜相互作用,并形成强烈的结合,同时其他细胞组分被清除。

接着,使用洗涤缓冲液去除杂质,最后使用低盐缓冲液来释放DNA。

这种方法可以提供高纯度的DNA样本,适用于大规模DNA提取和高通量分子生物学实验。

4.磁珠法:磁珠法是一种基于磁性珠子的DNA提取方法。

该方法使用特定大小和表面修饰的磁性珠子将DNA选择性地吸附到表面上。

首先,待提取的细胞或组织样本被裂解,并加入磁珠和DNA结合缓冲液。

接下来,通过磁力将磁珠与DNA结合物分离出来,并洗涤去除杂质。

最后,通过低盐缓冲液将DNA释放出来并收集。

dna提取

dna提取

dna提取
DNA提取是指从生物体中分离出DNA分子的过程。

DNA 提取是分子生物学和遗传学实验过程的关键步骤,用于研究DNA的结构、功能和遗传变异。

以下是一个常用的DNA提取方法的步骤:
1. 收集样本:根据实验需求,选择合适的生物体样本,如细胞、血液、组织等。

2. 细胞破碎:使用细胞裂解缓冲液和机械力(如搅拌、振荡或均质器)破碎细胞膜,释放DNA。

3. 蛋白质消化:加入蛋白酶K等蛋白质消化酶,将细胞内的蛋白质降解或去除。

4. DNA沉淀:加入盐和异丙醇,混合后静置,使DNA形
成白色沉淀。

5. 清洗沉淀:使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀,去除杂质。

6. 干燥和溶解:将洗涤后的DNA沉淀风干,然后使用缓冲液溶解DNA。

7. 检测和测量:使用分子生物学技术,如凝胶电泳或分光
光度计等,对提取的DNA进行质量和浓度检测。

需要注意的是,不同的生物体和样本类型可能需要不同的DNA提取方法和试剂盒。

在进行DNA提取实验前,最好
参考相关文献或向专家咨询,以确定最适合的方法。

提取dna的方法

提取dna的方法

提取dna的方法提取DNA的方法是从一种物质中检索出DNA分子的过程,包括酶切、基因工程等。

DNA提取方法有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法、实验室提取法等。

下面将对这些方法进行详细介绍。

1、核酸沉淀法:核酸沉淀法是一种常用的DNA提取方法,它的原理是通过pH调节使DNA沉淀,然后将DNA从溶液中收集。

步骤如下:首先,将样品用盐水或蛋白酶/胰蛋白酶消化;其次,加入超纯水、EDTA缓冲液和NaCl,调节pH至5.5;然后,加入乙醇,溶解DNA并沉淀;最后,在0℃-4℃维持1小时,收集沉淀的DNA。

2、缓冲溶液法:缓冲溶液法是通过改变溶液的pH值来提取DNA的一种方法,它利用DNA的结合能力和电性作用力,将DNA结合到某种特定的溶剂上,然后从溶剂中提取出来。

步骤如下:首先,将样品加入缓冲溶液,消化;其次,加入非离子表面活性剂,使DNA脱水;然后,加入离子表面活性剂,将DNA与其他组分分离;最后,用低温冷藏保存,以便收集DNA。

3、植物提取法:植物提取法是通过一系列物理和化学步骤,从植物细胞中提取DNA的一种方法。

步骤如下:首先,将植物细胞磨碎,用盐水悬浮;其次,加入碱性溶液,使细胞膜脱落;然后,加入非离子表面活性剂,溶解脱落的细胞膜,将DNA沉淀;最后,加入乙醇,将DNA沉淀,冷却保存,然后收集DNA。

4、实验室提取法:实验室提取法是一种基于细菌的实验室方法,它利用发酵的细菌细胞中的DNA进行提取。

步骤如下:首先,将细菌细胞加入特定的溶剂液中,使细胞膜脱落;其次,加入特定的酶和蛋白酶,将细胞内的DNA 溶解;然后,加入非离子表面活性剂,将溶解的DNA沉淀;最后,用乙醇沉淀DNA,将沉淀的DNA精细收集。

以上就是提取DNA的方法,主要有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法和实验室提取法四种方法,它们都具有不同的优点和缺点,因此,在实际应用中,应该根据样品的不同,选择适当的提取方法。

各种DNA提取方法

各种DNA提取方法

各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法一,基因组DNA提取方法制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤,通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。

在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。

主要是CTAB方法,其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。

2化学方式:异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。

根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤:1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。

2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。

试验步骤2再重新作一边。

3、加入5mlDNA提取缓冲液,(10mmol/%SDS)混匀。

4、加入25ul 蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml 混匀,50℃水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次,2500rpm离心收集水相,用等体积的(酚,氯仿,异戊醇)混合物抽提一次,2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿,异戊醇抽提一次。

加入等体积的5mol/L的LiCL混匀,冰浴,10min.。

7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。

加入等体积的异丙醇。

室温10min。

2500rpm离心10min。

弃上清。

8、加入倍体积3mol/L乙酸钠与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。

-20℃20min。

9、12000r/min室温离心5min。

弃上清。

将DNA 溶于适量TE中。

二,外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法:试验步骤:1、取人肘静脉血5ml,EDTA抗凝,2500rpm 离心10min。

2、小心吸取上层血浆,分装到3个离心管中。

3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液,摇匀,冰浴15min。

4、2500rpm离心10min,弃上清。

5、加入10ml 溶血液,摇匀,冰浴15min。

6、3000rpm离心10min,弃上清。

7、倒置离心管,去掉残液。

8、得白细胞,-80℃冻存。

提取dna的方法及原理

提取dna的方法及原理

提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA是生物体中的遗传物质,它携带着生物体的遗传信息。

提取DNA是研究基因组学、遗传学等领域的重要基础工作。

本文将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。

1. CTAB法CTAB法是一种经典的DNA提取方法。

其原理是利用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)与DNA结合形成离子对,然后通过盐溶液的浓度差异,使DNA从溶液中沉淀出来。

该方法适用于提取植物细胞中的DNA。

2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种常用的DNA提取方法。

其原理是利用DNA在酚相中溶解,而其他细胞组分则在氯仿相中溶解,通过酚/氯仿两相的分离,从而将DNA分离出来。

该方法适用于提取动物细胞和细菌等样品中的DNA。

3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效、纯化度较高的DNA提取方法。

其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性,将DNA吸附在硅胶颗粒上,然后通过洗涤、离心等步骤,将DNA从硅胶颗粒上洗脱下来。

该方法适用于提取各种样品中的DNA。

4. 磁珠法磁珠法是一种基于磁性颗粒的DNA提取方法。

其原理是将带有亲和基团的磁性颗粒与DNA结合,然后通过磁力的作用,将颗粒和DNA一起沉淀下来,最后通过洗涤等步骤,将DNA从颗粒上洗脱下来。

该方法具有快速、高效的特点,适用于高通量的DNA提取。

以上是几种常用的DNA提取方法及其原理。

不同的方法适用于不同类型的样品和实验需求。

在实际操作中,可以根据具体情况选择合适的方法进行DNA提取。

同时,为了保证提取到的DNA质量和纯度,还需要注意提取过程中的一些关键步骤,如细胞破碎、蛋白质酶处理、DNA沉淀等。

DNA的提取是基因研究和遗传学研究的重要步骤,通过合适的提取方法可以获取到高质量的DNA样品,为后续的实验和分析提供可靠的基础。

随着技术的不断进步,提取方法也在不断改进和优化,为科学研究提供更多的可能性。

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一、移液器使用移液器(也称作“枪”)是所有分子实验操作不可或缺的工具,其正确使用是顺利开展各项实验的先决条件。

为保证实验结果的准确性和稳定性,同时延长移液器的使用寿命,请大家细心操作并遵守以下使用规则和注意事项:1.从未使用移液器或刚进入实验室的研究生,只有完全准确掌握移液器使用规则后方可独立使用移液器。

2.按需要选用合适量程的移液器,调整刻度时,注意看移液器刻度表,不要超过最大刻度。

3.装配吸头时,用力不要过猛,以免吸头难以脱卸,同时损坏移液器。

4.吸取液体时,注意要慢慢向上释放控制按钮以免吸入速度过快导致液体进入移液器内。

5.切忌平放带有残液的吸头的移液器,更不能倒放。

6.使用移液器清洗或溶解固体物质等需反复吸打时,请装配多个叠加的吸头,且调整刻度不超过移液器最大量程的一半。

7.移液器使用完毕,务必调到最大刻度,并稳妥地放回对应的移液器架上。

8.细心操作,如不小心使移液器表面沾到液体,请及时清洗干净;如不小心将液体吸入移液器内,应及时清洗。

9.严禁用沾有放射性或腐蚀性物质的手套触摸移液器表面;严禁不熟悉移液器构造者私自校对移液器刻度。

第一节叶片总DNA的提取一、取样须知1. 取样之前一般要先编号(牌子和离心管的编号)和挂牌,务必保证离心管中的叶片是来自于同一编号单株,编号切勿混淆;2. 为保证质量,所取样品尽量为幼嫩叶片组织,并尽量保证全程低温(使用冰袋或碎冰);3. 取样时间最好在晴天或阴天上午叶面露水干后进行,尽量使样品不沾水及泥土。

4. 如使用塑料袋装样品,切记将袋内空气排尽,以免在–70℃保存时塑料袋破裂导致样品混合。

二、试剂的配制1. Tris-HCl ( 1.0 M/L, pH8.0 )121.16g Tris-HCl 和43ml HCl 加dd H2O 定容至1 L.2. EDTA ( 0.5M/L, pH8.0 )186g EDTA和25g NaOH加dd H2O 定容至1 L.3. 2%CTAB81.9g NaCl100ml 1.0 M/L Tris-HCl ( pH8.0 )40ml 0.5M/L EDTA ( pH8.0 )20g CTAB加dd H2O 定容至1 L, 灭菌后即可用于DNA的提取。

4.5M/L NH4AC385.4g NH4AC加dd H2O 定容至1 L5.76%Ethanol( 含10mM NH4AC )760ml无水乙醇和2ml 5M/L NH4AC,加dd H2O 定容至1 L.6. 3M/L NaAc ( pH5.2 )40.81g NaAc加dd H2O 定容至100ml, 并用HAC调pH值至5.27. 24 : 1吸取22ml 异戊醇加到500ml 三氯甲烷中8. RNAase用dd H2O将RNAase的浓度调节为10mg/ml, 然后在沸水中煮10min,冷却,存于-20℃三、提取方法1.大量法1)取10g左右的叶片放在-70℃冰箱冷冻备用,写好编号;2)取5g叶片用液氮研磨成粉末状后装入50ml离心管中(最好为离心管体积的1/3左右),盖好后马上放在冰上或是4℃冰箱内;3)将离心管用泡沫架(实验室自制)支住放入55~60℃的水浴锅中水浴60分钟,加入预热好的CTAB溶液20~25 ml(大约至离心管的1/2),用筷子搅拌每10分钟1次(要小心,防止污染);4)水浴完后盖紧盖子,轻轻放置于通风厨中室温冷却(大约30~60分钟);5)加入等体积的24:1溶液于管中,轻轻混匀数分钟,在3000~3200rpm离心15分钟;6)取上清夜转入另一编号相同的50ml离心管中,再加入等体积24:1溶液,轻轻混匀数分钟,在3000~3200rpm离心15分钟;7)将上清夜转至另一编号相同的50ml离心管中,加入冰冻的异丙醇2/3体积(-20℃冰箱过夜),轻轻混匀,于-20℃冰箱放置,大约20~30分钟,用干净枪头将析出DNA挑出,置于10ml编号相同的离心管内;8)加入76%酒精(10mM NH4AC)洗涤沉淀(可过夜),偶尔转动,重复2~3次,直到沉淀物相当白为止;9)倒出酒精,将DNA放置于管壁,室温下吹干,加入TE溶解,放入-20℃冰箱备用。

注意:1)混匀时,只有在第三步才能用力混合,其他步骤只能轻轻混匀,防止DNA断裂或是不能成团;2)加入24:1的过程中,注意更换枪头;吸取上清液时,动作要轻,不要将杂质吸入,也不要用力导致液体回吸入枪中,造成污染;3)离心机使用时要注意用天平平衡,卡子要卡好,防止发生事故;4)50ml及10ml离心管使用前应清洗干净、灭菌、烘干后使用。

2.小量法5)用写好编号的1.5ml或2ml离心管取1片叶片(大约1~2cm2)放在-70℃冰箱冷冻备用;6)取出离心管后臵于冰上,将叶片挑出臵于研钵中,加入600µl~1mlCTAB研磨后,将液体倒回原离心管中;7)将离心管放臵于离心盒板上,在55~60℃的水浴锅中水浴50~60min,轻轻摇晃数次。

放臵于通风厨中室温冷却(大约30~60 min);8)加入等体积的24:1溶液于管中,轻轻混匀数分钟,12000rpm离心15min;9)将上清夜转至与原编号相同的1.5ml离心管中(离心管中事先加入1/10上清液体积的NaAc),加入冰冻的无水乙醇(-20℃冰箱过夜),轻轻混匀,于-20℃冰箱放臵,大约20~30min,10000rpm离心2分钟,倒出乙醇(如果DNA量比较多的话,建议直接倒出乙醇或用枪头挑出DNA,再倒出乙醇)。

随后加入76%乙醇(10mM NH4AC)洗涤沉淀(可过夜),偶尔转动,重复1~2次;10)轻轻倒出乙醇,将DNA放臵于管底,室温下吹干,加入TE溶解,放入-20℃冰箱备用。

注意:A.如果需要DNA质量高一些,可重复4步骤一次;B.离心机要严格平衡,防止发生事故。

C.DNA溶解时需加入RNAase 除去其中的RNA,每个样加2µl.Extraction of DNA from Leaf Tissue1.Cut 20 mg of tissue into a 2 mL centrifuge tube containing 1 bead.2.Add 1.0 mL of CTAB extraction buffer (add 2 µL/mLmercaptoethanol CTAB prior to use).3.Run samples on bead-beater for 1-2 minutes.4.Incubate for at least 30 minutes at 60C.5.Add 700 µL of chloroform: isoamyl alcohol (24:1).6.V ortex at maximum speed.7.Centrifuge at least 10 minutes at 12,000 rpm.8.Transfer 600 µL of the upper aqueous phase to a new tube.9.Add 500 µL of cold isopropyl alcohol (stored in freezer).10.Incubate at –20 C for at least 2 hours to overnight.11.Centrifuge for 10 minutes at 12,000 rpm.12.Dump supernatant slowly and ensure pellet does not come out.13.Wash pellet with 500 µL 76% ethanol + 10mM sodium acetate.14.Centrifuge for 10 minutes at 12,000 rpm.15.Dump supernatant slowly.16.Dry pellet in Vacuum Dryer for about 15 minutes.17.Hydrate pellet with 100µL sterile distilled water.Here is the procedure for 2% CTAB buffer from Mr. Mike Irey at US Sugar Corp.Per 100 mL, add 2 g of CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide), 28 mL 5M NaCl, 4 mL 0.5M EDTA, 6.67 mL 1.5M Tris-HCl. Dissolve CTAB in 50 mL H2O at 60°C. Add remaining solutions and bring to volume with H2O. Adjust pH to 8.0. Add mercaptoethanol (2μL/mL) just prior to use.本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。

其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后,加入高浓度的KAc,0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质,最后用乙醇或异丙醇沉淀。

一材料、试剂和仪器1 材料新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料2 试剂(1)提取缓冲液Tris-HCl 100mmol/L(pH8.0)EDTA 50mmol/L (pH8.0)NaCl 500 mmol/L灭菌后加β-巯基乙醇至10 mmol/L(2)裂解液20%SDS(3)高盐溶液5mol/L KAc(4) RNaseA 10mg/ml(5) 异丙醇(6)灭菌ddH2O或TE3. 仪器: 离心机,恒温水浴, 台式高速离心机,电泳装置二实验程序1取幼嫩的组织材料1-2g,用蒸馏水冲洗干净,再用灭菌ddH2O冲洗2次,放入经液氮预冷的研钵中,加入液氮研磨至粉末状,用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到加有500μL提取液的离心管中,轻轻混匀。

2 向管中加入50μL20%SDS溶液,混匀,不可过于强烈震荡以防基因组DNA断裂,65℃保温10min,并不时摇动。

3 加入150μL 5mol/L KAc,混匀,置冰上20-30 min。

4 4℃,15 000rpm离心15min,转移上清到另一离心管中,加入0.7V的异丙醇,混匀,-20℃沉淀30 min 。

5 12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀,吹干后加入适量的灭菌ddH2O 或TE溶解DNA。

6 加入1/10体积的RNaseA,37℃保温20min,除去RNA。

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