第五节 中和试验
中和反应实验操作方法
中和反应是一种常见的化学实验，通常涉及将酸与碱混合以产生盐和水。
这是一个典型的酸碱反应。
在实验室进行中和反应时，通常会执行以下基本步骤：准备工作：1. 选择适当的酸和碱：比如盐酸（HCl）和氢氧化钠（NaOH）。
2. 准备实验设备：量筒、烧杯、滴定管、滴定架、磁力搅拌器、pH计或pH试纸等。
3. 佩戴安全装备：实验室安全眼镜、实验服和手套。
实验操作：1. 准确测量：使用量筒准确测量一定体积的酸溶液，然后倒入烧杯中。
2. 准备碱液：在另一量筒中准确测量碱溶液的体积，或者将固体碱溶解在水中制备成一定浓度的溶液。
3. 设置滴定装置（如果使用滴定法）：将碱液装入滴定管，并记录初始读数。
4. 调整pH检测：设置pH计或者准备pH试纸以便于检测pH。
5. 滴定/混合：如果是滴定实验，缓慢地将碱液加入含有酸的烧杯中，同时不断搅拌溶液，并且观察pH的变化。
如果是简单中和，直接将两种溶液缓慢混合，并搅拌。
6. 观察变化：观察溶液的颜色变化（如果有指示剂的话）和pH变化。
7. 确定终点：当溶液的pH接近7时（对于强酸和强碱的中和），中和反应接近终点。
如果使用指示剂（如酚酞），当颜色变化并保持不变时，表明反应已经达到终点。
8. 记录数据：记录滴定结束时滴定管的读数，计算消耗的碱液体积。
9. 清理：实验完成后，妥善处理所有化学品，并清洁实验器材。
数据处理：1. 计算：根据酸和碱的摩尔浓度和消耗的体积，计算出反应物的摩尔数。
2. 反应方程式：写出酸碱中和反应的化学方程式，并进行配平。
3. 分析：根据实验结果分析反应是否完全进行，以及是否存在操作上的误差。
安全注意事项：在整个实验过程中，避免酸或碱直接接触皮肤或眼睛。
实验后应立即清洗受污染的区域。
实验结束后，将所有废弃物按照实验室的废物处理指南进行处理。
请注意，这是一个简化的中和反应操作指南。
根据实验的具体要求和条件，步骤可能有所变化。
始终遵循贵实验室提供的具体指南和安全规程。
中和试验
中和试验中和试验是病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力的试验方法。
所属分类：免疫学概述动物受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，因而阻止病毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。
中和试验(Neutralization Test)是以测定病毒的感染力为基础，以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，来判定免疫血清中和病毒的能力。
两种试验方法介绍中和试验常用的有两种方法：一种是固定病毒量与等量系列倍比稀释的血清混合，另一种是固定血清用量与等量系列对数稀释(即十倍递次稀释)的病毒混合。
(一) 定血清－稀释病毒法(病毒中和试验)1.病毒毒价的测定毒价单位：衡量病毒毒价(毒力)的单位过去多用最小致死量(MLD)，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致全组试验动物死亡的最小剂量。
但由于剂量的递增与死亡率递增不呈线性关系，在越接近100%死亡时，对剂量的递增越不敏感。
而一般在死亡率越接近50%时，对剂量的变化越敏感，故现多改用半数致死量(LD50)作为毒价测定单位，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致半数试验动物死亡的剂量。
用鸡胚测定时，毒价单位为鸡胚半数致死量(ELD50)或鸡胚半数感染量(EID50)。
用细胞培养测定时，用组织细胞半数感染量(TCID50)。
在测定疫苗的免疫性能时，则用半数免疫量(IMD50)或半数保护量(PD50)。
(1) LD50的测定(以流行性乙型脑炎病毒为例)。
测定方法：将接种病毒，并已发病濒死的小鼠，无菌法取脑组织，称重、加稀释液充分研磨，配制成10-1悬液，3 000r/min离心20分钟，取上清液，以10倍递次稀释成10、10、10……10，每个稀释度分别接种5只小鼠，每只脑内注射0.03ml，逐日观察记录各组的死亡数。
本例高于50%病毒稀释度的对数－6，距离比例为0.5，称释系数的对数为－1。
初中化学酸碱中和实验教案
初中化学酸碱中和实验教案
实验名称：酸碱中和实验
实验目的：通过本实验，让学生了解酸碱的性质和中和反应，并掌握中和反应的基本过程。
实验材料：
1. 盐酸溶液
2. 硝酸溶液
3. 红色石蕊指示剂
4. 蒸馏水
5. 玻璃容器
6. 玻璃棒
实验步骤：
1. 将玻璃容器清洗干净并放在实验台上。
2. 用玻璃棒将适量盐酸溶液倒入容器中。
3. 在盐酸溶液中加入少许红色石蕊指示剂，搅拌均匀。
4. 将硝酸溶液慢慢加入到盐酸溶液中，同时搅拌。
观察是否有颜色变化。
5. 当出现颜色变化时，停止加入硝酸溶液，并观察变化后的颜色。
实验结果：
1. 当盐酸和硝酸发生中和反应时，溶液的颜色会发生变化。
2. 如果出现颢红色，则说明中和反应已经完成。
3. 红色石蕊指示剂会在中和反应后呈现橙黄色。
实验注意事项：
1. 在进行实验时，要注意安全措施，避免溶液溅到皮肤或眼睛。
2. 搅拌时要轻柔而均匀，以免溶液溅出。
3. 实验后要将玻璃容器清洗干净，保持实验台整洁。
实验总结：
通过本次实验，我们了解了酸碱中和反应的基本过程和颜色变化。
酸碱中和是一种重要的化学反应，可以用于调整溶液的酸碱度。
希望同学们能够掌握这一知识，并在以后的学习和生活中运用到实践中。
中和试验
中和试验文章目录*一、中和试验的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、中和试验的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、中和试验的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、中和试验的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、中和试验的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应中和试验的基本信息1、定义中和试验是病毒或毒素与相应的抗体结合后,失去对易感动物的致病力的试验方法。
动物受到病毒感染后,体内产生特异性中和抗体,并与相应的病毒粒子呈现特异性结合,因而阻止病毒对敏感细胞的吸附,或抑制其侵入,使病毒失去感染能力。
2、专科分类传染病检查3、检查分类免疫检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹非空腹中和试验的正常值和临床意义1、正常值人体处于动态平衡、健康状态。
2、临床意义本试验主要用于:从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;测定抗病毒血清或抗毒素效价;新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。
试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。
中和试验的检查过程及注意事项1、检查过程本法主要用于检出病料中的病毒,亦可进行初步鉴定或定型。
牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒先根据病毒易感性选定试验动物(或鸡胚、细胞培养)及接种途径。
将病料研磨,并稀释成一定浓度(约100 LD50-1 000LD50或TCID50)。
污染的病料需加抗生素(青霉素、链霉素各200-1 000单位),或用细菌滤器过滤,与已知的抗血清(适当稀释或不稀释)等量混合,并用正常血清加稀释病料作对照。
混合后置37℃1h,分别接种实验动物,每组至少3只。
分别隔离饲喂,观察发病和死亡情况。
对照动物死亡,而中和组动物不死,即证实该病料中含有与该抗血清相应的病毒。
中和试验原理
中和试验原理中和试验是一种常见的化学实验，用于研究酸和碱之间的中和反应。
中和反应是指酸和碱溶液混合后，产生盐和水的化学反应。
在中和试验中，我们可以通过观察颜色变化、PH值变化等现象，来了解酸碱溶液的中和过程。
下面我们来详细了解一下中和试验的原理。
首先，我们需要了解酸和碱的性质。
酸是一类能够释放氢离子（H+）的化合物，而碱是一类能够释放氢氧根离子（OH-）的化合物。
当酸和碱混合时，氢离子和氢氧根离子会结合生成水，同时盐的阳离子和阴离子会结合在一起。
这就是中和反应的基本原理。
在中和试验中，我们通常会使用酚酞指示剂来帮助观察中和反应的进行。
酚酞是一种能够根据溶液的PH值发生颜色变化的指示剂。
在酸性溶液中，酚酞呈现无色状态；而在碱性溶液中，酚酞会呈现粉红色。
因此，当酸性溶液和碱性溶液混合时，我们可以通过观察酚酞的颜色变化来确定中和反应是否发生。
除了酚酞指示剂外，我们还可以通过PH试纸或PH计来监测溶液的PH值变化。
PH值是用来表示溶液酸碱性强弱的指标，通常在0-14的范围内。
PH值小于7的溶液为酸性溶液，PH值大于7的溶液为碱性溶液，PH值等于7的溶液为中性溶液。
在中和反应中，溶液的PH值会逐渐趋于7，从而达到中和的状态。
中和试验不仅可以帮助我们了解酸碱中和的原理，还可以在生活和工业中得到广泛应用。
例如，在制备肥皂的过程中，中和反应是至关重要的；在水处理和污水处理过程中，也需要进行中和反应来调节水的酸碱性。
因此，深入了解中和试验的原理对于我们的生活和工作都具有重要意义。
总之，中和试验是一种重要的化学实验，通过观察酸碱溶液的中和反应，我们可以更好地了解酸碱中和的原理。
通过使用指示剂、PH试纸等工具，我们可以清晰地观察到中和反应的进行，从而加深对化学反应的理解。
希望通过本文的介绍，能够帮助大家更好地理解中和试验的原理和应用。
中和试验
测定方法:将接种病毒，并已发病濒死的小鼠,无菌法取脑组织,称重、加稀释液充分研磨，配制成１0-1悬液，3 000r/ｍin离心20分钟,取上清液，以1０倍递次稀释成1０、10、10……10,每个稀释度分别接种５只小鼠，每只脑内注射0.0３ml，逐日观察记录各组的死亡数。
IgLD50(或ＴＣIＤ50）＝L+d(S－０．5)
Ｌ为病毒最低稀释度的对数，d为组距，即稀释系数,S为死亡比值的和。本例Ｌ=－４,d＝-1,S＝1+1+5/６+1/6=3
IgLD50＝-４＋(-1）×(3-0．5)
=-6.5
则LＤ50＝10,0.０3ml
注意：用本法计算稀释血清中和试验中和效价时，S应为保护比值之和。
(3)病毒的稀释按选定的病毒稀释度范围,将病毒液作10倍递次稀释,使之成为所需要的稀释度。
(4)感作将不同稀释度病毒分别定量加入两排无菌试管内,第一排每管加入与病毒等量的免疫(或被检)血清作为试验组；第二排每管加入与免疫（或被检）血清同种的正常阴性血清作为对照组;充分摇匀后放37℃感作12ｈ。
(５)接种按“病毒价测定”中所述接种方法接种试验动物(或鸡胚、组织细胞)。观察持续时间，根据病毒和接种途径而定。
(２）EID50的测定(以新城疫病毒为例)将新鲜病毒液体10倍递次稀释法释成1０-1、1０-2、10-3……1０-９不同稀释度，分别接种9-1０日龄鸡胚尿囊腔,鸡胚必须来自健康母鸡，并且没有新城疫抗体。每只鸡胚接种0.２ｍl,每个稀释度接种6只鸡胚为一组,以石蜡封口,置37-38℃培养，每天照蛋,24h之内死亡的鸡胚弃掉，24h之后死亡的鸡胚置４℃保存。连续培养5天，取尿囊液作血球凝集试验，出现血凝者判阳性,记录结果,按上述方法计算EＩD50。
中和实验方法
RSV 特异性中和抗体滴度检测一、实验原理：抗体与相应的病毒粒子特异地结合，使后者失去对易感动物或细胞的致病力。
（该试验方法以测定抗病毒血清的中和价，将待检血清2 倍递增稀释，加等量已知毒价的病毒液。
）二、实验分类：1. 固定血清--稀释病毒中和试验2. 固定病毒—稀释血清中和试验3. 简单定性中和试验4. 空斑减少法三、实验步骤：1. 提前设定56 C水浴锅，将分装好的待测血清于56 C灭活（降低补体对实验结果的影响）30min 。
2. 将加过双抗的培养基DMEM/F-12 （用于Hep-2 细胞；Vero 细胞常用DMEM培养基）和BI血清进行37C预热30min，与此同时灭好实验台（该准备3599细胞培养板灭过菌枪头以及15ml和50ml摇菌管）为后续实验做准备。
3•实验台灭菌30min，灭好台子后进行实验，首先取1.5mlEP管，用DMEM/F-12培养基8倍稀释待测血清（每管中加培养基210卩」再加相应的血清30^）1,拆开96孔培养板后在盖子进行设计（实验设计参考图1）,最后向每孔中加入75卩的培养基，按照实验设计加入相应的稀释血清75门用排枪以两倍梯度稀释血清。
（注意：最终到256倍时吸出的多余的75卩血清并弃掉。
）4•实验孔以及阳性对照孔分别每孔加入25卩1（注意：加毒时应从血清低浓度到高浓度）的104TCID50病毒混匀，4C孵育2 h。
5. 在实验剩余半小时左右进行消化细胞，镜检细胞汇合度为90%左右即可用，弃掉培养液后，用2-3 ml 无血清培养吹洗几遍细胞（意图为去除死细胞或活性不好的细胞），加入 2 ml 胰酶后开始计时，将细胞培养板置于37C的CO2无菌培养箱培养消化2-3min，在镜检细胞间有间隙或细胞收缩为单个状态为好，加入等体积的无血清培养基终止，小心吸掉液体，加入有血清的培养基2-3ml 轻轻地吹下皿底部的细胞，轻微用枪吹吸几次使其成为均匀的单细胞悬液后转移到新的15ml 离心管中等待细胞计数。
中和试验原理
中和试验原理中和试验原理一、概述中和试验是一种常见的化学实验，其原理是利用化学反应进行物质的中和。
在实验中，通常会将一种酸性或碱性物质与相应的碱性或酸性物质混合，以达到中和的效果。
本文将详细介绍中和试验的原理。
二、酸碱反应1. 酸碱定义酸和碱是化学反应中常见的概念。
在水溶液中，酸溶液呈现出酸性，而碱溶液呈现出碱性。
根据布朗斯特德定义，酸是能够捐出氢离子（H+）的物质，而碱则是能够接受氢离子（H+）的物质。
2. 酸碱指数为了描述水溶液中酸度或碱度的强度，科学家们引入了pH值作为衡量标准。
pH值越低表示溶液越酸性，而pH值越高表示溶液越碱性。
pH值可以通过以下公式计算：pH = -log[H+]其中[H+]表示水溶液中氢离子浓度。
3. 酸碱反应酸和碱在一定条件下会发生化学反应，这种反应称为酸碱反应。
在酸碱反应中，酸和碱互相中和，生成盐和水。
例如：HCl + NaOH → NaCl + H2O其中HCl是一种强酸，NaOH是一种强碱。
它们在一定条件下混合时会发生化学反应，生成NaCl（盐）和H2O（水）。
三、中和试验原理1. 中和定义在化学实验中，中和指的是将一个酸性物质与一个碱性物质混合在一起，使它们互相中和并形成盐和水。
2. 实验步骤下面是进行中和试验的基本步骤：1）准备两个溶液：一个是酸性溶液，另一个是碱性溶液。
2）使用萘酚红等指示剂来检测溶液的pH值。
3）将两个溶液慢慢混合起来，并用磁力搅拌器或手动搅拌器充分混合。
4）观察溶液变化的颜色，并记录pH值的变化情况。
5）当pH值达到7时，说明酸性和碱性物质已经完全中和，实验结束。
3. 实验原理中和试验的原理是通过化学反应来中和酸性或碱性物质。
在中和试验中，酸性物质会捐出氢离子（H+），而碱性物质会接受氢离子（H+）。
当酸性物质与碱性物质混合时，它们互相中和，并生成盐和水。
例如：HCl + NaOH → NaCl + H2O在这个反应中，HCl是一种强酸，它会捐出氢离子（H+）。
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第十一章血清学试验
第五节中和试验
根据抗体能否中和病毒的感染性而建立的免疫学试验，称中和试验(Neutralization test）。
中和试验极为特异和敏感，既能定性又能定量，主要用于病毒感染的血清学诊断、病毒分离株的鉴定、病毒抗原性的分析、疫苗免疫原性的评价、血清抗体效价的检测等。
中和试验可在体内进行也可在体外进行。
体内中和试验也称保护试验，试验时先对实验动物接种疫苗或抗血清，间隔一定时间后，再用一定量病毒攻击，最后根据动物是否得到保护来判定结果。
常用于疫苗免疫原性的评价和抗血清的质量评价。
体外中和试验是将抗血清与病毒混合，在适当条件下作用一定时间后，接种于敏感细胞、鸡胚或动物，以检测混合液中病毒的感染力。
根据保护效果的差异，判断该病毒是否已被中和，并可计算中和指数，即中和抗体的效价。
根据测定方法不同，中和试验有终点法中和试验和空斑减数法中和试验等方法。
毒素和抗毒素也可进行中和试验。
其方法与病毒的中和试验基本相同。
一、终点法中和试验
终点法中和试验（Endpoint neutralization test）是滴定使病毒感染力减少至50%时，血清的中和效价或中和指数。
有固定病毒稀释血清和固定血清稀释病毒两种方法。
(一)固定病毒稀释血清法将已知的病毒量固定，血清作倍比稀释，常用于测定抗血清的中和效价。
1.病毒毒价单位病毒毒价(毒力)的单位过去多用最小致死量(MLD)，但由于剂量的递增与死亡率递增的关系不是一条直线，而是呈S形曲线，在越接近100％死亡时，对剂量的递增越不敏感。
而死亡率愈接近50%时，剂量与死亡率呈
直线关系，所以现基本上采用半数致死量(LD
50)作为毒价单位，而且LD
50
的计算应
用了统计学方法，减少了个体差异的影响，因此比较准确。
以感染发病作为指标
的，可用半数感染量(ID
50)。
用鸡胚测定时，可用鸡胚半数致死量(ELD
50
)或鸡胚
半数感染量(EID
50)；用细胞培养测定时，可用组织细胞半数感染量(TCID
50
)。
在
测定疫苗的免疫性能时，则用半数免疫量(IMD
50)或半数保护量(PD
50
)。
2.病毒毒价测定将病毒原液作10倍递进稀释即10-1、10-2、10-3……，选择4～6个稀释倍数接种一定体重的试验动物(或鸡胚、细胞)，每组3～6只(个、孔)。
接种后，观察一定时间内的死亡(或出现细胞病变)数和生存数。
根据累计死亡数和生存数计算致死百分率。
然后按Reed-Muench法、内插法或Karber法计算半数剂量。
以TCID
50
测定为例说明如下：
按Karber法计算，其公式为lgTCID
50
=L+d(S-0.5)，L为病毒最低稀释度的对数；d为组距，即稀释系数，10倍递进稀释时d为-1；S为死亡比值之和（计算固定病毒稀释血清法中和试验效价时，S应为保护比值之和），即各组死亡（感染）数/试验数相加。
若以测定某种病毒的TCID
50
为例，病毒作10-4～10-7稀释，记录其出现细胞病变（CPE）的情况（表11-1）。
则L=-4，d=-1，S=6/6+5/6+2/6+0/6=2.16
lgTCID
50=(-4)+(-1)×(2.16-0.5)=-5.66。
TCID
50
=10-5.66，0.1ml。
TCID
50
为毒价的单位，表示该病毒经稀释至10-5.66（1/105.66）时，每孔细胞接种0.1ml，可使50%的细胞孔出现CPE。
而病毒的毒价通常以每ml或每mg含多少
TCID
50或（LD
50
等）表示。
如上述病毒的毒价为105.66TCID
50
/0.1ml，即106.66TCID
50
/ml。
3.正式试验将病毒原液稀释成每一单位剂量含200LD
50(或EID
50
、TCID
50
)，
与等量递进稀释的待检血清混合，置37℃感作1h。
每一稀释度接种3～6只（个、
管）试验动物(或鸡胚、细胞)，记录每组动物的存活数和死亡数，同样按
Reed-Muench法或Karber法计算其半数保护量（PD
50
），即该血清的中和价。
(二)固定血清稀释病毒法将病毒原液作10倍递进稀释，分装两列无菌试管，第一列加等量正常血清(对照组)，第二列加等量待检血清(中和组)；混合后置37℃感作1h，每一稀释度接种3～6只试验动物(或鸡胚、组织细胞)，记录每
组动物死亡数、累积死亡数和累积存活数（表11-2），按Karber法计算LD
50
，
然后计算中和指数。
中和指数=中和组LD
50/对照组LD
50。
按表11-3的结果：中和
指数=10-2.2/10-5.5=103.3，查3.3的反对数为1995，即103.3=1995，也就是说该待检血清中和病毒的能力比正常血清大1994倍。
通常待检血清的中和指数大于50者即可判为阳性，10～40为可疑，小于
10为阴性。
二、空斑减数试验（Plague reduction test）
空斑或蚀斑是指把病毒接种于单层细胞，经过一段时间培养，进行染色，原先感染病毒的细胞及病毒扩散的周围细胞会形成一个近似圆形的斑点，类似固体培养基上的菌落形态。
空斑减数试验是应用空斑技术，使空斑数减少50%的血清稀释度为该血清的中和效价。
试验时，将已知空斑形成单位（PFU）的病毒稀释
成每一接种剂量含100PFU，加等量递进稀释的血清，37℃感作1h。
每一稀释度至少接种3个已形成单层细胞的培养瓶，每瓶0.2～0.5ml，37℃感作1h，使病毒与血清充分作用，然后加入在44℃水浴预温的营养琼脂（在0.5%水解乳蛋白或Eagles液中，加2%犊牛血清、1.5%琼脂及0.1%中性红3.3ml）10ml，平放凝
培养箱中。
同时用稀释的病毒加固后，将细胞面朝上放入无灯光照射的37℃ CO
2
等量Hanks液同样处理作为病毒对照。
数天后分别计算空斑数，用Reed-muench 法或Karber法计算血清的中和滴度。