104.水中总大肠菌群复习试题(多管发酵法)
生活饮用水 总大肠菌群 多管发酵法方法证实
生活饮用水微生物指标总大肠菌群1.项目概述本实验依据GB-T5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法总大肠菌群多管发酵法。
总大肠菌群指一群在37℃培养24 h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。
本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。
2.培养基与试剂2.1 乳糖蛋白胨培养液2.1.1 成分A蛋白胨10 gB牛肉膏3gC乳糖5gD氯化钠5gE溴甲酚紫乙醇溶液(16 g/L) 1mLF 蒸馏水1000 mL2.1.2 制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2～7.4，再加入1 mL16 g/L的溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，68. 95 kPa (115℃．10 lb)高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
2.2 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液(2.1.1)，除蒸馏水外，其他成分量加倍。
2.3 伊红美蓝培养基2.3.1 成分A蛋白胨10 gB乳糖10 gC磷酸氢二钾2gD琼脂20 g～30 gE 蒸馏水1000 mLF伊红水溶液(20 g/L) 20 mLG美蓝水溶液(5 g/L) 13 mL2.3.2 制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH为7.2，加入乳糖，混匀后分装，以68.95 kPa(115℃，10 lb)高压灭菌20 min。
临用时加热融化琼脂，冷至50℃～55℃，加入伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。
2.4 革兰氏染色液2.4.1 结晶紫染色液A成分：a结晶紫 1 gb乙醇（95%，体积分数）20 mLc草酸铵水溶液(10 g／L) 80 mLB制法：将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
注：结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成分，易出现假阳性。
结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。
2.4.2 革兰氏碘液A成分：a碘1gb碘化钾 2 gc蒸馏水300 mLB制法：将碘和碘化钾先进行混台，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。
总大肠菌群多管发酵法测定步骤
总大肠菌群多管发酵法测定步骤# 总大肠菌群多管发酵法测定步骤的理论研究大家好，我是这个领域的一名专家。
今天我要和大家分享一下关于总大肠菌群多管发酵法测定步骤的一些理论问题。
我们要知道什么是总大肠菌群。
简单来说，总大肠菌群就是肠道里的一种微生物群落，它们的数量可以反映出一个人是否健康。
而测定总大肠菌群的方法有很多种，其中最常用也最准确的一种是多管发酵法。
那么，多管发酵法是怎么测定总大肠菌群的呢？简单来说，就是将待测样品中的总大肠菌群接种到不同的培养基上进行培养，然后通过观察不同培养基上的菌落生长情况来判断总大肠菌群的数量。
在实际操作中，我们需要准备几个不同的培养基，每个培养基上都涂上一层薄薄的液体。
然后将待测样品中的总大肠菌群接种到这些培养基上，再将这些培养基放入恒温箱中进行培养。
在这个过程中，我们需要注意一些细节。
比如，培养的时间需要控制好，不能太长也不能太短；培养的温度也需要控制好，不能太高也不能太低；还有，培养基的选择也很重要，要选择适合总大肠菌群生长的培养基。
经过一段时间的培养后，我们就可以观察各个培养基上的菌落生长情况了。
一般来说，如果某个培养基上的菌落数量较多，就说明在这个样品中总大肠菌群的数量较多；反之，如果某个培养基上的菌落数量较少，就说明在这个样品中总大肠菌群的数量较少。
我们就可以根据各个培养基上的菌落生长情况来计算出总大肠菌群的数量了。
这就是多管发酵法测定总大肠菌群的基本步骤。
总的来说，多管发酵法是一种非常准确、可靠的测定总大肠菌群的方法。
它的操作过程虽然复杂了一些，但是只要我们掌握了正确的方法和技巧，就能够准确地测定出样品中总大肠菌群的数量。
这对于我们了解肠道微生物群落的情况、预防肠道疾病等方面都有着重要的意义。
多管发酵法测定水中大肠菌群
多管发酵法测定水中大肠菌群
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2）平皿分离（证实试验）
水中除大肠菌群外, 还有其它细菌可能引发 糖类发酵, 所以需要深入证实。
将初发酵管中已发酵菌液接种于伊红美兰 培养基, 37 ºC培养24 h, 依据菌落特征（带关键、 有金属光泽深紫色菌落）, 挑取可能为大肠菌 群菌落制片, 经革兰氏染色, 深入证实是否为大 肠菌群。
划线接种于伊红美蓝琼脂平板上, 再于37 ℃培养 18～24 h, 将符合以下特征菌落进行染色镜检。
深紫黑色, 有金属光泽； 紫黑色, 不带或略带金属光泽； 淡紫红色, 中心颜色较深。
多管发酵法测定水中大肠菌群
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（3）复发酵试验 将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌菌株重复初
步发酵试验。并依据初发酵管试验阳性管查表, 即得大肠菌群数。
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二、试验原理
发酵法: 又称多管发酵法或三步发酵法
1) 初发酵（推测试验）:
将不一样稀释度水样，分别接种于 含有乳糖等糖类培养液中（3倍或1倍乳 糖液），经37 ºC培养24 h，观察产酸产 气情况，培养基内加有溴甲酚紫作为 PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由 原来紫色变为黄色，以初步判断是否有 大肠管发酵法测定水中大肠菌群
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多管发酵法测定水中大肠菌群
一、试验目标 二、试验原理 三、试验材料 四、试验步骤 五、试验汇报
多管发酵法测定水中大肠菌群
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一、试验目标
1、学习测定水中大肠菌群数量多管发酵法。 2.了解大肠菌群数量在饮水中主要性。
多管发酵法测定水中大肠菌群
多管发酵法测定水中大肠菌群
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10ml×100 1ml×100 1ml×10-1 1ml×10-2
3×
多管发酵法与纸片法测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群
多管发酵法与纸片法测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群李恒，等多管发酵法与纸片法测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群Determination of Total Coliform Group and Fecal Coliform Group in Water by Multi-tube Fermentation and Paper Disk Method李恒张志君王光惠陈泓+（湖南省衡阳生态环境监测中心，湖南衡阳421000）［摘要］通过多管发酵法和纸片快速法对实际水样的总大肠菌群和粪大肠菌群进行实验比对，结果表明，两种方法的结果相差不大，但纸片快速法比多管发酵法操作简便、检测时间短，更适用于环境监测日常分析％［关键词］多管发酵法；纸片快速法；总大肠菌群;粪大肠菌群［中图分类号］X833［文献标识码］%引言粪大肠菌群是能在44.5!温度下生长并发酵乳糖产酸产气的耐热的大肠菌群，属于总大肠菌群的一部分，主要来自粪便。
水中粪大肠菌群和总大肠菌群的检验是研究水体污染和环境卫生的重要指标，具有广泛的卫生学意义。
目前，国内已颁布的标准主要是多管发酵法和纸片快速法［1+4］。
多管发酵法操作繁琐且时间过长（48~72h$,难以满足当前环境监测工作的需求［5］%纸片快速法不仅培养时间短（18~ 24h）,且无需提前准备培养基，可以避免培养基杂菌入侵和时间过长等不足。
为更精确、快速、可靠地进行监测，本文用多管发酵法和纸片快速法同步进行对比实验，并对两种分析方法的实验结果进行了比较分析。
1材料与仪器1.1材料水质粪大肠菌群、总大肠菌群快速检验纸片（广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司）；粪大肠菌群、总大肠菌群、培养基、革兰氏染色液％1.2试剂EC培养基：胰豚20g,乳糖5g,胆盐三号1.5g，磷酸氢二钾4g,磷酸二氢钾1.5g,氯化钠5g%将上述成分加热溶于1000ml水中，灭菌后的pH应在6.9左右。
该培养基在低温无菌条件下可以保存一个月％无菌水：将纯水在115!高压蒸汽灭菌20min,备用。
总大肠菌群——精选推荐
总大肠菌群
一、填空题
1．总大肠菌群多管发酵法测定的复发酵试验，是每一管接种完同一发酵管的最典型菌落1～3个后，将发酵管置于____℃恒温箱中，培养____h，有产酸产气者，则证实有大肠菌群存在。
2．总大肠菌群多管发酵法测定的步骤分为__________、___________ 和____________。
3．总大肠菌群测定的滤膜灭菌是将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水后置于沸水浴中煮沸灭菌_____次，每次_____min，前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂；也可用121℃蒸汽灭菌10min。
二、判断题
总大肠菌群测定时，如果不能实现常规的检验步骤，例如水样运输途中不能保证所要求的温度，或采样后不能在允许的时间内进行检验等，都可采用延迟培养法。
( )
三、选择题
1．我国目前以______为总大肠菌群的报告单位，MPN值再乘______即为该体积水样中的总大肠菌群数。
( )
A． 100m1， 10 B． 1 L， 1 C， 1 L， 10
2．对受污染严重的水体，可选择________测定总大肠菌群。
( )
A．滤膜法 B. 多管发酵法 C．延迟培养法
3．我国目前总大肠菌群以________为报告单位。
( )
A．个/L B．个／ml C．个／100m1
四、问答题
1．简述多管发酵法测定水源水中总大肠菌群的初发酵操作步骤。
2．简述总大肠菌群革兰氏染色的操作步骤及主要注意事项。
大肠菌群技术应知应会试题精选全文
可编辑修改精选全文完整版大肠菌群技术应知应会试题1、大肠菌群：在一定培养条件下能够（）、（）的需氧和兼性厌氧的革兰氏（）菌。
_________________________________2、VRBA平板计数范围：（）CFU，最低稀释度平板低于（）CFU的记录具体菌落数;_________________________________3、在大肠菌群检测第一法（）法中，如用到双料，则统一用（）进行空白对照；如果用的全部为单料，则统一用（）进行空白对照。
_________________________________4、大肠菌群作业SOP第一法引用的为（），第四法引用的为（）。
_________________________________5、检测过程中，十倍稀释时，手部不要触及（）位置。
_________________________________6、稀释度的选择应严格按照产品质量标准中的限量值进行选择，不得私自进行（）或（）。
_________________________________二、选择题（每题4分）_________________________________1、最可能数MPN是基于泊松分布的一种（D）方法。
A、计算B、计数C、直接计数D、间接计数(正确答案)2、大肠菌群主要来源于（）。
A、人的粪便B、人畜粪便(正确答案)C、粪便D、畜的粪便3、大肠菌群第一法适用于含量（）的食品中大肠的计数。
A、较低(正确答案)B、最低C、较高D、最高4、检样前，确认所检测样品匀液PH是否在（）之间A、6.8-7.8B、6.5-7.0C、6.5-7.5(正确答案)D、6.8-7.25、大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的（），带有或不带有沉淀环的菌落A、紫红色B、红色或紫色(正确答案)C、紫色D、红色6、培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加（）mlVRBA覆盖平板表面。
水中总大肠菌群的测定法(多管发酵法)
3.1乳糖蛋白胨培养液：外购商品培养基或按下列方法自行配制。
3.1.1 组分
蛋白胨 10.0g
牛肉膏 3.0g
乳糖5.0g
氯化钠5.0g
1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1.0ml
蒸馏水1000ml
3.1.2 配制
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1000ml蒸馏水中加热溶解，用1mol/L的NaOH或HCl调节pH为7.2～7.4，再加入1ml 1.6％溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，置于高压蒸汽灭菌器中，以115℃灭菌20分钟，贮存于冷暗处备用。
6.2.3根据证实有总大肠菌群存在的阳性管数，查检数表（附录B），计算每升水样中的总大肠菌群数。
7 计算
根据总大肠菌群检数表（附录A、B），查表计算水中总大肠菌群数。
8 精密度
8.1重复性
无
8.2再现性
无
9报告
根据查表结果报告水中总大肠菌群数，单位是个/L。
10 附加说明
附录A总大肠菌群数检数表
（接种水样总量300ml，其中100ml水样2份，10ml水样10份）
4.2干热灭菌箱。
4.3培养箱：37土1℃。
4.4冰箱。
4.5电炉。
4.6天平。
4.7灭菌试管：150mm×20mm、140mm×15mm。
4.8灭菌刻度吸管。
4.9灭菌采样瓶。
4.10 pH计或精密pH试纸。
4.11显微镜。
4.12革兰氏染色用有关器材。
5 仪器准备
5.1测定用试管、刻度吸管、采样瓶、三角瓶在使用前应在高压蒸汽灭菌器121℃灭菌15min，或者在干热灭菌箱160℃灭菌2h，干燥后灭菌箱内存放备用。
6.1.2平板分离
微生物实验基础知识考核试卷含答案
微生物实验基础知识考核试卷一、填空题（28分）1．总大肠菌群多管发酵法测定的复发酵试验，是每一管接种完同一发酵管的最典型菌落l～3个后，将发酵管置于℃恒温箱中，培养 h，有产酸产气者，则证实有大肠菌群存在。
①答案：37 242．总大肠菌群多管发酵法测定的步骤分为、和。
答案：初发酵试验平板分离复发酵试验3．总大肠菌群测定的滤膜灭菌是将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水后置于沸水浴中煮沸灭菌：次，每次 min，前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂；也可用1 2 l℃蒸汽灭菌1 0min。
②答案：3 1 54. 细菌总数的菌落数在100以内按报告，大于100时采用两位有效数字，用表示，在报告菌落数为无法计数时，应注明水样的稀释度。
答案：实有数 10的指数6．用于细菌学检测的吸管上端要用填塞，并注意，使其快速、准确流出所用体积。
答案：普通棉花松紧适度7．测定水中细菌学指标的采样瓶口用牛皮纸等防潮纸包扎后，置于干燥箱中，于℃干热灭菌2 h，或用高压蒸汽灭菌器℃灭菌15 min；不能用加热方法灭菌的塑料瓶，应浸泡在O．5％过氧乙酸lO min或环氧乙烷气体进行低温灭菌；聚丙烯耐热塑料瓶，可用℃高压蒸汽灭菌器灭菌1 5 mina答案：1 60～1 70 12 1 12 18．测定自来水样中的细菌学指标时，采水前将水龙头开至最大，放水 min，然后关闭水龙头，用酒精灯火焰灼烧约 Inin消毒水龙头或用75％酒精溶液消毒水龙头，再打开水龙头、开足放水l min，以充分去除水管中的滞留杂质。
答案：3～5 3。
9．测定水样中细菌学指标时，从取样到检验不宜超过 h，否则应使用1 0℃以下冷藏设备保存样品，但不得超过。
答案：2 610．分层检测地表水中的细菌学指标时，应自而（方向）进行采样，以免不同层次的搅扰；与理化监测项目同时采样时，应先采集细菌学检验样品。
答案：上下11．配制好的用于细菌学检测的培养基，不宜保存过久，以少量勤配为宜。
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水中总大肠菌群的测定复习试题
（多管发酵法）
一、填空题
1.总大肠菌群主要包括有_________________________ 、_________________________ 、肠杆菌属、_____________________________ 等菌属的细菌。
答：埃希氏菌属；柠檬酸杆菌属；克雷伯氏菌属。
2.总大肠菌群的检验方法中，多管发酵法可适用于 ____________________ ，操作
，
需要时间______________ 。
答：各种水样；较繁；较长。
3.配制乳糖蛋白胨培养液时，将 _____________ 、__________________ 、____________ 、氯化钠加热溶解于1000ml蒸馏水中，调节pH值为 _________________ ，再加入 _______________ 溶液1ml，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在_________ 答：蛋白胨；牛肉浸膏；乳糖；7.2〜7.4 ；115；20；暗处。
4.平板分离：经初发酵试验培养h 后，发酵试管颜色变黄为_______________ ，小玻璃倒管内有__________ 为产气。
答：24；产酸；气泡。
5.配制伊红美蓝贮备培养基：先将 _______________ 加至900ml蒸馏水中，加热融化，然后加入_______________________ 及 _______________ ，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整pH值为__________________ 。
趁热用脱脂棉或多层纱布过滤，再加入_______________ ，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中，在____________ C灭菌min ，贮存
于___________ 备用。
答：琼脂；磷酸氢二钾；蛋白胨；7.2〜7.4 ；115；20；冷暗处。
二、选择题
1.下列物质中________ 不是配制品红亚硫酸钠培养基所需要的。
A、蛋白胨；B琼脂；C溴甲酚紫乙醇溶液；D磷酸二氢钾
答：C
2.测定水源水中总大肠菌群时，将水样作 _________ 稀释。
A、1：10；
B、1：100；
C、1：1000；D 1：10000
答：A
三、判断题
1.大肠菌群在水中能自行繁殖。
（）
2.滤膜法主要适用于杂质较多的水样，操作较繁。
（）
答：1.V 2. X
四、问答题
1.请解释总大肠菌群？
答：总大肠菌群是指那些能在37C48h内发酵乳糖酸产气的、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。
2.多管发酵法测定总大肠菌群的原理是什么？答：多管发酵法是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、
产酸产气以及具备革兰氏染色阴性、无
芽孢、呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验，以求得水样中的总大肠菌群。
3.在何种情况下用多少三倍浓度的培养基接种？
答：接种体积为10ml时，试管内应装入有3倍浓度乳糖蛋白胨培养液5ml。
4.在进行水质生物实验时，灭菌的意义是什么？
答：使水中一切活的生物体（包括无性繁殖的和芽孢繁殖的形态）及病毒失活或消除。
5.总大肠菌群测定步骤与粪大肠菌群测定有什么异同之处？
答：相同之处：初发酵时，水样都稀释成三个浓度，接种乳糖蛋白胨培养基，在37C培养24h,对产酸产气者定为初发酵阳性。
不同之处：对粪大肠菌群检测做复发酵时，接种的培养基，培养的温度与大肠菌群检测不同，培养的时间相同。