饱和硫酸铵法
饱和硫酸铵析出的蛋白质
饱和硫酸铵析出的蛋白质蛋白质是生命中至关重要的分子之一，它们在细胞功能、结构和代谢中发挥着重要的作用。
因此，研究蛋白质的性质和特征对于理解生物学过程和开发药物具有重要意义。
饱和硫酸铵析出是一种常用的蛋白质分离和富集方法，其基本原理是利用硫酸铵的饱和溶液对蛋白质进行沉淀。
饱和硫酸铵析出法是一种物理分离方法，通过控制溶液中硫酸铵的浓度来使蛋白质发生沉淀。
一般而言，蛋白质在高浓度的硫酸铵溶液中溶解度较低，当硫酸铵浓度超过饱和度时，蛋白质会发生沉淀。
因此，可以通过逐渐加入硫酸铵饱和溶液的方法来将蛋白质从溶液中分离出来。
饱和硫酸铵析出法的操作步骤相对简单，但是需要注意一些关键因素以确保实验的成功。
首先，溶液的pH值是一个重要的参数，一般来说，蛋白质在酸性条件下更容易沉淀。
其次，溶液的温度也会影响到实验的结果，一般而言，在低温下进行实验可以提高蛋白质的沉淀效率。
此外，硫酸铵的加入速度也需要控制，过快的加入可能导致蛋白质的析出不完全。
饱和硫酸铵析出法的优点之一是可以同时富集多种蛋白质，从而减少后续步骤的操作。
此外，该方法对于大部分蛋白质都适用，并且可以在常规实验室条件下进行。
然而，由于蛋白质的性质和溶液条件的不同，该方法可能存在一定的局限性。
因此，在实验中需要根据具体的研究目的和样品特点选择合适的分离方法。
除了饱和硫酸铵析出法，还有许多其他的蛋白质富集和分离方法，如离心、凝胶过滤、电泳和亲和层析等。
这些方法各有优劣，可以根据研究需求和实验条件选择合适的方法。
此外，结合不同的分离方法也可以提高分离效果和纯度。
饱和硫酸铵析出是一种常用的蛋白质分离和富集方法，通过控制硫酸铵溶液的浓度来使蛋白质发生沉淀。
该方法操作简单，适用范围广，但在实验中需要注意一些关键因素。
对于蛋白质的研究和分析，选择合适的分离方法是非常重要的，可以根据具体的研究目的和样品特点选择合适的方法。
蛋白质的研究将有助于我们深入了解生物学过程和开发相关应用。
焦化基本知识点
焦化基本知识点一、硫酸铵生产工艺（一）饱和器法硫酸铵生产工艺流程1. 鼓泡式饱和法由鼓风机来的焦炉煤气，经电捕焦油器后进入煤气预热器。
在预热器内用间接蒸汽加热煤气到60～70℃或更高的温度，目的是为了使煤气进入鼓泡式饱和器蒸发饱和器内多余的水分，保持饱和器内的水平衡。
预热后的煤气沿饱和器中央煤气管进入饱和器，经泡沸伞从酸性母液中鼓泡而出，同时煤气中的氨被硫酸所吸收。
煤气出饱和器后进入除酸器，捕集其夹带的酸雾后，被送往粗苯工段。
鼓泡式饱和器后煤气含氨一般小于0.03g/m3。
冷凝工段的剩余氨水经蒸氨后得到的氨气，在不生产吡啶时，直接进入饱和器；当生产吡啶时将此氨气通入吡啶中和器。
氨在中和器内与母液中的游离酸及硫酸吡啶作用，生成硫酸铵，又随中和器回流母液返回饱和器。
饱和器母液中不断有硫酸铵生成，在硫酸铵含量高于其溶解度时，就析出结晶，并沉淀于饱和器底部。
其底部结晶被抽送到结晶槽，在结晶槽内使结晶长大并沉淀于底部。
结晶槽底部硫酸铵结晶放到离心机内进行离心分离，滤除母液，并用热水洗涤结晶，以减少硫酸铵表面上的游离酸和杂质。
离心分离的母液与结晶槽满流出的母液一同自流回饱和器中。
从离心机分离出的硫酸铵结晶经螺旋输送机，送入沸腾干燥器内，用热空气干燥后送入硫酸氨储斗，经称量包装入成品库。
为了使饱和器内煤气与母液接触充分，必须使煤气泡沸伞在母液中有一定的液封高度，并保证饱和器内液面稳定，为此在饱和器上还设有满流口，从满流口溢出的母液经插入液封内的满流管流入满流槽，以防止煤气逸出。
满流槽下部与循环泵链接，将母液不断地抽送到饱和器底部的喷射器。
因而一定的喷射速度，故饱和器内母液被不断循环搅动，以改善结晶过程。
煤气带入饱和器的煤焦油雾，在饱和器内与硫酸作用生成所谓的酸煤焦油，泡沫状酸煤焦油漂浮在母液面上，并与母液一起流入满流槽。
漂浮于满流槽液面上的酸煤焦油应及时捞出，或引入一分离处理装置与母液分离，以回收母液。
饱和器内所需补充的硫酸，由硫酸仓库送至高置槽，再自流入饱和器，正常生产时，应保持母液酸度为4%～6%，硫酸加入量为中氨的需要量；当不生产粗轻吡啶时，硫酸加入量要大一些，还要中和随氨气进入饱和器的氨。
饱和器法生产硫酸铵的工艺
硫酸铵饱和器工艺操作要点
控制氨气与硫酸铵溶液的混合比例
混合比例： 氨气与硫酸 铵溶液的比 例应控制在 1:1.5至1:2 之间
控制方法： 可通过调节 氨气流量和 硫酸铵溶液 流量来实现
混合效果： 混合后的溶 液应呈均匀 状态，无明 显分层现象
混合时间： 混合时间应 控制在30秒 至1分钟之间， 以确保混合 均匀
定期检查设备，确保设备 运行正常
定期更换易损件，避免设 备损坏
定期清洗设备，保持设备 清洁
定期进行设备保养，延长 设备使用寿命
合理安排生产计划，提高生产效率
制定合理的生产计划，确保生产过程的连续性和稳定性 合理安排生产时间，避免高峰时段的生产压力 定期检查和维护设备，确保设备的正常运行 加强员工培训，提高员工的操作技能和生产效率
降低生产成本和提高效率
优化工艺流程，减少能耗和材 料浪费
采用自动化和智能化技术，提 高生产效率
研发新型催化剂，降低反应温 度和压力
加强环保措施，减少废气、废 水和废渣排放
开发新的生产技术和设备
提高生产效率：通 过改进工艺和设备， 提高生产效率，降 低生产成本
环保要求：满足环 保要求，减少污染 排放，提高产品品 质
控制温度：保持适宜的温度，避免过高或 过低
控制时间：保持适当的反应时间，避免 过长或过短
控制压力：保持稳定的压力，避免过大 或过小
控制杂质：避免杂质进入反应体系，影 响产品质量
控制流量：保持稳定的流量，避免过大或 过小
控制设备：确保设备正常运行，避免故 障影响产品质量
加强设备维护和保养，延长设备使用寿命
硫酸铵溶液制备
原料：硫酸、氨水
反应条件：温度、压力、搅拌速度
饱和硫酸铵析出的蛋白质
饱和硫酸铵析出的蛋白质一、引言饱和硫酸铵（Ammonium Sulfate, (NH4)2SO4）是一种常用的沉淀试剂，可用于分离和纯化蛋白质。
通过改变溶液中的盐浓度，可以使蛋白质在特定的饱和度下发生沉淀，从而实现对蛋白质的分离和纯化。
本文将详细介绍饱和硫酸铵析出法在蛋白质分离中的应用原理、步骤以及注意事项。
二、原理饱和硫酸铵析出法利用了蛋白质在高盐浓度下容易发生沉淀的特性。
在饱和硫酸铵溶液中，硫酸铵分子会与蛋白质中的水分子竞争结合，从而导致蛋白质发生改变，使其结构发生变化。
当硫酸铵浓度达到一定的饱和度时，蛋白质将沉淀出来。
三、步骤饱和硫酸铵析出的蛋白质的步骤如下所示：1.准备工作：将所需的试剂和设备准备齐全。
试剂包括硫酸铵和待析出蛋白质的溶液。
设备包括离心管、离心机、冷藏设备等。
2.设定分离条件：根据待析出蛋白质的特性和要求，确定合适的硫酸铵浓度范围。
通常情况下，硫酸铵的饱和度为30%至90%之间。
3.配制硫酸铵溶液：根据所设定的分离条件，称取适量的硫酸铵，加入适量的溶剂（一般为纯水或缓冲液）中，并充分溶解。
4.添加硫酸铵溶液：将待析出蛋白质的溶液加入到硫酸铵溶液中，并充分混合。
注意，这个过程需保持低温，可以放在冷藏设备中。
5.离心沉淀：将溶液离心，以分离蛋白质的沉淀。
离心的条件可以根据具体的实验要求进行调整，一般来说，离心速度为10000-15000rpm，离心时间为10-20分钟。
6.分离蛋白质：将上一步离心得到的沉淀与上清分离。
可以通过倒置离心管将上清液倒出，或通过吸取上清液来分离蛋白质。
7.洗涤沉淀：使用适当的洗涤缓冲液洗涤沉淀，以去除杂质。
洗涤次数和洗涤缓冲液的浓度和体积需要根据具体的实验要求来确定。
8.蛋白质的溶解或储存：将洗涤后的蛋白质溶解在适合的缓冲液中，以便后续分析或储存。
根据需求，可以在储存前对蛋白质进行浓缩和纯化等处理。
四、注意事项1.操作过程中保持低温，以防止蛋白质的降解和变性。
饱和器法硫酸铵生产工艺流程
结晶槽的浆液经静置分层，底部的结晶排入到离心机，经分离和水洗的硫酸铵晶体由胶带输送机送至振动式流化床干燥器，并用被空气热风机加热的空气干燥，再经冷风冷却后进入硫酸铵储斗。然后称量、包装送入成品库。离心机滤出的母液与结晶槽满流出来的母液一同自流回饱和器的下段。干燥硫酸铵的尾气经旋风除尘器后由排风机排放至大气。
饱和器在操作一定时间后，由于结晶的沉积将使其阻力增加，严重时会造成饱和器的堵塞。所以操作中必须定期进行酸洗和水洗。当定期大加酸、补水、用水冲洗饱和器及除酸器时，所形成的大量母液有漫流槽满流至母液储槽。在正常生产时又将这些母液抽回饱和器以作补充。饱和器是周期性连续操作设备，为了防止结晶堵塞，定期大加酸和水洗，从而破坏了结晶生成的正常条件，加之结晶在饱和器底部停留时间短，因而结晶颗粒较小，平均直径在0.5mm。这些都是鼓泡式饱和器存在的缺点。
煤气带入饱和器的煤焦油雾，在饱和器内与硫酸作用生成所谓的酸煤焦油，泡沫状酸煤焦油漂浮在母液面上，并与母液一起流入满流槽。漂浮于满流槽液面上的酸煤焦油应及时捞出，或引入一分离处理装置与母液分离，以回收母液。
饱和器内所需补充的硫酸，由硫酸仓库送至高置槽，再自流入饱和器，正常生产时，应保持母液酸度为4%～6%，硫酸加入量为中氨的需要量；当不生产粗轻吡啶时，硫酸加入量要大一些，还要中和随氨气进入饱和器的氨。
饱和器的上段设满流管，保持液面并封住煤气，使煤气不能进入下段。满流管插入漫流槽7中也封住煤气，使煤气不能外逸。饱和器满流口溢出的母液流入漫流槽内的液封槽，再溢流到满流槽，然后用小母液泵送至饱和器的后室喷洒。冲洗和加酸时，母液经漫流槽至母液储槽，再用小母液泵送至饱和器。此外，母液储槽还可供饱和器检修时储存母液之用。
硫酸铵生产工艺
找了两个(1) 工业制硫酸铵的方式，包括化学方程式1 ．饱和器法硫酸铵生产工艺流程(1) 鼓泡式饱和器法由鼓风机来的焦炉煤气，经电捕焦油器后进入煤气预热器。
在预热器内用间接蒸汽加热煤气到60〜70C或更高的温度，目的是为了使煤气进入鼓泡式饱和器蒸发饱和器内多余的水分，保持饱和器内的水平衡。
预热后的煤气沿饱和器中央煤气管进入饱和器，经泡沸伞从酸性母液中鼓泡而出，同时煤气中的氨被硫酸所吸收。
煤气出饱和器后进入除酸器，捕集其夹带的酸雾后，被送往粗苯工段。
鼓泡式饱和器后煤气含氨一般小于0.03g/m3冷凝工段的剩余氨水经蒸氨后得到的氨气，在不生产吡啶时，直接进入饱和器；当生产吡啶时将此氨气通入吡啶中和器。
氨在中和器内与母液中的游离酸及硫酸吡啶作用，生成硫酸铵，又随中和器回流母液返回饱和器。
饱和器母液中不断有硫酸铵生成，在硫酸铵含量高于其溶解度时，就析出结晶，并沉淀于饱和器底部。
其底部结晶被抽送到结晶槽，在结晶槽内使结晶长大并沉淀于底部。
结晶槽底部硫酸铵结晶放到离心机内进行离心分离，滤除母液，并用热水洗涤结晶，以减少硫酸铵表面上的游离酸和杂质。
离心分离的母液与结晶槽满流出的母液一同自流回饱和器中。
从离心机分离出的硫酸铵结晶经螺旋输送机，送入沸腾干燥器内，用热空气干燥后送入硫酸氨储斗，经称量包装入成品库。
为了使饱和器内煤气与母液接触充分，必须使煤气泡沸伞在母液中有一定的液封高度，并保证饱和器内液面稳定，为此在饱和器上还设有满流口，从满流口溢出的母液经插入液封内的满流管流入满流槽，以防止煤气逸出。
满流槽下部与循环泵链接，将母液不断地抽送到饱和器底部的喷射器。
因而一定的喷射速度，故饱和器内母液被不断循环搅动，以改善结晶过程。
煤气带入饱和器的煤焦油雾，在饱和器内与硫酸作用生成所谓的酸煤焦油，泡沫状酸煤焦油漂浮在母液面上，并与母液一起流入满流槽。
漂浮于满流槽液面上的酸煤焦油应及时捞出，或引入一分离处理装置与母液分离，以回收母液。
根据IgG的不同特性,IgG的纯化方法主要有以下几种
膜色谱采用具有一定孔径的膜作为介质，连接配基，利用膜配基与蛋白质等目标作用进行分离纯化，当料液以一定流速流过膜的时候，目标分子与膜介质表面或膜孔内基团特异性结合，而杂质则透过膜孔流出，待处理结束后再通过洗脱液将目标分子洗脱下来．ProteinA能与人IgG分子的Fc段结合，但只结合其中的IgG1，IgG2和IgG4亚类，不能结合IgG3亚类．
缺点：吸附一些杂蛋白质，另洗脱过程中的配体会脱落进入分离体系；载体较昂贵，机械强度低，配基制备困难，配基与载体耦联条件激烈等
2、有机溶剂沉淀法
有机溶剂沉淀法是利用有机溶剂能破坏溶质分子周围形成的水化层，使溶质分子脱水而相互聚集析出，也就是降低了溶质的溶解度；而且有机溶剂的介电常数比水小，随着有机溶剂的加入，整个溶液的介电常数降低，带电溶质分子之间的库仑引力逐渐增强，于是发生相互吸引而聚集．一般来说，溶质分子量越大，越容易被有机溶剂沉淀，发生沉淀所需要的有机溶剂浓度越低．在这主要介绍辛酸法．
根据IgG的不同特性，IgG的纯化方法主要有以下几种：
1、饱和硫酸铵盐析法
盐析法是粗分离蛋白质的重要方法之一．因为蛋白质分子吸附某种盐离子后，其带电表层使蛋白质分子彼此排斥，而蛋白质分子与水分子间的相互作用却加强，因而溶解度提高．但当大量中性盐加入，使水的活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出．硫酸铵是盐析最常用的无机盐，其主要特点是溶解度大，随温度变化小；对蛋白质有保护作用，高浓度时可抑制微生物和蛋白酶的活性；溶解于水时不产生热量，价格低廉，但在碱性环境中不能用硫酸铵作为沉淀剂进行盐析反应．在血清中加入硫酸铵，当饱和度为28～33时，优球蛋白析出；33～55时，拟球蛋白析出；饱和度大于50%后，白蛋白析出，这是硫酸铵分析沉淀血清蛋白的一般规律．
抗体的检测和纯化(4)
• Protein A/G亲和层析 • 亲和层析是一种快速有效的生物活 性物质的纯化方法,它通过偶联蛋白对 目的蛋白选择性的吸收和分离,可取得 较高的纯化效果,且操作简便,广泛地应 用于实验室抗体纯化。由于产品价格昂 贵,使用成本较高,限制了它的运用
• Protein A • A 蛋白是金黄色葡萄球菌的表面蛋白,分 子量为42 KD ,有6 个不同的IgG结合位点。其 中有5 个位点对IgG的Fc 片段显示很强的特异 性亲和力,不同的位点独立地与抗体结合。但 IgA , IgM , IgE 也可能结合在配体上,当达到饱 和时,一个A 蛋白分子至少可以结合两个IgG分 子。A 蛋白对IgG有高亲和力和特异性,这一特 点使之非常适合用于纯化腹水或细胞培养上 清中的单克隆抗体
精度纯化
• 目的：保证最终抗体产品纯度，能有效对 潜在的污染物，如宿主细胞蛋白 (HCP)、免 疫球蛋白、宿主DNA； • 对用于腹水生产抗体的刺激物、内毒素、 其它热原物质、培养液成分、层析凝胶析 出成分 (脱落的蛋白A配基) 进行去除；并能 有效的去除/灭活病毒。
建议的工艺
• 首先采用0.2-0.45 m的中空纤维膜技术进行 澄清 (Cell removal)； • 然后用protein-A或protein-B捕获，酸性条件 洗脱后直接pH 4.0病毒灭活； • 澄清过滤后再穿透方式上Capto Adhere； • 这一步离子交换之前或之后会有一步20nm 纳滤去病毒；最后50K膜超滤浓缩和洗滤进 行缓冲液置换。 • 有些抗体如果通过优化结果不甚满意，通 过增加一步Capto Q也基本上可以达到要求
目的：去除特定的杂质，如HCP、DNA、聚集 体和变体等。 常用的层析技术：CaptoAdhere、离子交换、 疏水层析等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
饱和硫酸铵法测定啤酒保质期
标准操作规程
一．饱和硫酸铵溶液配制：
①按630ml水中加入500g硫酸铵；
②加热溶解，使其达到饱和状态；
③冷却到室温（不同温度中溶解度不同，温度降低后由结晶析出）
④冷却后用单层滤纸过滤，备用。
注意：试剂的保存要尽量恒温。
二．操作步骤：
①用500ml三角瓶预取250-300ml酒样；
②除气（必须保证气体除尽）；
③用量筒量取200ml除气后的酒样，倒入浊度杯；
④在20℃水浴中放置10-15分钟；
⑤放入浊度计，读取初始浊度值；
⑥加入转子，放磁力搅拌器上，准备滴定；
三．滴定过程：
①30ml饱和硫酸铵溶液一次性滴入，搅拌30秒，
②测浊度，浊度小于等于初始浊度时，继续以5ml/次加入，搅拌
20秒；
③测浊度，浊度大于初始浊度0.05EBC时，继续以2ml/次加入，
搅拌20秒；
④测浊度，浊度到达1.5EBC时，继续以0.5ml/次加入，搅拌20
秒；
⑤滴定终点，浊度值为2.0EBC；
⑥读数，并记录整个过程中消耗的饱和硫酸铵溶液量，即为饱和
硫酸铵值。