蛋黄卵磷脂的提取

蛋黄卵磷脂的提取

[实验目的]

1.了解从动物中提取有效物质的一般原理和方法。

2.更好的理解和利用相似相容原理。

3.熟悉从蛋黄中提取卵磷脂的操作。

4.掌握薄层液相色谱的原理及操作方法。

[仪器与试剂]

烧杯、量筒、三口瓶（100mL）、圆底烧瓶（100mL）、烧杯、分液漏斗、旋转蒸发仪、水浴锅、分液漏斗。

氯仿、无水乙醇、乙醚、三乙胺、氯化钠溶液（10%）、无水MgSO4、丙酮、GF254硅胶板。

[实验原理]

实验采用混合溶液萃取法。薄层色谱法又称薄板色谱法。薄板色谱法按其固定相性质和分离机理可分为：吸附薄层法，分配薄层法，离子交换薄层法及尺寸排阻薄层法等。薄层色谱法基本原理实质是吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程。

[实验步骤]

1.蛋黄卵磷脂的提取

取新鲜的熟鸡蛋一个，完整的取出蛋黄，置于装有搅拌器、回流冷凝管和温度计的100mL三口瓶中，加入20mL混合溶剂（氯仿：乙醇=1：3），控制反应温度为35—40℃，搅拌30min。抽滤，滤饼在同样条件下再提取一次。滤液转入分液漏斗中，以5mL氯仿清洗抽滤瓶后一并加入分液漏斗中，加入40mL 10%氯化钠溶液。分出氯仿层，用无水MgSO4干燥。干燥后的氯仿层减压蒸馏近干，加入10mL丙酮，搅拌，冰水冷却后分离沉淀物。用可能少的乙醚溶解沉淀物，转入烧杯，用1mL乙醚清洗烧瓶后也转入烧杯。在搅拌下缓慢加入10mL丙酮，冰水冷却后除去溶剂，将产品置于真空干燥箱中干燥，得到白色或浅黄色蜡状卵磷脂产品，计算产率。

2.薄层色谱法（TLC）定性检测

点样：取管口平整的毛细管吸取配置好的2%的卵磷脂氯仿溶液，点在薄层板上，点的直径一般为2-3cm，样品点在离薄层一端为1cm左右的起始线上，离板边约有1cm的距离。

展开：点样完毕，待溶剂挥干后，用氯仿、乙醇、三乙胺与水（体积比=1:1:1:0.3）的混合溶剂中进行展开，其方法是将薄层板斜放在盛有展开剂的层析槽内，薄板与展开剂液面成15°左右的夹角，点有样品的一端浸入溶剂中，深达0.5cm左右、切勿使溶剂浸没原点，盖好层析槽盖，当溶剂前沿达板的另一端1cm左右时，即可去除薄层板，标出溶剂前沿位置。

显色：取出薄层板，立即喷洒重铬酸钾显色剂（0.6%的重铬酸钾的55%的硫酸），120℃烘干10min使其显色，观察到红色斑点，计算R f值。

[要点与注意事项]

1.卵磷脂提取是应注意提取温度，卵磷脂中常含有不饱和脂肪酸，易氧化，使颜色变深，故需严格控制提取温度在45℃以下。

2.使用丙酮、乙醚，室内应严禁避免明火，并有良好的通风条件。

3.薄层色谱法定性检测时要注意展开剂的极性，要小心仔细配置。

[思考题]

1.单一溶剂在蛋黄卵磷脂提取中的缺陷是什么？

答：如果只用极性溶剂如甲醇、乙醇对脂质溶解能力差；单一的非极性溶液乙烷乙醚、氯仿

难以破坏脂蛋白复合物。而蛋黄是一下种相当稳定的乳状液，其中乳化剂是磷脂和蛋白质的结合脂蛋白复合物，要把磷脂完全提出来，所用溶剂必须能破坏这种复合物，所以单一溶剂不能满足要求。

2.化学方法鉴别磷脂举例。

答：薄层色谱法对胡麻卵磷脂进行定性鉴别，表明胡麻卵磷脂主要成分是磷脂酰胆碱（PC）。

3.影响R f值的因素。

答：它与展开剂的极性有关，若R f太小，要把极性调大；太大。要把极性调小。在展开剂一定时，温度对与分离度的印象特别明显，影响R f。R f的大小与物质结构、溶剂结构、滤纸种类、温度、PH值、时间等有关。但同样条件下只和物质的分配系数有关。