动物寄生虫病学兽医寄生虫实验技术

⑥ 倾去上层液体，换加饱和盐水；
⑦ 再次离心后，再倾去上层液体；
⑧ 再换加饱和盐水，如此反复操作，直到上层液体完全 清澈为止；
⑨ 倾去上层液体，将沉渣全部分别滴于数张载玻片上；
⑩ 检查全部所制的载玻片，统计其虫卵总数，以总数乘 以4，即为每克粪便中的肝片形吸虫虫卵数。
在进行牛粪便肝片形吸虫虫卵的计数时，操作步骤基本同上， 但用粪量改为30g。加入离心管中的粪液量为5ml，因此，最 后计得虫卵总数乘以2，即为每克粪便中虫卵总数。 在马，当线虫卵数量达到每克粪便中含卵500枚时，为轻感染； 800～1 000枚时为中感染；l 500～2 000枚时为重感染。
沉淀法示意图
2）注意事项：
① 注意此法粪量少，一次粪检最好多看几片，以 提高检出率。 ② 可将离心沉淀法和漂浮法结合起来应用。如可先 用漂浮法将虫卵和比虫卵轻的物质漂起来，再用离 心沉淀法将虫卵沉下去；或者选用沉淀法使虫卵及 比虫卵重的物质沉下去，再用漂浮法使虫卵浮起来， 以获得更高的检出率。
（4）锦纶筛兜淘洗法
① 在一小玻璃容器上（如小三角烧瓶或大试管）， 在容量为56ml和60ml处各作一个标记； ② 先取0.4％（或0.1mol/L）的氢氧化钠溶液注入 容器内到56ml处； ③ 再加入被检粪便使液体升到60ml处；
④ 加入一些玻璃珠，振荡使粪便完全破碎混匀； ⑤ 以1mL的吸管吸取粪液0.15mL，滴于2～3张载玻片 上，覆以盖玻片； ⑥ 在显微镜下循序检查，统计其中虫卵总数；
麦克马斯特氏计数法示意图
（引自秦建华，李国清等，2005）
3) 片形吸虫卵的计数法
对于羊，操作如下： ① 取羊粪10g，置于300ml的容量瓶中； ② 加入少量1.6％的氢氧化钠溶液，静置过夜； ③ 次日，将粪块搅碎，再加入1.6％的氢氧化钠溶 液到300ml刻度处； ④ 摇匀，立即吸取此粪液7.5ml注入到一离心管内； ⑤ 在离心机内以每分钟1 000转速，离心2min；
于40微米的细粪渣和可溶性色素均被洗去而
使虫卵集中。
（5）虫卵计数法
虫卵计数法是测定每克家畜粪便中的虫卵数，而 以此推断家畜体内某种寄生虫的数量方法，有时尚 以使用驱虫药前后虫卵数量的对比，以检查驱虫效 果。方法有多种，这里介绍目前常用的三种方法。
1) 斯陶尔氏法(Stoll's method)
⑤ 将滤液振荡混匀后立即吸取粪液充满麦克马斯特计 数板两个计数室； ⑥ 置于显微镜台上，静置2～3分钟；
⑦ 检计数两个计数室的虫卵数。该小室中的容积为 1cm×lcm×0.15cm=0.15cm3，内含粪2÷（10＋50） ×0.15=0.005g，两个计数室则为0.01g。故数得的 虫卵数乘以100即为每克粪便中的虫卵数（OPG值） 公式：OPG＝a×100，a代表两个计数室的虫卵数值
2）注意事项：① 涂片的厚以在载玻片的下面垫上有字的纸时， 纸上的字迹隐约可见为宜。 ② 该法简便、易行、快速、适合于虫卵量大的粪便
检查，但对虫卵含量低的粪便检出率低，故此法每
个样品必须检查3～5片。
③ 检查虫卵时，先用低倍镜顺序观察盖 玻片下所有部分，发现疑似虫卵物时， 再用高倍镜仔细观察。因一般虫卵(特
第19章 兽医寄生虫病的实验诊断技术 蠕虫病的实验诊断技术
粪便内蠕虫虫卵检查法 （1）直接涂片法 直接涂片法是检查虫卵的最简单方法，但如果 粪便中虫卵数量少时则不易查到。
1）操作方法： ① 取1～2滴清水，滴在载玻片； ② 然后用火柴梗或牙签取黄豆大小的粪便与载玻片 上的清水混匀； ③ 除去较粗的粪渣； ④ 将粪液涂成薄膜，薄膜的厚度以透过涂片隐约可 见书上的字迹为宜； ⑤ 盖上盖玻片，置于低倍镜下检查。
（3）沉淀法
沉淀法用于检查粪便中的吸虫卵，因为吸虫
卵一般来说其比重大于水，可沉集于水底。
1）操作方法：
① 取粪便5g； ② 加清水l00ml； ③ 用玻棒搅匀，通过60目铜筛过滤到另一胶杯中； ④ 静置半小时； ⑤ 倾去上层液，保留沉渣； ⑥ 再加水混匀； ⑦ 又静置半小时； ⑧ 再倾去上层液，保留沉渣； ⑨ 如此反复操作直到上层液体透明，最后倾去上层 液； ⑩ 吸取沉渣检查。
别是线虫卵)色彩较淡，镜检时视野宜
稍暗一些(聚光器下移)。
（2）漂浮法
漂浮法是利用比重比虫卵大的溶液稀释粪便， 将粪便中比重小的虫卵浮集于液体表面。常用饱和 盐水（即在1000m1沸水中加入380g食盐）做漂浮液， 用以检查线虫和绦虫虫卵。此外，尚可采用其他饱 和溶液，如饱和硫酸镁溶液等。
1）操作方法： ① 取粪便10g； ② 加饱和盐水l00ml； ③ 用玻棒搅匀，通过60目铜筛过滤到另一胶杯中； ④ 静置半小时； ⑤ 用直经5～10mm的铁丝圈，与液面平行接触以沾取 表面液膜，抖落于载玻片上，加盖玻片检查
1）操作方法： ① 取粪便5～10g； ② 加水搅匀； ③ 通过40或60目铜筛过滤； ④ 滤下液再通过260目锦纶筛兜过滤； ⑤ 在锦纶筛兜中继续加水冲洗，直到洗出液变清为 止； ⑥ 挑取260目锦纶筛兜中的粪渣抹片检查。
2）注意事项：
此法适用于宽度大于60微米球虫卵囊。因
通过260目锦纶筛兜过滤、冲洗后，直径小
2）注意事项：
① 漂浮时间：饱和盐水漂浮法漂浮时间为30min左 右较为适宜 ② 漂浮液保存：漂浮液必须饱和，盐类的饱和溶
液须保存在不低于13℃
③ 漂浮液的选择：除饱和盐水漂浮液以外，饱和 硫酸锌溶液,饱和蔗糖溶液也可选用。
④ 漂浮法检查多例粪便时，应避免相互污染，否 则影响结果的准确性。 ⑤ 静置滤液的容器选择：选用口径相当较小的类 似三角瓶的器皿，如经济实惠的青链霉素瓶。 ⑥ 如用载玻片或盖玻片蘸取虫卵，则使用的载玻 片或盖玻片一定要干净无油腻，否则难以蘸取。
⑦ 因0.15mL粪液中实际含原粪量是 0.15×4/60=0.01g，因此，所得虫卵总数乘100即为 每克粪便中的虫卵数（EPG）
斯陶尔氏法示意图 （引自秦建华，李国清等，2005）
2) 麦克马斯特氏法(McMaster's method) 操作如下：
① ② ③ ④ 取粪便2g，置研钵中； 先加入10ml水，搅匀，再加饱和食盐水50ml； 充分振荡混匀； 用60目铜筛过滤；