FasL反义寡核苷酸逆转肝癌细胞免疫逃逸 的实验研究(一)
survivin反义寡核苷酸抑制骨肉瘤细胞增殖及增加化疗敏感性的作用
survivin反义寡核苷酸抑制骨肉瘤细胞增殖及增加化疗敏感性的作用饶耀剑;刘慧娟;夏仁云【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2006(19)2【摘要】目的:探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对MG63细胞的抑制作用机制及对化疗敏感性的影响.方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染MG63细胞后,用单四唑(MTT)法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法分别检测survivin mRNA及蛋白质的表达.结果:MG63细胞转染ASODN后生长明显受抑制,且呈时间和剂量依赖性;Lip-ASODN组细胞72h总凋亡率为(81.12±3.2)%,Lip-SODN组为(27.09±2.1)%,空脂质体组为(26.87±1.6)%.三组比较,Lip-ASODN组差异具有显著性意义(P＜0.05),survivin mRNA及蛋白质的表达水平明显下降.survivin ASODN和多柔比星(ADM)联合处理组的细胞抑制率在72 h达(91.6±3.4)%,明显高于单用survivin ASODN的(41.2±4.6)%(P＜0.05)和ADM的(60.8±4.2)%(P＜0.05).结论:survivin ASODN能够抑制骨肉瘤细胞系MG63的增殖、诱导其凋亡,并能增加其对化疗药物的敏感性,可能是因surviving ASODN能下调survivin mRNA和蛋白质的表达而起作用.【总页数】4页(P132-135)【作者】饶耀剑;刘慧娟;夏仁云【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科,湖北,武汉,430030;黄石冶钢医院骨科,湖北,黄石,435000;华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科,湖北,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R738.1【相关文献】1.骨肉瘤MG-63细胞中Survivin的表达及其反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的作用 [J], 黎承军;缪叶佳;流小舟;施鑫;周光新;陆萌;吴苏稼;赵建宁2.抑制X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)和Survivin表达对胰腺癌Panc-1细胞增殖及化疗敏感性的影响 [J], 宰红艳;易小平;李宜雄;龙学颖;曹丽平;刘慧3.Survivin反义寡核苷酸增加A375细胞对顺铂的敏感性 [J], 王梅;王晓丽;王冰;谭升顺4.靶向Survivin的反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖的抑制作用 [J], 王治;梅柱中;童新;董燕;李青山;孙志贤5.survivin反义寡核苷酸对K562细胞增殖的抑制作用 [J], 温贤浩;徐酉华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
FAPα_靶向标记化合物131I-FAPI-03_的合成及初步体内外实验研究
FAPα靶向标记化合物131I-FAPI-03的合成及初步体内外实验研究马 欢1,2, 廖家莉2, 杨远友2, 刘 宁2, 李飞泽2（1. 四川省医学科学院 四川省人民医院（电子科技大学附属医院） 核医学科，成都 610072；2. 四川大学 原子核科学技术研究所，辐射物理及技术教育部重点实验室，成都 610064）摘要：本研究以4-喹啉基-甘氨基-2-氰基吡咯烷为骨架，对连接基团进行碳链延长及羟基修饰成功合成FAPI 衍生物ATE-FAPI-03；通过亲电取代反应实现其131I 标记，并对标记化合物131I-FAPI-03的脂水分配比、体外稳定性等进行分析；开展细胞结合、内吞、流出等实验以评价131I-FAPI-03的体外动力学特征；并考察了131I-FAPI-03在荷胶质瘤小鼠体内的分布情况。
结果表明：131I-FAPI-03为亲脂性小分子，并具有良好的体外稳定性；与FAPα阳性细胞U87MG 孵育10 min 时的结合率为（22.00 ± 0.35）%，且随着孵育时间的延长结合率有明显的上升趋势，而与FAPα阴性细胞MCF-7的结合率始终处于较低水平；通过竞争结合实验测得131I-FAPI-03的IC 50值为45.5 nM ，表明其对FAPα具有较高的亲和力；大部分与U87MG 细胞结合的131I-FAPI-03可被细胞内吞，但其在细胞中的滞留能力偏低。
131I-FAPI-03在荷胶质瘤小鼠体内具有快速的肿瘤靶向能力：经尾静脉注射5 min 后，肿瘤组织对131I-FAPI-03的放射性摄取值为（14.90 ±3.21）% ID/g ，注射2 h 后，肿瘤/肌肉的放射性摄取比值达到（43.7 ± 16.7）。
上述结果为新型FAPα靶向药物的研发提供了重要的参考。
关键词：FAPα；131I ；FAPI ；胶质瘤中图分类号：TL92+3 文献标志码：A 文章编号：1000-7512(2024)02-0097-09doi ：10.7538/tws.2024.37.02.0097Synthesis and Preliminary Evaluation of FAPα Targeted Tracer 131I-FAPI-03MA Huan 1,2, LIAO Jiali 2, YANG Yuanyou 2, LIU Ning 2, LI Feize2（1. Department of Nuclear Medicine , Sichuan Provincial People’s Hospital ,University of Electronic Science and Technology of China , Chengdu 610072, China ;2. Key Laboratory of Radiation Physics and Technology of the Ministry of Education ,Institute of Nuclear Science and Technology , Sichuan University , Chengdu 610064, China ）Abstract: Using N-(4-quinolinoyl)-Gly-(2-cyanopyrrolidine) as scaffold ，we prolonged the linker with serine to obtain a FAPI derivative ATE-FAPI-03，which was subsequently labeled with131I byelectrophilic substitution. Then the in vitro stability ，Log P value ，binding affinity ，targeting properties and biodistribution behavior of 131I-FAPI-03 was evaluated. Results show that 131I-FAPI-03 was lipophilic and stable in vitro ，capable of specifically binding to FAPα-positive U87MG cells收稿日期：2023-12-04；修回日期：2024-01-18基金项目：中央高校基本科研业务费专项资金资助（2023SCU12132）；四川省医学科学院.四川省人民医院青年人才基金（2022QN32）通信作者：李飞泽第37卷 第2期同 位 素Vol. 37 No. 22024年 4 月Journal of IsotopesApr. 2024fast with a major proportion trapped intracellularly. After 10 min of incubation，131I-FAPI-03 showed a specific binding rate of (22.00 ± 0.35)%，and the binding rate increased with the incubation time，to a peak of (37.5 ± 0.83)% at 180 min. However，the FAPα-negative MCF-7 cells exhibited very low uptake of 131I-FAPI-03 at any time point. The IC50 measured by the competition assay indicated significant binding property of 131I-FAPI-03. Biodistribution studies revealed that 131I-FAPI-03 could rapidly accumulate in tumor sites with an uptake of (14.90 ± 3.21)% ID/g at 5 min post injection. At 2 h post injection，131I-FAPI-03 displayed the highest tumor-to-muscle ratio of 43.7 ± 16.7. All above results provided important reference for the development of novel FAPα-targeting tracers.Key words: FAPα; 131I; FAPI; glioma肿瘤相关成纤维细胞（CAF）作为肿瘤微环境的主要组成部分，积极参与细胞外基质结构的重塑、肿瘤侵袭与转移、免疫抑制和耐药生成过程[1-3]。
枸杞多糖对实验性肝癌小鼠肿瘤细胞FasL表达的影响及其抗肿瘤作用机制
枸杞多糖对实验性肝癌小鼠肿瘤细胞FasL表达的影响及其抗肿瘤作用机制（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：何彦丽,杜标炎,王慧锋,苏宁,肖霞【摘要】【目的】观察枸杞多糖(LBP)对实验性肝癌小鼠肿瘤细胞死亡分子Fas配体(FasL)表达的影响,探讨其抗肿瘤作用机制。
【方法】选用昆明种小鼠,随机分为模型组,LBP低、高剂量组(剂量分别为0625、1250 g·kg-1·d-1),各组均采用右侧腋下接种H22肝癌腹水型细胞复制荷瘤模型,从第3天开始按设计剂量给药,连续14 d。
采用苏木素—伊红(HE)染色观察各组肿瘤细胞密度、细胞核分裂计数及间质淋巴细胞浸润情况，采用免疫组化法观察各组小鼠肿瘤细胞FasL表达情况。
【结果】LBP低、高剂量组均可显著降低肿瘤细胞核分裂计数(P＜005)；LBP高剂量组可升高肿瘤间质淋巴细胞浸润程度(P＜005),HE染色显示在肿瘤边缘组织内见多量淋巴细胞浸润。
LBP低、高剂量组均可显著降低小鼠肿瘤细胞FasL阳性表达指数(P ＜005)；免疫组化染色显示模型组FasL表达强阳性,LBP低剂量组部分肝癌细胞内FasL表达阳性,FasL仅在LBP高剂量组少量肝癌细胞中有表达。
【结论】LBP抗实验性肝癌的效应可能与其能抑制FasL 表达,减少免疫活性细胞凋亡有关。
【关键词】枸杞多糖/药理学肝肿瘤/中药疗法肿瘤组织/病理学基因表达调控疾病模型,动物小鼠Abstract: ObjectiveTo observe the influence of Lycium Barbarum polysaccharide(LBP) on FasL expression in H22bearing mice and to explore its anti tumor mechanism. MethodsKunming mice were randomized into the model group, and low andhigh dose LBP (in the dose of 0625 and 1250 g·kg-1·d-1 respectively) groups. H22bearing mice models were induced through right subaxillary inoculation of H22ascitic cells. Three days after inoculation, LBP group were given LBP for 14 days. Hematoxylin and eosin(HE) staining method was used to examine the tumor cell density, tumor cell mitotic count, and lymphocyte infiltration in tumor interstitial tissue. FasL expression was observed in the three groups with immunohistochemical method. ResultsTumor cell mitotic count was decreased in the two LBP groups (P005), the score of lymphocyte infiltration in tumor interstitial tissue was increased,and lymphocyte infiltration was obvious after HE staining in high dose LBP group (P005). The index of FasL expression positive was decreased in both LBP groups (P005).FasL expression was strong positive in the modelgroup, and positive in partial liver tumor cells of low dose LBP group and in less liver tumor cells of high dose LBP group. ConclusionThe anti tumor mechanism of LBP is probably related with the inhibition of FasL expression and with the suppression of apoptosis of immune active lymphocytes．Key words:LYCIUM BARBARUM POLYSACCHARIDE/pharmacology;LIVER NEOPLASMS/TCD therapy;NEOPLASMS /pathology;GENE EXPRESSION REGULATION;DISEASE MODELS, ANIMAL;MICE死亡分子Fas(APO1/CD95)和其配体FasL相互作用是细胞凋亡的重要途径之一。
第十二章 细胞免疫(医学免疫学,人民卫生出版社第7版)
3）致死性攻击
CTL杀伤靶细胞存在细胞裂解和细胞凋亡两种方式， 以后者为主。CTL通过两条途径杀伤靶细胞
① 穿孔素/颗粒酶途径
穿孔素 颗粒酶
靶细胞膜穿孔 靶细胞膜不可逆性损伤
进入靶细胞 激活凋亡相关的酶系统 介导靶细胞凋亡
穿孔素(perforin)
② FasL/Fas途径、TNF-TNFR
活化CTL---FasL 靶细胞---Fas
IL-2是促进活化后T细胞增殖的最重要的细胞因子
1、CD4+T细胞的增殖和分化
初始CD4+T细胞
抗原
活化T细胞
表达多种细胞因子及受体
IL-2+IL-2R
T细胞克隆增殖
分化为Th0
IL-12,IFN-γ
IL-4
分化成Th1 分化成Th2
2、CD8+T细胞的增殖和分化
1． Th细胞依赖性 靶细胞一般仅低表达或不表达共刺激分子，
– 依赖Th：主要 为初始CTL
第三节 T细胞的免疫效应
一 Th和Treg的免疫效应 二 CTL的免疫效应 三 T细胞介导免疫应答的
生物学意义
一 、Th和Treg的免疫效应
（一）Th1细胞的效应
单个核细胞浸润为主 的炎症反应或迟发型炎症 反应
• 直接接触诱导CTL分化 • 释放CK募集和活化 Mo/Mφ、淋巴细胞，诱导 细胞免疫
辅助体液免疫 清除蠕虫䓁
哮喘等变态反 应性疾病
固有免疫
抗细菌、真菌和 病毒
银屑病、炎症性 肠病、多发性硬 化症、类风湿性
关节炎
辅助体液免疫 自身免疫
自身免疫性损 伤和疾病
负性免疫 调控
维持免疫 应答适度 性、防止 自身免疫
《医学免疫学》人卫第9版教材--高清彩色_201-232
（二）免疫效应分子的抗肿瘤作用
免疫细胞产生的免疫分子以及一些酶类分子等也参与了机体的抗肿瘤作用。
1. 抗体在抗肿瘤免疫中的作用 肿瘤细胞因表达肿瘤抗原而能激活B细胞分泌具有抗肿瘤作 用的抗体。这些抗体可通过如下机制发挥抗肿瘤作用（图22-5）：①激活补体系统溶解肿瘤细胞; ②IgG可介导巨噬细胞、NK细胞发挥ADCC效应;③抗体的调理吞噬作用;④抗体封闭肿瘤细胞上的 某些受体，如封闭肿瘤细胞表面转铁蛋白受体,抑制肿瘤细胞生长。
三、对病原体所致肿瘤的预防
已知多种病原体感染与高发的肿瘤有关，如HBV或HCV感染与原发性肝癌、HPV感染与宫颈 癌、EBV感染与鼻咽癌、HTLV.1感染与成人T细胞白血病等。制备相关的病原体疫苗或探索新的干 预方式将可能降低这些肿瘤的发生。成功的范例是HPV疫苗应用于宫颈癌的预防。20世纪80年代 初期，我国在肝癌高发地江苏省启东市开展的HBV疫苗的免疫接种在降低了乙型肝炎的发生率的同 时，也大大降低了肝癌的发生率。
第四节肿瘤免疫诊断和免疫防治
―、肿瘤的免疫诊断
通过生化和免疫学技术检测肿瘤抗原、抗肿瘤抗体或其他肿瘤标记物，有助于辅助对肿瘤患者的 诊断及肿瘤状态的评估。检测肿瘤抗原是最常用的肿瘤免疫诊断方法,例如,AFP水平的升高对原发 性肝细胞肝癌有诊断价值,CEA的升高有助于诊断结直肠癌,CA199的检出有助于胰腺癌的诊断,PSA的升高有助于前列腺癌的诊断。除了血清或其他体液内肿瘤标志物外，釆用特异性单抗免疫组 化或流式细胞术等对细胞表面肿瘤标志物的检测愈来愈受到重视，例如对淋巴瘤和白血病细胞表面CD分子的检测,有助于淋巴瘤和白血病的诊断和组织分型，为其治疗提供有价值的线索。此外，将放 射性核素如⑶I与特异性抗肿瘤单抗结合后，从静脉或腔内注入体内可清晰显示和追踪肿瘤的形态和 转移,已应用于肿瘤诊断。对肿瘤抗原、抗肿瘤抗体或其他肿瘤标记物水平的动态检测和评估还有助 于对肿瘤患者预后的判断。
FAP-1反义寡核苷酸联合卡铂对卵巢癌细胞 SKOV3凋亡的作用
FAP-1反义寡核苷酸联合卡铂对卵巢癌细胞 SKOV3凋亡的作用王滨;郑维国;辛晓燕;齐荣义;于月成;曹云新【期刊名称】《癌症（英文版）》【年(卷),期】2004(023)008【摘要】背景与目的:实验已证明, Fas相关磷酸酯酶-1( FAP-1)在卵巢癌细胞SKOV3中有高表达,可能对卵巢癌的发病与耐药具有重要意义.本研究应用反义核酸技术探讨 FAP-1反义寡核苷酸( FAP-1 ASODN)联合卡铂对 SKOV3细胞凋亡的作用.方法:反义核苷酸技术将 FAP-1 ASODN转染 SKOV3细胞.采用逆转录聚合酶链反应( reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测转染前后 FAP-1 mRNA的表达,采用流式细胞术( FCM)分析细胞周期与细胞凋亡率,噻唑蓝法( MTT法)测定 FAP-1 ASODN与40 μ g/ml卡铂共同作用后对 SKOV3细胞生长的影响.结果:经 FAP-1 ASODN处理 24 h后,与对照组及 FAP-1正义寡核苷酸( SODN)组比较,反义组的 FAP-1mRNA表达明显减弱. FCM结果显示,卡铂+ FAP-1 ASODN组在 24～ 72 h的细胞凋亡率明显高于单用 ASODN组及单用卡铂组,差异有显著性 (P<0.05),且可将细胞周期阻滞于 G1期; MTT结果显示,卡铂+ FAP-1 ASODN组 12～ 96 h的细胞抑制率约为单用 ASODN组的 1 5～ 2倍,约为单用卡铂组的 1 5倍,明显高于后两者,差异有显著性( P< 0 05);而在单用卡铂组与卡铂+ FAP-1 SODN组间无显著性差异( P >0.05).结论: FAP-1 ASODN转染可以有效抑制 FAP-1基因的表达,同时可以增强卵巢癌细胞对卡铂诱导凋亡的敏感性.【总页数】5页(P885-889)【作者】王滨;郑维国;辛晓燕;齐荣义;于月成;曹云新【作者单位】中国人民解放军第254医院,妇产科,天津,300142;第四军医大学,附属西京医院妇产科,陕西,西安,710032;第四军医大学,附属西京医院妇产科,陕西,西安,710032;中国人民解放军第254医院,妇产科,天津,300142;第四军医大学,附属西京医院妇产科,陕西,西安,710032;第四军医大学免疫学教研室,陕西,西安,710032【正文语种】中文【中图分类】R737因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
FAK调节胃癌、肝癌细胞恶性行为及相关基因表达的体外研究
FAK调节胃癌、肝癌细胞恶性行为及相关基因表达的体外研究程思楠;马妮;肖丽;何慧敏;杨倩;黎金媚;侯依凡;刘政;侯颖春【期刊名称】《陕西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(046)002【摘要】To explore the relationship between FAK expression of cancer cell malignancy,FAK expression was inhibited in SGC7901 and SMC7721 cells.The cell malignancy was checked using MTT,woundhealing,Transwell,flow cytometry,laser confocal microscope and electron microscope,and the associated gene expressions were detected using RT-PCR and western blot.The results indicated that down-regulation of FAK decreased the proliferation and motility of SGC7901 and SMMC7721 cells significantly,and the expressions of Src,Ras,Apex1 and Rgnef were markedly inhibited.By the results above,FAK enhances the malignancy of SGC7901 and SMMC7721 cells,and the expressions of Src,Ras,Apex1 and Rgnef.Our results help people to understand FAK roles as a signal player during the oncogenesis and tumor development under the regulation by complicated signal pathways.%以siRNA技术对人胃癌细胞(SGC7901)和肝癌细胞(SMMC7721)的FAK表达进行抑制以后,通过MTT、损伤修复、Transwell、流式细胞仪、激光共聚焦和电子显微镜等方法对这些细胞的细胞行为的变化进行了研究.同时,以RT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光法检测下调FAK表达对Src、Ras、Apex1、Rgnef的表达的影响.结果发现,FAK基因表达被抑制后两种癌细胞运动能力明显降低,细胞增殖力显著下降,Src、Ras、Apex1、Rgnef的mRNA表达水平以及蛋白质的表达水平也明显被抑制.结果表明,在癌细胞的转移、侵袭等过程中FAK有着非常重要的促进作用,而且FAK可以促进Src、Ras、Apex1、Rgnef的表达,这可能有助于基于复杂信号网络理解FAK在肿瘤发生、发展过程中作用.【总页数】8页(P74-80,87)【作者】程思楠;马妮;肖丽;何慧敏;杨倩;黎金媚;侯依凡;刘政;侯颖春【作者单位】陕西师范大学生命科学学院,陕西西安710119;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安710119;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安710119;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安710119;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安710119;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安710119;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安710119;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安710119;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安710119【正文语种】中文【中图分类】Q279【相关文献】1.双灵固本散对人胃癌细胞凋亡相关基因表达调节的研究 [J], 唐犁;李志宏;王涛;吴侯;王沂;郭江宁;翁新楚2.膀胱移行细胞癌细胞周期调节相关基因表达与肿瘤生物学行为的关系 [J], 寇伯君;关丽3.三氧化二砷对人胃癌及肝癌细胞株癌相关基因表达影响的比较研究 [J], 史立君;梁桃;庄丽维;刘铁夫;唐印华4.环巴胺对胃癌MKN45细胞株恶性生物学行为及VEGF、MMP基因表达的影响[J], 刘杲5.子宫内膜腺上皮细胞凋亡及相关基因表达调节的体外研究 [J], 薛爱玲;陈贵安因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
AS1411介导STAT3反义寡核苷酸靶向抗肿瘤的作用
AS1411介导STAT3反义寡核苷酸靶向抗肿瘤的作用刘宝修;黄建胜;朱乃硕【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2017(044)004【摘要】目的研究核仁素核酸适配体(AS1411)介导信号转导与转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)靶向抗肿瘤的作用.方法以RNA为耦联分子,连接靶向分子AS1411和效应分子ASO.以RNA Structure软件对预合成的不同RNA碱基耦联构建的嵌合体分子二级结构进行预测分析.以琼脂糖凝胶电泳检测嵌合体分子在血清及细胞裂解液中的稳定性.通过流式细胞术和荧光共聚焦实验检测AS1411介导STAT3 ASO进入肿瘤细胞的情况.通过CCK-8试剂盒检测STAT3 ASO对肿瘤细胞生长的抑制情况.通过RT-PCR和Western blot分析ASO对肿瘤生长相关基因表达的影响.结果 AS1411可介导STAT3 ASO高效进入肿瘤细胞,抑制C-myc、Cyclin D1、Bcl-xl和PD-L1基因的转录和翻译,并能抑制Du145细胞的生长.结论 AS1411可介导STAT3 ASO靶向进入肿瘤细胞,从而发挥抗肿瘤的作用.%Objective To observe the effect of AS1411-mediated signal transduction and activator of transcription 3 (STAT3) antisense oligonucleotide (ASO) targeting tumor cells.Methods RNA was used as coupling molecules to link the targeting molecules AS1411 and effector molecules ASO.Prediction and analysis of the secondary structure of the pre-synthesis of chimeric molecules by RNA Structure software.Agarose gel electrophoresis was used to test the stability of chimeric molecules inserum and cell lysis ing flow cytometry and confocal fluorescence microscope were used to estimate the internalization ofAS1411-mediated STAT3 ASO.Inhibitory effect of ASO on the growth of tumor cells was detected by CCK-8 kit.RT-PCR and Western blot was used to measure the expression levels of tumor related genes.Results STAT3 ASOs mediated by AS1411 can enter tumor cells efficiently to inhibit the transcription and translation of C-myc,Cyclin D1,Bcl-xl and PD-L1 gene,and also can inhibit the growth of Du145 cells.Conclusions AS1411-mediated STAT3 ASO can enter tumor cells and act as anti-tumor medicine.【总页数】8页(P422-429)【作者】刘宝修;黄建胜;朱乃硕【作者单位】复旦大学生命科学学院分子感染与免疫实验室上海200438;复旦大学生命科学学院分子感染与免疫实验室上海200438;复旦大学生命科学学院分子感染与免疫实验室上海200438【正文语种】中文【中图分类】R73-36【相关文献】1.半乳糖受体介导的c-myc反义寡核苷酸对人肝癌细胞的靶向投递作用 [J], 蒋建伟;张洹2.纳米氧化铁介导的mdr1反义寡核苷酸对人肠癌细胞的靶向投递作用 [J], 王金玉;武兆忠;陈江林;李娜玲;蓝文珍3.肝细胞靶向pH敏脂质体介导的硫代反义寡核苷酸对HCV 5′NCR基因表达的抑制作用 [J], 王小红;王升启;文思远;管伟;毛秉智4.穿膜素TAT介导的KDR-siRNA慢病毒载体的构建及其靶向肺癌A549细胞的抗肿瘤作用 [J], 郑旭;张简丽;任玥;王杰5.miR-19a-3p靶向调控CCND1基因介导FrA-1/IL-6/Stat3信号通路对乳腺癌侵袭转移的作用机制 [J], 陈秀迎; 王洪远因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肝癌发生免疫逃逸机制的研究进展
肝癌发生免疫逃逸机制的研究进展
张虹;晁旭
【期刊名称】《中西医结合肝病杂志》
【年(卷),期】2022(32)10
【摘要】肝癌是当前癌症最常见的死亡原因,手术、消融及放化疗是肝癌的主流治法^([1])。
然而,因多数肝癌患者难以做到早期发现和治疗,在术后及放化疗后其复发率和转移率仍然很高。
近期研究发现,免疫逃逸是肿瘤患者治疗后复发和转移的重要机制^([2])。
免疫系统在免疫清除和肿瘤发展之间发挥重要平衡作用。
【总页数】4页(P953-956)
【作者】张虹;晁旭
【作者单位】陕西中医药大学基础医学院;陕西中医药大学第二附属医院
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11
【相关文献】
1.肝癌与凋亡抵抗性--肝癌发病进展中的免疫监视逃逸机制
2.幽门螺杆菌感染引起的免疫应答与免疫逃逸机制研究进展
3.多发肝癌免疫基因组特征及免疫逃逸机制的探究
4.肝癌免疫逃逸与免疫治疗的研究进展
5.中医药调节肠道菌群及其代谢产物在肝癌发生发展中的免疫机制研究进展
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反义VEGF寡核苷酸抑制小鼠肺癌作用的实验研究
反义VEGF寡核苷酸抑制小鼠肺癌作用的实验研究孙杰;吴斌;梁标【期刊名称】《中华肿瘤防治杂志》【年(卷),期】2008(15)14【摘要】目的:观察阳离子脂质体介导反义血管内皮生长因子(VEGF)寡核苷酸对肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用。
方法:取肺癌细胞悬液建立小鼠肺癌动物模型后,选择40只随机分成4组,分别为空白对照组、实验对照组、VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组和VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组。
治疗结束后行大体、HE染色观察,并观察小鼠营养状况和症状。
结果:对照组、VEGF反义寡核苷酸治疗组和VEGF正义寡核苷酸治疗组平均瘤质量分别为(7.14±1.68)、(4.26±1.37)和(7.33±1.56)g,VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为58.2%和7.4%,ASODN组与对照组及SODN组比较差异有统计学意义,χ2分别为8.21和8.04,P值均<0.01。
结论:阳离子脂质体介导反义VEGF寡核苷酸对小鼠肺癌的生长具有显著抑制作用,未发现明显的毒副反应,阳离子脂质体介导的基因转染技术有望成为治疗癌症的新方法。
【总页数】4页(P1057-1060)【关键词】肺肿瘤;血管内皮生长因子A;基因疗法【作者】孙杰;吴斌;梁标【作者单位】广东医学院附属医院呼吸内科【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.硫修饰脂质体包裹VEGF反义寡核苷酸对肺癌血管生成及转移的抑制作用 [J], 李春艳;成小松;李曦2.反义寡核苷酸对 Lewis肺癌细胞合成VEGF的抑制作用 [J], 王颖;林春艳;李春艳3.脂质体介导VEGF反义寡核苷酸对肺癌微血管密度及VEGF表达的抑制作用 [J], 李春艳;成小松;李曦4.联合应用Survivin和VEGF反义寡核苷酸对肺癌A549细胞的抑制作用 [J], 褚静英;谢小芳;颜洁;朱雪明;陆玉霞;陈瑶5.VEGF反义寡核苷酸抑制小鼠Lewis肺癌生长的研究 [J], 李春艳;成小松;王颖;林春艳;崔美芝;李景鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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FasL反义寡核苷酸逆转肝癌细胞免疫逃逸的实验研究(一)作者：张娇刘倩王杰毛海婷【摘要】目的：研究FasL反义寡核苷酸对肝癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸的逆转作用。
方法：用流式细胞术检测肝癌细胞系HepG2.2.15细胞表面Fas、FasL的表达及Jurkat细胞表面Fas的表达；用HepG2.2.15细胞与Jurkat细胞共培养方法，研究FasL诱导T细胞凋亡的功能；用脂质体介导法转导FasL反义寡核苷酸入肝癌细胞，并通过检测细胞表面FasL表达、RTPCR及细胞共培养方法研究FasL反义寡核苷酸转导对肝癌细胞免疫抑制的逆转作用。
结果：①HepG2.2.15细胞低表达Fas，却表达有功能的FasL，与高表达Fas的Jurkat细胞共培养可诱导后者凋亡；②肝癌细胞转入FasL反义寡核苷酸后，FasLmRNA降低；细胞表面FasL表达下降；与Jurkat细胞共培养，Jurkat细胞的凋亡率下降。
结论：肝癌细胞表达的FasL可抑制T细胞的免疫功能，是肝癌细胞免疫逃逸的重要机制之一；FasL反义寡核苷酸转导可以逆转肝癌细胞的免疫抑制作用。
【关键词】肝肿瘤・Fas/FasL・免疫逃逸・寡核苷酸类，反义TheFasLantisenseoligonucleotidecouldreversetheimmuneescapeinhepatoc arcinomacellline【ABSTRACT】Objective:ToinvestigatethereverseactionofFasLantisenseoligonucleotideont heimmuneescapethroughFas/FasLpathwayinhepatocarcinomacells.Methods:Fas、FasLexpressionofhepatocarcinomacelllineHepG2.2.15andFasexpressionofJ urkatcellwereexaminedbyflowcytometry.FasLfunctionofinducingTlymphoc ytestoapoptosiswasassessedbycocultrueassaysinvitrousinghepatocarcinom acellsHepG2.2.15andJurkatcells.Thehepatocarcinomacellsweretransfected withFasLantisenseoligonucleotidemediatedbylipofectin.Thereverseactionw asinvestigatedbythewaysofdetectingtheFasLexpression,RTPCRandcoculture assays.Results:①HepG2.2.15cellsexpressFasataver ylowlevel,butexpressfu nctionalFasLwhichcouldinduceJurkatcellswithhighFasexpressiontoapoptosi sincocultrueassays,②AfterthehepatocarcinomacellsweretransfectedwithF asLantisenseoligonucleotide,theFasLmRNA,therateofFasLexpressionandthe apoptoticrateofJurkatcellsincocultureassaysalldecreased.Conclusion:FasLex pressedbythehepatocarcinomacellscouldinhibittheimmunefunctionofTlym phocytes.Itwasoneoftheimportantmechanismsofimmuneescapeinhepatoc arcinomacells.FasLantisenseoligonucleotidecouldreversetheactionofimmu neinhibition.【KEYWORDS】Liverneoplasms・Fas/FasL・Immuneescape・Oligonucleotide,antisense近年研究发现，某些肿瘤细胞表达FasL，可以与激活的T细胞表面的Fas结合，诱导T细胞凋亡，从而反击宿主免疫系统，逃避免疫监视。
本实验对人肝癌细胞株HepG2.2.15细胞FasL的表达及功能进行检测，探讨肝癌细胞通过Fas/FasL途径的免疫逃逸机制，并设计合成特异的FasL反义寡核苷酸（ASODN），封闭肝癌细胞FasL 的表达，以期阻止免疫细胞凋亡，逆转肿瘤细胞的免疫逃逸。
1材料和方法1.1仪器和试剂兔抗人Fas、FasL多克隆抗体，为SantaCruz公司产品。
FITC标记的羊抗兔IgG抗体，购自华美生物公司。
鼠抗人FasL中和性单克隆抗体NOK2、AnnexinVFITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪FACSCan,均为美国BD公司产品。
脂质体OligofectamineTMReagent,为美国Invitrogen公司产品。
TRIzolReagent、ReverseTranscriptase、TaqDNApolymerase等RTPCR用试剂，均购自上海生工生物工程技术公司，引物及FasL反义、正义寡核苷酸（SODN），由上海生工生物工程技术公司合成。
1.2细胞培养人肝癌细胞株HepG2.2.15及Jurkat细胞由中国医学科学院提供。
HepG2.2.15细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养液中；Jurkat 细胞培养于含10%小牛血清的RPMI1640培养液中。
37℃、5%CO2、饱和湿度下培养。
1.3流式细胞术（FCM）检测肝癌细胞表面Fas、FasL表达及Jurkat细胞表面Fas表达收集正常生长的HepG2.2.15细胞及Jurkat细胞，PBS洗两次，分别加入1∶30稀释的兔抗人Fas、FasL抗体，用PBS代替一抗作阴性对照，4℃反应30min；PBS洗一次，加入1∶90稀释的FITC标记的羊抗兔IgG抗体，4℃避光反应30min，PBS洗一次，加入PBS500μl，上机检测。
1.4肝癌细胞FasL功能检测HepG2.2.15细胞2×106/孔接种至6孔培养板，培养至细胞密度达80%以上时，去除培养液并冲洗板孔。
实验组（A组）：HepG2.2.15细胞加入Jurkat细胞4×105/孔；NOK2处理组（B 组）：HepG2.2.15细胞加入10μg/ml的FasL中和抗体NOK2400μl，孵育1h后加入与A组等量Jurkat细胞；对照1组（C组）：Jurkat细胞单独培养；对照2组（D组）：Jurkat细胞加入与B组等量NOK2。
继续培养24h，收集悬液的Jurkat细胞，加PI及AnnexinVFITC染色，FCM检测细胞凋亡。
可出现四个细胞群；死亡细胞（Annexin-/PI+）、正常活细胞（Annexin-/PI-）、早期凋亡细胞（Annexin+/PI-）、中晚期凋亡细胞（Annexin+/PI+）。
1.5FasL反义寡核苷酸转染肝癌细胞设计FasLASODN序列与FasLmRNA 的翻译起始密码子互补为：5’GTAATTGAAGGGCTGCTGCAT3’；FasLSODN 序列：5’ATGCAGCAGCCCTTCAATTAC3’，均经硫代化修饰。
HepG2.2.15细胞1.5×106/孔接种至6孔培养板，培养至细胞密度达30%~50%时，去除培养液并用无血清培养基洗一次，每孔加入无血清DMEM800μl。
分别将6，10，14μl浓度为20μmol/L的FasLASODN/SODN及按4∶1体积比的OligofectamineTM各自用无血清DMEM稀释后，一一对应混匀，各形成FasLASODN/SODNOligofectamine复合体200μl，室温放置15~20min后，分别加入细胞中，并设未处理对照组。
转染液中FasLASODN/SODN的浓度分别为120，200，280nmol/L，培养4h后，撤出转染液，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液，继续培养48h后收集细胞。
1.5.1FCM检测ASODN/SODN转染细胞后FasL表达收集不同剂量各处理组及对照组细胞，FCM检测FasL的表达，方法同前。
1.5.2半定量RTPCR法检测ASODN/SODN转染细胞后FasLmRNA水平的变化收集FasLASODN/SODN的转染浓度为200nmol/L的处理组及对照组细胞，按TRIzolRengent操作说明提取总RNA，逆转录合成cDNA，然后PCR扩增，FasL引物为5’GGATTGGGCCTGGGGATGTTTCA3’，和5’TTGTGGCTCAGGGGCAGGTTGTTG3’，扩增片段344bp;βaction引物为5’GTGGGGCGCCCCAGGCACC3’和5’CTCCTTAATGTCACGCACGATTT3’，扩增片段506bp。
循环参数：变性96℃15sec，退火55℃30sec，延伸72℃3min，扩增40个循环。
扩增产物点样到 1.5%琼脂糖凝胶中，加DNAmarkerDL2000作参照，35V/cm，电泳1h，GelDos1000凝胶图像分析仪扫描各条带，用MolecularAnalysis软件，以βactin基因作内参照，分析各组FasLmRNA的相对表达量。
1.5.3FCM测Jurkat细胞与4组HepG2.2.15细胞共培养后细胞凋亡变化取FasLASODN/SODN转染浓度为200nmol/L的处理组及对照组细胞，去除培养液并冲洗板孔。
加入Jurkat细胞5×105/孔，继续培养24h后，收集悬浮的Jurkat细胞，加PI及AnnexinVFITC染色，FCM检测细胞凋亡。
1.6统计学方法多组均数两两比较采用q检验，两均数比较采用t检验。