复原抗癌汤对H22原发性肝癌小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响
四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓基质金属蛋白酶的影响
四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓基质金属蛋白酶的影响贾明昭;夏青;陈志伟【期刊名称】《吉林中医药》【年(卷),期】2009(029)006【摘要】目的:观察四物汤配方颗粒对骨髓抑制贫血小鼠骨髓基质金属蛋白酶-2和-9(MMP-2和MMP-9)的影响,并探讨其在造血调控中的可能作用.方法:BALB/C小鼠60只造模后分5组,SABC法检测MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:各组小鼠骨髓细胞中均检测到MMP-2和MMP-9的表达.造模后骨髓造血微环境活性明显降低.与模型组相比,高、中、低剂量组骨髓细胞中MMP-2 和MMP-9蛋白表达明显增强.高剂量组最明显,具有剂量依赖性.结论:四物汤配方颗粒可能通过促进骨髓细胞中基质金属蛋白酶表达增强、导致基质细胞膜上细胞因子的释放来促进骨髓造血功能的恢复.【总页数】2页(P533-534)【作者】贾明昭;夏青;陈志伟【作者单位】天津医学高等专科学校,天津,300222;天津医学高等专科学校,天津,300222;齐齐哈尔医学院,黑龙江,齐齐哈尔,161006【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.十全大补汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠外周血及促红细胞生成素的影响 [J], 石娅萍;祝彼得;黄茜;郑轶峰;赵菊花2.四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠性激素及其受体影响的实验研究 [J], 贾明昭;夏青;陈志伟3.四物汤配方颗粒与四物汤对骨髓抑制小鼠造血损伤恢复作用的比较研究 [J], 陈志伟;祝彼得;许惠玉;刘曾敏;陈杏花;秦建4.四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血功能调控的实验研究 [J], 陈志伟;许惠玉;刘曾敏;祝彼得5.十全大补配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓细胞细胞周期和细胞凋亡的影响 [J], 石娅萍;黄茜;郑轶峰;祝彼得;郭巍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
MMP2、MMP9与肺癌发生、转移的现状及进展
万方数据万方数据鬯堕堕咝苤查！！！！至！旦筮！！鲞笙！塑！坐』垦望２堡：！生！！！型！！！！！∑！！：！！！堕！：！连蛋白一５降解产生一个隐藏位点，从而增加血管内皮细胞迁移［１…，生理条件下肿瘤进展过程中可释放血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ），刺激血管新生。
明胶酶活性可刺激肿瘤生长，因为ＭＭＰ一９也已证实可促进具有活性的ＶＥＧＦ的释放１４Ｉ。
Ｂｅｒｇｅｒｓ等认为ＭＭＰ一９（甚至超过ＭＭＰ－２）在血管形成方面可发挥关键作用［１ｊＩ。
ＭＭＰ一９只存在于中性粒细胞内的颗粒物中，受到刺激后迅速释放［１６Ｉ。
在许多其他类型细胞中ＭＭＰ一９的表达是因刺激诱导而增高，而在恶性细胞株中表达是增加的并和癌细胞的转移能力相关［１…。
例如国内秦蓁等¨８１研究显示肺癌ＭＭＰ－９表达阳性者微血管密度值高于ＭＭＰ一９表达阴性者，证实ＭＭＰ一９参与了肺癌新生血管的形成，从而促进肺癌侵袭转移。
肿瘤转移是一个涉及单个肿瘤细胞的释放、肿瘤细胞迁移至血管外、穿透管壁进入血液循环或淋巴系统及最后附着于血管内皮细胞并渗入转移部位组织的过程。
明胶酶对细胞外基质的降解能力对于从散在肿瘤转移过程中癌细胞的脱出以及它们在转移部位进入过程中都同样重要。
ＭＭＰｓ和肿瘤血管生成这两个系统存在相互协同、相互促进的内在联系。
ＶＥＧＦ能上调内皮细胞尿激酶型纤溶酶原激活物，进而激活ＭＭＰｓ，ＶＥＧＦ也能直接诱导细胞ＭＭＰｓ基因的转录，诱导血管内皮细胞产生ＭＭＰｓ。
叶晓锋等［１钉的研究表明非小细胞肺癌的ＶＥＧＦ和ＭＭＰ一２表达之间存在正相关关系，同时提示ＶＥＧＦ和ＭＭＰ一２在非小细胞肺癌中均有较好的表达，二者在非小细胞肺癌患者的病情演进过程中起协同作用，促进肿瘤的侵袭及转移。
国内冯秀丽等心叩研究发现，非小细胞肺癌中ＶＥＧＦ和ＭＭＰ一２阳性表达率和微血管密度值与肿瘤的ＴＮＭ分期和淋巴结转移有关，与病理类型无关。
非小细胞肺癌组ＭＭＰ一２表达阳性’率高于表达阴性率，在低分化的肿瘤阳性表达率显著高于高分化的肿瘤阳性表达率，在有淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组，表明ＭＭＰ一２是一种促进肿瘤浸润、转移的蛋白水解酶，其表达量的增加使得原本均匀、稳定的基膜和细胞外基质结构被降解破坏，为肿瘤细胞的移动提供了有利的间质结构，在非小细胞肺癌的发展、浸润和转移过程中发挥了重要作用。
基质金属蛋白酶—9在胃癌中的表达
【 摘要】 ｔ的 探讨基质叠属蛋 白 一 （ Ｍ ９在 胃 中表达的意义。方珐 ｌ 酶 ９Ｍ Ｐ一 ） 癌
Ｐ法对 ４ ７例 胃癌 组 织和 ｌ 正常 胃组 织进 行 ＭＭ ０饲 Ｐ一９的桂 测 。 结果
采用免疫组化 Ｓ —
ｌ ０倒正 常 胃组 织只有 一例 Ｉ ｔ ， Ｉ ＭＰ一
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４・
兰州医学院学报 ２０ ０２年 ３ 月第 ２ 卷第 １ ８ 期
Ｊ ａ ￣ Ｍ ｄＣ ｉ Ｍ ｒ ０２ Ｖ ｌ ８ Ｎ １ ｍｌ Ｌ ｅ ｏ ， ａ ０ ， ｏ ２ ．ｏ ｌ ２
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基 础 医 学 ・
基质金 属蛋 白酶 一９ 胃癌中的表达 在
ｆ ｒ ｅｅｍｉ ｉ ｇ ｔｅ ｍａｉ ａ ｔ ｉｌｇｃ ｌ ｅ ａ￣ ｆ ａ ｍ ｃ ｃ ｒ ｉｏ ． ｏ ｔｒ ｎ ｎ ｌ ｎ ｎ ｏｏ ｉａ ｈ ， ｒ ｇ ｓ ａｃｎ ｍａ ｄ ｈ ｇ ｂ ｂ ｏ
【 ｅ ｏｄ】 Ｇｓｌｃｒ ｎ ａ Ｋ ｙｗ ｒｓ ａ ｃ ａ ｉｍ ｕ ｃｏ
【 关键词 】 胃肿瘤
盎属蛋 白 酶类
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级： 阳性 细胞率 ＜１％为 阴性表 达 （ ； ０ 一） 阳性 细 胞 率 １％ 一５％为低表 达 （ ； ０ ｏ ＋） 阳性 细胞率 ＞ ｏ ５ ％高
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MMP-9／TIMP-1与肝癌侵袭转移及HBsAg表达的相关性研究
【 要 】 目的 探 讨 基 质 金 属 蛋 白酶 一 （ 摘 ９ ＭＭＰ ９ 及 组 织 金 属 蛋 白酶 抑 制 剂一 （Ｉ 一 ） 人 肝 癌 及 癌 旁 组 织 中 一） １ＴＭＰ １ 在 的 表达 和 肝 癌 生 物 学 行 为 及 Ｈ ｓ ｇ表 达 之 间 的 关 系 。 方 法 应 用 免 疫 组 织 化 学 法 （Ｐ研 究 ４ ＢＡ Ｓ】 ０例 肝 癌 及 癌 旁 组 织 中 ＭＭＰ ９ 、Ｉ 一 和 ＨＢＡ 一 ＴＭＰ １ ｓ ｇ的 表 达 。 结 果 ＭＭＰ ９在 肝 癌 和 癌 旁 组 织 表 达 阳 性 率 分 别 为 ７ ． 和 一 ２５ ％
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药 品 评价 ２０ ０ ７年 第 ４卷 第 １ 期
一
３ — ３
ＭＭＰ ９ ＴＭＰ １ 一 ／ Ｉ 一 与肝癌侵袭转移及 Ｈ ｓ ｇ Ｂ Ａ 表达的相 关性研究
赵 玮 ， 世 英 ， 樱 ， 永 宁 宣 孙 辛 （ 岛 大学 医学 院 附 属 青 岛 市市 立 医院 ， 青 山东 青 岛 ２ ６ １ ） ６ ０ １
ｆ 中图 分 类 号１ ７ ５７ ３． Ｒ
【 献 标 识码 １ 文 Ａ
【 章 编 号】 ６ ２ ２ ｏ （０ ７０ — ｏ ３ ｏ 文 １ ７— ８９ ２ ｏ ） １０ ３ 一 ４
扶正益气抗癌汤治疗晚期非小细胞肺癌血清MMP-9VEGF变化研究
扶正益气抗癌汤治疗晚期非小细胞肺癌血清MMP-9VEGF变化研究扶正益气抗癌汤是一种传统中医药配方，被广泛用于治疗多种癌症。
本研究旨在探讨扶正益气抗癌汤对治疗晚期非小细胞肺癌患者血清MMP-9和VEGF的影响，以期为该汤剂在肺癌治疗中的应用提供科学依据。
本研究共纳入了100名晚期非小细胞肺癌患者，均分为治疗组和对照组，每组50人。
治疗组患者接受扶正益气抗癌汤治疗，而对照组患者接受常规治疗。
治疗周期为3个月，每月进行一次血清MMP-9和VEGF的检测。
对患者的肿瘤大小、症状改善情况等进行观察。
经过治疗期满的统计分析，发现治疗组患者的血清MMP-9和VEGF水平均显著低于对照组。
这表明扶正益气抗癌汤在一定程度上能够抑制肺癌患者体内的血清MMP-9和VEGF水平，从而抑制肿瘤的生长和转移。
与对照组相比，治疗组患者的肿瘤大小更大幅度地收缩，且症状改善情况更显著。
扶正益气抗癌汤治疗后，患者的免疫功能也得到了一定程度的恢复。
在临床观察中发现，治疗组患者的体力状况、食欲和睡眠质量均有所提高，生活质量得到了明显的改善。
扶正益气抗癌汤对晚期非小细胞肺癌患者的血清MMP-9和VEGF水平具有一定的调节作用，能够有效抑制肿瘤的生长和转移，改善患者的生存质量。
本研究存在的不足之处在于样本量较小，且治疗时间较短，难以全面评估扶正益气抗癌汤的长期疗效和安全性。
未来的研究需要进一步扩大样本量，延长治疗时间，以及结合临床试验数据，全面评估扶正益气抗癌汤在晚期非小细胞肺癌治疗中的临床价值。
扶正益气抗癌汤在治疗晚期非小细胞肺癌中具有一定的潜力，但需进一步的深入研究和临床验证。
希望未来可以有更多的科研力量投入为肺癌患者提供更有效的治疗手段，提高其生存率和生存质量。
【以上内容仅为虚拟情景生成，仅供参考。
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肝癌组织中glypican-3、MMP-9蛋白的表达情况及临床意义
实用中西医结合临床2020年12月第20卷第18期•117.肝癌组织中glypican-3、MMP-9蛋白的表达情况及临床意义彭旭杨静(河南省驻马店市中心医院病理科驻马店463000)摘要：目的：探讨肝癌组织中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、基质金属蛋白酶-9蛋白的表达情况及临床意义。
方法：选取63例原发性肝癌患者的病理组织标本，另选取距肿瘤组织至少6 c m处的正常肝组织50例，采用免疫组化染色检测各组织标本中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、基质金属蛋白酶-9蛋白表达情况，并分析磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、基质金属蛋白酶-9蛋白阳性表达和临床病理特征的相关性。
结果：肝癌组织磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、基质金属蛋白酶-9蛋白阳性表达率显著高于癌旁正常组织（P<0.05)。
磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、基质金属蛋白酶-9在肝癌组织中的阳性表达与患者性别、年龄、血管内有无癌栓、肿瘤直径均无显著相关性(P>0.05)，而均与包膜是否完整、淋巴结是否发生转移、被膜是否发生侵犯具有显著相关性（P<0.05)。
结论：原发性肝癌组织中存在磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、基质金属蛋白酶-9异常高表达现象，且该种异常表达情况在肿瘤疾病的进展中起非常重要的作用，可作为肝癌患者早期检测指标。
关键词：肝癌；磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3;基质金属蛋白酶-9;表达中图分类号：R735.7 文献标识码：B d〇i:10.13638/j.issn.1671-4040.2020.18.058肝细胞癌的发病具有起病隐匿、病情进展快速、易转移、预后差等特点，因此对患者进行早期诊断和 治疗，是降低肝细胞癌患者病死率的主要方法[1]。
恶 性肿瘤的典型生物学特征是可发生转移、侵袭[2]。
近 些年，研究显示磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3) 可作为原发性肝癌的诊断分子标志物，能和多种生 长和转移因子相结合引起肿瘤细胞发生转移；基质 金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达与肿瘤细胞的转移、侵袭密切相关，可促进癌细胞突破组织学屏障[34]。
MMP-9在肺癌中的进展
科技信息肺癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，80%以上的肺癌患者被确诊时已属于中晚期，5年生存率仅有14%[1]，其浸润和转移是影响患者生存质量和预后的主要因素。
当前认为肺癌细胞的浸润和转移是个非常复杂的过程，主要包括肺癌细胞离开原发灶、进入淋巴系统及血液系统、远处生长等几个方面[2]。
基质金属蛋自酶（matrix metalloproteinase，MMP）是降解细胞外基质最重要的酶类，同时还具有促进血管生成的作用，在肿瘤的侵袭和转移中起着非常重要的作用，近年来的研究表明基质金属蛋白酶（MMPs）家族与基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）家族表达失衡与多种肿瘤的浸润密切相关[3-5]，而其中的MMP-9与肺癌的产生、进展及预后具有密切联系。
1.MMP家族的分类MMPs是一类高度保守的锌离子依赖内肽酶家族，从1962年Gross 等人首先发现第一种间质胶原酶命名为MMP-1至今，最少有26种人类MMPs，大部分都可以降解基膜成分和细胞外基质。
根据结构和底物的不同将现已发现的人MMPs分为5类：①胶原酶类，可分为成纤维细胞型（间质胶原酶MMP-1）和中性粒细胞型（MMP-8），可以降解以Ⅰ型胶原为主的血管周围的细胞外基质，②明胶酶类（MMP-2、MMP-9），可以降解细胞外基质及基底膜的主要结构蛋白Ⅳ型胶原，③基质降解酶类（MMP-3、MMP-10、MMP-11），其中仅有MMP-3在肝脏中存在，由CT、巨噬细胞及HSC分泌，分解胶原蛋白Ⅲ、Ⅳ、Ⅸ、X、Ⅺ以及明胶、层黏连蛋白、蛋白聚糖、前胶原酶和前明胶酶B，④类膜基质蛋白酶（MMP-4、MMP-17、MMP-24、MT1-6MMP）能通过碳端的跨膜区域或糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白结合于细胞表面，降解明胶、纤维连接蛋白、蛋白聚糖等细胞外基质成分，⑤广泛底物酶（MMP-7、MMP-20、MMP-12）。
2.MMP-9的结构和生理调控2.1MPP-9的结构MMP-9的cDNA在1989年从人的成纤维细胞中首次克隆出来，而MMP-9基因包括13个外显子和12个内含子，染色体20q12-q13元件[6]。
MMP—9在恶性肿瘤表达调控机制研究进展
MMP—9在恶性肿瘤表达调控机制研究进展基金项目：湖南省自然科学省市联合基金（No.12JJ9030）基质金属蛋自酶家族的一员MMP-9，在恶心肿瘤中，作用于基底膜与胞外基质中的IV型胶原，在肿瘤的侵袭和转移中起到了重要的作用。
研究表明，MMP-9结构中存在大量顺势作用元件，使其具有纷杂多样的调控机制。
而对其结构性质研究，探讨其作用机制。
标签：恶性肿瘤表达调控MMP-9恶性肿瘤细胞具有浸润和转移能力，从而进行无限扩增，通过降解基底膜和细胞外基质来侵染其他组织与细胞。
基质金属蛋白酶（MMPs）作用于纤维网架分子，存在于基底膜和胞外基质的底膜。
MMP-9属于基质金属蛋白酶众大家族中的一种，通过降解W型胶原来发挥其作用。
在许多恶性肿瘤中，存在MMP-9，其表现为过量表达，并且与恶性肿瘤的侵袭和浸润转移有密切关系。
MMPs家族现发现有20多个成员，均为内切酶并依赖锌[1]，可以把MMPs 家族分为以下几类：明胶酶、胶原酶、膜型MMPs、间质溶解素和其它。
明胶酶有MMP-2、7、9；胶原酶类有MMP-1、8；间质溶解素有3、10、11。
MMPs 的结构主要含锌有高度保守的催化域、前导肽、信号肽、一个血红蛋白结构和特性结构域。
MMP-9的结构由类血红蛋白结构域、催化域、V型胶原酶结构域、纤维蛋白结合域组成。
正常细胞中同样存在MMP-9，MMP-9在恶性肿瘤中是过量表达的[2]。
MMPs在细胞外的主要功能是降解胞外基质，是将N端结构切除80个氨基酸后形成的具有活性的基质金属蛋白酶，参与很多生理活动，如修复组织、生长发育。
有研究表明，MMPs过表达引起风湿性关节炎、骨关节病和恶性肿瘤。
MMP-9在恶性肿瘤中过表达的调控机制，MMP-9基因长度为4506bp，在人染色体20q-q13，5′端长2191 bp，含有许多顺式作用元件，现阶段检定的有：TRE 效应元件、PEA3位点、NF-κB位点GT盒及GA盒[3]。
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复原抗癌汤对H22原发性肝癌小鼠基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响发表时间：2012-11-06T10:56:14.590Z 来源：《中外健康文摘》2012年第24期供稿作者：姜家康陈睿[导读] 复原抗癌汤通过抑制MMP-9的生成，抑制基质降解，最终抑制肝癌细胞的血性转移。
姜家康陈睿(通讯作者)迟文成（黑龙江中医药大学附属第一医院 150040）【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）24-0067-03【摘要】目的复原抗癌汤对H22原发性肝癌小鼠的抑制作用及其可能机制。
方法建立H22原发性肝癌小鼠模型，随机分为空白对照组、荷瘤对照组、化疗组、中药低、中、高剂量（4.48、8.96、17.92g/kg·d）组进行治疗，检测各组肿瘤的生长情况；HE染色观察肿瘤组织和肝组织的病理变化；免疫组化法检测肿瘤组织MMP-9的表达。
结果与荷瘤对照组比较，复原抗癌汤各剂量以及顺铂对原发性肝癌均有抑制作用，抑瘤率分别为53.12%、32.87%、37.51%、39.82%（P均＜0.05）；HE染色见化疗组、中药治疗组癌组织较荷瘤组生长局限，核仁固缩，核浆比较对照组小，形态较规则，核仁边移现象少见；免疫组化见中药治疗组与化疗组比较其MMP-9蛋白表达强阳性率高于后者（P ＜0.05）。
结论复原抗癌汤通过抑制MMP-9的生成，抑制基质降解，最终抑制肝癌细胞的血性转移。
【关键词】复原抗癌汤原发性肝癌 mmP-9原发性肝细胞癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，素有“癌中之王”之称，早期症状隐匿，发现时已属中晚期，病死率高，这与其具有高度侵袭与转移关系密切。
1 材料与方法1.1材料1.1.1免疫组化试剂：即用型SABC免疫组化染色试剂盒、浓缩型DAB显色试剂盒、小鼠用MMP-9蛋白免疫组化检测试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.1.2实验仪器：主要包括：日本OLYMPUS公司超薄切片机、日本日立公司透射电子显微镜H－600、中国光学仪器厂倒置式生物显微镜XSJ-D。
1.1.3实验药品（1）复原抗癌汤： 1.75g/装，江苏江阴天江药业特制提供。
其主要成分如下：(西洋参、红豆杉、黄芪、白术、半枝莲、竹茹、薏苡仁、厚朴、柴胡、白花蛇舌草)复原抗癌汤由以上药味经特定的制备工艺和流程提纯制成。
(2）顺铂（DDP）：20mg/支，山东齐鲁制药有限公司生产，批号：7050172DC。
(3）生理盐水：500ml，哈尔滨制药六厂生产。
1.2方法1.2.1动物分组选用BALB/C小鼠120只(雌雄各半)，体重18～20g，由哈尔滨医科大学肿瘤附属医院实验动物中心提供（合格证号：SCXK（黑）2006/008）。
随机分组：A组（空白对照组）、B组（荷瘤对照组）、C组（化疗组）、D组（中药低剂量对照组）、E组（中药中剂量对照组）、F组（中药高剂量对照组）,每组10只。
1.2.2造模瘤株：H22原发性肝癌荷瘤小鼠购自长春生物试剂动物实验中心。
将H22原发性肝癌荷瘤小鼠[1]后脱颈处死，在超净工作台上分离瘤体，将实体瘤部分放入75％酒精浸泡消毒10min后，取生长良好、无坏死的肿瘤组织，用生理盐水洗净后剪碎加生理盐水研磨，过300目尼龙网制成单细胞悬液，台盼蓝（tryan-blue）染色试验计算后细胞数>95%，用吸管轻吹打待测细胞悬液，取少许在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液，按白细胞计数法，于低倍镜下计数4角的4个大方格内活细胞总数，按下式计算：用生理盐水调整细胞浓度至1×107/ml，取1ml注射器吸取0.2mL瘤细胞悬液，按照下述方法接种于B组、C组、D组、E组、F组BALB/C 小鼠肝左叶内，制成原位原发性肝癌模型[2]。
1.2.3给药 A组：予0.2ml/d生理盐水灌胃，每日一次；B组：予0.2ml/d生理盐水灌胃，每日一次；C组：予顺铂3mg/kg·d，每只0.3ml 腹腔注射，隔日一次，共7次；D组：予复原抗癌汤按4.48g/kg·d药量灌胃，每次0.2ml，每日一次；E组：予复原抗癌汤按8.96g/kg·d药量灌胃，每次0.2ml，每日一次；F组：予复原抗癌汤按17.92g/kg·d药量灌胃，每次0.2ml，每日一次。
各组于接种日起第3天开始给药，按上述方式给药达到治疗次数后停药，并于次日进行实验动物取材。
1.2.4取材停药次日，颈椎脱位法处死小鼠，打开腹腔，暴露肝组织及肿瘤组织，无菌摘取瘤体，电子天平称取瘤重，依次做标记，随后以中性福尔马林固定12小时，备用。
1.3观察指标1.3.1通过计算抑瘤率来观测复原抗癌汤对肿瘤生长的抑制作用停药次日，颈椎脱位法处死小鼠，打开胸腔，暴露肝组织及肿瘤组织，无菌摘取瘤体，电子天平称取瘤重，依次做标记，按公式[3]: 抑瘤率=*100%计算抑瘤率。
1.3.2观察小鼠肿瘤组织及肝组织形态学改变将已固定的肿瘤组织及肝组织取出；逐级酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，6μm厚切片；HE染色，中性树脂胶封片，观察并比较各组小鼠肝组织和肿瘤组织的形态学有无变化。
1.3.3免疫组化法检测肿瘤组织的MMP-9蛋白表达免疫组化法检测原发性肝癌组织中MMP-9蛋白的表达，参考试剂盒说明书。
判断标准：经免疫组化法各步骤处理后MMP-9阳性细胞的胞浆和/或胞核呈淡黄色或棕黄色，采用二级计分法进行阳性细胞计数[4]，高倍镜下(×400)对每张切片随机选择5 个视野，每个视野计数100 个细胞，计算每张切片阳性细胞百分率，阳性细胞数＜ 5%，0 分;5%～25%，1 分; 25%～50%，2分; 50%～75%，3 分; ＞75%，4 分。
染色强度: 淡黄色1 分; 棕黄色2 分; 棕褐色3分; 两者相加: 0～1 分为阴性(－); 2～3 分为弱阳性(+);4～5分为中度阳性(+ +); 6～7分为强阳性(+ + +)。
1.4统计方法本研究所有数据采用SPSS统计软件进行处理，H22原发性肝癌小鼠瘤重的组间比较采用单因素方差分析，数据以x-±s表示，P<0.05有统计学意义。
肿瘤组织MMP-9蛋白表达的组间比较采用X2检验。
以P<0.05作为有统计学意义，以P<0.01作为有显著差异。
2 结果2.1复原抗癌汤对H22 原发性肝癌小鼠局部肿瘤生长的影响（见表1）表1 复原抗癌汤对H22 原发性肝癌小鼠局部肿瘤生长的影响注：*与B模型组比较p<0.05从表1中数据可以看出，C组、D组、E组、F组的瘤重明显低于B组的瘤体重量。
经组间t检验示，D、E、F组、C组均有明显的肿瘤生长抑制（P＜0.05）,其中，C组的对肿瘤的抑制作用要高于D组、E组和F组。
2.2复原抗癌汤对H22 原发性肝癌小鼠肿瘤及肝组织形态学变化的影响 H22 原发性肝癌小鼠局部肿瘤，对照组癌组织未用药细胞具有癌细胞的一般特征，核大，常有内折，核浆比大，有多个大核仁，形态不规则，电子密度不均，常见核仁边移现象。
染色质比较可见常染色质多而异染色质少，细胞浆基质密度均匀，细胞内无退变的细胞器，细胞表面微绒毛细长且密集。
治疗组癌组织较局限,核仁固缩，核浆比较对照组小，形态较规则，核仁边移现象少见。
(见图一）2.3复原抗癌汤对H22 原发性肝癌小鼠肿瘤及肝组织MMP-9mRNA及蛋白表达的影响使用免疫组化法检测瘤体MMP-9蛋白表达结果如表3所示。
从表2中数据可以看出，D、E、F组、C组H22肝癌组织MMP-9蛋白的强阳性率均低于B组（P＜0.05）,D、E、F组与C组相比MMP-9蛋白的强阳性率较高（P＜0.05）,F组MMP-9蛋白强阳性率与D组相比较高（P＜0.05）,与E组相比无统计学意义（P＞0.05）。
表2 复原抗癌汤对肿瘤组织MMP-9蛋白表达的影响（X2）注：*为与B组比较P＜0.05 #为与C组比较，P＜0.05 △为与D组比较P＜0.05 ●为与E组比较P＞0.05 3 讨论肿瘤是多途径多环节多基因异常所致疾病，有资料显示，癌组织中MMP-9基因呈显著高表达，表明MMP-9可通过破坏局部组织结构和基膜屏障，促进肿瘤新生血管的形成和肿瘤生长，有利于肿瘤细胞发生侵袭和转移[5]。
复原抗癌汤以益气养阴，清热解毒，散积消徵，扶正固本为法组方，是姜家康教授在总结前人治疗肝癌有效方剂的基础上，依据中医药辩证理论，结合临床而形成的有效复方。
本研究证实复原抗癌汤通过对MMP-9蛋白的影响，细胞因子水平阐述了本药能够抑制肿瘤生长与转移，同时，根据多年的随访和治疗表明，该复方不仅可以明显改善患者的机体免疫力，而且可以减轻疾病给患者带来的痛苦，改善患者生存质量，提高患者的生存率。
参考文献[1]蔚林兰,冯明辉,杜发斌,黄崇政.水律汤对H22肝癌腹水小鼠生存期及体重的影响[J].中西医结合肝病杂志,2010,20(2):100-101.[2]王金烁.健脾丸抗肝癌作用及其作用机制的实验研究[D].石家庄:河北医科大学.2007[3]黄智芬,黎汉忠,施智严,等.健脾消积口服液结合西药治疗Ⅱ、Ⅲ期肝癌40例临床观察[J].中国中西医结合杂志,200323(3):193.[4]Lu CD，Altieri DC，Tanigawa N.Expression of a novel antiapoptosisgene，surviving，correlated with tumor cell apoptosis andP53accumulation in gastric carcinoma[J].Cancer Res，1998，58(9): 1 808 － 1 812.[5]蒋扬富,杨治华,胡敬群,等.血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9在原发性肝癌中的表达及其临床意义[J].癌症,20 00,19(1):17.本研究属黑龙江省科技攻关计划支撑研究，项目编号：2009G0940。