藻蓝蛋白的分离与纯化 实验报告 开放性试验
钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特研究
钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特*研究
为发展新型海洋*物,采用SephacrylS-200凝胶层析和羟基*灰石柱层析对人工养殖钝顶螺旋藻中的藻蓝蛋白进行了分离和纯化,得到了藻蓝蛋白纯品.测定了藻蓝蛋白的氨基*组成和含量.藻蓝蛋白的紫外、可见吸收光谱表明其最大特征吸收波长为278,360,620nm.得到的藻蓝蛋白经等电聚焦显示为一条带,其等电点为pH＝4.3.还测量了藻蓝蛋白红外吸收光谱.研究所获得的藻蓝蛋白为后续开展临床应用提供了可靠的样品.
投诉
地木耳中藻蓝蛋白的分离与纯化
将上 加人固体 ( 助 多 清液 N 0准之达 %饱和， 搅 5 2 充分 拌， 静置30而n，1侧 9下冷冻离心30 i ，弃去离心管底 x幻 mn 部沉淀。 上清液中 继续加人 (N 多 使之达到 %饱和， ) 4 H o ’ 5 充分 搅拌， Z ， 静置 然后在1以 9下离心3腼i ， b xx〕 n 弃去上清 液， 沉淀即 蓝蛋白 ( 一 y o ya i ， ) 和 蓝蛋白 为藻 C Pcc nn P h C 别藻
1.2 3 盐析 .
层析 (HA层析) ， 用磷酸盐缓冲液洗脱 (PBS 后， ) 得到了 藻蓝蛋白 (P ) 和别藻蓝蛋白 (A c ) 的洗脱峰。洗脱的 c P 顺序为藻蓝蛋白 在前， 别藻蓝蛋白 在后。
1.3 纯度鉴定
收稿日期: 20 8刁3一 0 0 2 作者简介: 李三相 ( 1 7卜) ， 9 男， 甘肃静宁人，天水师范学院生命科学与化学学院讲师， 硕士。
A0 ycn A ( 1 户 o y in， ) 的 合 。 淀 00 m讥的 酸 c c P 混 物 沉 用1 o 磷 .
缓冲液(P S) 溶解( 含0.02mol NaCI及0.( lmol EDTA) ， B L l ) X L l
定溶至一定体积， 加人固体 (NH4 多 使其浓度达2 %， ) o ’ 6 充 分搅拌， 印 in， 卫 静置 m 10以〕 9离心10m 弃去沉淀。 in， 继 续加人 (N坳 多 达3 %饱和，静置Z 仪 〕 . 0 5 h，1 众9下离心 0 n 1 mi ，沉淀即为藻蓝蛋白 (P ) 。用同样的方法，再以 C
液 (分 10、 50、 0 、 o lllm 别为 20: 1 Z o泥， 人 o 比并加 0.lm
N l 梯度洗 洗脱速度为 sm ， c a ) 脱， . / 4 l 分步收集洗 h 脱液， 每
藻蓝蛋白的提取、纯化及紫外可见光谱仪检测藻蓝蛋白纯度-2
藻蓝蛋白的提取、纯化及紫外可见光谱仪检测藻蓝蛋白纯度-23.结果分析:实验测得的藻蓝蛋白纯度只有0.509，比较我们班其他组的结果相差不算太大，但其他班有的组测得藻蓝蛋白得纯度可达到 1.7左右，相对于这个纯度，我们所提取得藻蓝蛋白纯度时偏低的，影响藻蓝蛋白纯度的原因主要有以下几个：1)冻融次数:本实验时采用冻融法破碎细胞，冻融法破碎细胞主要是因为藻体在冻结过程中，细胞内外的液态水形成冰晶体，造成体积膨大，对藻体细胞壁和细胞膜产生破坏作用，使其通透性加大，内容物流出。
藻体冻结过程中首先是从最容易生成细小冰晶体的地方开始，然后冰晶体逐渐变大，向四周扩展，将距这些地方比较近的细胞壁和细胞膜胀破，压破。
每次冻融最容易生成细小冰晶体的地方是不一样的，即在细胞内外形成冰晶的部位是不同的，这样就能对细胞不同部位的细胞壁和细胞膜产生破坏，因而多次冻融能使破碎效果提高。
冻融时间增加随能使冰晶体变大，但由于受细胞内外水分含量的限制，冰晶的长大使有限度的，因而对细胞壁和细胞膜破坏只是在原有基础上的破坏，破坏区域较少，效果较差，所以冻融时间对冻融效果影响不大。
可见，在冻融法中次数对藻蓝蛋白得率得影响比时间对它得影响大，多次反复冻融的细胞破碎效果比较好。
我们自己只冻融了一次，其余是老师整体冻融的，所以我们冻融方面应与其他组没有多大区别。
2)不同饱和度硫酸铵的盐析效果：实验过程中，饱和度在20％时，没有明显的沉淀，查资料得知，当饱和度在25％以下时，没有明显的沉淀，在25％以上后，随着硫酸铵饱和度的增加，提取率逐步升高。
从纯度看，随着饱和度的升高，纯度先降后升。
实验测得的结果偏低，可能是加入硫酸铵过程中，随着饱和度的增大，杂蛋白，藻红蛋白和别藻蓝蛋白沉淀出的量都在增大，藻蓝蛋白所占的比例减小，所以纯度减小。
由于我们过柱时取的样不是我们组的，所以无法考证是这两种原因引起我们结果偏低，只能说这两种原因对我们所得的藻蓝蛋白纯度会有影响。
藻蛋白提取实验报告
一、实验目的本实验旨在通过学习并掌握藻蛋白的提取方法，了解不同提取方法对藻蛋白提取效果的影响，并对提取得到的藻蛋白进行初步的纯化及鉴定。
二、实验原理藻蛋白主要存在于藻类植物中，如螺旋藻、小球藻等。
藻蛋白的提取方法主要有物理法、化学法和生物法。
本实验采用物理法中的冻融法提取藻蛋白，该方法操作简单，对藻类植物损伤小，提取效率较高。
三、实验材料与仪器材料：1. 螺旋藻粉2. 蒸馏水3. 0.1mol/L的KOH溶液4. 0.1mol/L的HCl溶液5. 95%乙醇6. 无水乙醇7. 丙酮8. 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）仪器：1. 电子天平2. 磁力搅拌器3. 超声波清洗器4. 高速离心机5. 蒸发皿6. 烧杯7. 离心管8. 吸管9. 滤纸四、实验步骤1. 藻蛋白粗提1. 称取10g螺旋藻粉，置于100ml离心管中。
2. 加入50ml蒸馏水，充分搅拌，使螺旋藻粉充分溶解。
3. 将混合液置于冰浴中冷却，每隔30分钟搅拌一次，共冷却2小时。
4. 冷却完成后，以4000r/min的转速离心10分钟，收集上清液。
5. 将上清液转移至烧杯中，加入95%乙醇，使蛋白质沉淀，静置30分钟。
6. 以4000r/min的转速离心10分钟，收集沉淀。
7. 将沉淀用蒸馏水洗涤三次，以去除杂质。
2. 藻蛋白纯化1. 将洗涤后的沉淀溶于适量的磷酸盐缓冲液（pH 7.0）中。
2. 将混合液通过DEAE纤维素层析柱，用磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱。
3. 收集含有藻蛋白的洗脱液，经浓缩、冷冻干燥后得到藻蛋白。
五、实验结果与分析1. 藻蛋白粗提通过冻融法提取的藻蛋白，在95%乙醇中沉淀，经离心后得到淡蓝色沉淀，表明藻蛋白提取成功。
2. 藻蛋白纯化通过DEAE纤维素层析柱纯化后，得到的藻蛋白在紫外-可见光谱上呈现出典型的藻蓝蛋白特征峰，表明纯化成功。
六、实验结论本实验采用冻融法和DEAE纤维素层析柱法成功提取并纯化了藻蛋白。
实验结果表明，冻融法是一种简单、高效的藻蛋白提取方法，而DEAE纤维素层析柱法可以进一步纯化藻蛋白，提高其纯度。
钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特性研究
ISSN 100020054CN 1122223 N 清华大学学报(自然科学版)J T singhua U niv (Sci &Tech ),1999年第39卷第6期1999,V o l .39,N o .66 3520～22钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特性研究3殷 钢, 刘 铮, 刘 飞, 李 琛, 丁富新, 袁乃驹清华大学化学工程系,北京100084 收稿日期:1998208206 第一作者:男,1973年生,博士研究生 3基金项目:国家“九五”科技攻关项目,962C 03204205文 摘 为发展新型海洋药物,采用Sephacryl S 2200凝胶层析和羟基磷灰石柱层析对人工养殖钝顶螺旋藻中的藻蓝蛋白进行了分离和纯化,得到了藻蓝蛋白纯品。
测定了藻蓝蛋白的氨基酸组成和含量。
藻蓝蛋白的紫外、可见吸收光谱表明其最大特征吸收波长为278,360,620nm 。
得到的藻蓝蛋白经等电聚焦显示为一条带,其等电点为pH =4.3。
还测量了藻蓝蛋白红外吸收光谱。
研究所获得的藻蓝蛋白为后续开展临床应用提供了可靠的样品。
关键词 钝顶螺旋藻;藻蓝蛋白;分离;纯化分类号 Q 51 螺旋藻是一种丝状多细胞螺旋形藻类生物,藻体由于含有藻蓝素而使外观呈蓝绿色。
现已发现的螺旋藻共有36个个种,多数为淡水种。
它含有丰富的蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、叶绿素、Β2胡萝卜素及多糖类物质,是人类理想的食物及药物资源[1]。
目前用于工厂化生产的主要是钝顶螺旋藻和极大螺旋藻。
螺旋藻作为新型药物资源成为当前海洋药物研究的焦点之一。
螺旋藻中含有丰富的藻胆蛋白,藻胆蛋白中又包含藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白以及藻红蛋白等蛋白。
藻蓝蛋白是螺旋藻中重要的捕光色素蛋白,它以近乎100%的高效率把光能优先地传递给光系统 [2]。
研究表明,藻蓝蛋白具有提高人体免疫力,促进动物血细胞再生,抑制某些癌细胞等作用[3]。
临床实验证明藻蓝蛋白—铜激光对大肠癌细胞株有很强的杀伤效应[4],同时藻蓝蛋白还是一种无毒、无副作用的理想光敏剂[5]。
万东华-藻蛋白的分离纯化及光谱性质研究
藻蛋白的分离纯化及光谱性质研究Isolation, purification of phycobiliprotein from Porphyra and itsspectroscopic properties一、实验目的和要求1. 了解藻蛋白的生理意义和功能，藻蛋白一般的纯化方法；2. 掌握盐析和凝胶层析的实验技术；3. 掌握紫外可见光谱仪检测蛋白的方法；4. 了解藻蛋白的荧光发射特性。
二、实验原理藻蛋白是藻类特有的捕光色素蛋白，参与光合作用的能量吸收和传递，主要存在于红藻、蓝绿藻和隐藻的藻胆体中。
藻蛋白主要包括藻红蛋白、藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白三类。
藻蛋白在藻类中的含量可达细胞干重的25%～28%, 除了作为荧光探针用于医学诊断、免疫学和细胞学研究之外，藻胆蛋白具有抗氧化、提高机体免疫力和抗肿瘤等重要药理功能，在功能食品、化妆品和药品中有广泛的应用前景。
我国藻类资源十分丰富，是世界上最大的紫菜生产大国，是获取藻蛋白的理想资源。
选用紫菜提取藻红蛋白，具有成本低、得率高的优点，具有较好的利用价值。
1．蛋白质的盐析沉淀盐在水溶液中电离所形成的正负离子可吸引水分子，从而夺取蛋白质分子上的水化膜，还可中和部分电荷，致使蛋白质聚集，从而达到盐析沉淀蛋白质的目的。
由于各种蛋白质颗粒大小、所带电荷的多少及亲水程度不同，当使用某种中性盐对其进行盐析时，所需的最低盐浓度各不相同。
2．葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蛋白质凝胶层析也称分子筛层析、排阻层析。
是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离的技术。
单个凝胶珠本身象“筛子”。
不同类型凝胶的筛孔的大小不同。
相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔被完全排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间向下流动，因此流程较短，移动速度快；所以首先流出。
相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶网孔，可完全渗透进入凝胶颗粒的网孔，在向下移动过程中，因此流程较长，移动速率慢；所以最后流出。
藻蓝蛋白 实验报告
藻蓝蛋白的分离与纯化姓名：郭均学院：食品与生物工程班级：食安 09-2学号：200906041069藻蓝蛋白的分离与纯化一、实验目的和要求1、了解藻蓝蛋白的生理意义及功能，藻蓝蛋白的一般提取和纯化的方法；2、掌握蛋白含量测定方法；3、掌握盐析和离子交换层析纯化蛋白的分析技术。
二、实验原理藻蓝蛋白（PC）是一类普遍存在于藻蓝蛋白中的光合辅助色素，也是一种天天然色素蛋白，具有水溶性，可用作视频着色剂。
此外，它具有强烈的荧光，在分子生物学上被制成荧光探针，是一种无毒、无副作用的理想光敏剂。
藻蓝蛋白还具有重要的医疗价值，不但能提高机体的非特异性免疫功能，而且对特异性免疫功能有促进作用。
另外它还有清除自由基的能力，可以抗疲劳，延缓衰老，对人体的生理功能有重要的生物学意义。
利用盐析沉淀蛋白质的基本原理：盐在水溶液中电离所形成的正负离子可吸收水分子，从而夺取蛋白质分子上的水化膜，还可以中和部分电荷，致使蛋白质聚集，从而达到盐析沉淀蛋白质的目的。
由于各种蛋白颗粒大小、所带电荷的多少及亲水程度不同，当使用某种中性盐对其进行盐析时，所需的最低盐浓度各不相同。
研究表明可用25%硫酸铵饱和度沉淀除去杂质，55%硫酸铵沉淀藻蓝蛋白。
盐析出来的蛋白质，需通过脱盐以除去硫酸铵等盐类物质。
最常用脱盐的方法是透析。
蛋白质是大分子物质，它不能透过半透膜，故不断更换蒸馏水或缓冲液可将盐类等小分子杂志透析掉。
蛋白质含量测定有紫外分光光度计法和显色法（Folin-酚法、考马斯亮蓝法等），本实验采用考马斯亮蓝法测定提取藻蓝蛋白的含量，考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过疏水作用后变为蓝色，最大光吸收由465nm变为595nm，在一定范围内，蛋白质含量与595nm处吸光值成正比。
离子交换层析法纯化蛋白质，常用的阳离子交换剂有弱酸性的羧甲基纤维素（CM纤维素），阴离子交换剂有弱碱性的二乙胺基乙基纤维素（DEAE-纤维素）。
用含有0.25mg的藻蓝蛋白处理培养
用含有0.25mg的藻蓝蛋白处理培养
藻蓝蛋白（Phycocyanin）是一种具有高水溶性的复合蛋白，来源于藻类，具有蓝色
的色素，用于食品和药物中的添加剂，在食品领域中被广泛使用，比如作为细胞壁保护剂，用于抑制酒精的消化酶的活性和酒精的分解。
本次试验将使用含有0.25mg的藻蓝蛋白经
0.2% NaCl机械悬浊液处理培养。
要开始进行本次实验，首先需要准备一些必要的物品，比如0.2% NaCl机械悬浊液、0.25mg藻蓝蛋白样品、实验室消毒药水和PH值仪。
然后将0.2% NaCl机械悬浊液倒入实
验仪器中，配制含有0.25mg藻蓝蛋白的溶液。
此时将一定量的PH值仪测定溶液的PH，保证溶液处于正常PH范围，确保溶液的有效性。
接下来要开始进行培养。
在培养过程中，需要控制向培养液中添加的藻蓝蛋白的比例，以保证培养的细胞的繁殖和生长，并避免可能带来的不利影响。
因此，在添加藻蓝蛋白的
过程中，应使用比例微量秤进行精准控制，以确保藻蓝蛋白的比例达到精确的要求。
此外，藻蓝蛋白是一种易受热及溶解的物质。
因此，在进行培养液处理时，需要注意
控制处理温度，以防止藻蓝蛋白失去其活性，破坏培养细胞的形态和结构。
最后，在培养过程结束后，需要对处理的培养物进行核酸免疫灭活处理，以确保实验
室内的安全性。
然后要仔细观察处理后的培养物，以考察藻蓝蛋白对其形态和结构的影响
程度，检查处理过程中有无不良反应。
有了上述步骤，我们便可以完成使用含有0.25mg
的藻蓝蛋白处理培养的试验。
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藻蓝蛋白的分离与纯化实验报告食品与生物工程学院一、实验目的和要求1、了解藻蓝蛋白的生理意义及功能，藻蓝蛋白一般的提取和纯化的方法；2、掌握蛋白含量测定方法；3、掌握盐析和离子交换层析纯化蛋白的实验技术。
二、实验原理藻蓝蛋白（PC）是一类普通存在于蓝藻细胞中的光合辅助色素，也是一种天然色素蛋白，具有水溶性，可用作食品着色剂。
此外，它具有强烈的荧光，在分子生物学上被制成荧光探针，是一种无毒、无副作用的理想光敏剂。
藻蓝蛋白还具有重要的医疗价值，不但能提高机体细胞的非特异性免疫功能，而且对特异性免疫功能有促进作用。
另外，它还具有清除自由基的能力，可以抗疲劳，延缓衰老，对人体的生理功能有重要的生物学意义。
利用盐析沉淀蛋白质的基本原理：盐在水溶液中电离所形成的正负离子ＮＨ可吸引水分子，从而夺取蛋白质分子上的水化膜，还可中和部分电荷，致使蛋白质聚集，从而达到盐析沉淀蛋白质的目的。
由于各种蛋白质颗粒大小、所带电荷的多少及亲水程度不同，当使用某种中性盐对其进行盐析时，所需的最低盐浓度各不相同研究表明可用25%(NH4)2SO4 饱和度沉淀除去杂质，55%(NH4)2SO4沉淀藻蓝蛋白。
盐析出来的蛋白质，需通过脱盐以除去硫酸铵等盐类物质。
最常用的脱盐方法是透析。
蛋白质是大分子物质，它不能透过半透膜，而小分子物质可以自由透过半透膜，顾不断更换蒸馏水或缓冲液可将盐类等小分子杂质透析掉。
蛋白含量的测定有紫外分光光度计法和显色法（Folin-酚法、考马斯亮蓝法等），本实验采用考马斯亮蓝法测定提取藻蓝蛋白的含量，考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过疏水作用后变为蓝色，最大光吸收由465nm变为595nm，在一定范围内，蛋白质的含量与595nm处吸光值成正比。
离子交换层析法纯化蛋白质，常用的阳离子交换剂有弱酸性的羧甲基纤维素（CM-纤维素），阴离子交换剂有弱酸性的二乙氨基乙基纤维素（DEAE-纤维素）。
蛋白质的混合物与纤维素离子交换剂的酸性基团或碱性基团结合，结合力的大小取决于彼此间相反电荷基团的静电引力。
因此，被吸附的蛋白质的洗脱通过改变PH或离子强度来实现，与离子交换剂结合力小的蛋白质首先从层析柱中被洗脱下来。
本实验以蓝藻为材料，采用反复冻融、分步盐析法对藻蓝蛋白进行提取和初步纯化，采用考马斯亮蓝法测定提取藻蓝蛋白的含量，然后使用DEAE-纤维素柱层析对提取的藻蓝蛋白进一步纯化（由于来源不同和种类的差别，目前研究报道的藻蓝蛋白等电点尚无一致结论，但都在3.4-4.8之间，其中钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的等电点为 4.3，在PH6.5磷酸盐缓冲液中带负电，所以选择DEAE-纤维素阴离子交换柱）。
预期得到纯度较高的藻蓝蛋白。
三、试剂与仪器1、试剂螺旋藻藻粉0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PH6.5）、标准蛋白（0.1mg/L）、考马斯亮蓝G-250、0.5mol/LNaOH、0.5mol/LHCl、NaCl、0.5mol/LHCl、NaCl、硫酸铵、透析袋、DEAE纤维素、奈氏试剂四、实验步骤（一）、藻蓝蛋白的提取及初步纯化1、藻蓝蛋白抽提：采用反复冻融法破碎细胞，磷酸盐缓冲液浸提蛋白。
具体操作：取螺旋藻粉1g，加入0.01mol/LPH6.5的磷酸盐缓冲液10mL，充分搅拌混匀。
室温浸泡30min-1h后，在-20℃和38℃之间反复冻融数次（3-5次）。
细胞破碎后，将悬浮液移入离心管，加入10mL0.01moL/L PH6.5的磷酸盐缓冲液，混匀，静止30min，4000r/min 离心20min，上清液即为抽提得到的藻蓝蛋白混合液。
2、分步盐析：采用不同浓度的硫酸铵分步盐析初步纯化出藻蓝蛋白。
具体操作：取上清液，用25%饱和度的硫酸铵4℃盐析30min ，然后4000r/min离心20min，所得上清液用55%饱和度的硫酸铵放入冰箱盐析30min，4000r/min离心20min，弃去上清液，离心收集得到沉淀即为藻蓝蛋白。
3、透析去盐得到的沉淀用10mL0.01moL/Mlph6.5的磷酸盐缓冲液溶解，然后将藻蓝蛋白粗提液置于透析袋（截留分子质量为10Kd）中在蒸馏水中透析以去除盐离子。
每隔1h换一次透析液，换3-4次。
(二)藻蓝蛋白含量测定1、制作标准曲线；2、样品含量测定；3、计算结果。
具体操作步骤如下：取洁净干燥的试管若干，按表1-1比例配置标准蛋白溶液。
原本标准蛋白的浓度为0.1mg/mL。
表1-1标准溶液配置混匀此6组试管中的标准蛋白溶液，分别加入4mL考马斯亮蓝G-250，摇匀(充分混匀)，室温放置5min后在595nm波长处别色，以1号试管调零点，得到5组标准蛋白溶液在595nm处的吸光值A595。
以标准蛋白浓度（mg/mL）为横坐标，以A595值为纵坐标作图，得到的趋势线即标准曲线。
将提取的藻蓝蛋白溶液1mL适当稀释（6-10倍左右），再取0.2mL，补充水到1mL，同上进行比色操作，得到其595nm处的吸光值，通过标准曲线推算其含量。
（三）藻蓝蛋白纯度的测定测定A620和A280值，纯度可用A620/A280来表示。
将上述稀释后的样品，用可见分光光度计，测定其在620nm波长处的吸光值A620；再将样品转出，装入石英比色皿，放入紫外分光光度计，测定其在280nm波长处的吸光值A280。
由于藻蓝蛋白在620nm 波长处有特征吸收峰，其纯度可以用A620/A280来表示。
因此，根据在可见和紫外分光光度计中得到的数据就可以推算出提取的藻蓝蛋白样品的纯度。
（四）藻蓝蛋白的进一步纯化1、DEAE-纤维素处理、装柱和平衡2、上样、洗脱3、测定纯化的蛋白浓度和纯度，并分别计算回收率和纯化倍数。
具体操作：3.测定纯化的蛋白浓度和纯度，并分别计算回收率和纯化倍数。
具体操作：用三倍柱床体积的0.01mol／LpH6.5磷酸盐缓冲液平衡。
将初步纯化得到的藻蓝蛋白液上DEAE-纤维素柱，采用0.01mol／LpH6.5磷酸缓冲液洗脱（含0.4mol／LNaCI）进行洗脱，柱上层的深蓝色部分大多被迅速洗脱下来，只残留少量蓝色。
流速控制在10d／min，用小试管收集洗脱液，每管收集2mL（或30滴），收集10-12管（呈现蓝色的液体内含有目的蛋白）。
测定每管样品的A620，横横坐标洗脱体积、纵坐标A620值，绘制洗脱曲线。
合并所有管中的样品，A620和A280值，计算纯度。
然后用0.01mol／LpH6.5磷酸缓冲液（含0.6mol／LNaCI）洗脱，洗脱下的是藻蓝蛋白。
柱料的再生：用0.5ml ／LHCl 溶液处理柱料，洗2-3倍柱床体积，用水洗至pH6.0,0,01mol ／LpH6.5磷酸缓冲液平衡。
四、 数据处理及实验结果表一 标准蛋白曲线表二 标准曲线0.20.40.60.811.200.20.40.60.81ca提取的藻蓝蛋白溶液A595:0.176A620:1.022A280:1.017紫外可见光谱仪测藻蓝蛋白纯度表四根据数据制作藻蓝蛋白的洗脱曲线0.10.20.30.40.50.6123456789101112六、思考题1、蛋白含量测定方法有哪些？各有什么特点？（1）、微量凯氏定氮法，（2）、Folin-酚法，（3）、紫外吸收法，特点：操作简便迅速，且不消耗样品（可以回收），低浓度的盐类不干扰测定。
（4）、考马斯亮蓝染色法，2、盐析分离蛋白的原理是什么？盐在水溶液中电离所形成的正负离子ＮＨ可吸引水分子，从而夺取蛋白质分子上的水化膜，还可中和部分电荷，致使蛋白质聚集，从而达到盐析沉淀蛋白质的目的。
由于各种蛋白质颗粒大小、所带电荷的多少及亲水程度不同，当使用某种中性盐对其进行盐析时，所需的最低盐浓度各不相同研究表明可用25%(NH 4)2SO 4 饱和度沉淀除去杂质，55%(NH 4)2SO 4沉淀藻蓝蛋白。
盐析出来的蛋白质，需通过脱盐以除去硫酸铵等盐类物质。
最常用的脱盐方法是透析。
蛋白质是大分子物质，它不能透过半透膜，而小分子物质可以自由透过半透膜，顾不断更换蒸馏水或缓冲液可将盐类等小分子杂质透析掉。
3、离子交换层析纯化蛋白的原理？离子交换层析法纯化蛋白质，常用的阳离子交换剂有弱酸性的羧甲基纤维素（CM-纤维素），阴离子交换剂有弱酸性的二乙氨基乙基纤维素（DEAE-纤维素）。
蛋白质的混合物与纤维素离子交换剂的酸性基团或碱性基团结合，结合力的大小取决于彼此间相反电荷基团的静电引力。
因此，被吸附的蛋白质的洗脱通过改变PH或离子强度来实现，与离子交换剂结合力小的蛋白质首先从层析柱中被洗脱下来。
4、藻蓝蛋白的功能有哪些？广泛用于食品着色剂和化妆品的添加剂。
藻蓝蛋白带有荧光 ,可用作荧光标记物藻蓝蛋白具有刺激红细胞集落生成，类似红细胞生成素(epo)的作用；藻蓝蛋白具有补血、调整白血球和提高淋巴细胞活性的作用；增加体能、促进红血球增长，能增进机体免疫功能，促进生长发育；藻蓝蛋白还具有抑制某些癌细胞的作用；具有很高的营养价值和医疗价值。
藻蓝蛋白作为天然食用色素，它可以改善食品的色泽，不仅能提高食品的档次，而且能增加食品中的功能成份。
藻蓝蛋白是少见的色素蛋白之一。
它不仅颜色鲜艳，而且本身是一种营养丰富的蛋白质，其氨基酸组成齐全，必需氨基酸含量高。
藻蓝蛋白是水溶性色素，清亮鲜艳，外观悦目可爱，可作为食品、化妆品的添加剂。
七、注意事项1、标准曲线制作规范、准确，样品含量测定准确；2、藻体细胞要反复冻融3次以上，确保细胞全部破碎；3、注意离心机使用；4、DEAE-纤维素柱层析，洗脱液的离子浓度严格控制。