基因突变检测与染色体显带技术具体实验安排如下
基因突变检测技术的使用方法
基因突变检测技术的使用方法基因突变检测技术是一种用于检测生物体基因组中发生的突变的技术。
这些突变可能导致一些疾病或者其他遗传性状的变化。
基因突变检测技术在医学、生物学和遗传学等领域都有着广泛的应用，可以帮助研究人员了解基因突变对生物体的影响，也可以帮助医生诊断疾病，选择治疗方案。
1.样本采集：首先需要采集来自样本患者的DNA。
样本可以是血液、唾液、组织等，根据具体实验的需要选择合适的样本。
2.DNA提取：将采集到的样本中的DNA提取出来。
DNA提取是基因检测的第一步，是整个检测流程中最关键的一步。
提取出的DNA需要保持完整性和纯度，以确保后续的检测结果准确可靠。
3.PCR扩增：为了提高检测的灵敏度和特异性，通常需要对目标基因进行PCR扩增。
PCR是一种快速、灵敏的核酸扩增技术，可以将少量的DNA扩增至足够数量进行检测。
4. 基因检测：通过各种基因检测技术，如Sanger测序、PCR-RFLP、聚合酶链式反应（PCR）、序列特异放大（SSCP）等，对样本DNA中的基因序列进行检测。
通过比对样本DNA序列与正常基因序列之间的差异，可以发现是否存在基因突变。
5.数据分析：将检测到的基因序列数据进行比对和分析，确定是否存在突变以及其类型和位置。
数据分析是整个检测流程中最复杂的步骤，需要借助专业的软件和基因数据库进行分析和解读。
6.结果报告：根据数据分析的结果，生成基因突变检测报告，包括样本信息、检测方法、检测结果、结论等内容。
根据检测结果，可以为患者提供个性化的诊断和治疗方案。
总的来说，基因突变检测技术是一项复杂而精密的技术，需要严谨的操作流程和专业的数据分析能力。
在使用基因突变检测技术时，需要结合具体的实验目的和样本类型，选择合适的检测方法和分析工具，以确保检测结果的准确性和可靠性。
随着基因检测技术的不断发展，相信在未来基因突变检测技术将会在医学和生物学领域发挥更加重要的作用。
染色体显带原理与技术
4、 2×SSC处理：在60-65℃的2×SSC液中处理90分钟时， 用自来水冲洗干净， 2×SSC 温育可使 DNA 骨架断裂并使 断片溶解。 5、 染色：用蒸馏水配制5%Giemsa，染色5-10分钟，用自来 水冲洗干净，室温下风干后即可镜检。
T带：是染色体端粒部位经丫啶橙染色后呈现的区带；
N带：Ag-As染色，主要染核仁组织者区域的酸性蛋白。
1975年建立了染色体高分辨显带技术。
几种显带的制作方法之间的关系
24hrs 时加 入BrdU 68 hrs 时加 入秋水仙素
人类外周血
植物血球凝集素 ( PHA） 肝素、培养基、小牛血清
体外培养
巴黎会议（1971）对各条染色体的C带描述如下: 1号 大，从着丝粒扩展到q。 2号 小。 3-8号 中等 9号 大，从着丝粒扩展到q。 10号 中等。 11号 中等，但比10号或12号大些。 12号 中等。 13号 中等，有时分为二节。 14号-15号 中等。 16号大，从着丝粒向q扩展。
17号 中等。 18号 中等，但比17号大些。 19-22号 中等。 X 中等 Y在着丝粒处有一条非常窄的带；q的末端有 一宽带。1，9，16号的C带和Yq上的宽阔的 远侧带都有明显的形态变异及异态性。
3.G显带 3.1 取2.5％胰酶溶液0.5ml，加入50 ml生理盐水染色缸中（终浓度 0.025%），用 1N HCl或1N NaOH调节PH7.0左右，置 37OC预温。
基因突变检测技术的使用方法
基因突变检测技术的使用方法基因突变检测技术是一种关键的生物学和医学工具，已经在许多领域被广泛应用。
这项技术不仅可以帮助科学家们深入了解基因突变与疾病之间的关联，还可以用于个体化医疗以及药物研发等方面。
本文将介绍基因突变检测技术的使用方法，以及常见的检测方法和应用领域。
基因突变检测技术主要分为两种类型：直接检测和间接检测。
直接检测方法通过测量基因本身的序列来确定突变的存在与否，而间接检测方法则是通过分析基因的表达或功能来间接推断突变的存在。
以下是常见的基因突变检测技术及其使用方法的介绍：1. PCR（聚合酶链式反应）：PCR是一种直接检测方法，通过扩增基因特定区域的DNA片段，可以快速有效地检测突变。
使用PCR进行基因突变检测的步骤包括：设计引物，PCR扩增，电泳分离和检测结果分析。
通过分析PCR扩增产物的大小和形态，可以确定基因是否存在突变。
2. 基因测序：基因测序是一种直接检测方法，它能够准确地确定基因序列中的所有碱基。
基因测序可以通过Sanger测序或者新一代测序技术（如Illumina测序、Ion Torrent测序等）来进行。
使用基因测序进行基因突变检测的步骤包括：DNA提取，PCR扩增，准备测序文库，测序反应，数据分析和解读结果。
基因测序技术的优势在于它可以确定突变的具体位置和类型。
3. 聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）：PCR-RFLP方法结合了PCR和限制性酶的使用，可以检测与基因突变相关的限制性片段长度多态性。
该方法的使用步骤包括：设计引物，PCR扩增，酶切反应，电泳分离和检测结果分析。
通过比较样品的酶切图谱，可以确定是否存在基因突变。
4. 荧光PCR：荧光PCR是一种直接检测方法，它利用荧光标记的引物或探针来检测目标基因的突变。
荧光PCR的使用步骤包括：设计荧光引物或探针，PCR扩增，荧光检测，结果分析。
荧光PCR可以实现实时监测PCR反应，是一种高效、灵敏和特异性的基因突变检测方法。
4病理标本基因突变检测的流程及质量控制
• 选用带盖子的塑料瓶；
• 在塑料瓶上做好患者信息的标记。
痰液标本收集及蜡块制作流程
NSCLC
非NSCLC
重视痰液细胞学标本的病理质控
• 痰液细胞学标本病理评估是基因突变检测的第一步； • 病理评估的目的：1）确定被检测标本中是否存在非 小细胞肺癌细胞；2)是否有足够量癌细胞的用于检 测；3）以及决定下一步的处理方法； • 提高痰液细胞学诊断水平，注意鉴别不典型鳞化与 鳞癌、增生肺泡上皮细胞与腺癌细胞； • 必要时可以采用免疫细胞化学方法。
egfr突变检测egfr突变阴性egfr突变阳性真阳性假阳性假阴性真阴性病理评估及质控的目的尽可能排除质量达标质量不达标标本接收取材组织处理蜡块和he染色切片制作病理质量控制egfr基因突变检测无egfr基因突变检测病理科临床医生协作保证及时充分固定手术标本10中性缓冲福尔马林固定标本定期对福尔马林固定液进行检测核对患者姓名病历号手术标本取材应尽量全部取肿瘤组织避开坏死区域并放入有颜色的取材盒以区别用于常规病理诊断组织块
• 标本较小； • 通常是福尔马林固定处理。
• 视肿瘤组织的大小5-10uM/张，5-10张切片能满足 突变检测需求（其中要备出HE染色需要以及必要 时免疫组织化学的需要）。
细胞学标本
• 胸水、腹水细胞学
• 痰液 • 支气管盥洗液 • 穿刺细胞学悬液 • 载有肿瘤细胞的细胞学涂片
在日本，突变检测的验证研究 (东北大学附属医院/井上晃)
标本接收、取材
组织处理、蜡块和 H&E染色切片制作
病理质量控制
质量达标
质量不达标
EGFR 基因突变 检测
无EGFR 基因 突变检测
核对患者姓名、病历号
病理科、临床医生协作保证 及时充分固定手术标本
遗传变异检测实验室标准操作规程
遗传变异检测实验室标准操作规程1. 引言本实验室标准操作规程旨在确保遗传变异检测的准确性和可靠性，保证实验室内工作的一致性和操作的规范性。
遵循以下操作规则能够帮助实验室团队高效地开展遗传变异检测实验。
2. 实验室设备2.1 实验室必须配备符合要求的检测设备，包括但不限于PCR 仪、电泳设备、显微镜等。
2.2 实验室工作人员应当经过合适的培训，熟悉并能正确操作上述设备。
3. 样本处理3.1 样本的收集、存储和处理应符合相关伦理规定和标准操作程序。
3.2 样本收集后，应及时进行必要的预处理和样本分装，确保样本完整性和可靠性。
4. 实验室操作流程4.1 实验室操作人员应按照标准操作程序进行实验，避免操作过程中的误操作和交叉污染。
4.2 实验前，实验室操作人员应核对所需试剂、材料和设备是否齐全，并及时准备好。
4.3 实验室操作人员应定期对实验环境进行清洁和消毒，以保持实验环境的洁净和无菌状态。
5. 数据分析与结果报告5.1 所有实验结果应当经过审核和验证，确保结果准确无误。
5.2 实验室操作人员应尽快对实验结果进行分析和解读。
5.3 实验室操作人员应编制详细的报告，准确记录实验过程和结果，并及时提交给相关人员。
6. 质量控制6.1 实验室操作人员应定期进行质量控制检测，确保实验室操作的稳定性和结果的可靠性。
6.2 实验室应建立完善的质量控制体系，包括标准操作程序、内部质量控制和外部质量评估等。
7. 安全与卫生7.1 实验室操作人员应严格遵守相关的安全和卫生规定，保护个人和团队成员的健康与安全。
7.2 实验室应配备必要的安全设施和应急处理措施，以应对可能发生的事故或意外情况。
8. 文件管理8.1 实验室应建立完善的文件管理体系，包括实验记录、质控记录、实验报告等的归档和保存。
8.2 实验室操作人员应按要求填写和管理相关文件，便于实验结果的溯源和监督。
9. 变更管理9.1 实验室内的任何实验操作规程变更都应经过评审和批准，确保变更的合理性和有效性。
高考知识能力提升专题15 基因突变和染色体变异判断
高考知识能力提升专题15基因突变和染色体变异判断与实验探究1.类型：一对相对性状纯合亲本杂交，子代中出现了非显性性状以外都其他性状。
2.示例：红眼雌果蝇与白眼雄果蝇杂交，子代红眼果蝇中偶然出现了一只白眼雌果蝇M，已知控制眼色的基因B、b位于X染色体上，只有一条X染色体的果蝇为雄性，缺失眼色基因、缺失X染色体的个体均胚胎致死。
3.判断（1）方法1：镜检法①过程：制作变异个体的减数分裂临时装片，找到减Ⅰ前期，观察四分体中同源染色体联会现象。
②判断：Ⅰ.若同源染色体联会全部正常→基因突变；Ⅱ.若同源染色体中，其中一条出现片段缺失或染色体缺失→染色体变异。
（2）方法2：杂交法①过程：将白眼雌果蝇M与正常红眼雄果蝇杂交，观察子代的表现型及其比例。
②判断：Ⅰ.若子代红眼雌果蝇：白眼雄果蝇=1:1→基因突变；Ⅱ.若子代红眼雌果蝇：白眼雄果蝇=2:1→X染色体片段缺失；Ⅲ.若子代红眼雌果蝇：红眼雄果蝇：白眼雄果蝇=1:1:1→X染色体缺失。
4.图解：【典例1】（2022·广东深圳中学月考）如图示果蝇染色体上的基因：灰身（C）对黑身（c）为显性。
纯合灰身果蝇与黑身果蝇杂交，后代中出现了一只黑身果蝇（甲），果蝇甲可能是亲本果蝇在减数分裂时发生基因突变或染色体缺失造成的。
科研人员又增加果蝇乙（CC）进行相关实验，弄清了出现果蝇甲的原因（假定对同源染色体缺失相同片段时胚胎致死，不同基因组成的配子活力相同）。
（1）合理的实验思路：________________________。
（2）预期实验结果与结论：______________________。
【答案】用果蝇甲和果蝇乙杂交，获得F1；F1自由交配，观察并统计F2的表现型及比例。
若F2表现型及比例为灰身∶黑身=3∶1，则甲的出现是基因突变导致的；若F2表现型及比例为灰身∶黑身=4∶1，则甲的出现是染色体片段缺失导致的。
【分析】纯合灰身果蝇CC与黑身果蝇cc杂交，后代理论上全为灰身Cc，其出现了一只黑身果蝇（甲），如果是由于基因突变产生则其基因型为cc，如果是染色体缺失则其丢失了含C基因的染色体。
染色体分析实验报告
1. 了解染色体分析的基本原理和方法。
2. 掌握染色体观察、计数和核型分析的操作技能。
3. 通过实验，对实验结果进行分析和总结，提高对染色体变异和遗传规律的认识。
二、实验原理染色体是生物细胞中携带遗传信息的结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体分析是研究生物遗传、发育、进化等领域的重要手段。
本实验通过观察染色体形态、计数染色体数目、分析核型，探讨染色体变异和遗传规律。
三、实验材料与仪器1. 材料：人体口腔黏膜细胞、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液等。
2. 仪器：显微镜、染色缸、滴管、载玻片、盖玻片、显微镜载物台等。
四、实验步骤1. 取材：用消毒的牙签刮取人体口腔黏膜细胞，放入盛有生理盐水的试管中。
2. 涂片：将细胞悬液滴于载玻片上，用盖玻片轻轻压平。
3. 固定：将载玻片放入固定液中固定细胞，然后用流水冲洗。
4. 染色：将固定后的载玻片放入Giemsa染液中染色，然后用流水冲洗。
5. 观察：将染色后的载玻片放在显微镜下观察染色体形态、计数染色体数目。
6. 核型分析：根据染色体形态、数目和结构，分析核型。
五、实验结果与分析1. 染色体形态观察：在显微镜下观察，可见染色体呈带状，有明显的着丝粒和端粒。
染色体分为两类：A类染色体（长染色体），B类染色体（中染色体），C类染色体（短染色体）。
2. 染色体计数：在显微镜下观察，对染色体进行计数，得到每对染色体的数目。
3. 核型分析：根据染色体形态、数目和结构，分析核型。
本实验观察到的染色体核型为46，XX。
1. 实验过程中，染色体的固定和染色是关键步骤。
固定要适度，以免染色体断裂；染色要均匀，避免染色过深或过浅。
2. 观察染色体时，要调整显微镜的焦距，确保染色体清晰可见。
同时，要注意观察染色体的形态、数目和结构，以便进行核型分析。
3. 染色体变异是生物进化的一个重要因素。
通过染色体分析，可以研究染色体数目、结构变异等遗传现象，为生物遗传、发育、进化等领域的研究提供依据。
基因突变检测实验操作流程-EGFR
基因突变检测实验操作流程实验试剂：QIAGEN DNA FFPE Tissue Kit试剂盒、实验仪器：离心机、生物安全柜、Nanodrop2000分光光度计、LightCycler480荧光定量PCR、恒温金属浴。
一、DNA提取1.Extract DNA（详见QIAGEN DNA FFPE Tissue Kit,货号56404）HE染色：1）石蜡块固定至切片机上，调整切片机切片厚度设置为2μm；2）切取2μm厚度的组织片1张，先放入15%酒精中，然后从15%酒精中放入45℃水中捞片；3）HE染色；HE分析；如图* 记录：病理号、病理诊断、肿瘤细胞比例。
1)石蜡块固定至切片机上，调整切片机切片厚度设置为5μm，首先切除表面的2-3片，以去除表面氧化层；2)切取5μm厚度的组织片3片（如果组织块过小，需要多切几片），然后放入EP管中，加入1ml二甲苯振荡混匀，以充分溶解组织周围石蜡，14000rpm离心2min吸去上清去除石蜡，如果石蜡过多，可以用二甲苯再洗一次；3)加入无水乙醇1ml（去除二甲苯），14000rpm离心2min吸尽上清后开盖直至残余乙醇全部挥发（大约10min）；4)加入180μlATL和20μl蛋白酶K，震荡混匀；5)56℃1h（期间可以适当摇晃颠倒样品，使之混匀裂解充分）；6)90℃1h（注意管盖，由于90°高温可能会导致开盖，以致液体被蒸发；时间不要太长1小时足够；一个水浴锅时，56℃到90℃之间应该将样本置于室温中）；7)短暂离心使液体聚于管底，加入200μlAL，震荡混匀，然后加入200μl无水乙醇，震荡混匀；8)短暂离心使液体聚于管底，将整个液体全部移入收集柱中，然后8000rpm离心1min，丢弃收集管后将收集柱置于新的收集管中；9)加入500μl AW1漂洗液，离心8000 rpm，1min，丢弃收集管后将收集柱置于新的收集管中；10)加入500μl AW2漂洗液，离心8000rpm，1min，丢弃收集管后将收集柱置于新的收集管中；11)离心14000rpm，3min，以去除收集柱中的残余液体；12)加入ATE（洗脱液）50μl，然后室温静置2min；13)离心14000rpm，1min，收集洗脱液。
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基因突变检测与染色体显带技术具体实验安排如下:
第十周开始
（2016级硕士研究生）
（一）分组：
（二）以下为各次实验内容： 实验1.致病基因突变检测
授课教师：蒋玮莹教授 地点：医学科技楼东1221（本实验上课时间12：00开始） 实验2. 染色体分析
授课教师：陈争副教授 地点：医学科技楼东102 （本实验上课时间14：30开始） 实验3.黏多糖基因病分析检测
授课教师：郭奕斌副教授 地点：医学科技楼东1221（本实验上课时间14：30开始） （三）分组情况： 【姓名（学号）】
第一组：（21人） 第二组（20人） 第三组（20人）
学 号
姓名
学 号
姓名
学 号
姓名
16214645 张丽娜 16214847 吴丽娜 16214530 杨光谱 16213814 王铭铄 16214531 杨亮 16214644 谢建伟 16214698 史钱枫 16213809 黄智坚 16110984 王丹 16214836 林楚文 16214864 邱文瀚 16214659 李松 16214806 吕殷婷 16220015 蔡文婷 16110798 李斌 16213737 向微 16213815 杨贤智 16214850 程道柔 16213795 陈洪
16214927 魏伟
16213762 范亚丽
日期
第一组 第二组 第三组
2016/11/2 实验1 实验2 实验3 2016/11/9 实验3 实验1 实验2 2016/11/16 实验2
实验3 实验1
2016/11/23
实验考试
学号姓名学号姓名学号姓名
16214814蔡丽思16214535张琦16213747洪梦芝
16213829柳鑫城16214521何榕洲16214487李峥科
16110817丁瑶16214837林琼艳16213816张恒
16214511邵琮翔16215070苏荣飞16214830罗堉暄
16214692向柯旭16214867张俊夫16213812沈刚
16214799汪瑜16213911郑子聪16213899刘瑶
16214504刘凤琪16214714周志威16214815廖文娟
16214858刘灿16214863马功朝16214457陈超
16214800叶倩莹16214666欧华霜16214930张夏茵
16214869郑浩锋16213776罗海丹16215063陈嘉耀
16213734谢杰16214505吴琼16214921彭曼娟
16214798陈丹纯16214922彭诗16213729吴婷
16220011黄嘉筑16215088林甜16214855梁豪
16220013黄鼎腾
（四）实验考试的形式由三位老师根据情况统一安排。
（五）因为各组情况不同，请务必记住自己所在组每周上课的时间及地点，不要混乱。