食品中维生素C的检测方法
食品中维生素C的测定
（二）总抗坏血酸测定（二硝基苯肼法） 1. 实验原理 用酸处理过的活性炭把还原型Vc全部 氧化成二酮古洛糖酸，它与二硝基苯肼作 用生成红色的脎，脎的生成量与Vc总量成 正比。 2. 实验器材 ⑴ 组织捣碎机。 ⑵ 恒温水浴锅。 ⑶ 721分光光度计。
⑷ 100ml容量瓶。 ⑸ 刻度吸管。 ⑹ 100ml 锥形瓶。 3. 实验试剂 ⑴ 85%硫酸溶液（水）。 ⑵。 ⑷ 10%硫尿溶液（乙醇）。 ⑸ 活性炭（用盐酸处理）。 ⑹ 标准维生素C应用液（100µg/ml）。
实验二、食品中维生素C测定
一、实验目的 掌握滴定法和比色法测定维生素 C的原理；熟悉操作方法。 （一）还原维生素C测定（二氯酚靛酚滴 定法） 1. 实验原理 二氯靛酚染料在酸性溶液中呈红 色，被维生素C还原后红色消失。一 定量的样品提取液还原标准染料的量 与样品中维生素C的量成正比。
2. 实验器材 ⑴ 组织捣碎机。 ⑵ 5.0ml 微量滴定管。 ⑶ 100ml 容量瓶。 ⑷ 50ml 具塞量筒。 3. 实验试剂 ⑴ 1%、2%草酸溶液。 ⑵ 白陶土。 ⑶ 标定好的二氯靛酚溶液。
4. 操作步骤 ⑴ 样品处理：洗净剪碎，称取100g，放入捣 碎机；按1﹕1加入2%草酸制成匀浆。 ⑵ 称取匀浆液10g，用50ml 具塞量筒以1% 草酸定容。 20ml 100ml ⑶ 取约20ml 上清倒入100ml 锥形瓶，加白陶 土一勺。同时用1%草酸20ml 加陶土一勺， 作为空白。 ⑷ 取上清液过滤，取滤液 5ml，以标定的二 氯酚靛酚滴定至溶液呈淡红色，纪录用量。 ⑸ 还原型Vc的计算：
4.操作步骤 1. 样品提取：称取匀浆4g加1%草酸稀释后 倒入100ml容量瓶，并以1%草酸冲洗烧杯 并入容量瓶稀释至刻度，过滤。 2. 氧化：样品取滤液约25ml置100ml锥形瓶 中，加活性炭0.5g振摇30s后过滤，取滤 液10ml，加1%草酸10ml混匀。. 3. 标样制备:取标准VC应用液约25ml于 100ml锥形瓶中，加活性炭0.5g振摇60s后 过滤,取滤液10ml于100ml容量瓶中，加 1%草酸定容. 4. 脎的生成：
在测定维生素C国标方法中
在测定维生素 C 的国标方法中 ,荧光法为测定食品中维生素 C含量的第一标准方法 ,2,4－二硝基苯肼法作为第二法 .一,荧光法1.原理样品中复原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后 ,与邻苯二胺（ OPDA ）反响生成拥有荧光的喹喔啉（quinoxaline ）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在必定条件下成正比 ,以此测定食品中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量 .脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA 反响,以此清除样品中荧光杂质所产生的扰乱 .本方法的最小检出限为 0.022 g/ml.2.合用范围GB12392-90 本方法合用于蔬菜 ,水果及其制品中总抗坏血酸的测定3.仪器3.1.实验室常用设施 .3.2.荧光分光光度计或拥有 350nm 及 430nm 波长的荧光计 .3.3.打坏机 .4.试剂本实验用水均为蒸馏水 ,试剂不加说明均为剖析纯试剂 .（1）偏磷酸－乙酸液：称取 15g 偏磷酸 ,加入 40ml 冰乙酸及 250ml 水,搅拌,搁置留宿使之渐渐溶解 ,加水至500ml.4℃冰箱可保留 7～10 天.（2）0.15 mol/L 硫酸：取 10ml 硫酸,当心加入水中 ,再加水稀释至 1200ml.（3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以 0.15mol/L 硫酸液为稀释液 ,其他同 4.1.配制.（4）50％乙酸钠溶液：称取 500g 乙酸钠（ CH3COO·Na 3H2O）,加水至 1000ml.（5）硼酸 -乙酸钠溶液：称取 3g 硼酸,溶于 100ml 乙酸钠溶液（ 4.4）中.临用前配制 .（6）邻苯二胺溶液：称取 20mg 邻苯二胺 ,于临用前用水稀释至 100ml.（7） 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取 0.1g 百里酚蓝 ,加 0.02mol/L 氢氧化钠溶液 ,在玻璃研钵中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为 10.75ml,磨溶后用水稀释至 250ml.变色范围： pH=1.2 红色pH=2.8 黄色pH＞4.0 兰色（8）活性炭的活化：加 200g 炭粉于 1L 1+9 盐酸中 ,加热回流 1~2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止 ,置于 110~120℃烘箱中干燥 ,备用.（9）标准抗坏血酸标准溶液（ 1mg/ml ）：正确称取 50mg 抗坏血酸 ,用溶液（ 4.1）溶于 50ml 容量瓶中 ,并稀释至刻度 .抗坏血酸标准使用液（ 100μg/ml）: 取 10ml 抗坏血酸标准液 ,用偏磷酸 -乙酸溶液稀释至 100ml.定容前试 pH 值,如其 pH＞2.2 时,则应用溶液（ 4.3）稀释 .标准曲线的制备：取下述 "标准 "溶液（抗坏血酸含量 10μg/ml）0.5,1.0,1.5 和 2.0ml 标准系列 ,取双份分别置于 10ml 带盖试管中 ,再用水增补至 2.0ml.5.操作步骤5.1 样品制备所有实验过程应避光 .称取 100g 鲜样,加 100g偏磷酸 -乙酸溶液 ,倒入打坏机内打成匀浆 ,用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度 .如呈红色,即可用偏磷酸 -乙酸溶液稀释 ,若呈黄色或兰色 ,则用偏磷酸 -乙酸-硫酸溶液稀释 ,使其 pH 为1.2.匀浆的取量需依据样品中抗坏血酸的含量而定 .当样品液含量在 40~100μg/ml 之间,一般取 20g 匀浆,用偏磷酸 -乙酸溶液稀释至 100ml,过滤,滤液备用 .5.2 氧化办理：分别取样品滤液及标准使用液各 100ml 于带盖三角瓶中 ,加 2g 活性炭 ,使劲振摇 1min,过滤,弃去最先数毫升滤液 ,分别采集其他所有滤液 ,即样品氧化液和标准氧化液 ,待测定 .5.3 各取 5ml 标准氧化液于 2 个 50ml 容量瓶中 ,分别注明 "标准"及" 标准空白 ".5.4 各取 5ml 样品氧化液于 2 个 50ml 容量瓶中 ,分别注明 "样品"及" 样品空白 ".5.5 于"标准空白 " 及"样品空白 "溶液中各加 5ml 硼酸-乙酸钠溶液 ,混淆摇动 15min,用水稀释至 50ml,在 4℃冰箱中搁置 2h,拿出备用 .5.6 于"样品" 及"标准 "溶液中各加入 5ml50%乙酸钠溶液 ,用水稀释至 50ml, 备用.5.7 荧光反响取"标准空白 "溶液,"样品空白 "溶液及（ 5.6）中"样品"溶液各 2ml,分别置于 10ml 带盖试管中 .在暗室中快速向各管中加入 5ml 邻苯二胺 ,振摇混淆 ,在室温下反响 35min,用激发光波长 338nm,发射光波长 420nm 测定荧光强度 .标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标 ,对应的抗坏血酸含量为横坐标 ,绘制标准曲线或进行有关计算 ,其直线回归方程供计算时使用 .6. 计算X= （c×V/m）×F×(100/1000)式中： X----- 样品中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量 ,mg/100g;c------ 由标准曲线查得或由回归方程算得样品溶液浓度 , μg/ml;m----- 试样质量 ,g;F------ 样品溶液的稀释倍数 ;V------ 荧光反响所用试样体积 ,ml.例：测定每一制备溶液的荧光强度 .用标准溶液每 ml 含 2.5μg,5.0 μg,7.5及μ g10.0μg各, 标准浓度管读数减去相应的标准空白读数的各均匀值做标准曲线 .由样品液读数减去样品液空白读数之值 ,从标准曲线上查得相应的抗坏血酸（μg/m）l ,按取样量及稀释率计算样品中抗坏血酸的含量 .如：取制备好的辣椒样品 2.138g,稀释到 100ml,氧化后分别取 10ml 滤液稀释到 50ml样品读数为 23.34,样品空白读数为 3.188,样品读数减去样品空白读数为 20.152,查荧光标准曲线相当标准抗坏血酸的 2.23μg.2.23 ×100 50 100----- -××-- = 52（mg/100g）2.138 10 10007. 注意事项7.1 大部分植物组织内含有一种能损坏抗坏血酸的氧化酶 ,所以,抗坏血酸的测定应采纳新鲜样品并赶快用偏磷酸 -醋酸提取液将样品制成匀浆以保留维生素 C.7.2 某些果胶含量高的样品不易过滤 ,可采纳抽滤的方法 ,也可先离心 ,再取上清液过滤 .7.3 活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸 ,但它也有吸附抗坏血酸的作用 ,故活性炭用量应适合与正确 ,所以,应用天平称量 .我们的实验结果证明 ,用 2g 活性炭能使测定样品中复原型抗坏血酸完整氧化为脱氢型 ,其吸附影响不显然 .建议建议:二,2,4-二硝基苯肼法1.原理总抗坏血酸包含复原型 ,脱氢型和二酮古乐糖酸 .样品中复原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸 ,再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎 ,脎的含量与总抗坏血酸含量成正比 ,进行比色测定 .2.合用范围GB12392-90 本方法合用于蔬菜 ,水果及其制品中总抗坏血酸的测定 .3. 仪器3.1 恒温箱： 37±0.5℃3.2 可见-紫外分光光度计3.3 打坏机4.试剂本实验用水均为蒸馏水 ,试剂纯度均为剖析纯 .4.1 4.5mol/L 硫酸：慎重地加 250ml 硫酸（比重 1.84）于 700ml 水中,冷却后用水稀释至 1000ml.4.2 85%硫酸：慎重地加 900ml 硫酸（比重 1.84）于 100ml 水中.4.3 2%2,4-二硝基苯肼溶液：溶解 2g 2,4-二硝基苯肼于 100ml4.5mol/L 硫酸内 ,过滤.不用时存于冰箱内 ,每次用前一定过滤 .4.4 2%草酸溶液：溶解 20g 草酸于 700ml 水中,稀释至 1000ml.4.5 1%草酸溶液：稀释 500ml 2%草酸溶液到 1000ml.4.6 1%硫脲溶液：溶解 5g 硫脲于 500ml 1% 草酸溶液中 .4.7 2%硫脲溶液：溶解 10g 硫脲于 500ml1% 草酸溶液中 .4.8 1mol/L 盐酸：取 100ml 盐酸,加入水中 ,并稀释至 1200ml.4.9 活性炭：将 100g 活性炭加到 750ml 1mol/L 盐酸中 ,回流 1~2h,过滤,用水洗数次 ,至滤液中无铁离子（Fe3+）为止,而后置于 110℃烘箱中烘干 .4.10 标准（1）抗坏血酸标准溶液（ 1mg/ml ）：溶解 100mg 纯抗坏血酸于 100ml 1% 草酸溶液中 .（2）标准曲线绘制加 1g 活性炭于 50ml 标准溶液中 ,摇动 1min,过滤.取 10ml 滤液放入 500ml 容量瓶中 ,加 5.0g 硫脲,用 1%草酸溶液稀释至刻度 .抗坏血酸浓度为 20μg/ml.取 5,10,20,25,40,50,60ml 稀释液 ,分别放入 7 个 100ml 容量瓶中 ,用 1%硫脲溶液稀释至刻度 ,使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为 1,2,4,5,8,10 及 12μg/ml.按样品测定步骤形成脎并比色 .以吸光值为纵坐标 ,以抗坏血酸浓度（μg/ml）为横坐标绘制标准曲线 .5. 操作步骤5.1 样品制备所有实验过程应避光 .鲜样制备：称 100g 鲜样和 100g2%草酸溶液 ,倒入打坏机中打成匀浆 ,取 10-40g 匀浆（含 1-2mg 抗坏血酸）倒入 100ml 容量瓶中 ,用 1%草酸溶液稀释至刻度 ,混匀.干样制备：称 1-4g 干样（含 1-2mg 抗坏血酸）放入乳钵内 ,加入 1%草酸溶液磨成匀浆 ,倒入 100ml 容量瓶中 ,用 1%草酸溶液稀释至刻度 ,混匀.将上述两液过滤 ,滤液备用 .不易过滤的样品可用离心计积淀后 ,倾出上清液 ,过滤,备用.5.2 氧化办理：取 25ml 上述滤液 ,加入 0.5g 活性炭 ,振摇 1min,过滤,弃去最先数毫升滤液 .取 10ml 此氧化提取液,加入 10ml 2%硫脲溶液 ,混匀.5.3 呈色反响于三个试管中各加入 4ml 稀释液 .一个试管作为空白 ,在其他试管中加入 1.0ml 2%2,4-二硝基苯肼溶液 ,将所有试管放入 37±0.5℃恒温箱或水浴中 ,保温 3h.后拿出 ,除空白管外 ,将所有试管放入冰水中 .空白管拿出后使其冷到室温 ,而后加入 1.0ml 2%2,4- 二硝基苯肼溶液 ,在室温中搁置 10~15min 后放入冰水内 .其他步骤相同品 .85%硫酸办理：当试管放入冰水后 ,向每一试管中加入 5ml85%硫酸,滴加时间起码需要 1min, 需边加边摇动试管 .将试管自冰水中拿出 ,在室温搁置 30min 后比色.比色：用 1cm 比色杯 ,以空白液调零点 ,于 500nm 波长测吸光值 .6. 计算同荧光法 .7. 注意事项7.1 大部分植物组织内含有一种能损坏抗坏血酸的氧化酶 ,所以,抗坏血酸的测定应采纳新鲜样品并赶快用2%草酸溶液制成匀浆以保留维生素 C.7.2 若溶液中含有糖 ,硫酸加得太快 ,溶解热会使溶液变黑 .7.3 试管自冰水中拿出后 ,颜色会持续变深 ,所以,加入硫酸后 30 分钟应准时比色 .。
食品中维生素C的检测方法
食品中维生素C的检测方法
维生素C是机体正常生命活动所必需的有机化合物，作为一种理想的保健食品功能因子，被添加于各种保健食品及饮料中，因此对维生素C含量测定方法的研究也较多。
目前常规的维生素C含量测定方法有紫外分光光度法、碘量法等，但是维生素C具有较强的还原性，在中性和碱性环境下不稳定，遇热迅速分解，检测方法操作步骤复杂，具有试剂和试样溶液不稳定、灵敏度低、费时等缺点，尤其是有颜色的试样，其溶液颜色背景干扰大，对最终数据有影响。
高效液相色谱法具有高效、快速、稳定、灵敏度高的特点，能在较短时间内完成测定。
一、实验目的和要求
1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；
2、熟悉高效液相色谱的分析操作规程；
3、学习高效液相色谱检测食品中的维生素C的方法。
二、实验原理
在以维生素C标准品保留时间定性，采用外标法定量维生素C含量。
X=(A2×C)/A1
（X为样品中维生素C的含量单位为ug/mL，单位；A1为标样维生素C的峰面积；A2为样品中维生素C峰面积；C为维生素C标准液质量浓度。
）
三、仪器、试剂
1、仪器：岛津高效液相色谱仪、超声波清洗仪、超纯水制备仪、千分之一天平、离心机
2、试剂：维生素C标准品、醋酸、超纯水、橙汁
四、实验步骤
1、标准液的制备：
维生素C标准溶液配制:准确称取0.1219g维生素C，用0.1%醋酸溶液溶解，超声波振荡5min，再用0.1%醋酸定容至50mL，为标准溶液。
分别吸取标准溶液0.05，0.10，0.50，1.00，2.00，3.00mL于10mL容量瓶中，用0.1%醋酸溶液定容，进样测定。
2、样品的前处理：。
食品 维生素C测定 荧光光度法
法中提取液难配制以及存放时间不宜过长的缺点，而且简化了操作手续，提高了分析速度。
析 ３试剂 酸洗活性碳：取 １００ｇ活性碳，以 １０％的 ＨＣｌ５００ｍｌ加热煮沸 ２ｍｉｎ，以水洗涤 ３次（每 次 ５００ｍｌ），然后置 １２０℃下烘干备用；
９．５ １０．８ １２．２ １４．５ １６．９
中 硼酸－醋酸钠的影响：试验表明，作为掩蔽剂的硼酸－醋酸钠溶液在加入空白管后，必
须放置 １５ｍｉｎ后，荧光强度才完全降到最低值，否则空白值会偏高。
国 工作曲线：试验表明，Ｖｃ含量在 ０～８０μｇ／１４ｍｌ范围内有良好的线性关系，其工作曲线
的回归方程为：
Ｆ＝１．９７４＋１．２８１，相关系数 ｒ＝０．９９９１
表 ５ 几种食品中 Ｖｃ的测定结果
Ｖｃ含量
回收率
（ｍｇ／ｍｌ）
（％）
２．３６
９１．９
１２２．６６
９２．０
０．２４８
９２．１
０．２２８
９３．２
平均回收率 （％） ９２．３ ９２．３ ９２．３ ９２．３
７参考文献 《食品与发酵工业》 １９９４ Ｎｏ．１
中 国 分 析 网
式中：Ｆ 相对荧光强度； Ｃ μｇ／１４ｍｌ。
分
由于本法中 Ｖｃ在 ０～８０μｇ／１４ｍｌ范围内有良好的线性关系，故本文采用直接定点比较
法来计算样品的 Ｖｃ总量。
析 式中：ＦＡ
Ｖｃ含量（ｍｇ／ｍｌ）＝ＦＦＡＳ－－ＦＦＡＳ００ ×Ｃ×Ｋ×
１ １０００
样品液的相对荧光强度；
网 ＦＡ０ 样品空白液的相对荧光强度；
以水定容至 ５０ｍｌ，取此定容液 ５０ｍｌ，从棉花过滤至 １００ｍｌ烧杯中，加入 ２ｇ活性碳，剧烈搅
食品中维生素C的测定
目录1 前言 (1)2 实验方案 (1)2.1 方案一： 2，6-二氯靛酚滴定法 (1)2.2 方案二：高效液相色谱法 (1)2.3 方案三：2，4-二硝基苯肼法 (2)3 方案讨论 (3)4 结果与分析 (3)4.1 标准曲线 (3)4.2 计算 (3)4.3 数据分析 (4)5 注意事项及说明 (4)参考文献 (5)致谢 (6)摘要维生素 C（抗坏血酸）是一种己糖醛基酸，有四种异构体，其中L-（+）-抗坏血酸的活性最强，极易被氧化。
它在细胞氧化、胶原蛋白的形成、铁离子由血浆到组织器官中的转运、肌体免疫及抗体形成中起着重要的作用。
测定维生素C常用的方法有2，6-二氯靛粉滴定法、2，4-二硝基苯肼法、荧光法及高效液相色谱法、极谱法等。
2，6-二氯靛酚滴定法测定的是还原型抗坏血酸，该法简便、快速，但易受其他还原物质干扰、对深色样液难辨终点；荧光法、高效液相色谱法及极谱法对实验仪器和技术的要求比较高，综合各方面本文采用2，4-二硝基苯肼法，利用分光光度计分别测定橙汁、猕猴桃汁、梨汁的汁，再根据标准曲线计算其维生素C含量。
关键词：维生素C 2，4-二硝基苯肼法分光光度计标准曲线ABSTRACTVitamin C (ascorbic acid) is a kind of hexose aldehyde group acid, there are four isomer, including L - (+) - ascorbic acid activity is the most powerful, extremely easy oxidation. It in cell oxidation, collagen formation, iron ion by plasma to tissue organs of transport, the body immune antibody formation and plays an important role. Determination of vitamin C commonly used methods 2, 6 - dichloro indigo powder titration, 2, 4 - dinitrobenzene hydrazine method, fluorescent method and high performance liquid chromatography, polarography, etc. 2, 6 - dichloro indophenol titration determination is reduced ascorbic acid, the method is simple, rapid, but vulnerable to other reducing substances interference, to brunet sample liquid failure to end. Fluorescence method, high performance liquid chromatography and polarographic method for experimental instrument and technology demand is higher, integrated various aspects based on the 2, 4 - dinitrobenzene hydrazine method, using spectrophotometer, respectively orange juice, kiwi fruit juice, pear juice juice, then according to the standard curve calculating the vitamin C content.Keywords：Vitamin C 2, 4 - dinitrobenzene hydrazine method spectrophotometer standard curve1 前言：本文介绍了靛粉滴定法、高效液相色谱法及2，4-二硝基苯肼法这三种维生素C含量的测定方法，通过分析比较并结合实验室的设备条件及对操作技术的要求，采用2，4-二硝基苯肼法。
果蔬中vc含量的测定
果汁中Vc含量的测定引言：随着科学技术的开展，食品中维生素C的测定方法很多，如高效液相色谱法、荧光分光光度法、原子吸收光谱法、紫外分光光度法、滴定分析法、钼蓝比色法、碘量法等，其中高效液相色谱法、荧光分光光度法和原子吸收光谱法要求样品的纯度较高，还需要有昂贵的仪器；紫外分光光度法中2，4-二硝基苯肼比色法操作麻烦，耗时较长；2，6-二氯靛酚法操作简便且应用最普遍，但是药品价格昂贵，而且多数果汁样品溶液都有颜色，使滴定终点不易判定，使用脱色剂也很难脱色完全，且造成VC的损失。
相比之下，碘量法只需标定碘液，其后续操作方便简单，易操作，故本次试验采用碘量法测定果汁中维生素C的含量。
关键字：维生素C 碘量法碘溶液可溶性淀粉滴定一、实验局部(一)、实验原理维生素C属水溶性维生素，分子式C6H8O6。
分子中的烯二醇基具有复原性，能被I2定量地氧化成二酮基，因而可用I2标准溶液直接测定。
C6H8O6＋I2= C6H6O6＋2HI使用淀粉作为指示剂，用直接碘量法可测定药片、注射液、饮料、汁菜、水果中维生素C的含量。
由于Vc的复原性很强，较容易被溶液和空气中的氧氧化，在碱性介质中这种氧化作用更强，因此滴定宜在酸性介质中进展，以减少副反响的发生。
考虑到I -在强酸性中也易被氧化，故一般选在pH为3~4的弱酸性溶液中进展滴定。
(二)、实验仪器及药品材料：果汁。
仪器：烧杯多个、量筒、玻璃棒、滴管、容量瓶多个〔250mL〕、酸式滴定管、滤纸、锥形瓶等。
药品：0.02mol /L碘溶液、2% 可溶性淀粉溶液、2% HC l溶液。
(三)、试验步骤1、购置市场上现成的果汁；2、滴定果汁中vc的含量；〔1〕、移取50ml果汁注入250 ml锥形瓶中，三份，分别向三个锥形瓶中加人3m l淀粉溶液，再滴加10ml醋酸，将PH 值调至3左右；〔2〕、用0.02mol /L碘溶液滴定果汁，在滴定过程中，边滴边晃动锥形瓶，直到提取液呈现蓝色，且在30 秒内不褪色；〔3〕、重复滴定三次，记录每次滴定所用去的碘溶液量，并算出平均值。
实验四-测定食品中Vc的含量
实验三测定食品中Vc的含量一、能力目标1、熟练仪器的规范操作与检测；2、熟练标准工作曲线绘制；3、熟练原始记录、数据处理与报告。
二、原理根据维生素C具有对紫外光产生吸收、对碱不稳定的特性，在243nm处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度值之差，并通过标准曲线，即可计算出维生素C的含量。
三、仪器与试剂1、仪器紫外可见分光光度计2、试剂1）10%HCl：取133mL浓盐酸，加水稀释至500mL；2）1% HCl：取22mL浓盐酸，加水稀释至100mL；3）1mol/L NaOH溶液：称取40g 氢氧化钠，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000mL。
4）维生素C标准使用液的配制：在分析天平上准确称取抗坏血酸10mg，加2mL 10%HCl，再蒸馏水定容至100mL，混匀，即为100 μg/mL维生素C标准溶液。
四、测定步骤1、维生素C标准系列溶液的配制及测定取6个50mL容量瓶，依序加入100μg/mL维生素C标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL，分别补加蒸馏水至50.0mL，摇匀。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定标准系列维生素C溶液的吸光度。
2、样品中维生素C含量的测定（1）样品的测定：在两个盛有1.0～2.0mL10%HCl的50 mL容量瓶中，分别准确加入0.5～1.0mL样品液，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定吸光度。
（2）待测碱处理液的制备与测定：分别准确吸取0.5～1.0mL样品液、10mL蒸馏水和3～4 mL1mol/L NaOH溶液依次放入50 mL容量瓶中，混匀，15min后加入3～4 mL10%HCl，混匀，加蒸馏水定容至刻度。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定吸光度。
也可以碱处理待测液为空白，在243nm处测定样品提取液的吸光度。
五、数据记录及处理1．皿差的测定2．标准溶液吸光度测定以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
食品与药品中维生素C含量的检测方法综述
维生素C含量的检测方法综述维生素C是人体不可缺少的营养物质之一，人体主要通过新鲜水果、蔬菜或药片来获取或补充维生素。
因此维生素C的含量成为评价食品营养价值和药品质量的重要标准之一。
随着对食品安全的日益关心，食品营养中维生素C和医药品的定量分析已经吸引了越来越多的关注。
近年来食品与药品中维生素C的检测方法发展较为迅速，主要有滴定分析法、光度法、电化学法、化学发光法、流动注射法、液相色谱法以及原子吸收间接法等。
本文对比总结了这些方法的原理、特点以及应用范围，讨论了方法的优缺点，以期为选择合适的检测方法提供一定的参考。
维生素 C又称抗坏血酸，其结构式如图1所示，是一种重要的水溶性维生素，作为一种抗氧化剂和自由基清除剂，能够缓解多种疾病的氧化应激，与生命活动密切相关，具有极其重要的生理功能。
维生素C在人体内不能合成，因此必须从食品中摄取，其中水果和蔬菜是人体维生素C的主要来源。
由于维生素C的性质不稳定，在氧气、金属离子(如Cu2+、Ag+、Fe3+)存在下以及碱性、高温等条件下，很容易被氧化，不能确保维生素C的含量恒定。
文献报道的食品与药品中维生素C的检测方法主要包括滴定分析法、光度法、电化学法，化学发光法、流动注射法、液相色谱法(HPLC) 以及原子吸收间接法(AAS) 等。
表1中汇总了已报道的主要检测方法。
以下对几种常见的检测方法进行简要的叙述。
维生素C的测定方法1.滴定分析法采用滴定法测定维生素C的原理主要是利用维生素C的氧化还原性质，通过化学反应，选择合适的指示剂，根据样品溶液颜色的变化判定终点。
常见的方法有2,6-二氯吲哚酚滴定法(又称染料法)和碘量法等。
其中2,6-二氯吲哚酚滴定法的基本原理是：在酸性环境中，红色的2,6-二氯吲哚酚与维生素C反应被还原为无色的酚亚胺，以2,6-二氯吲哚酚染料为滴定剂，用滴定剂自身的颜色变化指示终点，当溶液中的维生素C刚好被全部氧化时,溶液呈浅红色, 30s内不褪色,即为滴定终点,其反应式如图2所示。
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食品中维生素C的检测方法
维生素C是机体正常生命活动所必需的有机化合物，作为一种理想的保健食品功能因子，被添加于各种保健食品及饮料中，因此对维生素C含量测定方法的研究也较多。
目前常规的维生素C含量测定方法有紫外分光光度法、碘量法等，但是维生素C具有较强的还原性，在中性和碱性环境下不稳定，遇热迅速分解，检测方法操作步骤复杂，具有试剂和试样溶液不稳定、灵敏度低、费时等缺点，尤其是有颜色的试样，其溶液颜色背景干扰大，对最终数据有影响。
高效液相色谱法具有高效、快速、稳定、灵敏度高的特点，能在较短时间内完成测定。
一、实验目的和要求
1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；
2、熟悉高效液相色谱的分析操作规程；
3、学习高效液相色谱检测食品中的维生素C的方法。
二、实验原理
在以维生素C标准品保留时间定性，采用外标法定量维生素C含量。
X=(A2×C)/A1
（X为样品中维生素C的含量单位为ug/mL，单位；A1为标样维生素C的峰面积；A2为样品中维生素C峰面积；C为维生素C标准液质量浓度。
）
三、仪器、试剂
1、仪器：岛津高效液相色谱仪、超声波清洗仪、超纯水制备仪、千分之一天平、离心机
2、试剂：维生素C标准品、醋酸、超纯水、橙汁
四、实验步骤
1、标准液的制备：
维生素C标准溶液配制:准确称取0.1219g维生素C，用0.1%醋酸溶液溶解，超声波振荡5min，再用0.1%醋酸定容至50mL，为标准溶液。
分别吸取标准溶液0.05，0.10，0.50，1.00，2.00，3.00mL于10mL容量瓶中，用0.1%醋酸溶液定容，进样测定。
2、样品的前处理：。