尿素(UREA)检测的标准操作程序
血清尿素的测定标准操作规程
血清尿素的测定标准操作规程【目的】学习血清尿素(Urea)测定方法，了解其意义。
【原理】血清尿素（Urea）是蛋白质的正常代谢产物。
它的测定是常用的衡量肾小球功能的指标之一。
肾性血清尿素含量增加，提示肾小球损伤。
是研究药物肾毒性的重要指标之一。
【器材】兔固定架、注射器、烧杯、可见分光光度计、试管、水浴【药品】0.5%氯化高汞溶液、生理盐水【动物】家兔2只【方法】取家兔2只，1只注射氯化高汞5ml/kg（0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg)，另1只注射等量的生理盐水。
48小时后，从家兔耳静脉取血1ml，制取血清，按血清尿素测定方法测定血清尿素含量。
【结果】记录2只家兔血清尿素含量，比较并分析其差别。
附血清尿素(Urea)测定方法【原理】尿素与二乙酰在酸性反应环境中加热，缩合生成色素原二嗪化合物。
因二乙酰不稳定，不宜直接加入，可由化学反应生成。
通常由反应系统中二乙酰一肟与强酸作用，产生乙二酰。
二乙酰和尿素反应，缩合生成红色的二嗪。
根据颜色深浅确定尿素含量的多少。
【试剂】(1)酸性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml。
冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g。
溶解后用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中冰箱保存，可稳定6个月。
(2)二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml，溶解后，再用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年。
(3)尿素标准贮存液（100mmol/L）:称取干燥纯尿素(MW=60.06)0.6g，溶解于蒸馏水中，并稀释至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内可稳定半年。
(4)尿素标准液应用液(5mmol/L)：取5.0ml贮存液用无氨蒸馏水稀释至100ml.【操作】按表T4-1进行混匀后，置沸水中加热12分钟，置冷水中冷却5分钟后，用分光光度计在波长540nm，以空白管调至零点。
比色读取标准管及测定管的吸光度。
UREA 项目操作手册
SOP标准操作程序UREA 尿素（货号：OSR6134，OSR6234）一、 目的：规范尿素测定的操作程序，确保尿素测定的结果准确二、 适用范围：在Beckman Coulter AU 分析仪上定量测定人血清中的尿素（UREA ） 三、 临床意义尿素在肝脏中合成，它是蛋白质和氨基酸代谢的最终产物。
因此，尿素合成取决于每日的蛋白质摄入量和内源性蛋白质代谢。
在这些代谢过程中产生的绝大多数尿素通过肾小球过滤消除，40 – 60% 扩散返回血液中（与近端小管中的流速无关）。
远侧小管内的重新扩散取决于尿流，受抗利尿激素调节。
在利尿期间，最少量的尿素重新扩散进入血液，大量尿素被排泄到尿液中，血浆尿素浓度很低。
在抗利尿（在少尿性心力衰竭，缺水状态或口渴中，可能出现这种状况）期间，尿素重新扩散到小管内的速度增加，血浆尿素增加。
在肾前性和肾后性肾衰竭中，小管尿流减少，导致远侧小管中的尿素重新扩散增加，肌酐分泌增加。
在心脏代偿失调、蛋白质分解代谢增加和缺水时，尿素会发生肾前性增加。
尿素水平可能因肾脏因素而升高，例如急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾小管坏死和肾硬化。
尿素的肾后性升高可能由泌尿道梗阻引起。
血浆尿素浓度取决于肾灌注、尿素合成速度和肾小球滤过率 (GFR)，在急性肾功能衰竭，慢性肾衰竭和肾前性氮质血症中，可能会升高。
在透析患者中，尿素浓度代表蛋白质的降解，也是代谢状态的指标。
在肾衰竭终末期，尿毒素病征（特别是与胃肠系统有关的尿毒素病征）与尿素浓度有密切的相关性。
在肾功能的鉴别诊断中，血清尿素和血清肌酐通常会一起测定。
四、 方法原理在水和尿素酶存在的情况下，尿素被水解，产生氨和二氧化碳。
在谷氨酸脱氢酶 (GLDH) 存在的情况下，上一反应中产生的氨与 2-酮戊二酸和NADH 结合，产生谷氨酸盐和 NAD+。
单位时间 NADH 吸光度的降低与尿素浓度成正比。
反应原理五、 标本的采集与处理5.1. 受检者的准备：空腹，采集前静坐5min ，如有输液，应在停止输液3min 后在另一侧肢体静脉采集。
血清尿素UREA测定
血清尿素UREA测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理在下述反应中，NAD+生成速率与样本中尿素（尿素氮）的浓度成正比。
通过在340 nm处测定固定时间间隔内吸光度的下降速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。
尿素酶尿素 + 2H2O 2 NH4＋ + 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH+H+ L-谷氨酸+NAD＋+H2O3 标本：3.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
3.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3.3标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：α-酮戊二酸7.5mmol/L谷氨酸脱氢酶＞800U/LNADH 0.35mmol/L二磷酸腺苷 1.5mmol/L Tris缓冲液115mmol/L试剂2（R2）：Tris缓冲液115mmol/L尿素酶＞40000 U/L α-酮戊二酸7mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有防腐剂叠氮化钠，可能存在一定的刺激作用，请勿直接接触皮肤、眼睛。
人(Human)尿素( urea)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）尿素（Urea）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被尿素（Urea）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的尿素（Urea）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
上海笃玛生物科技有限公司试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1、2、4、8、16mmol/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
尿素检测标准操作规程SOP
还原型辅酶I（NADH)
0.3mol/l
α-酮戊二酸
13.0mol/l
不同批次的试剂不推荐混合使用
7.4储存条件有效期
试剂在2-8℃保存可稳定1年，试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。
7.5参数设置
主波长
340nm
辅助波长
405nm
反应方法
速率法
反应温度
37℃
反应方向
向下
试剂1
200ulቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
样本
2.5ul
4.1生理性：高蛋白饮食可引起血尿素浓度和尿液排出量显著增高。成人血清尿素浓度男性比女性平均高出0.3-0.8mmol/l，并随着年龄增加有增高倾向。妊娠妇女由于血容量增加，尿素浓度比非孕妇低。
4.2病理性：分为肾前性、肾性、肾后性。①肾前性:主要是严重失水引起的血液浓缩，肾血流量減少及肾小球滤过率降低，从而使尿素潴留，可见于剧烈呕吐、肠梗阻和长期腹泻;②肾性:为最常见的因素，可见于急性肾小球肾炎、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等，在肾功能不全的代偿期可见尿素轻度升高(＞8.0mmol/L)，肾功能衰竭失代偿期，尿素可中度升高(17.9～21.4mmol/L)，肌酐也中度升高(442.0umol/L);尿毒症时尿素＞21.4mmol/L，肌酐也可达1800umol/L，为尿毒症的诊断标准之一;③肾后性:如前列腺肥大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤等都可能使尿路阻塞引起血尿素升高。血液尿素减少较为少见，除了妊娠、蛋白质营养不良等情況外。常表示有严重的肝病、肝坏死。
12.2尿素氮测定只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体征、病史及其他的诊断项目、诊断手段进行综合判断。
13.性能指标
13.1线性范围：在（0.3-35.7）mmol/L范围内：a)线性相关系数（r）应>0.995;b)（0.3-10.0）mmol/L范围内，线性偏差应≦2.0mmol/L;（10.0-35.7）mmol/L范围内，线性偏差应该≦10.0%。
尿素检测--检测技术
迪信泰检测平台
尿素检测
尿素（Urea），又称碳酰胺（Carbamide)，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物，也是目前含氮量最高的氮肥。
作为一种中性肥料，尿素适用于各种土壤和植物。
它易保存，使用方便，对土壤的破坏作用小，是目前使用量较大的一种化学氮肥。
工业上用氨气和二氧化碳在一定条件下合成尿素。
迪信泰检测平台采用液相质谱联用(LC-MS)的方法，使用Thermo Scientific的
U3000快速液相色谱对样品进行分离，Thermo Scientific™ Q Exactive™对样品进行鉴定，可高效、精准的检测尿素的含量变化。
此外，我们还提供其他极性小分子系列检测服务，以满足您的不同需求。
LC-MS测定尿素样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3.质谱图片。
4. 原始数据。
5. 尿素含量信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
二乙酰一肟检测尿素指南
尿素又称脲，是体内蛋白质分解代谢的含氮终产物，不 与血浆蛋白结合，分子量仅为60，体内生成量受蛋白质摄入
量，机体蛋白质分解代谢及肝脏（生成尿素的唯一器官）功
能的影响。 尿素是表明游泳池水受到人体污染程度的一项重要指标。
二乙酰一肟（diacetylmonoxime） 法检测尿素（urea）含量
2 试剂
2.1 二乙酰一肟-异丙醇溶液 称取1.0g二乙酰一肟溶于 1+9乙酸溶液中，并使其总量为100ml，于此溶液中加入异丙 醇50ml，混匀，棕色瓶中保存。 2.2 2.3 安替比林溶液 称取0.2g安替比林溶于1+1硫酸中，并 称取0.1000g尿素，溶于少量水后移 使其总量为100ml，棕色瓶中保存。 尿素标准贮备液 入1000ml容量瓶中，加0.1ml氯仿并用水定容，冷藏保存，
值。以浓度对照吸光值，制备标准曲线。以水样的吸光值
在标准曲线上查出尿素含量。
4 结果
本法操作简便，溶液显色稳定，线性范围宽，试剂 稳定时间长，适合平时工作中使用。
二乙酰一肟-异丙醇-安替比林法
化学式
（CH3）2CHOH OH
异丙醇
结构式
H3C
CH
I
CH3
作用
作显色稳定剂。
1 原理
在原发的基础上，选择异丙醇作显色稳定剂对游泳池 水中尿素进行测定，使标准曲线的线性范围有了很大的提 高，缩短了煮沸时间，方法的精密度、准确度优于原法， 且符合卫生检验要求。
导致测定结果不准确的弊端;方法的精密度、准确度好,优于原 法,且符合卫生检验的要求。
国标法改进前后对照表
加热时间 优点 缺点
改进前
50分钟
灵敏度、重现性、 费时、遇光易褪色、 线性范围窄 回收率高
实验十七 血清尿素的测定(二乙酰一肟法)
实验十七 血清尿素的测定（二乙酰一肟法）【目的】1. 掌握血清尿素的测定原理和方法。
2. 了解尿素测定的参考范围及临床意义。
【原理】尿素（urea ）在强酸、加热的条件下，与二乙酰缩合生成红色的二嗪化合物（Fearon 反应），其颜色深浅与尿素含量成正比。
与同样处理的标准液在540nm 处比色，求得尿素含量。
由于二乙酰不稳定，一般由二乙酰一肟与强酸作用产生。
其反应式如下：CH 3CH 3O O +H 2OH +CH 3CH 3O N OH +NH 2OH二乙酰一肟二乙酰羟胺CH 3CH 3O O 二乙酰+C ON H 2NH 2尿素H +CH 3C C 3N N C O+H 2O2二嗪衍生物【器材】试管、试管架、微量加样器及吸量管、沸水浴、分光光度计。
【试剂】 1．酸性试剂在三角烧瓶中加去离子水约100ml ，然后缓慢加入浓硫酸44ml 、85%磷酸66ml ，冷至室温，加入氨基硫脲50mg 及硫酸镉(CdSO4·8H 2O)2g ，溶解后移入1L 容量瓶中，加去离子水至1L 。
置棕色瓶中，4℃可保存半年。
2．二乙酰一肟溶液称二乙酰一肟20g 溶于去离子水中并定容至1L 。
置棕色瓶中，4℃可保存半年。
3．尿素标准贮存液(100mmol/L)精确称取于60～65℃干燥恒重的尿素(MW 为 60.06)0.6g ，溶解于无氨去离子水，并定容至100ml ，加0.1g 叠氮钠防腐，4℃可保存6个月。
4．尿素标准应用液(5mmol/L)取5ml上述贮存液用无氨去离子水稀释至100ml。
【操作】取试管3支，按下表操作：表3-19 血清尿素测定加入物 (ml) 空白管标准管测定管血清－－0.02尿素标准应用液－0.02 －去离子水0.02 －－二乙酰一肟溶液0.5 0.5 0.5酸性试剂 5.0 5.0 5.0混匀，置沸水浴加热 12分钟，取出置冷水中冷却 5分钟，以空白管调零，在 540nm 波长处读取各管吸光度。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
尿素（UREA）检测的标准操作程序
一、目的
规范在罗氏cobas c311生化分析仪上定量检测人血清、血浆中的尿素，确保检测结果的准确性及重复性。
二、范围
检验科生化室检验人员。
三、该SOP变动程序
本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准:专业组长，科室主任。
四、授权操作人
检验科经过培训并被授权发报告的人员均可操作。
五、实验原理
酶动力学法
尿素 + H
2O 尿酶 2NH+
4
+ CO
2
2NH+
4 + α-酮戊二酸 + NADH + H+ 谷氨酸脱氢酶 L-谷氨酸 + 2NAD+ + H
2
O
NADH浓度降低的速率与样本中的BUN的浓度成正比，在340nm下进行检测。
六、标本
1、标本类型：
血清：使用标准取样试管或含分离胶的试管采集。
血浆：肝素、EDTA-K3 、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可。
2、样本稳定性：
标本在2－8 度可稳定2 天，15－25度可稳定8小时，-20 度可稳定6 个月。
只能冻融一次。
七、仪器与试剂
1、仪器：罗氏cobas c311生化分析仪
2、试剂：罗氏原装配套尿素试剂，试剂无需任何处理，可直接使用
3、试剂稳定性：未开封试剂盒按要求保存可稳定至有效期末，已开封试剂
盒在仪器上可稳定8周
八、校准
1、校准物：S1:0.9%NaCl，S2:C.f.a.s(罗氏通用校准品，复溶后使用)。
2、校准方法：两点校准。
3、校准频率：每批试剂必须用新鲜试剂和校准一次。
另外，以下情况需要再
次校准：校准过期:批校准稳定28天，盒校准7天。
九、操作程序
1.每日开机准备：
1.1仪器处于关机状态
1.1.1检查供水、排水系统是否正常
1.1.2接通仪器左侧电源开关, 以及电脑控制电脑的开关
1.1.3登陆：输入用户名mjt及密码123，仪器初始化后进入待机状态
1.2仪器处于休眠状态：
1.2.1仪器在进入睡眠时指定的时间自动唤醒，或单击[[唤醒]]唤醒仪器；
1.2.2系统退出睡眠状态至登录界面，输入用户名及密码，仪器初始化后进入待
机状态。
1.3开机后确认
1.3.1进入系统总览，点击日常保养按键，检查保养工作是否完成（仪器自动完
成，但如果Hitergent不够量，自动保养会中断），如保养未完成，确认Hitergent够量后，进入综合功能—维护，用光标选中需做的保养项目，点选择，再执行，手工要求仪器完成保养工作
1.3.2清除标本数据库
进入进入系统概览，点样本数据清除，选择清除后点确定，即可清除以往所有的病人结果数据
1.3.3检查试剂盘内试剂是否足够：
进入试剂界面，点击设置按键,从该画面下检查试剂量,按需要更换试剂
2.校准程序
2.1 仪器校准的条件
2.1 1 仪器光路系统经过大型保养或仪器更换重要部件
2.1.2 挪动仪器的安装地点
2.1.3 更换不同品牌的试剂
2.1.4 更换试剂批号
2.1.5室内质控失控
2.2 校准步骤
2.2.1点击“校准”→“状态”→选择UREA→点击“2点”→“量程”→“保
存”
2.2.2 在98号位放入生理盐水，97号位放入C.f.a.s，点击“开始”。
2.3.查看定标结果
在校准—状态界面中点某项目，再点校准结果, 可看到项目的空白吸光度值及定标K值
3、质控程序
3.1根据CLIA’88和卫生部临床检验中心室间质评要求，以被测项目总误差
的1/3乘以该项目的靶值所得的绝对值为一个标准差，作为室内质控的质量目标要求。
根据CLIA’88要求，UREA总分析误差为±9%。
3.2在冰箱冷冻室取出已分装好的质控品，放置室温30分钟，待其完全溶解。
3.3 检测质控品（参阅样品检测程序），待检测完毕仪器自动将检测结果传入
LIS系统。
3.4 在LIS系统姓名栏输入“质控1”（低值）和“质控2”（高值），打印报
告单。
3.5 点击LIS系统上质控栏→质控图，观察质控结果是否违背质控规则。
3.6 若如无失控，则继续检测样本；若有失控，分析失控原因，填写失控报
告单，纠正失控原因后，方可继续检测样本。
4、样品检测程序
4.1项目选择：
“工作区”→“项目选择”→输入序列号，样本位置，标本编号，选择
项目→“保存”
4.2 把标本放入输入好的样本位置，点击“开始”。
5、结果的查看
进入工作区—结果浏览(如下图), 光标选上要查看的标本号，在右边界
面可看到该标本所做的项目和结果，不同的项目，再点反应过程监测，
可看到相应项目的反应曲线
6、关机程序
W1放ISE Cleaning，W2放新鲜血清，执行“综合”→“维护”→“guanjibaoyang”→“选择”，仪器自动进行冲洗，完成仪器回到休眠状态。
十、计算
对每一个标本，仪器会自动计算尿素含量，单位是mmol/l。
十一、参考区间
1.7- 8.3 mmol/L (<50 mg/dL)
十二、性能指标
1.本法线性范围0.5-40 mmol/L，
2.不确定度允许范围X±9%，
3.不精密度CV≤2.7%
4.灵敏度为0.5 mmol/L。
十三、注意事项
标准：回收率在90％－110％之间；
黄疸：血清指数高至60，对检测结果无明显干扰；
溶血：血清指数高至1000，对检测结果无明显干扰；
血脂：血清指数高至1000，对检测结果无明显干扰；
如果将检测结果作为诊断指标，应该结合病史及其它临床检查结果综合进行评估。
十四、临床意义
尿素是蛋白质和氨基酸中氮的代谢的终产物。
在肝脏中尿素/尿素氮通过尿素循环由氨基酸脱氨基形成的氨合成，绝大多数的尿素通过肾脏排泄,少量的尿素/尿素氮也通过汗液排泄以及通过小肠中的细菌分解后排泄。
检测血液中的尿素氮的水平最普遍用于筛查肾脏的功能。
当尿素/尿素氮的检测与血清中的肌肝水平的检测结合起来的时候,能够有助于鉴别三种肾脏疾病:肾前性、肾性、肾后性。
血液中的尿素/尿素氮的水平升高见于肾脏功能障碍、休克、供血量减少(肾前性)、慢性肾炎、肾血管硬化、肾小球肾炎(肾性)以及尿道阻塞等情况(肾后性)。
饮食中蛋白质水平的升高也可以造成结果的偏高，尿素水平降低可以出现在饮食蛋白质水平偏低以及肝脏疾病等情况下.。