胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PPT78页)
合集下载
《胶体金检测技术》ppt幻灯片
培训资料
12
培训资料四、B-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例一 .适用范围：主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb) 。 也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml 时，检测卡才 能检测到。
培训资料
23
培训资料六、发展方向(Developing)1.标记技术的探索顺磁粒子标记、量子点标记
免疫反应信号转化为电子信号模式
mndad/-CenjuyateSwhatratePeristaltiepurmP
2.生物传感器
wit.(b)(o)
oistansNc sbnste
培训资料
Sample Well
培训资料
20
培训资料五、常见问题及注意事项1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心(西安)
主要内容一、免疫胶体金技术的发展历史二、 胶体金检测卡的基本原理及构造三、 免疫胶体金层析法检测原理及应用四、S-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍五、 常见问题分析与注意事项六、 免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
2
培训资料一 、免疫胶体金技术的发展史1. 1939年(英，植物) Kausche 和Ruska 把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。2. 1971年(美，微生物) Faulk 和Taylor 首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。3 . 1974年(奥) Romano 等将胶体金标记在马抗人IgG 上，实现了间接免疫金染色法。同年Bauer 等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。
12
培训资料四、B-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例一 .适用范围：主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb) 。 也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml 时，检测卡才 能检测到。
培训资料
23
培训资料六、发展方向(Developing)1.标记技术的探索顺磁粒子标记、量子点标记
免疫反应信号转化为电子信号模式
mndad/-CenjuyateSwhatratePeristaltiepurmP
2.生物传感器
wit.(b)(o)
oistansNc sbnste
培训资料
Sample Well
培训资料
20
培训资料五、常见问题及注意事项1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心(西安)
主要内容一、免疫胶体金技术的发展历史二、 胶体金检测卡的基本原理及构造三、 免疫胶体金层析法检测原理及应用四、S-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍五、 常见问题分析与注意事项六、 免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
2
培训资料一 、免疫胶体金技术的发展史1. 1939年(英，植物) Kausche 和Ruska 把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。2. 1971年(美，微生物) Faulk 和Taylor 首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。3 . 1974年(奥) Romano 等将胶体金标记在马抗人IgG 上，实现了间接免疫金染色法。同年Bauer 等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。
实验六 胶体金免疫层析技术PPT课件
第2页/共16页
简介
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠） 的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带 负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳 定的胶体状态，故称胶体金。
第3页/共16页
简介
胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗
第9页/共16页
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合 （免疫金复合物中的单克隆抗体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色 质 控 线条（R）。
第10页/共16页
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
第11页/共16页
胶体金快速诊断技术的特 点
粒为球形，大小均一，无棱角。 ✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，
形状各异。
第4页/共16页
简介
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。 胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用于 抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
第5页/共16页
胶体金试纸条诊断技术的原 理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另 一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体 金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
第6页/共16页
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
质检线
实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
简介
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠） 的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带 负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳 定的胶体状态，故称胶体金。
第3页/共16页
简介
胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗
第9页/共16页
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合 （免疫金复合物中的单克隆抗体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色 质 控 线条（R）。
第10页/共16页
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
第11页/共16页
胶体金快速诊断技术的特 点
粒为球形，大小均一，无棱角。 ✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，
形状各异。
第4页/共16页
简介
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。 胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用于 抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
第5页/共16页
胶体金试纸条诊断技术的原 理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另 一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体 金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
第6页/共16页
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
质检线
实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
胶体金的制备及其应用PPT课件
胶体金用于电镜水平的研究，主要包括：①细胞悬液 或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内 抗原的检测。③组织抗原的检测。
金标记在电镜水平的应用，主要方法包括： 包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记 技术和原位杂交技术等。
实验证明，该法样本用量少、检测速度快、 对比明显、操作简单、敏感性和特异性高，既可 用于抗原检测，也可用于抗体检测，因此，可同 时适用于科研和诊断。
• 目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的 免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫 金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力 工具
免疫胶体金技术的基本原理
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也 可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银 染色。
主要内容
• 概述 • 免疫胶体金技术的基本原理 • 胶体金的特性 • 胶体金的制备方法 • 胶体金的鉴定和保存 • 免疫胶体金制备和保存 • 免疫胶体金应用
概述
• 胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径
在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系， 颜色呈桔红色到紫红色。
• 1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化 学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；
下述标记步骤最为常见：
• ①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH( 标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。
金标记在电镜水平的应用，主要方法包括： 包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记 技术和原位杂交技术等。
实验证明，该法样本用量少、检测速度快、 对比明显、操作简单、敏感性和特异性高，既可 用于抗原检测，也可用于抗体检测，因此，可同 时适用于科研和诊断。
• 目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的 免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫 金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力 工具
免疫胶体金技术的基本原理
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也 可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银 染色。
主要内容
• 概述 • 免疫胶体金技术的基本原理 • 胶体金的特性 • 胶体金的制备方法 • 胶体金的鉴定和保存 • 免疫胶体金制备和保存 • 免疫胶体金应用
概述
• 胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径
在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系， 颜色呈桔红色到紫红色。
• 1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化 学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；
下述标记步骤最为常见：
• ①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH( 标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。
胶体金快速免疫诊断技术课件
•胶体金快速免疫诊断技术
•11
•胶体金快速免疫诊断技术
•12
•胶体金快速免疫诊断技术
•13
•胶体金快速免疫诊断技术
•14
•胶体金快速免疫诊断技术
•15
•胶体金快速免疫诊断技术
•16
•胶体金快速免疫诊断技术
•17
•胶体金快速免疫诊断技术
•18
•胶体金快速免疫诊断技术
•19
•胶体金快速免疫诊断技术
•胶体金快速免疫诊断技术
•1
•胶体金快速免疫诊断技术
•2
•胶体金快速免疫诊断技术
•3
•胶体金快速免疫诊断技术
•4
•胶体金快速免疫诊断技术
•5
•胶体金快速免疫诊断技术
•6
•胶体金快速免疫诊断技术
•7
•胶体金快速免疫诊断技术
•8
•胶体金快速免疫诊断技术
•9
•胶体金快速免疫诊断技术
•10
•20
•胶体金快速免疫诊断技术
•21
•胶体金快速免疫诊断技术
•22
•胶体金快速免疫诊断技术•23 Nhomakorabea•胶体金快速免疫诊断技术
•24
•胶体金快速免疫诊断技术
•25
•胶体金快速免疫诊断技术
•26
•胶体金快速免疫诊断技术
•27
•胶体金快速免疫诊断技术
•28
•胶体金快速免疫诊断技术
•29
•胶体金快速免疫诊断技术
•30
•胶体金快速免疫诊断技术
•31
胶体金生产工艺配方原则参考幻灯片共81页
胶体金生产工艺配方原则参考幻灯片
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢
胶体金技术简介 ppt课件
稳定性好：金标试剂稳定，可长期室温保存
检测标本种类多：既可用于测血清/血浆/全血，又可用于测 尿或唾液,或处理后的组织等固体样品
6
免疫层析法应用领域
类别 人类医学
农牧业 环境 食品安全
应用领域
检测的物质
各级医院,血站,CDC,防 疫站,诊断中心；家庭
自检；商检系统；边检 口岸；公安系统.
女性妊娠（hCG,LH等)
传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等） 肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等）
心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统, 传染病（禽流感、兽瘟疫等）
边检口岸,农牧类院系
和研究所
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机 有害物质超标 构
喷点法与浸泡法的比较 (AJQ3000喷头)
1.释放快慢 2.液体量不同，干燥快慢，边缘
效应 3.生产方便性
20
样品垫
材料选择
各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100
21
吸水纸
吸水效率 进口与国产纸的差异
一步法
固相系统,常温保存
开发周期长,使用方便
20-40nm 胶体金 大孔径膜 侧向流动
免疫渗滤法
多步法
液体/固相系统 液体需要冷冻保存 开发周期短,使用不方便
10-15nm 胶体金 小孔径膜 竖向流动
4
免疫层析法技术优势:简单/现场/快速
1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内）
胶体金试纸条检测技术ppt
-
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合（免疫金复合物中的单克隆 抗 体 为 小 鼠 IgG）， 而 显出红 色质控线条（R）。
-
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
-
胶体金快速诊断技术的特点
简捷快速：操作简单，一般只要5-10min 就会出 结果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR 需要 时间更长。
H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
-
谢谢观看!
-
快乐工作，快乐生活！ 感谢您的聆听！ ！
欢迎批评指导！！
2019
-
18
-
➢基础金核 ➢双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中 zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持 胶体金的稳定状态。
-
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功 能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质 等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非 共价结合，形成胶体金标记物。
-
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
-
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易 判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这 决定了它具有很好的特异性。
-
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合（免疫金复合物中的单克隆 抗 体 为 小 鼠 IgG）， 而 显出红 色质控线条（R）。
-
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
-
胶体金快速诊断技术的特点
简捷快速：操作简单，一般只要5-10min 就会出 结果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR 需要 时间更长。
H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
-
谢谢观看!
-
快乐工作，快乐生活！ 感谢您的聆听！ ！
欢迎批评指导！！
2019
-
18
-
➢基础金核 ➢双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中 zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持 胶体金的稳定状态。
-
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功 能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质 等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非 共价结合，形成胶体金标记物。
-
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
-
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易 判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这 决定了它具有很好的特异性。
-
胶体金 ppt课件
(三) 技术要点
• 1.试剂盒组成 ①滴金反应板 (图20-1)胶体 金免疫渗滤试验中主要试剂成分之一， 由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或 抗体的醋酸纤维素膜片三部分组成。② 胶体金标记物 ③洗涤液 。
2.操作要点
• 2.操作要点 ①将反应板平放于实验台面上，于 小孔内滴加含待测抗原标本1-2滴，待完全渗 入；②于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1-2 滴，待完全渗入；
• （2）胶体金的颜色和光吸收性：对同一
种物质的水溶胶金颗粒来说，粒子大小 不同，颜色亦不同，胶体金颗粒在5～ 20nm之间，吸收波长520nm，呈葡萄酒 红色，20～40nm之间吸收波长530nm， 液体为深红色，60nm的金溶液主要吸收 波长600nm，金溶液呈兰紫色，若离心
去掉较大的金颗胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金 却也并非易事。因此对每次制好的胶体金应加以 检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程 度及有无凝集颗粒等。在日光下仔细观察比较胶 体金的颜色，可以粗略估计制得的金颗粒的大小。 当然也可用分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的 粒径。制备的胶体金最好作电镜观察，并选一些 代表性的作显微摄影，可以比较精确地测定胶体 金的平均粒径。 良好的胶体金应该是清亮透明的， 若制备的胶体金混浊或液体表面有漂浮物，提示 此次制备的胶体金有较多的凝集颗粒。
最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法。
①先配制HAuC14水溶液，加热至沸。②搅动下准 确加入一定量的柠檬酸三钠 （Na3C6H5O7·2H2O）水溶液。③继续加热煮 沸一定时间。此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶 液在柠檬酸钠加入后很快变灰色，续而转成黑色， 随后逐渐稳定成红色。全过程约2～3min。④冷 却至室温后用蒸馏水恢复至原体积。通过改变柠 檬酸三钠的用量可以制得不同大小的胶体金颗粒
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
245 185 140 100
胶体金诊断试剂工艺配方原则
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 IgG结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
7
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
12
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
13
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 BSA结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
8
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
▪ 静电 ▪ 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
▪ 使蛋白从溶液中分离出来 ▪ 长久结合作用
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖盐
▪ 通常不会影响 ▪ 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 ▪ 减少信号强度，消假阳
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
17
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
❖惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 ❖表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
11
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
蛋白结合到固相材料上
❖ 蛋白结合到固相材料上是一个多步骤过程 ❖ 取决于
▪ 蛋白溶液扩散到固相表面 ▪ 蛋白从溶液中分离出来 ▪ 蛋白吸附到固相上 ▪ 蛋白重排到最低能态
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
19
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
推荐的起始缓冲液
❖10mM Phosphate pH 7.0 3% Ethanol
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
20
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
18
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
缓冲液的基本成分
各种缓冲系: Tris-HCl, PB, CB等 盐类：NaCl 糖：蔗糖，海藻糖等 表面活性剂：Tween20，Triton x-100等 惰性蛋白：Casein等 防腐剂 ：叠氮钠，卡松等
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
10
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖蛋白质疏水性状和亲水性状
当蛋白质溶解在溶剂中时，蛋白质处于非常 稳定的状态，此时蛋白质的亲水基团展开 在外，疏水基团收缩在内，亲水基团和水 分子接触，保证了溶解性的状态；当蛋白 质沉淀出来时，疏水基团展开，亲水基团 收缩，此时为疏水状态，也呈现不稳定的 固体状态，疏水基团和其他固体物的疏水 基团通过疏水作用力结合，达到固定的目 的。
9
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖静电作用力
静电作用力是正负电荷相互吸引产生的作用 力
❖疏水作用力
疏水作用力又称为疏水键。它是由侧链的疏 水基团相互接近. 而形成的一种作用力。对 维持分子的三、四级结构起着重要的作用。 每一个蛋白质都具有疏水基团和亲水基团。
多位点结合
只有1个位点的结合是可逆的
多位点结合使得蛋白稳定在固相表面， 即使其中的每个单位点都是可逆的
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
14
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
影响蛋白结合的因素
▪ 蛋白缓冲液 ▪ 使用的膜 ▪ 蛋白自身 ▪ 应用体系
2
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
一、和膜相关的配方和原理
电镜下的NC膜
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
3
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
硝酸纤维膜生产工艺图
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
15
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
蛋白缓冲液
❖没有通用的缓冲液，不同的系统必须分别 优化。
❖作用：提供适合的PH, 改善亲水性, 增溶性, 提高稳定性
❖定律:
“蛋白在缓冲液中越不稳定，蛋白结合力越 强”
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺 配方原则
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
内容
一、和膜相关的配方和原理 二、和金子垫相关的配方和原理 三、和样品垫相关的配方和原理 四、相关问题
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
4
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
孔径定义的问题
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
5
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
孔径对侧向层析速度的影响
标称孔径 (m)
3 5 8 12
层析 4.5 cm 的时间 (sec)
16
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
缓冲液的优化
❖ 离子强度
▪ 对于蛋白从溶液中脱离出来很重要，少量的离子强度， 蛋白难以从溶液中脱离沉淀出来，过量的的离子强度， 溶液配制中就已会出现沉淀。
❖ pH
▪ 蛋白在等电点最不稳定
❖ 沉淀剂
▪ 通常用醇降低蛋白的稳定性，也可润湿膜，减少膜带 有的静电，利于结合包被。
胶体金诊断试剂工艺配方原则
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 IgG结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
7
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
12
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
13
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 BSA结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
8
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
▪ 静电 ▪ 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
▪ 使蛋白从溶液中分离出来 ▪ 长久结合作用
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖盐
▪ 通常不会影响 ▪ 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 ▪ 减少信号强度，消假阳
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
17
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
❖惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 ❖表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
11
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
蛋白结合到固相材料上
❖ 蛋白结合到固相材料上是一个多步骤过程 ❖ 取决于
▪ 蛋白溶液扩散到固相表面 ▪ 蛋白从溶液中分离出来 ▪ 蛋白吸附到固相上 ▪ 蛋白重排到最低能态
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
19
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
推荐的起始缓冲液
❖10mM Phosphate pH 7.0 3% Ethanol
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
20
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
18
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
缓冲液的基本成分
各种缓冲系: Tris-HCl, PB, CB等 盐类：NaCl 糖：蔗糖，海藻糖等 表面活性剂：Tween20，Triton x-100等 惰性蛋白：Casein等 防腐剂 ：叠氮钠，卡松等
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
10
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖蛋白质疏水性状和亲水性状
当蛋白质溶解在溶剂中时，蛋白质处于非常 稳定的状态，此时蛋白质的亲水基团展开 在外，疏水基团收缩在内，亲水基团和水 分子接触，保证了溶解性的状态；当蛋白 质沉淀出来时，疏水基团展开，亲水基团 收缩，此时为疏水状态，也呈现不稳定的 固体状态，疏水基团和其他固体物的疏水 基团通过疏水作用力结合，达到固定的目 的。
9
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖静电作用力
静电作用力是正负电荷相互吸引产生的作用 力
❖疏水作用力
疏水作用力又称为疏水键。它是由侧链的疏 水基团相互接近. 而形成的一种作用力。对 维持分子的三、四级结构起着重要的作用。 每一个蛋白质都具有疏水基团和亲水基团。
多位点结合
只有1个位点的结合是可逆的
多位点结合使得蛋白稳定在固相表面， 即使其中的每个单位点都是可逆的
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
14
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
影响蛋白结合的因素
▪ 蛋白缓冲液 ▪ 使用的膜 ▪ 蛋白自身 ▪ 应用体系
2
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
一、和膜相关的配方和原理
电镜下的NC膜
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
3
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
硝酸纤维膜生产工艺图
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
15
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
蛋白缓冲液
❖没有通用的缓冲液，不同的系统必须分别 优化。
❖作用：提供适合的PH, 改善亲水性, 增溶性, 提高稳定性
❖定律:
“蛋白在缓冲液中越不稳定，蛋白结合力越 强”
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺 配方原则
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
内容
一、和膜相关的配方和原理 二、和金子垫相关的配方和原理 三、和样品垫相关的配方和原理 四、相关问题
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
4
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
孔径定义的问题
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
5
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
孔径对侧向层析速度的影响
标称孔径 (m)
3 5 8 12
层析 4.5 cm 的时间 (sec)
16
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
缓冲液的优化
❖ 离子强度
▪ 对于蛋白从溶液中脱离出来很重要，少量的离子强度， 蛋白难以从溶液中脱离沉淀出来，过量的的离子强度， 溶液配制中就已会出现沉淀。
❖ pH
▪ 蛋白在等电点最不稳定
❖ 沉淀剂
▪ 通常用醇降低蛋白的稳定性，也可润湿膜，减少膜带 有的静电，利于结合包被。