超全干细胞重点知识总结
干细胞 医学百科知识
干细胞是一类具有特殊能力的细胞，它们能够自我复制并分化成各种不同类型的细胞。
这种特殊能力使得干细胞在医学研究和治疗领域具有巨大的潜力。
以下是有关干细胞的医学百科知识：
1.类型：干细胞分为多种类型，包括胚胎干细胞和成体干细胞。
胚胎干细胞来源于早期胚
胎，可以分化成任何细胞类型。
成体干细胞存在于成熟组织中，可以分化成与其来源组织相似的细胞。
2.分化能力：干细胞的主要特点是其分化能力，即能够分化成多种细胞类型，例如神经细
胞、心脏细胞、肌肉细胞等。
这种能力使得它们在组织修复和再生方面具有潜力。
3.治疗潜力：干细胞研究在医学领域有广泛的应用潜力，例如用于再生医学、组织工程、
神经退行性疾病治疗、心脏病治疗等。
通过将干细胞移植到受损组织，可以促进组织修复和再生。
4.伦理问题：胚胎干细胞研究引发了伦理争议，因为获取胚胎干细胞通常需要破坏胚胎。
这导致了关于胚胎保护和道德问题的讨论。
为了避免这些问题，研究人员也在寻找成体干细胞和诱导多能性干细胞（iPSCs）等替代方法。
5.诱导多能性干细胞：诱导多能性干细胞是通过对成体细胞进行基因操作，使其重新获得
类似胚胎干细胞的分化能力。
这种方法避免了使用胚胎，并且具有很大的研究和治疗潜力。
干细胞研究在医学领域具有重要的意义，但也面临着科学、伦理和法律等方面的挑战和限制。
随着技术的不断进步，人们希望能够更好地利用干细胞来治疗各种疾病和促进人类健康。
关于干细胞你所要了解的几个知识点
关于干细胞你所要了解的几个知识点
关于干细胞，以下是你需要了解的几个知识点：
1. 干细胞的概念：干细胞是一类具有自我复制和多向分化潜能的细胞，可以分化成多种细胞类型，包括各种分化细胞或特化细胞。
它们在人体或动物个体发育过程中发挥着重要的作用，是各种分化细胞或特化细胞的初始来源。
2. 干细胞的分类：根据其分化潜能和来源时期的不同，干细胞可以分为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。
全能干细胞可以分化成所有的细胞类型，包括生殖细胞；多能干细胞可以分化成多种细胞类型，但不一定包括生殖细胞；单能干细胞只能分化成一种或有限的几种细胞类型。
3. 干细胞的生物学特性：干细胞具有自我复制和多向分化潜能的特性，可以在特定条件下进行自我更新和分化。
此外，干细胞还具有迁移和归巢的能力，可以向损伤或病变部位迁移并参与组织修复。
4. 干细胞的应用：干细胞在许多生物医学领域都有广泛的应用，包括再生医学、组织工程、药物筛选和疾病模型研究等。
例如，通过诱导干细胞分化成特定类型的细胞，可以用于治疗某些疾病，如糖尿病和帕金森病等。
总之，了解干细胞的基本概念、分类、生物学特性和应用，有助于你更好地理解干细胞在生物医学领域中的重要性
和潜在应用价值。
公共基础知识干细胞基础知识概述
《干细胞基础知识的综合性概述》一、引言干细胞，作为生命科学领域中最具潜力和神秘色彩的研究对象之一，近年来引起了广泛的关注。
干细胞具有自我更新和多向分化的能力，为人类治疗多种疾病带来了新的希望。
本文将全面阐述干细胞的基础知识，包括基本概念、核心理论、发展历程、重要实践以及未来趋势，为读者提供一个系统而深入的理解框架。
二、干细胞的基本概念（一）定义干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞。
它们可以通过不断地自我复制来维持自身数量的稳定，同时在特定的条件下可以分化为各种不同类型的细胞，如神经细胞、心肌细胞、肝细胞等。
（二）分类1. 按照来源分类- 胚胎干细胞：来源于胚胎发育早期的内细胞团，具有最强的分化潜能，可以分化为人体的各种细胞类型。
- 成体干细胞：存在于成体组织中的干细胞，如骨髓干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞等。
成体干细胞的分化潜能相对有限，但在维持组织的稳态和修复损伤方面起着重要作用。
- 诱导多能干细胞：通过特定的方法将已分化的体细胞重编程为具有类似胚胎干细胞特性的细胞。
诱导多能干细胞的出现为干细胞研究提供了新的途径，避免了胚胎干细胞研究面临的伦理争议。
2. 按照分化潜能分类- 全能干细胞：具有形成完整个体的分化潜能，如受精卵和早期胚胎细胞。
- 多能干细胞：能够分化为多种不同类型的细胞，但不能形成完整个体，如胚胎干细胞和诱导多能干细胞。
- 单能干细胞：只能分化为一种特定类型的细胞，如成体组织中的干细胞。
三、干细胞的核心理论（一）自我更新机制干细胞的自我更新是通过细胞分裂来实现的。
在细胞分裂过程中，干细胞可以保持其未分化状态，或者产生两个相同的干细胞，从而维持干细胞群体的数量稳定。
自我更新的机制涉及多种信号通路和基因调控网络，其中包括 Wnt、Notch、Hedgehog 等信号通路。
（二）分化机制干细胞的分化是在特定的信号刺激下，通过基因表达的调控来实现的。
在分化过程中，干细胞逐渐失去其多能性，表达特定的基因，从而形成特定类型的细胞。
干细胞相关知识点汇总总结
干细胞相关知识点汇总总结一、干细胞的基本概念干细胞是一种具有自我更新能力和多能性的细胞。
它们可以不断分裂产生同类干细胞，同时也能够分化为多种功能成熟细胞，如神经细胞、心肌细胞、肝细胞等。
干细胞分为两大类：胚胎干细胞和成体干细胞。
胚胎干细胞来源于早期的胚胎，具有最大的多能性；成体干细胞来源于成熟组织和器官，具有较小的多能性。
二、干细胞的类型1. 胚胎干细胞（ES细胞）：来自早期的胚胎，具有最大的多能性，可以分化为任何细胞类型。
2. 诱导多能干细胞（iPS细胞）：是通过基因工程技术将成体细胞重新编程而成的具有多能性的细胞。
3. 成体干细胞：来自成熟组织和器官，包括骨髓干细胞、脐带干细胞、脂肪干细胞等，具有较小的多能性。
三、干细胞的来源1. 胚胎：胚胎干细胞来源于早期的胚胎，通常来自体外受精后的胚胎。
2. 成体组织：成体干细胞来源于成熟组织和器官，包括骨髓、脐带、脂肪等。
3. 基因工程：诱导多能干细胞是通过基因工程技术将成体细胞重新编程而成的多能性细胞。
四、干细胞的应用1. 再生医学：利用干细胞进行再生医学研究，可以修复受损组织和器官，治疗多种疾病和损伤。
2. 组织工程：利用干细胞构建人工组织和器官，解决器官移植的短缺问题。
3. 药物研发：利用干细胞进行药物筛选和药效评估，加快新药的研发和上市。
五、干细胞的伦理和法律问题1. 伦理问题：胚胎干细胞研究涉及胚胎的使用和破坏，引发了伦理和道德方面的争议。
2. 法律问题：不同国家和地区对干细胞研究和应用的法律规定不同，有些国家禁止胚胎干细胞的研究和应用，有些国家则允许并支持相关研究。
六、干细胞的临床研究进展1. 干细胞移植治疗：干细胞移植已经成为治疗白血病、淋巴瘤等血液系统疾病的重要手段。
2. 干细胞再生医学：干细胞可以用于治疗多种慢性疾病和器官损伤，如心脏病、糖尿病、脊髓损伤等。
3. 干细胞组织工程：干细胞组织工程技术正在积极开发人工心脏、肝脏、胰岛、肌肉等人工组织和器官。
干细胞基础知识
基础知识篇1.什么是人体干细胞?人体干细胞是指那些来源与人体具有自我复制和多向分化能力的细胞包，括胚胎干细胞、胎儿组织干细胞和成体干细胞。
它们可以不断地自我更新，并在特定条件下转变分化成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。
2.目前临床使用的干细胞来自何处?目前用于临床干细胞来源主要有三种：自体外周血、自体骨髓、胎盘及其附属物。
3.干细胞有哪些生物学特性？干细胞具有自我复制和多向分化的特型。
4.什么是自我复制？自我复制指通过细胞分裂的方式复制自身，完成数量上的飞跃。
5.什么是多向分化？多向分化指特定的生理环境或体外诱导条件下，可以分化成具有不同功能的成熟细胞，如心肌细胞，神经细胞，血细胞等。
6.什么是干细胞的可塑性可塑性（plasticity ）指造血干细胞、骨髓间充质干细胞、神经干细胞等成体干细胞具有一定跨系、甚至跨胚层分化的特性，称其为干细胞的“可塑性”。
如利用神经干细胞可实现跨胚层分化，如分化为骨骼肌细胞和造血样细胞等。
7.干细胞可塑性具有哪些重要的理论意义和实用价值？①组织间叶干细胞可塑性的揭示，提示成年人组织干细胞可能存在广泛的分化潜能；人类组织工程细胞的来源除去胚胎干细胞外，还可以从自体的体细胞中获得，而且不受组织相容性和伦理方面的限制。
②造血干细胞的概念需要更新，造血干细胞不仅是CD34+／CD34-细胞，而且还应考虑来自体内其它组织的干细胞，这些细胞在体外能长期培养和扩增，增殖潜能强，因而有可能用于骨髓移植；造血干细胞和非造血干细胞共移植(Co-transplantation)有可能用于器官再生。
③成年组织干细胞可塑性的研究证明，干细胞的微环境(壁龛)对其转化具有非常重要的作用，一些内在和外在的信号调节着这些干细胞的命运，这将为干细胞定向培养和应用带来新的前景。
④干细胞的转化常发生于病理情况，向病理部位迁移，成为病理损伤的前体细胞，并分化为终末成熟细胞。
因此，不仅可利用它来修复组织的损伤，而且还可把它作为基因治疗的理想载体。
干细胞基础知识-概述说明以及解释
干细胞基础知识-概述说明以及解释1.引言1.1 概述干细胞是一种具有自我更新和分化潜能的特殊细胞，具有重要的研究和应用价值。
干细胞可以分为胚胎干细胞和成体干细胞两种类型，它们在生物医学领域有着广泛的应用前景，可以用于再生医学、组织工程、药物筛选等领域。
本文将介绍干细胞的基本概念、分类和应用，希望能够为读者提供一些基础知识，并展望干细胞在未来的发展前景。
1.2 文章结构文章结构部分将主要包括引言、正文和结论三部分。
在引言部分，我们将概述干细胞的基础知识，并介绍本文的结构和目的。
在正文部分，我们将详细探讨干细胞的概念、分类和应用。
最后，在结论部分，将总结本文涉及的干细胞基础知识，展望未来的发展方向，并结束文章。
整个文章结构将围绕干细胞这一主题展开，希望能为读者提供全面、系统的干细胞知识。
1.3 目的：本文旨在介绍干细胞的基础知识，包括干细胞的概念、分类和应用等内容。
通过对干细胞的全面了解，读者可以更好地理解干细胞在生物学和医学领域的重要性，以及其潜在的应用价值。
同时，本文也旨在引发读者对干细胞研究和应用领域的兴趣，促进该领域的进一步探索和发展。
希望通过本文的阐述，读者能够对干细胞有一个清晰的认识，为未来的学习和研究打下基础。
2.正文2.1 干细胞概念:干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，其主要特点是能够不断地进行细胞分裂产生新的干细胞，同时也可以分化为不同类型的细胞，如神经细胞、肌肉细胞、血细胞等。
干细胞在人体内起着重要的生物学作用，是维持组织器官功能和修复损伤的关键细胞之一。
根据其分化潜能和来源不同，干细胞可以分为多种类型，主要包括胚胎干细胞（ESCs）和成体干细胞（Adult stem cells）。
胚胎干细胞来源于早期胚胎，具有最广泛的分化潜能，可以分化为任何细胞类型；而成体干细胞则存在于成人组织中，其分化潜能较低，但具有自我更新和分化成多种细胞类型的能力。
此外，还有诱导多能性干细胞（iPSCs），是通过基因工程技术将成体细胞重新编程成具有胚胎干细胞样特性的细胞。
干细胞基础知识
干细胞基础知识
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事实上，所谓同卵双胞胎、三胞胎、四胞胎，即为受 精卵分裂成二个或四个totipotent stem cells 后，每个细胞 单独分开发育，故成为双胞胎或四胞胎，至于三胞胎则 为四个totipotent stem cells中的一个在发育过程中不幸未 能成熟之故。Totipotent stem cells时期大约仅维持四天， 即进入下一阶段之发育，形成特殊分化细胞，称为原始 胚囊体（blastocyst）。
科学成就之一。
组织工程是以干细胞研究为基础发展起来，它有望解决
临床上急需的人工组织与器官问题，进展极为迅速，已经成
为干细胞应用的主要方向。
干细胞基础知识
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干细胞有几个主要特征
➢干细胞本身不是终末分化细胞； ➢干细胞能无限增殖分裂； ➢干细胞可连续分裂几代，也可在较长时间内处于静止
状态；
➢干细胞分裂产生的子细胞只能有两种命运——保持为
干细胞基础知识
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(4) ES细胞在体外分化抑制培养中，呈克隆状 生长，细胞紧密地聚集在一起，形似鸟巢， 细胞界限不清，克隆周围有时可见单个ES 细胞和分化的扁平状上皮细胞。
(5) ES细胞增殖迅速，每18—24 h分裂增殖 1 次。
(6) 此外，其还可以在体外进行选择、操作、 冻存。冻存的细胞可在需要时随时解冻， 继续培养不失其原有特性，并且来自一个 克隆的细胞具有同样的特征。
干细胞基础知识
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ES细胞的高度分化潜能
ES细胞的全能性是其区别于成纤维细胞等
体细胞的显著特点
(1) ES细胞在体外需在饲养层细胞上培养才
能维持其未分化状态，一旦脱离饲养层就自
发地进行分化。
(2) 在单层培养时细胞自发分化成多种细胞，
关于干细胞的知识点总结
关于干细胞的知识点总结### 1. 干细胞的基本知识#### 1.1 干细胞的定义干细胞是一种具有自我更新和分化为多种细胞类型潜能的细胞。
它们可以通过不同的分化途径产生特定类型的细胞，例如心脏细胞、神经元和肌肉细胞。
干细胞的特点是具有自我更新的能力，即可以不断地分裂产生新的干细胞，同时可以分化为多种不同的细胞类型。
#### 1.2 干细胞的来源干细胞可以从多种来源获得，包括胚胎、胎儿、成体组织和实验室中的细胞。
胚胎干细胞是最早被发现的干细胞类型，它们来自胚胎内部的内细胞团，具有最广泛的分化潜能。
成体干细胞来源于成熟组织或器官中的特定位置，具有较为有限的分化潜能。
实验室中可以通过诱导多能干细胞（iPSCs）技术将成体细胞重新编程成具有干细胞特性的细胞。
#### 1.3 干细胞的分类根据其潜能和来源，干细胞可以分为多种类型。
根据其分化潜能可分为全能干细胞（pluripotent stem cells）、多能干细胞（multipotent stem cells）和单能干细胞（unipotent stem cells）。
全能干细胞能够分化为除胎盘细胞外的所有体细胞类型，如胚胎干细胞和诱导多能干细胞。
多能干细胞只能分化为某一种或某几种细胞类型，如造血干细胞和神经干细胞。
单能干细胞只能分化为同一种细胞类型，如肝细胞和皮肤细胞。
### 2. 干细胞的应用#### 2.1 干细胞在医学上的应用干细胞在医学上有广泛的应用，可以用于治疗各种疾病和损伤。
例如，造血干细胞可以用于治疗白血病和其他血液疾病，神经干细胞可以用于治疗神经退行性疾病，肌肉干细胞可以用于肌肉再生和修复。
胚胎干细胞和诱导多能干细胞还可以用于体外器官的再生和修复。
#### 2.2 干细胞在科研中的应用干细胞在科研中也有重要的应用，可以用于研究细胞分化和发育、基因调控、疾病模型和药物筛选。
通过对干细胞的培养和分化，可以获得大量的特定细胞类型，为细胞和分子生物学研究提供了重要的工具。
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第九章干细胞第一节干细胞概述一、干细胞( stem cells)与个体发育正常生物个体发育的过程是按严格的时空程序进行的一系列细胞分裂、分化和细胞凋亡相互协调作用的结果。
从一个受精卵、全能胚胎干细胞或组织谱系干细胞最终分化为具有独特功能体细胞所组成的组织器官,这是一个彼此协调而又制约的复杂过程,这一过程通常被称为发育的遗传程序(genetic program) ,被记录在细胞基因组的结构中。
不同物种有不同的遗传程序,这可能是物种在长期进化过程中逐渐形成的。
在哺乳动物个体发育的不同阶段,包括胚胎、幼年和成年个体的各个发育时期,都存在着发育潜能参差不同的干细胞。
干细胞最终演变为独特结构和功能的体细胞或成熟生殖细胞,这过程即是所谓细胞分化。
从分子水平而言,可以认为细胞分化是部分基因选择性地被激活或差异性表达,从而控制专一性蛋白质的合成和排布的结果。
对正常细胞分化来说,最重要的是多个基因表达过程在数量和时空上的精确联系和密切配合,并受不同层次的基因调控网络系统精确无误地调节和控制。
干细胞在胚胎和成体组织内部的活动,包括干细胞基本特性的分子机制和调节控制、胚胎细胞的迁移活动、时空程序与相邻胚胎细胞的相互作用,对细胞增殖和分化的关系等,虽已有所了解,但由于技术上的原因,直接证据还很少,因此,干细胞增殖和分化问题仍是今天发育生物学研究的主题内容之一.二、干细胞的定义和分类因干细胞是指一类具有自我更新和产生分化后代这两种基本特性的细胞。
一个充满生命力的雌雄两性机体都是由两类不同的组织和器官构成的。
一类是全部由体细胞组成的,另一类是以生殖细胞为主的,也包括一些由体细胞组成的组织和器官构成的。
前者是执行机体生命活动各种生理功能的;后者一切都为了保证生殖系统的卵巢和辜丸中的卵子和精子的发育和成熟并延续生命的。
对人类来讲,从一个受精卵的单细胞要产生200多种不同类别的细胞来构成各种组织和器官,必然要靠全能性的早期胚胎干细胞通过自我更新和产生分化后代来实现的。
自我更新是指干细胞可进行均等分裂,产生两个遗传特性上完全一样的干细胞,均等分裂是大多数细胞的特性,而产生分化后代指的是干细胞还可进行不均等分裂,产生的两个子代细胞中一个仍是干细胞,而另一个是遗传特性有所不同的,要开始走上分化道路的定向祖细胞。
早期胚胎细胞是全能的,它既可产生体细胞,又能产生生殖细胞,这包括从早期的卵裂球和囊胚期的ICM细胞以及后来胚胎的3个胚层已分化后的生殖嵴区的原始生殖细胞;而分化的后代细胞可从包括全能细胞向多能细胞和细胞谱系的各级祖细胞发展,这些细胞仍旧可通过均等和不均等两种分裂方式进行繁殖,一直到最后的终未分化体细胞。
干细胞可分为两类:一类干细胞包括从早期囊胚ICM(inner cell mass)细胞分离并在体外培养和建系的胚胎干细胞(embryonic stem cells,简称ES细胞)和从胚胎生殖嵴原始生殖细胞(primordial germ cells, PGC)分离建系的胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,简称EG细胞) ;另一类是先在成年组织和器官,以后在胎儿组织被证明其存在,随后个别也在体外培养和建系成功的干细胞, 称为组织干细胞( tissue stem cells) ,又称成体干细胞(adult stem cells) 。
三、胚胎干细胞研究简史哺乳动物早期胚胎体积小,又在母体子宫内发育,因此,要在体内对各类干细胞的分化及其机制进行实验研究几乎不可能。
从20世纪50年代开始,人们一直在致力于寻找一个既能在体外增殖,又具有胚胎细胞全能性(totipotency)或多能性的(pluripotency)并通过适当条件能被诱导分化为各种类型分化细胞的实验模型。
20世纪50年代末美国发育生物学家Stevens (1967)将着床前发育阶段的小鼠胚胎(包括受精卵) 或12天胚龄的胚胎生殖嵴异位移植到同系成年小鼠辜丸或肾脏被膜下,移植后7天,发现有80%接种灶出现并发展为畸胎瘤。
从中分离、培养和建立了胚胎性癌细胞(embryonal carcinoma cell, EC)系,揭开了胚胎性干细胞早期研究的序幕。
EC细胞既具有恶性生长又具有早期胚胎细胞发育多潜能性的双重性质。
在20 世纪70年代, EC细胞常用作研究哺乳动物发育遗传以及细胞分化的实验模型,并取得了一些重要结果。
后因EC细胞核型异常,分化细胞类型有限等缺点而不再被使用。
20世纪80年代初,英国Evans和Kaufman以及美国Martin 2家实验室独立地从小鼠囊胚成功地建立了能在体外不断增殖,并维持不分化状态的多潜能胚胎干(ES)细胞系,开创了ES细胞生物学研究的新时代。
但此后ES细胞在其他动物上的分离和建系却颇受挫折,直到20世纪80年代后期才有所突破,见表19.1。
20世纪90年代初,美国Matsui等从小鼠9天胚胎生殖嵴建立了多潜能的胚胎生殖细胞系,同一时期,少数其他动物也相继建立了ES或EG细胞系。
1998年美国威斯康星大学Thomson等人利用36枚新鲜或冻存的人工体外受精胚胎,获得人ICM细胞,经体外培养后,首次成功地建立了5株人类ES细胞系,同年, John Hopkins医学院Shamblott等人从5 -9周人流胚胎的生殖嵴和肠系膜首次培养出人EG细胞系。
第二节胚胎干细胞胚胎干细胞又称ES细胞主要是指从早期胚胎的卵裂球、囊胚ICM细胞分离培养和建系的细胞。
而从胚胎生殖嵴中PGC分离培养建成的称胚胎生殖细胞简称EG细胞。
这2类干细胞统称为胚胎性干细胞,其最基本的重要特性是具有稳定地在体外自我更新并保持不分化和发育的多能性,即可以在体外分化为属于3个胚层的各种细胞。
一、ES和EG细胞培养、建系技术体外培养建系ES和EG细胞的技术以小鼠的最为成熟,成功率最高,其基本原则是有赖于获得全能性胚胎细胞或细胞团并建立体外适合其增殖和抑制分化的培养系统。
由于早期胚胎细胞离体后极易发生分化,首先要解决阻止其分化、确保维持其全能性或多能性这一关键问题。
目前常用的细胞分化抑制物主要有3种:饲养层细胞( feeder layer cells)、特殊细胞的条件培液(conditioned medium) ,如BRL (Buffalo rat liver)细胞条件培液,分化抑制因子(differentiation inhibitory factor, DIF) ,如白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF) 。
此外,也有添加通过gp130信号转导途径的细胞因子,例如,白介素6 (lL一6)、Oncostatin M和睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor, CNTF)等同样可达到维持小鼠ES细胞的不分化状态。
因此,体外培养ES和EG细胞可划分为两大类:饲养层培养法和无饲养层培养法。
(一)饲养层细胞培养法不论ES细胞或EG细胞,原代或初期培养阶段一般都需依赖于能分泌使它们在体外存活和增殖所必需生长因子的饲养层细胞。
不同类型的饲养层细胞分泌的生长因子略有不同。
但都要求在ES或EG细胞培养过程中的饲养层细胞保持不分裂增殖,而仍然保持细胞的代谢活性。
常用的饲养层细胞有下列两种:一种是取自各种品系小鼠交配后12 dpc (days post coitum)的胚胎成纤维细胞(embryonic fibroblast, MEF) 。
经丝裂霉素C (mitomycin C)处理以终止细胞分裂后,用作ES细胞培养的饲养层。
另一种是来自SIM小鼠(S)胚胎的对硫代鸟嘌岭(thioguanine, T)和乌本苷(ouabain, O )有抗性的成纤维STO细胞系,主要分泌干细胞生长因子(stem cell factor, SCF)和白血病抑制因子(LIF)。
此外,SL - M220细胞是小鼠胚胎造血的基质细胞SI/SI4经基因改造产生专一性跨膜型SCF的细胞系,以它作为饲养层更有利于促进EG细胞生长。
用作ES细胞或EG细胞培养的饲养层的MEF或STO细胞均需用10 mg/L丝裂霉素C在370C灭活,用前经PBS 彻底洗涤。
(二)无饲养层培养法饲养层细胞的制备在一定程度上使ES和EG细胞培养过程显得较为繁杂。
近来以添加某些特定细胞的条件培养液和LIF生长因子至含胎牛血清(FCS)的正常培养液,借此替代饲养层细胞。
有3种条件培养液可用于小鼠ES细胞培养:①直接在ES细胞基础培养液中加入重组生长因子和LIF等。
②Buffalo大鼠肝细胞条件培养液(BRL-CM)。
③2 -3周龄幼年大鼠心肌细胞条件培养液(RH - CM) 。
一般以2 -3份上述细胞条件培养液加1 - 2份新鲜的ES细胞培养液,再添加10% - 20%胎牛血清,共同组合成无饲养层的ES 细胞培养系统。
但往往在胚胎干细胞原代和建系初期缺乏饲养层时,用这种条件培养液培养ES和EG细胞成功率不高,因此,正确使用饲养层细胞和条件培养液在ES/EG细胞建系初期仍是成功的一个关键因素。
(三) ES和EC细胞的体外培养1. ES细胞不同动物,甚至同种不同品系动物的胚胎发育速度和方式存在着较大差异,例如,猪ICM细胞生长与小鼠的不一样,其生长速率很慢,且有一个休眠(quiescent)时期。
因此,ES细胞培养建系需根据各个物种而选择不同发育阶段的早期胚胎。
例如,一般小鼠多选用3 -4 d的囊胚或2 - 3 d的桑椹胚,猪取8 - 10 d 的囊胚,绵羊取8 -9 d的囊胚,人和牛取7 -8 d的囊胚。
同时,经体外受精的胚胎或由核移植获得的重构胚胎在体外培养至所需适当的发育阶段也是选取ES细胞培养的有效材料来源。
基本培养液为含15% - 20% FCS、0.1 mmol/Lβ-疏基乙醇和50IV/mL青霉素、50µg/mL链霉素的DMEM液.将桑椹胚或囊胚接种于预先铺有作为饲养层而无有丝分裂活性的单层MEF细胞的35 mm培养皿中。
培养2 -3天后按下列两种方法之一分离出ICM细胞进一步培养:方法一：免疫手术法(immunosurgery)。
由于4 - 4.5 dpc的小鼠囊胚主要由己分化的滋养外胚层(trophectoderm)和未分化的ICM细胞组成,前者细胞表面一般已表达主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC) ,能识别其相应抗体和形成免疫复合物,在补体存在时可导致细胞发生免疫溶解。
囊胚去除透明带,直接暴露于稀释的兔抗JCR小鼠脾细胞抗血清(抗H - 2b)。
再移到新鲜豚鼠血清中, 囊胚的滋养外胚层细胞呈泡状,发生免疫溶解;而ICM细胞不具H -2b抗原,不发生免疫溶解,故细胞完整元损。