常用生化检测项目分析方法与参数设置
检验科生物化学指标常见检测与分析方法
检验科生物化学指标常见检测与分析方法在检验科中，生物化学指标的检测与分析是非常重要的一项工作。
通过对生物体内各种物质的检测，我们可以了解其生理状况、代谢过程以及疾病发展情况等。
本文将介绍常见的生物化学指标检测与分析方法。
1. 血糖测定方法血糖是机体能量代谢的重要指标，也是衡量糖尿病、胰岛功能等的关键参数。
目前常用的血糖测定方法有以下几种：1.1 血糖试纸法：通过检测尿液或血液中的葡萄糖含量来判断血糖水平，这种方法操作简便，但准确性较低。
1.2 酶法：利用葡萄糖氧化酶催化葡萄糖与氧发生反应，生成过氧化氢，进而与染料产生色素变化，通过比色测定来确定血糖水平。
1.3 电化学法：利用电极测量血液中葡萄糖的电流，根据电流强度与血糖浓度之间的关系确定血糖水平。
2. 血脂测定方法血脂是衡量人体脂质代谢情况的重要指标，对心血管疾病的发生发展具有重要影响。
下面介绍几种常用的血脂测定方法：2.1 酶法：利用特定酶催化血液中的甘油三酯、胆固醇等成分与底物反应，通过酶促反应生成染色物质，通过比色法来确定血脂水平。
2.2 荧光法：利用荧光标记的血脂分子与特定荧光染料结合并发生荧光共振能量转移，通过荧光强度的变化来测定血脂水平。
2.3 高效液相色谱法：采用高效液相色谱进行分离，利用紫外检测器检测分离的血脂成分，进而确定血脂水平。
3. 肝功能指标测定方法肝功能指标是评估肝脏健康状况的重要依据，下面介绍几种常见的肝功能指标测定方法：3.1 谷丙转氨酶（ALT）检测法：通过酶促反应，测定血液中ALT 的活性，进而判断肝细胞损伤情况。
这种方法操作简便、准确性高。
3.2 谷草转氨酶（AST）检测法：利用酶促反应测定血液中AST的活性，AST水平升高可能与心脏、肝脏或肌肉组织的损伤有关。
3.3 白蛋白测定法：通过比色测定血液中白蛋白的含量，判断肝脏合成蛋白质的功能状态，白蛋白水平降低可能与肝脏疾病有关。
4. 肾功能指标测定方法肾功能指标的测定是评估肾脏健康情况的重要手段，下面介绍几种常见的肾功能指标测定方法：4.1 血尿素氮（BUN）测定法：通过分析血液中的尿素氮含量，可以评估肾小球滤过功能和尿液浓缩功能。
生化分析仪参数设置
（八）底物耗尽限额设置。
有些仪器有自动选择线性功能，能自动 选择反应曲线上连续监测期内仍呈线性 的吸光度数据计算结果，使酶活性测定 的线性范围得以扩大，可以减少稀释及 重测次数。
（九）试剂吸光度上限、下限 和试剂空白速率设置。
每种试剂都有一定的空白吸光度范围， 试剂空白吸光度的改变往往提示着试剂 的变质，此时应更换合格试剂。 试剂吸光度上限为正向反应用，试剂吸 光度下限为负向反应用。
（三）：样品量与试剂量设置
3.1稀释水量。 添加样品稀释水是为了洗出粘附在采样 针内壁上的微量血清，减少加样误差， 添加试剂稀释水是为了避免试剂间的交 叉污染。所以两种稀释水应尽量减少， 以免被过量稀释。
（三）：样品量与试剂量设置
3.2最小样品量。 即分析仪进样针能在规定的误差范围内 吸取的最小样品量，随着技术的不断改 进，仪器的最小样品量逐渐减小，在样 品含高浓度代谢产物或高活性酶浓度的 情况下往往需采用分析仪的最小样品量 作为减量参数，从而使仪器的检测范围 上限得以扩大。
（一）：检测方法。
1.3比浊法。 自动生化分析仪一般只能做透射免疫比 浊分析，当光线通过一定体积的含免疫 复合物的溶液时，由于溶液中存在的抗 原-抗体复合物粒子对光线的反射和吸收， 引起透射光的减少，测定的光通量和抗 原抗体复合物的量成反比。
（一）：检测方法。
比浊法常用于终点法测定,目前主要用于 血清特种蛋白的检测，如载脂蛋白、免 疫球蛋白等。
（一）：检测方法。
1.1终点法 1.1终点法又称为平衡法，是根据反应达 到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其 对光吸收强度的大小对物质进行定量分 析的一类方法，有一点终点法和两点终 点法两类。
生化项目测定方法整理
生化项目的基本分析方法1．终点法检测1.1定义完全被转化成产物，不再进行反应达到终点，取反应终点的吸光度来计算被测物质的浓度。
生化检验中除酶和BUN、CRE外几乎都用终点法来进行检测。
被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。
终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液（校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化的标准曲线。
通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计算出该标本中待测物的浓度。
1.2检测流程一点终点法：取反应达终点时的一个点的吸光度来计算结果。
对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点终点法。
以试剂和样品混合之前的空气空白(GB)、水空白(WB)或试剂空白(RB)的吸光度值为测定计算基点，以反应终点的吸光度读数减去空白读数，得到反应吸光度。
通过与相同条件下校准液反应吸光度的比较，求得测定结果。
常与一点校准法配合使用，即采用一个校准浓度，校准曲线通过零点且成线性。
也应用多点校准。
•计算公式：C=(Am-Ab)*KAm----终点读数点的吸光度Ab----试剂空白吸光度K----校正系数二点终点法：加入第一试剂，主要起缓冲或者消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应点。
取反应尚未开始时读取一个点的吸光度，待反应达终点时再取第二点的吸光度，用第二点吸光度减去第一点吸光度的差值来计算结果。
以试剂和样品混合之后的某一时间点作为始点，以反应终点的吸光度读数减去始点读数。
一定条件下可降低样品对反应或反应本身的特异性于扰(主要指色度干扰)。
常采用双试剂，多以加R2前某一点作测定始点；某些情况下，也可以加R2后一点作测定始点。
若使用单试剂，主反应启动太快或仪器起始读数点受限时难以运用。
主要用于扣除试剂和样品空白，保证结果的准确性，一般双试剂用。
常用生化检测项目分析方法及参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数（analysis paramete）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1．试验名称试验名称（test code）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式）方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
检验科常见生化学检测方法与解读
检验科常见生化学检测方法与解读生化学检测方法是临床检验科中常见的一种检测方法，通过分析人体液体、组织或细胞中的生物化学物质，可以揭示人体的生理状态和疾病情况。
本文将介绍一些常见的生化学检测方法及其解读。
一、血液生化学检测方法血液生化学检测是一种常见的检测方法，可以了解人体内各种生物化学物质的水平。
常见的血液生化学指标包括：血糖、血脂、肾功能、肝功能等。
1. 血糖检测血糖检测是评价人体糖代谢情况的重要指标，常用的检测方法有空腹血糖、餐后血糖和糖化血红蛋白。
正常人空腹血糖水平一般在3.9-6.1mmol/L之间，餐后血糖水平在7.8mmol/L以下。
糖化血红蛋白则可以反映近期（2-3个月）内平均血糖水平，正常水平一般在4%-6%之间。
2. 血脂检测血脂检测是评估人体脂质代谢情况的指标，主要包括总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇。
正常人总胆固醇水平一般在5.2mmol/L以下，甘油三酯水平在1.7mmol/L以下，高密度脂蛋白胆固醇水平在1.0mmol/L以上，低密度脂蛋白胆固醇水平在3.4mmol/L以下。
3. 肾功能检测肾功能检测是评价肾脏排泄功能的重要指标，包括血清尿素氮、血清肌酐和尿液常规等。
正常人血清尿素氮和血清肌酐的水平较稳定，尿液常规正常应无蛋白、红细胞、白细胞等异常。
4. 肝功能检测肝功能检测是评价肝脏代谢和排泄功能的指标，包括血清谷丙转氨酶、血清谷草转氨酶、总胆红素、直接胆红素和白蛋白等。
正常人血清谷丙转氨酶和血清谷草转氨酶的水平较低，总胆红素和直接胆红素的水平也较低，而白蛋白水平较高。
二、尿液常规检测方法尿液常规检测是一种常见的生化学检测方法，通过分析尿液中的物质含量和性状，可以了解人体的代谢和排泄情况。
常见的尿液常规指标包括：尿液比重、PH值、蛋白质、糖、酮体、亚硝酸盐等。
1. 尿液比重尿液比重反映尿液的浓缩程度，正常人尿液比重通常在1.005-1.025之间。
全自动生化分析仪常用分析参数的设置
基本分析参数设置
二、方法类型 检测方法类型或分析类型至少分为终点法和速率法两
种，其他方法都与这两类方法有关。 1. 终点法可以分为减试剂空白和不减试剂空白两种，多选择
前者。 2. 速率法也可以分为减试剂空白或不减试剂空白的两种方法
。色素原底物自身水解引起的空白速率应该在测定速率中 减去。而某些内源性干扰引起的速率，由于包含在测定阶 段的速率中，故无法减掉，只能通过设置一定的延迟时间 或恰当的主读数区间，加上双波长检测来尽量避免。 3. 固定时间法实际上就是特殊的两点法，只不过第一点不一 定是起点，第二点不一定是终点。
基本分析参数设置
例如:如果是单试剂终 点法测定，例如血糖 试剂盒说明书(己糖 激酶法)规定为37℃ 需10分钟反应达到终 点，那么试剂必须在 测光点0点前加入， 才能保证线性测量范 围内的所有样品都能 在分析流程结束前达 到终点。
反应的时间过程
基本分析参数设置
反应的时间过程
如果是双试剂终点法 测定，安排试剂2在测 光点16-17间加入，剩 下的时间不足10分钟 ，那么就有可能出现 反应尚未达到终点而 分析流程结束，得到 的结果将不可靠。可 见，针对类似7600 p 分析流程特点，对一 个终点法试剂盒性能 的要求，在37℃反应 达终点的时间最多不 能超过十分钟，否则 无法实现全自动分析 。
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术临床生物化学检验是一种常规医学检验方法，通过检测人体血液、尿液、体液等样本中的化学成分，评估人体的生理功能和病理变化，为临床医生提供确诊、治疗和监测疾病的重要依据。
在临床生物化学检验中，常见的项目包括血糖、血脂、肝肾功能等指标。
本文将对临床生物化学检验常规项目的分析质量指标以及临床化学常用的分析技术进行探讨。
一、临床生物化学检验常规项目分析质量指标临床生物化学检验常规项目分析质量指标主要包括准确性、精确性和灵敏度。
准确性是指检验结果与实际值之间的接近程度。
为了保证准确性，临床生物化学检验常规项目需要使用准确可靠的检验方法和仪器，保证样品采集和保存的标准化，以及质量控制的有效性。
精确性是指同一样本在不同条件下重复检验的结果的一致性。
为了保证精确性，临床生物化学检验常规项目需要使用稳定可靠的试剂和仪器设备，并进行严格的质量控制和质量评价。
此外，操作人员的培训和技术水平也对结果的精确性有重要影响。
灵敏度是指检验方法能够检测样本中低浓度分析物的能力。
临床生物化学检验常规项目中，一些指标如甲状腺相关激素、肿瘤标志物等需要具备较高的灵敏度，能够提供更加精准的诊断和治疗。
二、临床化学常用分析技术临床化学常用的分析技术包括光度法、比色法、电化学法、质谱法等。
光度法基于分析物在特定波长的光线下吸收光的原理。
通过光度计测量样品吸光度的变化，可以计算出样品中分析物的浓度。
光度法广泛应用于临床生物化学检验中的各种项目，如血糖、血脂等。
比色法基于分析物在染色试剂作用下产生显色反应的原理。
通过比较比色试剂与样品显色的程度，可以确定样品中分析物的浓度。
比色法常用于临床生物化学检验中的糖化血红蛋白、尿液蛋白等项目。
电化学法基于分析物在电极上发生氧化还原反应产生电流的原理。
根据电流的大小可以计算出样品中分析物的浓度。
电化学法常用于临床生物化学检验中的血液电解质、血气分析等项目。
自动生化分析仪的分析参数设置
自动生化分析仪是一种把生化分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、恒温反应、自动监测、数据处理以及实验后清洗等步骤进行自动化操作的仪器，它完全模仿并代替了手工操作，目前已经成为医疗机构进行临床诊断所必可不少的仪器之一。
它的应用大大提高了生化检验的准确性、精密度和工作效率，适应了临床医学发展对检验医学的要求，然而这一切不仅需要生化分析仪的技术基础，也需要仪器内每个项目都有一组最优化的分析参数。
并且目前大多数生化分析仪为开放式，封闭式的仪器一般也会另外留一些检测项目的空白通道由用户自己设定分析参数，因此我们有必要了解生化分析仪各个分析参数的基本含义以及设置方法。
1.试验名称常以项目的英文缩写来设置，如总蛋白设置为TP，白蛋白设置为ALB 等。
2.方法类型生化分析仪常用的方法有终点法、连续监测法、比浊法等，根据被检物质的检测原理等选择其中一种分析方法。
2.1终点法又称为平衡法，是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小对物质进行定量分析的一类方法，有一点终点法和两点终点法两类。
一点终点法的特点是使用一种或两种试剂，当待测物与试剂反应达到终点时，测定混合溶液的吸光度来计算待测物的浓度，该法常用的有总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法、葡萄糖氧化酶法等，手工操作的大多数方法都是一点终点法。
两点终点法也称固定时间法，如果是单试剂分析，当测定波长同干扰物质的吸收光谱有重叠时，通过选用两点终点法可消除样品空白引起的干扰，其分析过程是在样品与试剂混合后经过一段延滞期读取一个点A1，一定时间后再读取A2，然后比较标准和测定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待测物的浓度。
肌酐苦味酸法就是一个典型的单试剂两点法的例子。
如果是双试剂分析，选用二点终点分析法除了可消除样品空白引起的干扰外，还可消除内源性干扰物质的干扰，其分析过程是加入试剂1后读取A1，加入试剂2后读取A2，A1相当于读出样品空白值，A2才是实际呈色反应，然后比较标准和测定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待测物的浓度。
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常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数（analysisparamete）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1．试验名称试验名称（testcode）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式）方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
3．反应温度一般有30℃、37℃可供选择，通常固定为37℃。
4．主波长主波长（primarywavelength）是指定一个与被测物质反应产物的光吸收有关的波长。
5．次波长次波长（secondarywavelength）是在使用双波长时，要指定一个与主波长、干扰物质光吸收有关的波长。
6．反应方向反应方向（responsedirection）有正向反应和负向反应两种，吸光度增加为正向反应，吸光度下降为负向反应。
7．样品量样品量（samplingvolum）一般是2μ～l35μ，l以0.1μ步l进，个别分析仪最少能达到1.6μ。
l可设置常量、减量和增量。
8．第一试剂量第一试剂量（firstregengtvolum）一般是20～300μ，l以1μl步进。
9．第二试剂量第二试剂量（secondregengtvolum）一般也是20～300μ，l以1μl步进。
10．总反应容量总反应容量（totalreactingvolum）在不同的分析仪有一个不同的规定范围，一般是180～350μl，个别仪器能减少至120μl。
总反应容量太少无法进行吸光度测定。
11．孵育时间孵育时间（incubatetime）在终点法是样品与试剂混匀开始至反应终点为止的时间，在两点法是第一个吸光度选择点开始至第二个吸光度选择点为止的时间。
12．延迟时间延迟时间（delaytime）在连续监测法中样品与反应试剂（第二试剂）混匀开始至连续监测期第一个吸光度选择点之间的时间。
13．连续监测时间连续监测时间（continuousmonitoringtime）在延迟时间之后即开始，一般为60～120s，不少于4个吸光度检测点（3个吸光度变化值）。
14．校准液个数及浓度校准曲线线性好并通过坐标零点的，可采用一个校准液（calibrator）；线性好但不通过坐标零点，应使用两个校准液；对于校准曲线呈非线性者，必须使用两个以上校准液。
每一个校准液都要有一个合适的浓度。
15．校准K值或理论K值通过校准得到的K值为校准K值（calibratecoefficient）或由计算得出的K值为理论K值。
16．线性范围即方法的线性范围（linearityrange），超过此范围应增加样品量或减少样品量重测。
与试剂/样品比值有关。
17．小数点位数检测结果的小数点位数（decimalpointdigit）。
（二）备选分析参数这类分析参数与检测结果的准确性有关，一般来说不设置这类分析参数，分析仪也能检测出结果，但若样品中待测物浓度太高等，检测结果可能不准确。
1．样品预稀释设置样品量、稀释剂量和稀释后样品量三个数值，便可在分析前自动对样品进行高倍稀释。
2．底物耗尽值底物耗尽值（substrateexhaustlimit）在负反应的酶活性测定中，可设置此参数，以规定一个吸光度下降限。
若低于此限时底物已太少，不足以维持零级反应而导致检测结果不准确。
3．前区检查免疫比浊法中应用，以判断是否有抗原过剩。
将终点法最后两个吸光度值的差别（ΔA）设置一个限值，如果后一点的吸光度比前一点低，表示已有抗原过剩，应稀释样品后重测。
4．试剂空白吸光度范围超过此设定范围表示试剂已变质，应更换合格试剂。
5．试剂空白速率连续监测法中使用，是试剂本身在监测过程中没有化学反应时的变化速率。
6．方法学补偿系数用于校准不同分析方法间测定结果的一致性，有斜率和截距两个参数。
7．参考值范围对超过此范围的测定结果，仪器会打印出提示。
（三）某些参数的特殊意义1．最小样品量最小样品量是指分析仪进样针能在规定的误差范围内吸取的最小样品量。
一般分析仪的最小样品量是2μ，l目前也有小至1.6μl的。
在样品含高浓度代谢产物或高活性酶浓度的情况下往往需采用分析仪的最小样品量作为减量参数，从而使分析仪检测范围（与线性范围不同）的上限得以扩大。
2．最大试剂量方法灵敏度很高而线性上限低的检测项目，如血清白蛋白的溴甲酚氯法测定，以往手工法操作时样品量10μl，试剂量4ml，这样试剂量/样品量比例（R/S）为200，线性上限则为60g/L。
此法移植到分析仪上后，R/S却很难达到200，致使线性上限变低。
因此对这类检测项目最大试剂量非常重要。
3．弹性速率在酶活性测定中，当酶活性太高，在连续监测期中已不呈线性反应时，有些仪器具有弹性速率（flexrate）功能，能自动选择反应曲线上连续监测期中仍呈线性的吸光度数据计算结果，使酶活性测定的线性范围得以扩大。
如AST可从1000U/L扩展至4000U/L，从而减少稀释及重测次数、降低成本。
4．试剂空白速率当样品中存在胆红素时，胆红素对碱性苦味酸速率法或两点法测定肌酐有负干扰。
因为胆红素在肌酐检测的波长505nm有较高光吸收，而且胆红素在碱性环境中可被氧化转变，因而在肌酐反应过程中胆红素的光吸收呈下降趋势。
若在加入第一试剂后一段时间内设置试剂空白速率，因为此段中苦味酸尚未与肌酐反应，而胆红素在第一试剂的碱性环境中已同样被氧化转变，因而以第二试剂加入后的速率变化，减去试剂空白速率变化，便可消除胆红素的负干扰。
二、单波长和双波长方式（一）概念采用一个波长检测物质的光吸收强度的方式称为单波长(mono-wavelength)方式。
当反应液中含有一种组分，或在混合反应液中待测组分的吸收峰与其它共存物质的吸收波长无重叠时，可以选用。
在吸光度检测中，使用一个主波长和一个次波长的称双波长方式。
当反应液中存在干扰物的较大吸收、从而影响测定结果的准确性时，采用双波长方式更好。
（二）双波长的作用双波长(di-wavelength)测定优点是①消除噪音干扰;②减少杂散光影响;③减少样品本身光吸收的干扰。
从光源，到比色杯、单色器、检测器的整个光路系统中，均存在着随时间发生变化的不稳定的检测信号，即噪音，而双波长检测是同时进行的，两种波长检测产生的噪音基本上相同，因而能消除噪音干扰。
当样品中存在非化学反应的干扰物如甘油三酯、血红蛋白、胆红素等时，会产生非特异性的光吸收，而干扰测定结果的准确性。
采用双波长方式测定可以部分消除这类干扰，提高检测的准确性。
（三）次波长的确定方法当被测物的主波长确定之后，再选择次波长。
如根据甘油三酯等干扰物吸收光谱特征，选择次波长，使干扰物在主、次波长处有尽可能相同的光吸收值，而被测物在主、次波长处的光吸收值应有较大的差异。
一般来说，次波长应大于主波长100nm。
以主波长与次波长吸光度差来计算结果。
（四）双波长的具体应用对于某些反应速度快且无法设置为两点终点法的分析项目，尤其是单试剂分析中，可以利用双波长的方式来部分消除样品本身的光吸收干扰。
目前用单试剂法测定的项目应用双波长的为血清总蛋白（双缩脲法）主波长500nm，次波长576nm；血清白蛋白（溴甲酚氯法）主、次波长分别为600和700nm；钙（偶氮砷Ⅲ法）主、次波长分别为660、770nm；磷（紫外比色法）主、次波长为340、405nm，镁（二甲苯胺蓝法）主、次波长为505和600nm。
三、单试剂和双试剂方式反应过程中只加一次试剂称单试剂方式，加两次试剂便为双试剂方式。
目前的生化分析仪大多可用双试剂方式分析，其优点是：①可提高试剂的稳定性，多数双试剂混合成单一工作试剂时，其稳定时间缩短；②能设置两点终点法，来消除来自样品本身的光吸收干扰；③在某些项目检测时能消除非特异性化学反应的干扰。
如血清ALT测定，血清中的内源性丙酮酸及其它酮酸也可与试剂中的指示酶（乳酸脱氢酶）起反应，使结果偏高。
若先加入缺乏α- 酮戊二酸的第一试剂，使其它酮酸与指示酶反应之后再加入含有α-酮戊二酸的第二试剂，启动真正的ALT酶促反应生成丙酮酸，而丙酮酸与乳酸脱氢酶的反应消耗的NAD＋能真正反映ALT的活性，从而消除以上副反应的影响。
四、测定过程的自动监测各种自动生化分析仪或多或少都具有对测定过程进行各种监测的功能，以便在没有人"监督" 化学反应的情况下提高检测的准确性。
高档分析仪的监测功能更强。
1．试剂空白监测每种试剂都有一定的空白吸光度范围，试剂空白吸光度的改变往往提示着该试剂的变质：如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因酚被氧化为醌而变为红色；碱性磷酸酶、γ－谷氨酰转移酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或硝基苯胺而变黄；有些试剂久置后变浑浊。
这些情况均可使空白吸光度升高。
丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应检测项目，其试剂在放置过程中空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降等。
试剂空白的测定方法有两种：①每瓶试剂在使用前通过对试剂空白校准来确定试剂空白吸光度，这种方式适用于先取样品后加试剂的分析仪。