植物体内硝态氮含量的测定
植物中硝态氮的测定方法
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具（1）722型分光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20ml26支；（4）刻度吸管0.1ml. 0.5ml. 5ml. 10ml各1支；（5）容量瓶50ml8个；（6）容量瓶25ml3个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml分别放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11ml，分别放入刻度试管中，以0.11ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为101ml。
（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。
实验12 植物体内硝态氮含量的测定
实验12 植物体内硝态氮含量的测定植物对氮的吸收与利用，对于其生长发育和产量形成具有重要的影响。
氮素如果以亚硝酸盐或硝酸盐的形式被植物吸收，则称为植物体内的硝态氮(N-NO3-)含量。
在植物体内量测硝态氮含量，不仅可以为揭示植物氮素代谢的特点和生理机制提供数据，还可以指导植物耐受性研究和农业生产。
1 实验原理硝态氮是植物生长发育和产量形成的重要因素，在不同发育阶段的植物中，其含量也相应发生变化。
硝态氮含量可采用摄谱光度法和电化学法测定，其中电化学法的准确性更高且应用范围更广。
本实验是利用电化学法，根据硝酸与还原剂还原成亚硝酸或氨态氮时的电离电流大小的差异，测定植物体内的硝态氮含量。
2 实验步骤2.1 样品处理取适量新鲜样品，如茄子、番茄等，去皮、去籽并洗净。
将样品碾磨成泥状，加入特定的醋酸钾(KCH3COO)提取液(醋酸钾10 g/L)，摇匀，封口密封24 h在4℃下提取。
离心后，取上清，用玛瑙瓶收集。
将所需植物红单色隐花苣、矮生豌豆、楸树等的种子按5 g每袋加入15 mL的海绵培养体，在恒温箱中翻转培养6 d至10 d。
2.3 制备电极制备硝酸电极(NH4NO3-SCE单接)和参比电极，使用前需打磨至光亮。
取同样量的植物提取液和硝酸标准溶液，加入还原剂及缘草酸进行反应。
反应完毕后，测量1 min内的电流，计算硝态氮含量。
2.5 数据处理及统计按照硝态氮含量公式计算并汇总数据，进行ANOVA方差分析及t检验。
3 注意事项3.1 样品应尽量新鲜，提取液操作要快，以避免样品中硝态氮被还原。
3.2 试剂应准确、无杂质、无缺损，若出现异常，应立即更换。
3.3 电极应保持干燥、光洁，并调整标定。
3.4 电化学池应密封，避免气泡干扰或溢液现象。
4 结果分析实验结果如下表所示：在统计学分析中，各组数据的p值均小于0.05，表明差异极显著，比较表明楸树叶片硝态氮含量最高，其次是红单色隐花苣和矮生豌豆，而茄子和番茄中硝态氮含量最低。
实验三 植物营养(铵态氮,硝态氮)
高级植物生理实验报告植物营养农学院农药学东保柱20132020542013年12月27日实验1 植物组织铵态氮含量的测定（茚三酮比色法）一、实验原理植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。
测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。
根据蓝紫色的深浅，在580nm 波长下测定吸光值。
本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。
二、仪器设备研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计三、试剂1. 10%醋酸(100mL)2. 1% 抗坏血酸（100mL）3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）4. pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g或三水醋酸钠27.2g 配成1000mL）。
5. 水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。
保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。
四、操作步骤1. 标准曲线的绘制以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至2mL，对照加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。
盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。
冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以铵态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
铵态氮和硝态氮测定方法!!!---副本
铵态氮和硝态氮测定方法---副本铵态氮测量方法（2mol•L-1KCl浸提—靛酚蓝比色法）1）方法原理2mol•L-1KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。
土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。
在含氮0.05～0.5mol•L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。
2）试剂（1）2mol•L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。
（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。
此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4•7H2O，化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4•12H2O，化学纯）31.8g和52.5g•L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
（4）掩蔽剂将400g•L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O，化学纯）与100g•L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。
每100mL 混合液中加入10 mol•L-1氢氧化钠0.5mL。
（5）2.5µg•mL –1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4，分析纯0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100µg•mL –1的贮存溶液；使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5µg•mL –1的标准溶液备用。
3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。
4）分析步骤（1）浸提称取相当于10.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于150mL三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。
植物体内硝态氮含量的测定
原理
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应， 生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在 碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸 收峰的波长为量呈正比，可直接比 色测定。
材料、仪器与试剂
植物材料：菠菜 仪器：分光光度计；天平（感量0.1 mg）； 试管；刻度吸量管0.1 ml、0.5 ml、5 ml、10 ml各1支；50 ml容量瓶；小漏斗（ø 5cm）3个； 玻棒；洗耳球；水浴锅；封口膜；7 cm 定量 滤纸若干；
• 在标准曲线上查得或用回归方程计算出 硝态氮的浓度，再用以下公式计算其含 量。 V NO3 -N含量= (C× 1000 )/W • 式中 C—标准曲线上查得或回归方程计 算得NO3- —N浓度； • V—提取样品液总量； • W—样品鲜重。
注意事项：
1、一定不要将5%水杨酸-硫酸溶液溅到桌面、
实验步骤 1. 标准曲线的制作
（1）吸取500 mg/L 硝态氮的标准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml分别放入50 ml 容 量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成10、20、 40、60、80、100mg/L的系列标准溶液。
(2)吸取上述系列标准溶液0.1 ml，分别放入烘干的 试管中，以0.1 ml 蒸馏水代替标准溶液作空白。再 分别放入0.4 ml 5%水杨酸-硫酸溶液，摇匀，在室 温下放置20 min后，再加入8% NaOH 溶液9.5 ml， 摇匀冷却至室温。则显色液总体积为10 ml。 (3)绘制标准曲线：以空白作参比，在410 nm 波长 下测定吸光度。以吸光度为横坐标，硝态氮浓度 为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。
2.样品中硝酸盐的测定
(1)样品液的制备： 取一定量的植物材料，剪碎混匀， 用天平精确称取材料2 g 左右，放入试管中，加入10 ml 去离子水，用塑料封口，置于沸水浴中提取30 min。到 时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25 ml容 量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。 (2)样品液的测定： 吸取样品液0.1 ml放入烘干的试管 中，然后加入5%水杨酸-硫酸溶液0.4 ml，混匀后置室 温下20 min，再慢慢加入9.5 ml 8% NaOH溶液，待冷 却至室温后，以空白作参比，在410 nm 波长下测其吸 光度。
叶片硝态氮测定方法
如何准确测定叶片硝态氮？
叶片硝态氮是影响植物生长的重要因素，因此测定叶片硝态氮含
量非常必要。
以下介绍两种常用的测定方法，帮助大家准确测定叶片
硝态氮。
方法一：酚-亚硝酸法
1. 取适量的样品，在磨细后加入足量的闭口水中搅拌均匀，放置20-30分钟，取出过滤。
2. 取少量滤液加入1%酚水和2%亚硝酸，混匀后放置20分钟。
3. 加入硫酸蒸馏，控制加热速度，在加热过程中不断搅拌，开始
收集第一个60mL蒸馏液，舍去，收集第二个60mL蒸馏液，用3%硫酸
钠溶液进行滴定，直到背景色消失。
方法二：自动氨态氮/硝态氮分析法
1. 取适量茎叶样品，磨碎后加入硝酸钾与过磷酸钠的混合液体中。
2. 将样品放入装有附有硝态氮/氨态氮分析仪的载样舱中，进行
测试。
注意：使用前需要对分析仪进行预热，同时，还需要使用标准物
质进行标定，确保结果准确。
通过以上两种方法的操作，我们可以准确地测定叶片硝态氮含量，为培育高产优质作物提供科学依据。
植物生理学实验硝态氮
硝态氮在农业生产中的优化应用
研究在不同土壤类型、气候条件和作 物种类下，硝态氮的最佳施用量和施 用方式，以提高农作物的产量和品质 。
VS
探讨硝态氮与其他农业措施（如灌溉 、施肥、种植密度等）的协同作用， 以实现农业生产的可持续发展。
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硝态氮的吸收和运输影响因素
土壤pH值
土壤pH值影响硝态氮的溶解度和 植物对其的吸收，通常在中性土 壤中硝态氮的溶解度和吸收效率
较高。
土壤湿度
土壤湿度影响硝态氮的溶解度和扩 散速率，过湿或过干的土壤都不利ຫໍສະໝຸດ 于植物吸收硝态氮。光照强度
光照强度影响植物的光合作用和呼 吸作用，从而影响植物对硝态氮的 吸收和利用。
详细描述
硝态氮不仅为植物提供营养，还与植物激素共同调节植物的生长和发育过程。例 如，硝态氮可以影响植物激素如生长素、细胞分裂素等的合成与代谢，进而影响 植物的形态建成和生理生化过程。
硝态氮与植物抗逆性
总结词
硝态氮有助于提高植物的抗逆性。
详细描述
硝态氮对植物的抗逆性具有重要作用，如抵抗干旱、高温、盐碱等逆境条件。硝态氮能够调节植物体内的渗透平 衡、提高抗氧化酶活性等，从而提高植物对逆境的适应能力。此外，硝态氮还参与植物对病原菌的防御反应，增 强植物的抗病性。
04
硝态氮的实验研究方法
硝态氮的测定方法
酚二磺酸法
01
利用硝态氮与酚二磺酸反应生成硝基酚，再将其水解成酚，最
后用分光光度法测定硝态氮的含量。
紫外分光光度法
02
利用硝态氮在紫外光区有特征吸收峰，通过测定吸光度值计算
植物体内硝态氮含量的测定
植物体内硝态氮含量的测定
测定植物体内硝态氮含量的方法可以通过以下步骤进行：
1. 样品准备：选择一定数量的植物组织或器官作为样品，如根、茎、叶等。
将样品收集并保持新鲜。
2. 样品处理：将样品在离子交换树脂柱中进行前处理，使用硝化态氮还原剂将硝态氮还原为氨。
3. 反应体系：将还原后的样品与含有硫酚酸、过硫酸铵等试剂的反应体系混合，形成可测定的化合物。
4. 反应媒介：选择合适的反应媒介来测定反应产生的化合物，如使用紫外光谱法、分光光度法、电化学法等。
5. 检测与测量：使用相应的仪器或设备进行测量和记录，根据每种方法的特点和原理，选择合适的测量方式。
值得注意的是，硝态氮含量的测定方法可能因不同的植物物种和研究目的而有所差异，因此建议在实施前进行相关的文献调研和方法优化。
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二、植物体内硝态氮含量的测定
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况， 作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量， 不仅能够反映出植物的氮素营养情况， 对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
一）原理
贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
三）实验步骤
1. 标准曲线的制作
10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm 的系列标准溶液。
0.11cm 3,分别放入刻度试管中，以 0.11cm 3无离子水代替标准溶
液作空白，再分别加入 0.4cm 3水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置
20分钟后再加入8%NaOH 因此可 而且
色， 支； 个； 锅1 在浓酸条件下， NO 3- 与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（ 在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
二）仪器与用具
PH>12) 呈黄 1）722 型分子光光度计 1 台；（2）电子顶载天平 1 台（感量 1/ 万）；（ 3）刻度试管 20cm 326
4）刻度吸管 0.1cm 3. 0.5cm 3. 5cm 3. 10cm 3 各 1 支；（ 5 ）容量瓶 50cm 3 8 个；（6）容量瓶 25cm 33
（7）小漏斗（为5cm 3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝
个；（ 12 ）玻璃塞；（ 13 ）定量滤纸 7cm 。
试剂：
500ppmNO 3 标准溶液精确称取烘至恒重的
KNO 3 0.7221 克溶于无离水中，定容至 200cm 3。
5% 水杨酸一硫酸溶液 称取 5 克水杨酸溶于 100cm3, 浓硫酸中（密度为 1. 84 ），搅拌溶解后，
8% 氢氧化纳溶液 称取 10 克氢氧化纳溶于
1dm 3 无离子水中即可。
1 ）吸取 500ppmNO 3- 标准溶液 33 1cm . 2cm. 3cm 3. 4cm 3. 6cm 3. 8cm 3. 10cm 3. 12cm 3 分别放入 501cm 3
容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成 2 ）吸收上述系列标准溶液
溶液9. 51cm 3摇匀冷却至室温，显色液总体积为101cm3。
(3)以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。
以NO-N浓度为横坐标，吸光度为纵坐标,
绘制标准曲线。
2. 样品中硝酸盐的测定
(1)样品液的制备，取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2-3克分别放入三支刻度试
管中, 加入10cm3无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分钟，到时间后取岀，用自来水
冷却, 将是取液过滤到25cm3容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。
(2)样口液的测定吸取样品0.1 cm分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸一硫酸溶液0.4 cm3,混匀后置室温下20分钟，再慢慢加入9. 5 cm 3 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白
作参比，在410nm波长下测期吸光度。
在标准曲线上查得或用回归方程计算岀NO--N浓度，再用下公式计算其含量。
NSN含量(A畝鲜重)
标准曲线上查得或回归方程计算得曲度X牒|备
祥品鲜重
旱作物组织中硝态氮的测定一一硝酸试粉比色法
1. 目的
作物根系从土壤吸收的硝态氮，一部分很快参加蛋白质的合成但仍有相当数量的硝态氮是在向
地上部分转运途中逐步转化的。
特别是某些旱作物叶柄硝态氮的水平, 在一定范围内反映了当时体
内的氮素营养水平和土壤供氮状况。
定期检测作物适当部位的硝态氮含量的水平，可以为作物的施
肥和促控措施等提供一些依据。
本方法是基二锌在酸性条件下产生氢气，将硝酸根还原成亚硝酸根, 亚硝酸根对氨基苯磺酸和
a-萘胺作用，形成红色偶氮染料，在一定范围内可按颜色(玫瑰红)深浅估测NQ-N含量。
灵敏度范围为0.5-2Oppm，其反应一定要在PH5左右条件下进行，在碱性条件下不显色或显色
不明显。
2. 材料和试剂
(1 )硝酸试粉称硫酸钡50g，分成数份，分别与硫酸锰( MnS04?"。
)5g，锌粉1g，对氨基苯磺酸2g，a-萘1g，在研钵中研细混匀，最后与37. 5g柠檬酸一起研磨均匀，贮于暗色瓶中，防
潮避光。
此试粉灰白色，若变为粉红色，则不能使用。
(2)PH5柠檬酸缓冲液称取化学纯柠檬4. 31g，柠檬酸钠 6. 86g，溶于500ml蒸馏水中(溶
液必须新鲜酸置)。
(3 )硝态氨标准溶液称取7. 22g分析纯硝酸钾加水定容到1000ml，即为1000ppmNo-N。
3. 方法与步骤
(1)取样清晨在待测田块中，选取有代表性的植株10-20株的敏感部位，用湿布擦净，剪碎,
榨汁备用。
(2)测定于15ml刻度试管中，加入5mlPH5. 0的柠檬酸缓冲液，滴入一滴组织汁液，摇匀
加入0.2g硝酸试粉，塞紧，纵向摇动试管1分钟(200次/分)，静置15分钟后，与硝态氮试管
法比色卡或标准色阶溶液进行比较，目测硝态氮ppm 数。
(3 )结果计算
植株组级f^NOyN含童(ppm)二标准色阶相当NO3'N〔ppm)X丄*
其中：V1-显色溶液的ml数；
V2- 所取汁的ml数(按每毫升20滴计)。