月季植物组培方案
月季组织培养
目录摘要 (4)前言 (4)综述 (5)1．外植体 (5)1.1取材部位1.2取材时间1.3取材大小2. 消毒 (8)3. 接种方式 (8)4.培养基 (9)4.1基本培养基4.2激素4.2.1不同激素对诱导愈伤组织的影响4.2.2不同激素对继代培养的影响4.2.3不同激素对生根培养的影响4.3糖浓度的影响4.4无机盐4.5琼脂5.培养基的配置 (13)6.培养条件 (14)7．防褐化 (14)技术路线与实验设计 (15)参考文献 (17)摘要：为了进行月季组织培养实验，我们查阅了相关文献，从多个方面了解影响月季组织培养的因素，如外植体的取材部位、时间、大小、消毒、接种方式、不同阶段激素的配比、培养基成分、培养条件等，以期在实验中调控月季组培的环境，确保实验顺利进行。
基于我们想探究激素对组织培养中细胞的脱分化和再分化的作用这一想法，我们的设计了以ＮＡＡ浓度、６ＢＡ浓度、外植体部位为影响因素的正交实验（L9（3４）），并考察NAA与6BA的交互作用。
同时，我们还以接种方式作为单因素考察其对愈伤组织诱导的影响。
关键词：组织培养、影响因素、正交前言在阅读了植物组织培养的相关文献资料后，我们设计了此次组织培养实验方案，考察细胞分裂素浓度、生长素浓度、接种方式、取材部位因素对愈伤组织的形成有何影响，期望寻找出诱导月季愈伤组织的最佳条件；同时探究由愈伤组织诱导出芽及生根所需的最佳浓度配比。
并在月季组织培养过程中，掌握外植体消毒方面要注意的事项，整个培养过程中培养条件的选取与控制，实验过程中出现的现象的观察记录以及分析，在这个过程中不断加强理论与实践的联系，深化对理论知识的理解。
对于外植体选择，我们采用了以往研究者的做法，即选用带腋芽的枝条。
但是，我们的不同之处在于，我们还保留了一部分刚好能包裹住腋芽的叶柄。
这样做的目的是为了在消毒时避免芽受到太大损伤。
参考论文中防褐化多用抗氧化剂和其他抑制剂，减轻外植体在组培中的酶促褐变，我们根据生理生化原理，考虑到酶活性与温度有关、以及外植体内的酚类物质含量有关，因此需对外植体做如下处理：接种前先将外植体用低温水流冲洗24小时；选择晴朗天气采摘外植体。
月季的组织培养
外植体的取材部位对芽的萌发也有影响，“Gold Glow”和“Improved fire”月季的侧芽如果在不 同激素的培养基上进行组培，可发现在枝条顶部 和基部的芽发育慢，而枝条中部的芽发育快。在 研究中发现靠近外植体顶端的芽较其他部位芽的 发育慢，在茎尖脱毒培养时，由嫩茎的顶芽得到 的外植体成活率高于腋芽。在实际工作中由于顶 芽数量少，故月季的组培依旧常常使用腋芽作为 外植体，这时一般需要进行茎切除顶芽（摘心） 以打破顶端优势、促使腋芽健壮生长，以促进嫩 茎的增殖。 此外，外植体的取材时间及培养所需时间对月季 嫩茎的发育和增殖也有影响。对于“Bulgarian rose”而言，选取外植体的最佳时间是冬季 （1～3月），而“Improved fire”月季的培养时 间以28d继代一次较好，超过 28d，茎的数目就 不再增加了。
诱导培养基以MS为基本培养基（硝酸 盐、钾和铵的含量高），附加适量的 细胞分裂素6-卞氨基嘌呤（6-BA）0.53.0mg/L和生长素萘乙酸（NAA） 0.01-1.0mg/L,且培养基中添加蔗糖有 增加丛生芽数量的作用。
壮苗培养与生根
1、壮苗培养 在继代培养过程中，细胞分裂素浓度的增加有助于增殖系 数的提高。但伴随着增殖系数的提高，增殖的芽往往出现 生长势减弱，不定芽短小、细弱，无法进行生根培养的现 象；即使能够生根，移栽成活率也不高，必须经过壮苗培 养。壮苗培养时，可将生长较好的芽分成单株培养，而将 一些尚未成型的芽分成几个芽丛培养。 通过选择适宜的细胞分裂素和生长素的种类及不同浓度配 比，可以同时满足增殖和壮苗的不同要求。高浓度的生长 素和低浓度的细胞分裂素的组合有利于形成壮苗。因此， 在以丛生芽方式进行增殖时，适当降低培养基中BA等细胞 分裂素的浓度，并增加NAA等生长素的浓度，就能达到壮 苗培养的目的。在实际生产中，我们一般用较低浓度的细 胞分裂素与生长素组成合理的比列，将有效增殖系数控制 在3.0-5.0，以实现增殖和壮苗的双重目的。
月季新品种培育的方法和途径
月季新品种培育的方法和途径
答案：
月季新品种的培育主要通过杂交育种、芽变育种和组织培养三种途径实现。
杂交育种是通过选择具有特定性状的亲本进行杂交，以期获得具有优良性状的新品种。
在杂交初期，对亲本的选择具有一定的针对性，例如，若要培育超级微型月季，则选择小型月季作为亲本。
杂交后产生的种子经过播种、生长、筛选等过程，最终筛选出具有优良性状的新品种。
这一过程需要层层筛选，从初选到进一步测试抗性，再到试种，能够保留进入市场的品种非常稀少，可以说是“万里挑一”。
芽变育种则是利用物理或化学手段导致月季产生芽变，从而获得新品种。
芽变的方向是不确定的，可能会产生花型、花色等方面的变异，甚至叶子出现斑点等。
虽然芽变后很快就能发现开花的特性，但大部分芽变并没有意义或不稳定，因此需要大量的苗圃和筛选工作来发现和保留有价值的芽变。
组织培养是一种通过无菌操作，利用植物组织或细胞进行培养，以快速繁殖植物或产生新品种的技术。
在组织培养过程中，选择生长健壮的当年生枝条作为外植体，通过特定的培养基和条件，促使芽萌发和生长，最终形成新的植株。
这种方法在月季新品种的培育中起到了重要作用，能够加速新老品种的更新换代。
综上所述，月季新品种的培育是一个复杂而精细的过程，涉及多种技术和方法的应用，以确保最终培育出的新品种具有优良的性状和观赏价值。
月季的植物组织培养
月季的植物组织培养一．实验目的1．掌握蔷薇科月季的组织培养技术2．熟悉、巩固无菌操作技术二．实验器皿及试剂1.仪器及用品：超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、电热炉酒精灯、镊子、解剖刀、解剖剪、烧杯、三角瓶、培养皿、滤纸、封口膜2.试剂：MS+6BA1+NAA1（诱导）培养基、MS+6BA2+NAA2（继代）培养基、70%酒精、3%次氯酸钠、无菌水3.材料：月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药。
三．实验步骤配制诱导培养基：MS+6BA1+NAA1，1升，灭菌后分装到35个培养1.皿中。
2.取材：将采集的月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药冲洗干净，按不同部位分装到3个500烧杯中，放入超净工作台；先用70%酒精浸没并轻摇10秒进行预消毒；倒出酒精，加入3%次氯酸钠浸没，轻摇11分钟；倒净次氯酸钠，用无菌水冲洗5遍以上，倒出无菌水。
3.将消毒后的外植体放入带有滤纸的无菌平皿中，用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成5mm2大小、茎段长2—3cm每段至少有1 个侧芽、将花苞打开取花药，分别接种到带有培养基的平皿中并封口（每皿3—5个）。
4.标记好后，放入培养室中培养（2周左右）。
5.配制分化培养基：MS+6BA2+NAA2培养基，配制1升，灭菌后分装到35个100ml的三角瓶中。
6.挑选长有愈伤组织的外植体，将其转移到分化培养基中。
在超净工作台中，将培养皿封口膜在酒精灯旁打开，将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从平皿中取出，转移到带有分化培养基三角瓶中（每瓶最多）并封口。
7.标记好后，放入培养室培养。
继续观察愈伤组织的生长情况。
四．实验结果茎段出愈率=25根出愈/总接种40根*100%=63%叶片出愈率=5片出愈／总接种30片*100%=17%花药及萼片出愈率=1片出愈/总接种20片*100%=5%通过实验得出月季茎段的出愈率最高，其次是叶片及花药。
接种过程中有三个平皿出现污染现象。
五．问题分析及解决1.三个污染的外植体，两个是叶片内延至周围。
月季组织培养
有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等
植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
不同植物激素使用顺序和使用量
使用顺序 实验结果
先生长素， 有利于分裂但 后细胞分裂素 不分化 先细胞分裂素， 细胞既分裂也 分化 后生长素 同时使用 分化频率提高
生长素细胞 结果 分裂素比值 比值高时 促根分化， 抑芽形成 比值低时 促芽分化， 抑根形成 比值适中 促进愈伤组 织生长
3 .培养基
• 用于月季的基本培养基种类很多，如 B5、N6、WPM和 MS 培养基等。众多培养基中以 MS 培养 基的效果为最好，广泛用于月季的离体快速繁殖中。培养基的培养成分（主要是各类无机盐浓度） 及物理性能（pH 值、糖分以及固化支持物）会影响月季的组培。对 MS 培养基的成分及物理性能 进行合理的选择会提高月季组织培养的成功率。 MS 培养基中无机盐离子浓度因月季培养阶段的不同而有不同： 1）茎段培养阶段，将带有腋芽的嫩茎接种到不添加任何激素类物质的 MS 和 1/2MS 培养基上，两 周后，MS 培养基上的腋芽生长，而在 1/2MS 培养基上的腋芽几乎不萌发或发育不良。通过提高 MS 培养基中氯化钴的浓度，并用硫酸铵代替硝酸铵培养“Bulgarian rose”，可使其茎的生长状况 得到改善。同时有报道认为在 MS 培养基中添加硝酸银可以缓解叶片衰败并提高茎段侧芽的生长。 2）诱导生根阶段，一般要求较低的 MS 培养基无机盐离子浓度。Skirvin 等在用（Forever Yours ）月季做生根试验时发现，采用1/4MS 培养基，不加生长素即可以促进生根。
外植体消毒
接种
冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌 水冲洗至少三次之上
培
养
栽
培
移
栽
月季组培方案
月季的组培一、工作目标通过此项工作掌握植物组织培养的基本知识，并掌握月季的组培技术二、材料用具超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、无菌培养皿、酒精灯、接种工具、无菌瓶、烧杯三、工作过程1.培养基的配置初代培养基：MS+6-BA0.5~3.0mg/L+NAA0.01~1.0mg/L继代培养基：MS+BA0.5~2.0mg/L+NAA0.01~0.05mg/L生根培养基：1/2MS+IBA 0.2mg/L+活性炭2.培养过程（1）外植体的选择一般选取生长健壮的带腋芽的枝条是较适宜的外植体，选芽以茎段中芽为最好，采样成活率较高，枝条须保留一部分包裹住腋芽的叶柄，避免在消毒时芽受到太大损伤（2）外植体的消菌灭毒接种材料为当年抽生侧芽饱满的幼嫩茎段，自来水冲洗10-20min；75%或70%乙醇浸泡30s,0.1%升汞表面消毒3min,无菌水冲洗4-5次，将侧芽切下接种到MS培养基上，获得无菌苗备用。
取回枝条用自来水冲洗干净，无菌条件下用70%酒精表面消毒30-40s，再用0.1%Hgcl2溶液灭菌5-10min，最后用无菌水冲洗3-5次（3）初代培养将消毒后的外植体放入带有滤纸的无菌平皿中，用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成5mm大小、茎段长2~3cm，每段至少有一个侧芽、将花苞打开取花药，分别接种到带有培养基的培养皿中并封口（每皿3~5个），标记好后，放入培养室中培养2周左右（4）继代培养挑选长有愈伤组织的外植体，将其转移到分化培养基中。
在超净工作台中，将培养皿封口膜在酒精灯旁打开，将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从平皿中取出，转移到带有分化培养基三角瓶中（每瓶最多）并封口。
（5）生根培养苗高2~3cm,茎粗0.1cm左右，苗开始木质化，此时进行生根培养，把苗转移到生根培养基上。
观察它生长情况。
（6）驯化小苗接到生根培养基上后，14d可见基部分化出根点，20d则长出许多白根。
此时组培阶段结束，进入试管苗移栽成活阶段。
有菌条件下月季组织培养技术
有菌条件下月季组织培养技术摘要介绍有菌环境条件下月季组织培养技术，包括培养基组成、培养瓶灭菌、灭菌培养基的制作、取材、材料处理、接种、培养、继代增值培养、生根培养、炼苗等方面内容，以为月季无性繁殖提供参考。
关键词月季；组织培养；有菌环境月季属蔷薇科蔷薇属花卉，品种繁多，近100年来累计的品种数以万计，目前流行的有数千个品种，而且每年许多国家仍在不断选育新品种。
现在许多国家都在用组织培养技术来繁殖月季的优良品种，目前这种快速繁殖方法技术成熟，已进行工厂化生产，对加速老品种的更新换代，迅速普及月季名优新特品种将起到重要的作用。
月季常规组培技术报道很多，但在有菌环境条件下的月季组织培养技术未见报道。
1培养基组成诱导萌芽培养基：MS+BA 0.5-1.0 mg/L+S106杀菌剂0.3 mL/L；增殖培养基：MS+BA 1-2 mg/L+NAA 0.1-0.2 mg/L+S106杀菌剂0.3 mL/L；生根培养基：1/2 MS+NAA 0.1-0.2 mg/L+IAA 1.0 mg/L（或NAA 0.5 mg/L）+S106杀菌剂0.3 mL/L。
2培养瓶灭菌根据培养瓶的大小、数量，以浸没培养瓶及瓶盖为度，在水池或容器中量取适度的自来水，然后加入S105杀菌剂0.2 mL/L，搅拌均匀，放入洗净的培养瓶及盖浸泡2 h以上。
然后捞取培养瓶及盖，将其倒扣在干净的工作台面上滤干水，待用。
3灭菌培养基的制作以制取1 L培养基为例：量取1 L自来水放在电饭煲内加热（因加热蒸发加入母液后到分装时煮沸刚好是定容要求的1 100 mL，冷却后就是1 L，故配1 L 培养基量取1 L自来水），称取白糖30 g、琼脂4 g，加入电饭煲锅水中，待全部溶解，再加入100倍MS母液（其中：大量元素A 10 mL、大量元素B 10 mL、铁盐10 mL、微量元素10 mL、有机物10 mL、1 mg/mL BA 0.5-1.0 mL），煮沸。
月季组培实验报告(3篇)
第1篇一、实验简介实验名称：月季组培实验实验目的：通过组培技术，了解月季组织培养的原理和方法，掌握无菌操作技术，提高植物繁殖效率，为月季的快速繁殖和遗传改良提供技术支持。
实验时间：2023年X月X日至X月X日实验地点：XX大学园艺实验室实验材料：月季植株（品种：XX）实验设备：超净工作台、无菌操作箱、高温高压灭菌器、移液枪、解剖刀、培养皿、试管、滤纸、镊子、剪刀、酒精灯、高压蒸汽灭菌锅等。
二、实验方法1. 外植体选取与消毒：- 选择生长健壮的月季植株，取其茎尖作为外植体。
- 使用无菌水清洗外植体，然后用75%酒精浸泡30秒，再用无菌水冲洗3次。
- 将外植体置于0.1%的氯化汞溶液中消毒5分钟，再用无菌水冲洗5次。
2. 诱导生根：- 将消毒后的外植体切成1-2厘米的小段，接种到含有不同激素比例的MS培养基中。
- 将接种后的培养皿放入培养箱中，培养温度为25℃，光照时间为12小时/天。
3. 生根培养：- 当外植体开始生根时，将培养基更换为含有较低激素浓度的MS培养基。
- 继续培养至生根率达到80%以上。
4. 炼苗与移栽：- 将生根的植株从培养皿中取出，置于温室中炼苗。
- 炼苗成功后，将植株移栽到花盆中，进行正常的养护管理。
三、实验结果与分析1. 外植体消毒效果：- 通过显微镜观察，发现消毒后的外植体表面无细菌污染，说明消毒效果良好。
2. 诱导生根效果：- 在不同激素比例的培养基中，生根效果最好的培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/L IBA。
- 在此培养基中，生根率达到90%，平均根长为3.5厘米。
3. 炼苗与移栽效果：- 炼苗过程中，植株生长良好，无病虫害发生。
- 移栽后的植株成活率达到了95%。
四、实验讨论1. 外植体选取：- 本实验选择茎尖作为外植体，主要是因为茎尖细胞分裂旺盛，易于诱导生根。
2. 消毒方法：- 消毒是组培实验的关键步骤，本实验采用氯化汞溶液消毒，效果良好。
3. 激素配比：- 激素配比对生根效果有显著影响，本实验通过优化激素配比，提高了生根率。
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月季组织培养方案
1供试材料来源:本实验材料取自盆栽的丰花月季,剪取腋芽尚未萌发的枝条,去除茎段两端各2毫米，选芽以茎段中芽为最好。
2技术路线:
外植体选取——初代培养——增值培养——生根培养——训化
3方法步骤:
（1）外植体的剪取和消毒程序的筛选: 取无菌苗叶片切成0.5cm×0.5cm的小块，叶柄，茎段切成小段。
外植体很小时，有利于培养脱毒的植株(对月季的杉树坏疽环斑病毒可通过茎尖培养的方式达到脱毒的目的，如果单纯为了快速繁殖，可用大的茎尖或茎段进行离体培养，这时外植体的大小决定了茎尖的成活比例。
一般说外植体愈大，成活率愈高，成苗时间愈短。
外植体的大小同时影响外植体自身的发育和月季组培苗茎的增殖，外植体的长度在9.0-10.0mm，直径在3.0-3.5mm范围时(茎的增殖和发育是最好的）.消毒:接种材料为当年抽生侧芽饱满的幼嫩茎段，自来水冲洗10-20min;75%或70%乙醇表面消毒15s。
用无菌水冲洗3次。
2%NaClO灭菌5—10min。
然后用无菌水冲洗3次。
（2）初代培养基的筛选:诱导培养基以MS为基本培养基，附加适量的细胞分裂素6一苄氨基嘌呤(6-BA)和生长素萘乙酸(NAA)。
NAA增加至0.1mg,L时，6一BA浓度的高与低已对增殖系数不产生明显影响。
最适的侧芽诱导培养基为MS + 6一B A 0.5,3.0 mg,L + NAA 0.0l,1(0mg,L，且培养基中添加蔗糖有增加丛生芽数量的作用。
（3）增殖培养基的筛选:诱导培养基上已经萌发的嫩芽转入附加6一BA、NAA等激素的MS培养基中，进行增殖继代。
KT，IAA等激素作用效果较差，协同作用不明显。
低浓度的6 一BA有利于不定芽的增殖，浓度过高则抑制不定芽增殖，适量NAA有利于芽和叶生长，但浓度过高诱导产生大量愈伤组织，不利于侧芽的直接分化和生长。
在NAA浓度相同BA 浓度不同的培养基中，随BA浓度的升高，芽苗的增殖系数也相应提高。
在BA浓度相同而NAA浓度不同的培养基中，随NAA浓度升高，小芽生长速度加快
(4).生根培养基的筛选:无菌芽苗在继代培养基中只诱导地上部分生长。
待培养一段时间后，转入生根培养基中，诱导生根。
采用1,4 MS培养基，不加生长素即可以促进生根。
在无菌苗的生根诱导过程中，生长素的种类和浓度起决定性作用。
分浓度NAA、IBA、IAA 对藤本月季进行生根培养，发现3种生长素的生根效果不同，且浓度的影响较大。
发现低浓度的生长素有利于根的形成，适当浓度的IBA、NAA 对生根率有显著影响，浓度过高会抑制根的形成，NAA浓度为0.50mg,L时效果最佳。
生根阶段加人活性炭(AC)后，有助于提高生根率和生根质量。
(5).试管苗移栽实验
小苗接到生根培养基上后，14d可见基部分化出根点，20d则长出许多白根。
此时组培阶段结束，进入试管苗移栽成活阶段。
所有试管苗移栽前都应先将生根苗移至室温进行移栽前的锻炼。
锻炼时问与移栽成活率有关，练苗7d以上，成活率达到95,。
影响移栽成活率的主要因素有3个:湿度、温度以及基质种类和带菌量。
考虑到这3个因素，移栽时应保持90,以上湿度，18,25?的环境温度，基质用0.2 ,的高锰酸钾或其他灭菌剂进行消毒灭菌。
而基质的选择上，以蛭石和珍珠岩的栽培效果较好。
移栽成活后喷极稀的营养液，使小苗得到营养补充。
l0,15d即长出新叶，且根系快速生长，可适时进行大田移栽。