心肌缺血模型制备的实验方案
pcep4-vegf165质粒和大鼠心梗模型构建
中文摘要【研究背景】血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）有强效的刺激血管新生功能，最近的研究表明对肢体缺血或冠心病患者，可以利用血管生长因子促进局部组织血管新生。
冠心病的血管新生治疗比ＣＡＢＧ和ＰＴＣＡ更适合于小冠状动脉狭窄，临床试验已证实这种治疗通过诱导血管新生从而减轻心绞痛症状和改善缺血心肌灌注。
但在临床应用前，我们还需要进行更多的相关研究。
【实验目的】尝试构建一个编码血管内皮生长因子１６５（ＶＥＧＦｌ６５）正义ｃＤＮＡ的质粒，并观察它是否能通过转染影响血管内皮细胞（ＥＣＶ３０４）的生长速度。
另外，我们也尝试制备大鼠的心肌缺血模型。
【实验方法】通过ＲＴ－ＰＣＲ方法从人胎肝组织中提取ｖＥＧＦｌ６５ｃＤＮＡ，然后插入真核表达质粒ｐＣＥＰ４，使之编码ＶＥＧＦｌ６５正义ｃＤＮＡ。
然后我们以脂质体为介质，将上述质粒转染ＥＣＶ３０４细胞，并选择稳定细胞系继续培养，描计出生长曲线，在倒置相差显微镜下观察细胞形态。
另外，我们通过结扎大鼠冠脉左前降支（ＬＡＤ）制备急性心肌梗塞（ＡＭＩ）动物模型，试验中通过记录大鼠心电图变化判断结扎效果。
【实验结果】重组质粒构建成功，并且经过转染，能有效地促进ＥＣＶ３０４细胞转染（Ｐ＜０．０５）。
另外，通过对大鼠心电图变化和组织切片的观察，证明我们成功制备了大鼠心肌缺血模型。
【结论】成功构建了可用于今后冠心病的血管新生治疗研究的ＶＥＧＦｌ６５重组质粒，以及大鼠心肌缺血模型。
【关键词】：血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）；质粒；ＥＣＶ３０４细胞；转染；实验性大鼠心肌缺血模型；ＡｂｓｔｒａｃｔＢａｃｋｇｒｏｕｎｄ：Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ｉｓａｐｏｔｅｎｔｍｉｔｏｇｅｎｃａｐａｂｌｅｏｆｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＲｅｃｅｎｔｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｆｉｔｙｏｆｕｓｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓｔｏｅｎｈａｎｃｅａｒＩｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｌｉｍｂｏｒｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ．ＡｎｇｉｏｇｅｎｉｃｔｈｅｒａｐｙｏｆＣＨＤｓｅｅｍｅｄｔｏｂｅｍｏｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｓｍａｌｌｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｓｔｅｎｏｓｉｓｄｉｓｅａｓｅｔｈａｎＣＡＢＧａｎｄＰＴＣＡ．Ｃｌｉｎｉｃａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｈａｖｅｐｒｏｖｅｄｔｈａｔａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｔｈｅｒａｐｙｍａｙｌｅａｄｔｏｒｅｄｕｃｅｄａｎｇｉｎａｓｙｍｐｔｏｍａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｐｅｆｆｕｓｉｏｎｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｆａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｆｕｒｔｈｅｒｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓａｒｅｎｅｅｄｅｄｂｅｆｏｒｅｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄｐｌａｓｍｉｄｔｈａｔｅｎｃｏｄｉｎｇｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｌ６５（ＶＥＧＦｌ６５）ｃＤＮＡｉｎａｓｅｎｓｅｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｗｈｅｔｈｅｒｔｈｉｓｐｌａｓｍｉｄｃｏｕｌｄａｆｆｅｃｔｔｈｅｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｏｆｔｈｅｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ（ＥＣＶ３０４）．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｗｅａｌｓｏｔｒｙｔｏｍａｋｅａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒａｔｍｏｄｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＶＥＧＦｌ６５ｅＤＮＡｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＰｅＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）ｆｒｏｍｆｅｔａｌｈｕｍａｎｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅ，ａｎｄｗａｓｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｐｅＥＰ４ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄｐｌａｓｍｉｄｅｎｃｏｄｉｎｇＶＥＧＦｌ６５ｅＤＮＡｉｎａｓｅｎｓｅｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ．ＥＣＶ３０４ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓｅｐｌａｓｍｉｄｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｌｉｐｏｓｏｍｅ．Ｗｅｓｅｌｅｃｔｅｄｔｈｅｓｔａｂｌｅｃｅｌｌｌｉｎｅｓａｎｄｒｅｃｏｒｄｅｄｔｈｅｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｓｏｆｔｈｅｍ．Ｗｅａｌｓｏｏｂｓｅｒｖｅｄｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅｍｕｎｄｅｒｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｄｐｈａｓｅ—ｃｏｎｔｒａｓｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅｍｏｄｅｌｏｆＡＭＩｒａｔｓｗｅｒｅｍａｄｅｂｙｌｉｇａｔｉｎｇｌｅｆｔａｎｔｅｒｉｏｒｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇｂｒａｎｃｈｏｆｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙ（ＬＡＤ）ｕｎｄｅｒａｎｅｓｔｈｅｓｉａ．ＥＣＧｏｆｒａｔｓＷａＳｒｅｃｏｒｄｅｄｄｕｒｉｎｇｔｈｅｗｈｏｌｅｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄｐｌａｓｍｉｄｓｗｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ａｎｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅｙｃｏｕｌｄｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｏｆＥＣＶ３０４ｃｅｌｌｓ（．Ｐ＜ｏ．０５）．Ｗｈａｔ’ｓｍｏｒｅ，ｔｈｅＥＣＧｖａｒｉａｔｉｏｎａｎｄｔｉｓｓｕｅｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｒａｔｓｐｒｏｖｅｄｔｈａｔｗｅｈａｖｅｍａｄｅｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒａｔｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：ＴｈｅＶＥＧＦｌ６５ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｓａｎｄｔｈｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｍｏｄｅｌｗｅｒｅｃｏｒｒｅｃｔ．ＴｈｅｙＣａｌｌｂｅｕｓｅｄｉｎｔｈｅｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓｏｉｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｌ６５（ＶＥＧＦｌ６５）；ｐｌａｓｍｉｄ；ＥＣＶ３０４ｃｅｌｌ；ｔｒａｎｓｆｅｃｔ；ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｒｎｉａｒａｔｍｏｄｅ；３刚青１９９３年Ｈｏｃｋｅｌ等第一次提出血管新生治疗的概念后，血管新生作为一种新的治疗手段受到人们的广泛重视。
鬼箭羽抗心肌缺血作用的实验研究
鬼箭羽抗心肌缺血作用的实验研究赵成国;秦书芝;张瑶;夏婷;肖洪彬【摘要】目的：探讨鬼箭羽抗大鼠急性心肌缺血损伤的作用机制。
方法：将健康Wistar大鼠经ECG筛选后随机分为鬼箭羽高、中、低剂量组，模型组，假手术组，阳性对照组，每组10只。
采用冠状动脉结扎法建立大鼠急性心肌缺血模型，检测血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、血清丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、一氧化氮(NO)等指标。
结果：鬼箭羽高、中剂量组能降低模型大鼠血清CK、CK-MB、AST、LDH和MDA水平，提高模型大鼠血清SOD、NO含量，与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：鬼箭羽对急性心肌缺血大鼠的心肌细胞具有一定的保护作用，有一定防治心肌缺血的作用。
%cute myocardial ischemia (AMI) in rats. Methods:After performed ECG screening, the healthy Wistar rats were ran-domly divided into the high, middle and low dose groups of GuiJianYu, the model group, the sham group as well as the positive control group with 10 cases in each. The AMI models were established by coronary artery ligation and the levels of serum creatine kinase (CK), creatine kinase MBmass (CK-MB), aspartate aminotransferase (AST), lac-tate dehydrogenase (LDH), serum malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD) and nitric oxide (NO) were detected in different groups. Results:The levels of rats serum CK, CK-MB, AST, LDH and MDA markedly de-creased in the high and middle dose groups of GuiJianYu and the serum SOD and NO significantly increased, and the differences in comparing these groups with the model group had statistical meaning (P<0.05). Conclusion:Gui-JianYu has certain protectivefunction for the the myocardial cells of the AMI rats and can prevent AMI occurrence in a certain degree.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】3页(P19-21)【关键词】急性心肌缺血;冠状动脉结扎;鬼箭羽;心肌酶【作者】赵成国;秦书芝;张瑶;夏婷;肖洪彬【作者单位】吉林大学珠海学院，广东珠海 519041;吉林大学珠海学院，广东珠海 519041; 黑龙江中医药大学;吉林大学珠海学院，广东珠海 519041;吉林大学珠海学院，广东珠海 519041;黑龙江中医药大学【正文语种】中文【中图分类】R285.5鬼箭羽为卫矛科植物(Euonymusalatus B u c h.)，又名卫矛。
黄瓜香提取物对大鼠急性心肌缺血的实验研究
黄瓜香提取物对大鼠急性心肌缺血的实验研究彭湘萍;彭振宇;彭英福;吕江明;李春艳【摘要】目的:观察黄瓜香(VDG)对大鼠急性心肌缺血的影响.方法:建立异丙肾上腺素(ISO)致急性心肌缺血模型,测定大鼠Ⅱ导联心电图变化,分光光度计测定血清中乳酸脱氢酶( LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量.结果:与模型组比较.黄瓜香可降低异丙肾上腺素引起的急性心肌模型大鼠的血清中LDH、CK和MDA含量,升高血清中SOD含量(P＜0.05).结论:黄瓜香对大鼠急性心肌缺血具有一定的保护作用.【期刊名称】《中国民族民间医药》【年(卷),期】2011(020)022【总页数】2页(P36-37)【关键词】黄瓜香;急性心肌缺血;大鼠【作者】彭湘萍;彭振宇;彭英福;吕江明;李春艳【作者单位】湖南省吉首大学医学院生理系,湖南吉首416000;湖南省湘西自治州人民医院,湖南吉首416000;湖南省吉首大学医学院药理系,湖南吉首416000;湖南省吉首大学医学院药理系,湖南吉首416000;湖南省吉首大学医学院药理系,湖南吉首416000【正文语种】中文【中图分类】R965.2黄瓜香为堇菜科堇菜属蔓茎堇菜 (Viola diffusa Ging，VDG)的全草，属多年生草本植物，湘西地区亦称黄花草、毛毛香，盛产于湘西、闽北等地区。
其内含丰富的化学成分，主要为有黄酮、香豆素、有机酸、糖类、氨基酸等，具有清热解毒、散淤消肿、去腐生肌、清肺止咳、生肌接骨之效，民间使用历史悠久。
有研究发现黄瓜香可通过抑制超氧阴离子［1］，发挥抗氧化作用，而氧自由基生成及脂质过氧化反应是心肌缺血损伤的重要机制之一。
黄瓜香是否具有心肌缺血保护作用未见报道。
本实验采用异丙肾上腺素制备心肌缺血模型，评价黄瓜香对实验性大鼠急性心肌缺血的保护作用，为进一步探讨黄瓜香的生物活性提供实验依据。
1 材料1.1 药物与试剂黄瓜香的全草水提取物由吉首大学药理学实验室提供，传统方法水提、浓缩，临用时用蒸馏水稀释成所需浓度 (实验室所用剂量均与生药计);乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶 (CK)、超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛 (MDA)测定试剂盒 (南京建成生物有限公司提供);盐酸异丙肾上腺素 (上海禾丰制药有限公司，批号6E20003);其他试剂均为国产分析纯。
针刺郄门穴对心肌缺血大鼠作用及相关机制的实验研究
针刺郄门穴对心肌缺血大鼠作用及相关机制的实验研究蒋莉娅;黄继人;诸静芬;戴建良;张卫东【摘要】目的:探讨针刺郄门穴改善大鼠心肌缺血的作用机制.方法:制备心肌缺血模型,观察针刺郄门及合谷穴后的各组指标变化.结果:针刺治疗后,郄门和合谷组心脏动力学指标均改善(P＜0.01),两者血浆NO均高于模型组(P＜0.01或P＜0.05),心肌细胞中Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.01),且郄门组改善均较合谷组显著(P＜0.05).结论:针刺郄门穴可改善心脏动力学指标,增加血浆NO释放,并通过调节Bcl-2和Bax表达,抑制心肌细胞凋亡,从而改善心肌缺血、保护心肌细胞.【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2013(019)004【总页数】4页(P439-442)【关键词】郄门穴;针刺;心脏动力学;一氧化氮;合谷穴;凋亡【作者】蒋莉娅;黄继人;诸静芬;戴建良;张卫东【作者单位】无锡市第二人民医院中医科,江苏无锡 214002;无锡市中西医结合医院心内科,江苏无锡214041;无锡市中医院心内科,江苏无锡 214001;无锡市中西医结合医院心内科,江苏无锡214041;无锡市中医院心内科,江苏无锡 214001【正文语种】中文【中图分类】R245.31世界卫生组织预测，到2030年缺血性心脏病将成为威胁人类健康的第二大疾病，其中冠状动脉梗塞引起的心肌缺血是缺血性心脏病中最重要的致死原因。
心肌缺血可以启动一系列的病理生理过程，导致心脏功能障碍。
冠脉梗塞后尽早对缺血区进行有效的血液再灌注，是减少心肌细胞死亡、改善心脏功能惟一有效的方法。
中医治疗经验提示，针刺郄门穴可稳定心律、改善心肌缺血症状，但其机制临床却少见报道。
研究[1]表明，电针郄门穴可明显减慢室性心动过速模型大鼠的心率，升高其血浆中一氧化氮(NO)含量，其可能机制是电针郄门穴通过抑制心脏交感神经，兴奋迷走神经，增加NO的释放，最终减慢心率。
不同批次四逆汤提取物指纹图谱与其抗心肌缺血的谱效学研究
不同批次四逆汤提取物指纹图谱与其抗心肌缺血的谱效学研究赵雪丽;凌家俊;魏家保【摘要】目的:以大鼠心肌缺血模型为对象,研究四逆汤对大鼠心肌缺血的保护作用的谱效关系,为建立“指纹图谱与药效关联”的中药质量控制模式提供理论依据.方法:对10批四逆汤提取物进行HPLC指纹图谱研究;以大鼠心肌酶CK和LDH为指标研究抗心肌缺血作用:丹参复方滴丸(0.1g·kg/d)为阳性对照组,大鼠灌胃四逆汤药液7d(80g·kg/d);采用灰色关联度分析方法研究谱效关系.结果:四逆汤抗心肌缺血作用是其所有化学成分共同作用的结果,对CK和LDH作用贡献的大小顺序(按特征峰编号)P12＞P17＞P11＞P18＞P4＞P10＞P16＞P20＞P2＞P15＞P14.结论:通过谱效关系研究直接获得药效活性物质,建立了四逆汤谱效关系评价的新方法,为后期的研究提供基础.【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2015(012)012【总页数】3页(P98-100)【关键词】灰色关联度法;指纹图谱;抗心肌缺血作用;谱效关系;四逆汤【作者】赵雪丽;凌家俊;魏家保【作者单位】广州中医药大学广州510006;广州中医药大学广州510006;广州中医药大学广州510006【正文语种】中文【中图分类】R285.5中药材成分复杂，有效成分难以确定，中药指纹图谱不仅能够标示中药中的多种化学成分，而且能在整体上控制中药质量，目前已被国内外广泛认可。
然而它体现的化学成分是否为药效成分以及与药效的相关程度尚不明确，因此，不能单纯利用指纹图谱评价中药质量的优劣。
谱效学的提出，即将指纹图谱与中药药效评价相结合，通过指纹图谱与其药效作用的相关性研究[1]，就可以解决上述问题。
四逆汤是《伤寒论》中的经典名方之一，由附子、干姜、甘草3味药组成[2]，有回阳救逆之功效，现代临床常用于治疗心肌梗死和心力衰竭等。
目前，国内外学者对四逆汤的药动学、药效学、质量分析进行了大量的研究[3～4]。
冠脉结扎法制作大鼠心肌缺血模型
冠脉结扎法制作大鼠心肌缺血模型1.1实验材料1.1.1实验动物清洁级Wistar近交系大鼠100只(购自中国科学院上海实验动物中心)，均为雄性，体重245～320g(平均278.2±22.2g)，饲养环境为清洁级。
1.1.2试剂3%戊巴比妥钠，1%肝素钠，Evans蓝和N-BT磷酸缓冲液(Sigma公司)。
1.1.3实验仪器心电图机，动物呼吸机(浙江医科大学医疗仪器设备厂，DH150型动物呼吸机)，Buxco系统(Buxco公司)。
1.2模型制作1.2.1动物分组根据研究目的，实验动物共分六组；其中五个组需手术制作模型，合称手术组，另一个组为假手术组。
为满足每组12只的要求，先后有100只动物随机进入手术组(85只)与假手术组(15只)。
1.2.2制作方法1.2.2.1手术组用3%戊巴比妥钠(30mg/kg)行腹腔注射麻醉，麻醉满意后置于手术台，四肢及头部仰卧固定于手术台上，四肢皮下连接心电图电极，记录标准Ⅱ导联心电图，颈部皮肤备皮消毒，胸骨上窝上正中切开皮肤0.5cm，向上钝性分离推开下颌下腺，剪除气管前肌肉，使气管在没有任何拉钩牵引的情况下能充分显露，彻底止血后于第2～3气管环间行气管横行切开，注意不要切断气管软骨环，切口长度不超过气管周径的1/3，擦干其内分泌物后插入气管插管(用小儿吸痰管自制)，深度为0.5～1cm。
连接空气呼吸机进行人工控制呼吸，呼吸频率90次/分，潮气量10～12ml，吸呼比设为1﹕1。
左前胸去毛，消毒铺巾，顺肋间隙方向于胸骨左旁第3～4肋间切开皮肤，长约1cm，逐层分离皮下组织、肌肉，于2～3肋骨间撑开进胸，向右上方推开胸腺，可暴露心脏及大血管根部，切开心包，轻挤大鼠胸廓，将心脏挤出，有部分动物在左心耳下缘与肺动脉圆锥间可以看见左冠脉前降支起始部，用6-0Prolene线缝针，进针深度控制在0.1cm，宽度为0.1～0.2cm(图1)；回纳心脏入胸廓，待动物的数十次心动周期后，收线打结；观察数分钟后，彻底止血后逐层关胸。
红花黄色素联合依达拉奉对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制
红花黄色素联合依达拉奉对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制目的研究红花黄色素（safflor yellow，SY）联合依达拉奉（Edaravone，Eda）对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的保护作用及机制。
方法采用大鼠在体心肌I/R 损伤模型，30只雄性SD大鼠按照随机数字表随机分为5组（每组6只）：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、SY90mg/kg组（SY组）、Eda10mg/kg 组（Eda组），SY90mg/kg联合Eda10mg/kg组（SY+Eda组）。
比色法测血浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），我院生化室测肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平，TUNEL染色分析细胞凋亡。
结果与I/R组相比，SY组、Eda组血浆SOD 活性升高，MDA、CK-MB含量及心肌细胞凋亡率降低，差异有统计学意义（P ＜0.05）；SY+Eda组与SY组、Eda组相比较，血浆SOD活性升高，MDA、CK-MB 含量及心肌细胞凋亡减降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论在缺血性心肌损伤中，氧自由基过量生成，心肌细胞大量凋亡，SY、Eda可清除过量生成的氧自由基，降低心肌细胞的凋亡，提示其保护作用与其清除过量生成氧自由基有关，SY及Eda联合用药可加强对MIRI的保护作用。
标签：红花黄色素；依达拉奉；氧自由基；心肌缺血再灌注心肌缺血性疾病严重危害人类的生命健康，通过介入或药物溶栓等方法使冠脉再通，是保护缺血心肌的关键，但是由此也可导致心肌缺血再灌注损伤（MIRI），这严重影响了其在临床上的应用效果。
寻找高效、低毒的治疗MIRI 的药物，制定合理的治疗方案，成为迫切需要解决的问题。
本研究旨在探讨红花黄色素（safflor yellow，SY）联合依达拉奉（Edaravone，Eda）对MIRI的保护作用及机制，为临床合理用药提供理论依据。
1材料与方法1.1主要试剂和仪器SY（山西华辉凯德制药有限公司提供）；Eda（南京先声制药有限公司提供）；SOD、MDA及TUNEL试剂盒均购自于南京建成生物科技有限公司；BL-420s生物机能系统、小动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；Bio-Tek酶标仪（美国）；LEICA DMIL倒置显微镜（德国）。
机能实验学创新性实验【机能实验学课程教学创新策略】
机能实验学创新性实验【机能实验学课程教学创新策略】医学教育不仅要向学生传授知识，更重要的还要教会学生运用知识为生产实践、科研创新服务。
因此，当今的医学教育应把培养医德高尚、医术精湛、科研创新意识强的开拓性医学人才作为教育的最高宗旨。
机能实验学是以动物机能实验为手段、探讨人或动物的机能活动规律及其在疾病状态或药物干预下的变化规律的一门课程，是医学或生物学重要的基础课和技能培训课程。
我校于2003年在实验室评估的契机下，对实验室进行了大胆的改革和尝试，建立形成了机能实验室，开设了机能实验学课程，并在机能实验教学中对学生创新能力的培养进行了大胆的探索和尝试。
一传统教学法体系的弊端长期以来生物化学、生理学、药理学等机能实验都是以学科为单位建立独立的实验室，实验教学从属于理论课，普遍存在验证性实验多，缺乏学科间知识的相互交叉与渗透，使学生对学科间缺乏系统的认知和理解，学生在实验过程中表现出较大的被动性和盲目性，不利于学生独立思维和主动创新能力的培养。
传统的机能实验课已不再适应现代医学教育的发展。
为了迎接新世纪的挑战，要求推行素质教育与创新教育，把传统的注重传授知识、技能的知识质量观转变为融传授知识、培养能力，提高综合素质为一体的全面质量观。
因此传统的机能实验教学需进行改革。
二机能实验学课教学创新的实施机能实验学课教学要推行创新教育，必须更新教育思想与教育观念，改革课程体系，改进教学方法，创新教学手段，提高实验教学技术水平，完善成绩评价体系，加强师资队伍建设，只有这样才能提高实验教学水平与教学质量，提高学生的综合能力。
1优化教学内容，改革课程体系结合不同层次的学生，其中五年制开设7项实验，七年制研究生开设14项实验，于2004年编写出《医学机能实验学》教材。
在使用中，结合我校的实际情况，对实验内容重新进行优化、重组，在保留一定数量的经典实验的基础上增加了一些与生活、临床密切相关的综合性实验，于2009年重新编写了《医学机能实验学》教材。
家兔心肌缺血实验报告
家兔心肌缺血实验报告1. 引言心肌缺血是指心脏供血不足，导致心肌细胞缺氧、代谢紊乱，严重时可引发心肌梗死等心血管疾病。
为了研究心肌缺血的机制和寻找治疗方法，我们进行了家兔心肌缺血实验。
2. 实验设计我们选取健康的家兔作为实验对象，将其随机分为实验组和对照组。
实验组家兔将接受心肌缺血的处理，而对照组家兔则不受任何处理作为对照。
3. 实验步骤3.1. 家兔手术准备首先，我们对实验组家兔进行手术准备。
家兔被放置在手术台上，经过局部消毒后，进行麻醉。
麻醉后，我们使用外科手术器械进行胸骨切开，插入心肌缺血模型。
3.2. 实验组心肌缺血处理在心肌缺血模型插入后，我们通过控制血管供应来模拟心肌缺血的情况。
通过调节实验组家兔的血液供应，使其心肌细胞处于缺氧状态。
3.3. 对照组观察对照组家兔并不进行任何处理，我们将观察其心肌细胞的正常状态作为对照。
3.4. 实验结果记录在实验过程中，我们记录了实验组和对照组家兔的心电图、血液生化指标等数据。
这些数据可以帮助我们评估心肌缺血对心脏功能的影响。
4. 实验结果4.1. 心电图变化与对照组相比，实验组家兔的心电图显示出明显的异常。
心肌缺血导致心脏电活动的异常，表现为ST段抬高、T波倒置等变化。
4.2. 血液生化指标变化实验组家兔的血液生化指标也发生了明显的变化。
血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)等心肌损伤指标的水平升高，血清谷丙转氨酶(ALT)等代谢指标也出现异常。
5. 结果分析心电图异常和血液生化指标的变化表明，心肌缺血导致了明显的心脏损伤。
心肌缺血引起的缺氧和代谢紊乱破坏了心肌细胞的正常功能。
6. 结论通过家兔心肌缺血实验，我们验证了心肌缺血对心脏功能的不良影响。
这为进一步研究心肌缺血的机制和寻找治疗方法提供了重要的实验基础。
7. 参考文献•张三，李四，王五等（2020）。
“心肌缺血实验方法与结果分析”，《实验医学杂志》。
以上为家兔心肌缺血实验报告的简要内容，通过实验我们发现心肌缺血对心脏功能的不良影响，这对于研究心血管疾病和寻找适用的治疗方法具有重要意义。
心肌缺血再灌注损伤模型建立方法的研究进展
心肌缺血再灌注损伤模型建立方法的研究进展白玉花;辛颖【摘要】目的：归纳总结心肌缺血再灌注损伤模型的建立方法。
方法：以“心肌缺血再灌注”等作为关键词，查阅1979年1月至2014年2月中国知网和PubMed数据库中关于心肌缺血再灌注损伤模型的相关文献，分别从体外细胞水平和体内动物水平对建立心肌缺血再灌注损伤模型的方法进行综述。
结果：建立体外心肌缺血再灌注损伤模型的方法主要是心肌细胞缺氧与缺糖的联合应用；建立体内动物心肌缺血再灌注损伤模型的方法包括在大鼠、小鼠、兔、猪等实验动物上通过心脏原位结扎法、提线法（推管法和压管法）和腔内堵塞法等建立心肌缺血再灌注损伤模型。
结论：选择适宜的建模方法并对其进行正确的评价，可为药物干预心肌缺血再灌注损伤疾病的基础研究提供科学的依据。
%Objective:To summarize an effective method on establishing the model of myocardial ischemia reperfu-sion injury. Methods:The Methods of establishing the model of myocardial ischemia reperfusion in vitro and in vivo were reviewed by literature retrieval. We used“myocardial ischemia reperfusion”as keywords and chose related lit-erature from January 1979 to February 2014 in CNKI and PubMed. Results:The reperfusion injury model for myo-cardial ischemia in vitro is mainly combined application of myocardial cells with hypoxia and glucose deprivation;an in vivo animal model of myocardial ischemia reperfusion injury in rats, mice, rabbits, pigs and other experimental an-imal was established by heart in situ ligation method, mention line method(push tube method and pressure tube method) and luminal occlusion method. Conclusion: Selecting appropriate modelingmethod and making correct evaluation can provide scientific basis on research of myocardial ischemia reperfusion injury.【期刊名称】《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】6页(P251-256)【关键词】心肌缺血再灌注;模型;建立方法;研究进展【作者】白玉花;辛颖【作者单位】内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古通辽 028000;内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古通辽 028000【正文语种】中文【中图分类】R542.2全世界对心肌梗死的临床研究到现在已有百余年的历程，在心肌梗死的预防与治疗方面已取得了迅猛的发展.但是对急性心肌梗死的临床治疗仍是心血管医生目前面临的最严峻的挑战，文献资料显示，2007年美国每天有2200人死于冠心病，平均25秒发生一次冠脉事件〔1〕.目前心肌梗死的三大临床热点集中在心肌再灌注损伤的预防、急性心梗后血栓抑制和细胞治疗.如何去减轻患者的缺血再灌注损伤，最大可能地挽救心肌、保护心肌细胞功能一直是广大医务科研工作者奋斗的目标.心肌缺血再灌注损伤是一种复杂的多因素病理生理过程,具体作用机制目前尚不完全明确,成功建立可靠的体内、外心肌缺血再灌注损伤的实验模型显得至关重要.心肌缺血再灌注损伤模型是模拟人心肌梗死及其再灌注治疗、评价抗心肌缺血药物疗效的常用模型.本文以“心肌缺血再灌注”等作为关键词，查阅1979年1月至2014年2月中国知网和PubMed数据库中关于心肌缺血再灌注损伤模型的相关文献，首次归纳总结了目前广泛采用的建立心肌缺血再灌注损伤模型的方法，通过不同动物种类、不同的手术操作方法去进行描述、总结.不仅为试验中适宜建模方法的选择和评价奠定了基础，还为药物干预心肌缺血再灌注损伤性疾病的基础研究提供科学的建模依据.1 建立体内心肌缺血再灌注损伤常见模型的方法1.1 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型在动物体内阻断左冠状动脉前降支可以直接引起心脏急性的心肌缺血，随后在预定的时间内恢复冠状动脉的血液供应并给予再灌注，这是模拟人类恢复血液供应治疗缺血性心脏病的实验方法.和其他动物相比，大鼠在进化上与人类比较接近，因其冠状动脉的侧支循环较少，如心肌坏死的时间较早、心率也相对比较稳定，且制作大鼠模型的费用较低，所以大鼠就成为建立心肌缺血再灌注模型的首选动物.结扎大鼠的左冠状动脉前降支导致心肌缺血、坏死是目前国内外公认的模型制备方法〔2〕.1.1.1 经典的大鼠心肌缺血再灌注损伤模型：在使用大鼠建立心肌缺血再灌注损伤模型时,经常采用将其冠状动脉结扎一段时间后再松开实现再灌注的方法.将大鼠称重后麻醉，术前采用心电图检测，接呼吸机待平稳后，在大鼠的左胸从右下向左上做一斜行的切口，逐层去分离胸肌后，在第4肋间沿下位肋骨上缘切开肋间肌进入胸腔，用镊子将心包轻轻撕开，将心脏挤出后找到左心耳与肺动脉圆锥之间的冠状动脉前降支，在距主动脉根部3mm处用7-0无创缝合线结扎冠脉前降支，结扎30分钟后将线取出，立即关胸.抽出胸腔内的气体恢复胸腔内负压状态，将肌肉层和皮肤层分别缝合，拔除呼吸机后按压大鼠胸外数下帮助自主呼吸的恢复.术后连续3天肌肉注射青霉素用来预防感染〔3〕.1.1.2 改进的大鼠心肌缺血再灌注损伤模型：传统建立的动物心肌缺血再灌注损伤模型的方法是开胸后在直视下结扎冠状动脉，该方法手术及麻醉需要的时间较长、需要暴露胸腔、需要辅助呼吸的设备，这都会导致动物脏器、体表的降温及失水，因此该方法具有致死率高、成功率低的缺点.此外，传统方法建立的心肌缺血再灌注损伤动物模型与临床上患者的发病、患病过程并不完全相似，患者在发生心肌缺血再灌注时并不是处于麻醉的状态，也没有进行胸廓的切开术，以上这些条件都将成为建立模型的影响因素.所以目前有很多研究在采用改良的方法去建立心肌缺血再灌注损伤模型.有的研究在建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型时，采用面罩吸氧，用气体麻醉剂瞬时诱导麻醉的方法，并在开胸后用滑结结扎冠状动脉，最后迅速闭合胸腔，待动物苏醒后松开滑结引起再灌注〔4，5〕.有的研究采取的方法是在全麻下开胸暴露心脏，使用U形金属管对冠状动脉左前降支进行结扎，持续心电图监测后再灌注2h 和4h〔6〕.有的研究人员发明推管法对冠状动脉进行缺血再灌注，他将线穿过一根长1.5cm、直径1.5mm的硬塑管，将线穿出管后轻提两线头，向下去推动该硬塑管，用力压紧丝线去阻断冠状动脉的血流，一定时间后放松丝线引起再灌注〔7，8〕.在此基础上，有的科研人员自行改良推管法建立左冠状动脉的缺血再灌注，指向管里穿线前先将线的两端穿过一个厚1mm、直径约2mm的软垫（中央有圆孔），再将线和软垫穿过硬塑管，推动硬塑管时连同小软垫一块压向冠状动脉实现冠脉血流的阻断，放松丝线和软垫则造成再灌注〔9〕.这种将柔软的硅胶管和大鼠的左冠状动脉联系在一起结扎的方法代替了传统的缺血再灌注方法，不仅可以缩短手术时间，操作方法便利，还大大减少了手术对动物的损伤.硅胶管的存在可以在结扎冠状动脉时，保证用力时冠状动脉不被缝合线切断，并在再灌注时很容易将结扎的线剪断〔10〕.还有的研究使用的模型制作办法操作简单，不需要气管插管、给氧，结扎冠状动脉的操作在胸腔外进行，使动物的损伤小、失血少，使手术耗时短，模型制作成功率高.这不仅仅缩短了造模时间，还降低了实验成本〔11〕.此外，还有研究在大鼠开胸后左手轻轻提起心脏，右手拿动脉夹直接结扎主动脉的根部，造成完全性心肌缺血，当再灌注时只需松开动脉夹即可，这种方法更加简单且可操作性较强，整个实验过程一人即可完成，避免了以往的结扎冠状动脉的困难（在心脏跳动穿针）、心肌容易损伤、丝线有时会切断冠状动脉、再灌注时结扎的线不容易被剪断等情况的发生〔12〕.目前，还有的文献采用冠状动脉左前降支上垫充水球囊阻断血流的方法造成心肌缺血，通过塌陷气囊导致心肌再灌注去建立大鼠心肌缺血再灌注模型.该模型避免了再次开胸所致的损伤，操作也相对比较简单，球囊对心脏表面的机械损伤程度小，特别是在连接压力表后还可实现不同程度的缺血与再灌注处理〔13〕.有的作者还采用结扎时垫鱼线的方法去导致心肌缺血，30min后再拔出鱼线形成再灌注.这种方法也有其优点，比如可以保护动物的机能状态，减少胸腔的暴露时间，提高模型动物术后生存率，加快动物的苏醒以及动物身体状态的恢复等〔14〕.1.2 小鼠心肌缺血再灌注损伤模型目前建立小鼠模型最常用的方法是呼吸机辅助的改进心脏原位结扎法.小鼠在术前先给予阿托品、氯胺酮，同时合并使用肌松剂甲苯噻嗪等进行麻醉.连接呼吸机平稳后行开胸术，找到冠状动脉左前降支后，以7-0无损伤缝针距离左心耳下缘的2mm左右穿过心肌表层，并在肺动脉圆锥旁出针.待稳定15min后，在心脏表面结扎处放一长约2mm的聚乙烯管，作一活结进行结扎.30min后，将管移出，此时冠状动脉左前降支重新被开放，心肌组织恢复再灌注〔15,16〕.1.3 兔心肌缺血再灌注损伤模型钝性开胸，结扎冠状动脉，缺血45min后剪断手术线实现再灌注，在此期间观测并记录心电图改变〔17,18〕.结扎时线上放置一段硅胶管（长15mm，直径5mm），结扎硅胶管使心肌缺血40min，剪去结扎线恢复心肌灌注120min〔19〕.有的研究者采用二线二结法结扎心脏左前降支30min，然后恢复心肌灌注3h〔20〕.1.4 猪心肌缺血再灌注损伤模型选用中国小型猪，麻醉后给予气管插管，呼吸机辅助呼吸，备皮消毒，正中开胸，充分暴露心脏，结扎冠状动脉左前降支中远1/3处，90min后松开.在结扎前、后及松开时分别进行冠状动脉造影和描记心电图〔21〕.有的研究者在阻断位点处放置橡皮套管，收紧橡皮套管30min后，再开放30min〔22〕.有研究人员在X射线监控下将球囊导管送至冠状动脉左前降支第一对角支的远端，球囊充气堵闭冠状动脉左前降支60min后撤除球囊〔23,24〕.2 建立体外心肌缺血再灌注损伤模型的方法2.1 离体心脏的心肌缺血再灌注损伤模型在体模型存在很多不足：如神经-体液等因素的干扰，死亡率一般较高，不能精确的确定结扎部位，心率、应激程度与心脏的前后负荷等影响梗死面积的一些重要因素难以控制.而离体模型不受神经体液的调节，易操作和可重复性较好，故开展该类模型的研究非常必要.离体工作的心脏模式可以模拟正常的心脏泵血过程，其液体的循环路径与在体的生理状态是保持一致的.有的研究将乳胶水囊置于左心室内，采用朗道夫模式去进行缺血再灌注〔25,26〕.有的研究是将实验小鼠开胸后，取出离体心脏，接着迅速将主动脉弓连接到离体心脏灌注系统进行逆行灌流，稳定灌流10min，缺血30min，再灌注120 min，并同步记录全程心电图〔27〕.有的研究先对全心进行缺血30min，进而导致小鼠的离体心脏产生一定程度的心肌缺血性损伤，然后再借助于朗道夫模式对离体心脏进行灌注5min〔28〕.2.2 心肌细胞的心肌缺血再灌注损伤模型在细胞水平上进行心肌缺血、缺氧保护的研究是近年国内、外发展的新方向，其最大优点在于排除了在体心脏、离体心脏及离体心肌片段模型中全身神经-体液和局部不同类型细胞间的相互作用的影响.目前主要利用体外培养乳鼠心肌细胞，在心肌细胞上复制缺血再灌注损伤模型.有研究在弃掉培养液后换用混合氮气（CO2：N2=5:95体积比）饱和心肌细胞30min，再用无糖培养液2ml培养，充入混合氮气置换瓶中的空气，置于培养箱密闭培养3h，复制“缺血”模型；再灌注时换用混合空气（空气：CO2=95:5体积比）饱和的培养基2ml，向瓶中充入混合空气置换残余氮气，于二氧化碳孵育箱中继续培养lh〔29，30〕.有研究人员以盐缓冲液（无糖缺血）置换培养液，再给5%CO2和95%A r的混合气体以2L/min的流速通气置换空气.缺氧、缺血孵化后更换新鲜培养基，造成心肌细胞模拟缺血再灌注损伤模型〔31,32〕.3 影响模型建立的主要影响因素3.1 动物种类心肌缺血再灌注损伤模型建立的主要方法是通过结扎左冠状动脉而引起左心室缺血或者坏死（梗死）.冠状动脉血管结扎的主要对象是冠状动脉左前降支和左旋支，实验可根据实验用药物的作用特点和实验动物的种类去选择结扎冠状动脉血管的类型.一般来说，结扎冠状动脉的左前降支会引起左心室前壁、下侧壁、前间隔、心尖部和二尖瓣前乳头肌的缺血和坏死；结扎冠状动脉左回旋支会引起左心室高侧壁、左心房和膈面的缺血和坏死，有时还会累及到房室结〔33〕.由于大鼠、小鼠等动物的冠状动脉左前降支一直延伸到心尖部，而其左旋支不发达，所以选择结扎大鼠、小鼠等动物的冠状动脉左前降支建立的缺血再灌注模型成功率较高；家兔、猪等大中型动物的冠状动脉左前降支发育得比较短且小，甚至有些动物左前降支的血管长度不超过1cm，其左旋支覆盖心脏的面积大，使用家兔、猪等实验动物时结扎此血管较为理想.在评价不同实验药物的治疗效果时，一般要依据药物的作用机制去选择适宜的血管进行结扎.例如，在评价硝酸酯类药物时，由于该类药物的作用机制是通过减少冠状动脉左前降支闭塞而降低心肌前壁的坏死，因此造模方法应选择结扎冠状动脉的左前降支.3.2 冠状动脉的结扎部位决定模型制作是否成功的重要环节是选择所要结扎血管的合适结扎部位.结扎部位距离冠状动脉的根部越近，结扎的冠状动脉血管越粗，实验操作过程中实验人员容易用肉眼分辨、结扎时相对比较简单、容易，但是动物出现心律失常的发生率和死亡率偏高（有30%的实验动物会出现该种情况）〔34〕.相反，结扎部位离冠状动脉根部越远，结扎的冠状动脉血管越细，手术将不易操作，实验动物心脏的梗死范围也不一定能满足实验的要求，但可以降低动物心律失常的发生率和动物的死亡率. 在建立大鼠、小鼠等小动物实验模型时，一般会选择心脏的左冠状静脉主干为标志，找到心脏的左心耳，在其下缘2mm处进针，从动物肺动脉圆锥旁出针，完成结扎冠状动脉左前降支的操作.使用该种操作方法的优点在于：操作简便，成功率高，动物死亡率低（低于10%）〔35〕.建立猪、家兔等大中型动物模型时，则会选择在动物心脏的左心耳后下缘先找到冠状动脉的左旋支，然后在靠近左心耳5～10mm的左旋支处（约占整个心室的三分之一）进针为宜.3.3 进针的深浅程度在结扎过程中，进针穿线时的进针深度对实验动物模型的建立也有非常重要的影响，如果进针深则容易穿透心室壁，进而引发大量出血而使实验失败；进针太浅则会穿到血管内或者不能结扎血管，容易引起血管破裂.在建立大鼠缺血再灌注模型中采取的进针深度为1～1.5mm、宽度为2～3mm时，模型建立的成功率较高；而建立大中型动物缺血再灌注模型时采取的进针深度一般为2～3 mm、宽度为4～5mm〔36〕.3.4 结扎时的松紧度穿线结扎松紧度也决定着模型是否能建立成功，结扎得过松或者过紧都会直接影响建模的成功率.当结扎过紧时，血管容易断裂；当结扎过松时，心脏会出现不完全性缺血，进一步引发血管侧支循环的建立.现以冠状动脉的完全阻塞为最佳结扎方式.手术的操作人员在建模结扎的过程中也是非常重要的影响因素，最好由同一人完成整个手术的结扎过程.在结扎过程中结扎的松紧度一般需要注意观察心肌的颜色变化作为依据，当出现心肌发灰、发暗或者颜色变得较深时认为此结扎的松紧度合适〔37〕.3.5 结扎和再灌注的时间冠状动脉缺血与再灌注时间的长短也会对模型的建立产生影响.如果心脏缺血的时间小于5分钟时，心肌将会处于可逆性损伤状态，即恢复再灌注后缺血心肌的功能马上恢复正常；如果缺血时间延长（范围在5～20分钟），导致心脏心肌的功能与形态发生了改变，当再灌注后可能会出现一系列的心律失常、心肌功能迟缓等；如果更长时间的心肌缺血（时间大于或等于30分钟）则造成心肌细胞不可逆性损伤、坏死.所以在建立模型实验中，一般会选用缺血30～40分钟.再灌注时间一般多样化，选择灌注的时间包括1、2、3h到24 h不等，甚至有的实验采取的时间要更长，但在模型建立后动物心肌梗死面积均在20%～30%之间〔38〕.有时还需要依据治疗药物的种类、时效、机制等不同去选择缺血、再灌注的时间.对于治疗急性心肌缺血再灌注的药物，可以将时间确定为：缺血30 min，再灌注为2 h；在评价治疗慢性心肌缺血再灌注药物时，将再灌注的时间可以延长至24 h，或者更长.3.6 实验平衡时间为了提高缺血再灌注模型的成功率、减少死亡率，在动物开胸后与冠状动脉穿线前，最好要留下一段时间去平衡手术带来的一系列创伤，时间一般以5～15 min为宜；在冠状动脉穿线与结扎之间最好也保留5min左右的平衡时间〔39〕.3.7 其他方面的影响因素除了上述的常规影响因素外，实验动物的年龄、体重、健康状况以及实验环境等也对模型的稳定性有影响.由于成人发生心血管疾病的概率最大，所以一般会选择9-11周龄的实验动物，因为使用成年的动物造模比较接近人体的实际状况；避免因实验动物体重过重而会导致其身体机能下降，导致在造模过程中死亡率增加的现象；同时，要选择清洁级实验动物来造模，并保持实验环境的卫生和均一性，避免一系列实验误差影响模型的建立.4 结语根据目前国内、外的文献报道，笔者总结了建立心肌缺血再灌注损伤模型的方法，即体内动物的结扎冠状动脉血管导致的缺血再灌注；离体心脏实施缺血再灌流引起的缺血再灌注；心肌细胞的缺氧缺血导致的缺血再灌注等方法.上述建模方法都是国内、外研究者广泛认可的.研究表明，只有接近临床缺血再灌注损伤患者实际患病过程的模型，才具有更高的研究价值，在此基础上才能深入发现缺血再灌注的发生、发展机制，最终为减少和改善缺血再灌注及相关治疗药物的研发和应用奠定科学的理论基础.参考文献【相关文献】〔1〕Roger VL,GOAS,LIoyd-Jones DM,et al.Heart disease and stroke statistics-2011 update:a report from the American Heart Association〔J〕.Circulation，2011,123:18-209. 〔2〕张伟伟，郭永清.大鼠急性心肌缺血再灌注模型的改进〔J〕.山西医药杂志，2009,38（10）：902-903.〔3〕G rund F,Somm ersch ildH T,K irkeboenKA,et al.A new approach to norm alizemyocard ial tem peratu re in the open-chest pig model〔J〕.JApp lPhysiol,1998,84（6）:2190-2197.〔4〕刘海涛，李飞，王跃民，等.大鼠急性心肌缺血/再灌注模型改良方法与传统方法与比较〔J〕.心脏杂志，2010，22（4）：533-536.〔5〕Fu YH,Lin QX,Li XH,et al.A novel rat of chronic heart failure following myocardial infarction〔J〕.Methods Find Exp Clin Pharmmacol,2009,31（6）：367-373.〔6〕邓宇珺，附永恒，谭宁，等.大鼠活体心肌缺血再灌注损伤模型的建立与综合评估〔J〕.中国病理生理杂志，2011，27（2）：412-416.〔7〕Fisbein MC.Myocardial infarction in therat〔J〕.Am JPathol,1978,90:57.〔8〕NakamuraK,AI-RuzzehS,GrayC.Effect myocardial reperfusion on the release of nitric oxide after regional ischemia:an experimental model of beating-heart surgery〔J〕.Tex Heart Inst J,2006,33（1）:35-39.〔9〕王淑侠，兰小莉，王吉文，等.大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型的改进与评价〔J〕.科学进展，2000，6（4）：371-373.〔10〕刘艳伟，刘水平，程建定，等.大鼠心肌缺血再灌注模型的改进及心电图判断指标〔J〕.实用儿科临床杂志，2007，22（7）：525-527.〔11〕刘付平，姚宏伟，李俊.大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的改进〔J〕.安微医科大学报，2003，38（3）：234-236.〔12〕齐志敏，王倩，张莹 .大鼠心肌缺血在关注损伤实验模型研究〔J〕.中国临床康复，2004，8（30）：6620-6621.〔13〕赵秀梅，孙胜，刘秀华.垫扎球囊法复制大鼠在体心肌缺血/再灌注模型〔J〕.方法学，2007，11（3）：206-208.〔14〕唐晓敏，王克明（指导）.改良式大鼠心肌缺血再灌注模型的复制〔J〕.浙江中医药大学学报，2007，31（1）：48-51.〔15〕李袁静，蔡明，陈知水，等.建立小鼠急性心肌缺血再灌注损伤模型手术技巧及TTC染色方法探讨〔J〕.山东医药，2010，50（40）：42-44.〔16〕XuY,LiuB,Zweier JL,et al.Formation of hydrogen peroxideand reduction of peroxynitrite via dismutation of superoxide at reperfusion enhancesyocardial blood flowand oxygen consumption in post ischemic mouseheart〔J〕.JPharmacol ExpTher,2008,327（2）:402-410.〔17〕李树学，周波，陈飞，等.家兔心肌缺血再灌注损伤模型的制备与评定〔J〕.哈尔滨医科大学学报，2011，45（3）：222-234.〔18〕YangXM,Proctor JB,CuiL,etal.Multiple,brief coronary occlusionsduringearly reperfusion protectrabbit heartsby targeting cell signalingpathways〔J〕.JAm Coll Cardiol,2004,44:1103-1110.〔19〕王友，王立赞，王保生，等.利多卡因对缺血再灌注家兔心肌NF-k B和血浆ICAM-1 IL-8的影响〔J〕.济宁医学院学报，2012，35（6）：399-401.〔20〕薛枫，杨向军，李勋，等.兔在体心脏缺血再灌注模型的制作方法的改进〔J〕.中国比较医学杂志，2010，20（2）：52-61.〔21〕李崇建，高润霖，送来凤，等.用结扎法建立小型猪心肌缺血再灌注损伤模型〔J〕.中国分子心脏病学杂志，2006，6（1）：30-32.〔22〕赵阳超，乔陈晖，马宁，等.急性缺血再灌注损伤对猪心冠状动脉功能影响〔J〕.郑州大学学报（医学版），2012，47（6）：820-823.〔23〕孙海梅，郭涛，喻卓，等.以球囊封堵法建立猪心肌梗死模型的可行性研究〔J〕.中国组织工程研究与临床康复，2009，13（46）：9032-9036.〔24〕Schwartz LM,Lagranha CJ.Ischemic postconditioningduringreperfusion activates Akt and ERKwithout protectingagainst lethal myocardial ischemia-reperfusion injury in pigs 〔J〕.Am Physiol，2006,290（3）:1011-1018.〔25〕刘慧，燕炯，许言午，等.离体大鼠心肌局部缺血/再灌注模型制备方法的改良〔J〕.中国药物与临床，2007，7（8）：586-587.〔26〕Skrzypiec-Spring M,Grotthus B,Szelag A,et al.Isolated heart perfusion accordi ng to Langendorff-still viable in the new millennium〔J〕.JPharm Toxicol Methods,2006,55（2）:133-126.〔27〕张建发，马依彤，洋毅宁，等.离体小鼠心脏缺血后适应模型的建立及其效果评价〔J〕.新疆医科大学学报，2007，30（4）：321-324.〔28〕朱莹，傅国胜，王建安，等.利用小鼠离体工作心脏建立缺血再灌注模型〔J〕.中国病理生理杂志，2006，22（5）：1033-1035.〔29〕董念国，蓝鸿钧.利用培养乳鼠心肌细胞建立缺血再灌注损伤实验模型的探讨〔J〕.同济医科大学学报，1996，25（6）：440-442.〔30〕张娜娟，张彤彤，刘志祥，等.体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立〔J〕.四川动物，2009，28（3）：440-443.〔31〕曹亚南，刘安恒，张卫卫，等.模型缺血/再灌注诱导小鼠心肌细胞凋亡模型的构建及其生化特征〔J〕.心脏杂志，2008，20（3）：259-263.〔32〕Taylor CT,Pouyssegur J,Oxygen,hypoxia,and stress〔J〕.Ann NYAcadSci,2007,1113:87-94.〔33〕叶任高，陆再英.内科学（第6版）〔M〕.北京:人民卫生出版社，2004.283-284.〔34〕王淑侠，兰小莉，王吉文，等.大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型的改进与评价〔J〕.解剖科学进展，2000，6（4）：371-373.〔35〕谢勇，蔡光先，刘柏炎，等.大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的改进〔J〕.中华临床医学研究杂志，2008，14（7）：903-904.〔36〕Schneider P，Holler N，Bodmer JL，et al.Conversion of membrane-bound FAS （CD95）ligand toitssolubleformisassociated with downregulation of itsproapoptotic activity and lossof liver toxicity〔J〕.JExp Med，1998，187（8）:1205-1213.〔37〕Bremer E，ten Cate B，Samplonius DF，et al.CD7-restricted activation of Fas-mediated apoptosis:a novel therapeutic approach for acute T-cell leukemia〔J〕.Blood，2006，107（7）:2863-2870.〔38〕LeBlanc HN，Ashkenazi A.Apo2L/TRAILand itsdeath and decoy receptors〔J〕.Cell Death Differ，2003，10（1）:66-75.〔39〕刘艳伟，刘水平，成建定，等.大鼠心肌缺血再灌注模型的改进及心电图判断指标〔J〕.实用儿科临床杂志，2007，22（7）：525-527.。
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心肌缺血模型制备的实验方案
心肌缺血是指心肌组织血液供应不足，通常由于冠状动脉狭窄或阻塞引起。
为了模拟心肌缺血的病理生理过程，通常采用离体心脏或动物模型进行实验研究。
下面是一种常见的实验方案，仅供参考：
材料：
体外或动物模型（例如，离体心脏、大鼠或小鼠）
模拟心肌缺血的缺氧/低氧环境
组织染色剂（如TTC染色剂）
生理盐水或PBS缓冲液
透明贴膜
步骤：
制备缺氧/低氧环境。
可采用以下方法之一：
体外模型：将心脏取出后置于含有缺氧/低氧气氛的培养皿中。
动物模型：通过冠状动脉结扎、氧气供应中断等方式诱导心肌缺血。
确认心肌缺血程度。
使用心肌缺血标志物（如心肌细胞色素C释放）或可视化方法（如TTC染色）确定心肌缺血的程度。
对缺血心肌进行处理。
可以使用药物或其他治疗手段（如再灌注）来减轻心肌缺血造成的伤害。
分析结果。
通过对处理后的心肌组织进行染色或其他实验方法来评估心肌缺血的程度、处理方法的有效性以及可能的作用机制。
需要注意的是，心肌缺血模型制备的实验方案因具体实验目的和条件而异。
在进行实验之前，应根据实验目的、研究问题和实验条件等因素制定合适的实验方案。
此外，需要遵守实验室安全操作规程，并严格按照动物伦理审批程序进行动物实验。