心脏灌流

方
法
1. 破坏蟾蜍脑脊髓，仰卧位固定在蛙板上，打开胸腔和 心包膜，暴露心脏。
2. 心室插管：在主动脉干下方引2根线，一条在左主动脉上端结 扎作插管时牵引用，另一根则在动脉圆锥上方，系一松结用于结扎固 定蛙心插管。在松结上方左主动脉根部剪一小斜口．将盛有少许任氏 液的蛙心插管由此剪口处插入动脉圆锥。当插管头到达动脉圆锥时， 再将插管稍稍后退，并转向心室中央方向，在心室收缩期插入心室。 判断小插管是否进入心室可根据插管内的任氏液的液面是否能随心室 的舒缩而上下波动。如蛙心插管已进入心室，则将预先准备好的松结 扎紧，并固定在蛙心插管的侧钩上以免挂心插管滑出心室。剪断主动 脉左右分支。 3. 游离蛙心：轻轻提起蛙心插管以抬高心脏，用一线在静脉窦 与腔静脉交界处作一结扎，注意避免不要损伤静脉窦，在结扎线外侧 剪断所有组织，将蛙心游离出来。
Necly等(1967)：在肺静脉或左心房内插入另一根 导管，灌流液经此导管进入左心房，并通过二尖瓣进入 左心室，左心室收缩时将灌流液通过主动脉泵出，该方 法可改变心脏的前后负荷，测定心输出量、压力－容积 作功关系等。
经肺静脉、左心房和二尖瓣将微型压力传感器放入左心室腔可 直接记录和测定左心室内压力变化，如左心室收缩压（LVSP）、左 心室舒张末期压（LVEDP）和左心室压力变化速率（LV dP/dP）等； 利用一根放入肺动脉内的导管连接到PMH 73酸碱／血气检测 仪上的E 5046型电极可测定冠状静脉的Po2,并可结合灌流液的Po2和 冠状动脉流量计算心肌耗氧量； 经过两根固定在心脏表面的电极可记录心外膜心电图；心脏内 埋藏电极记录希氏束电图等。
参考文献
Langendorff O. Pfluger’s Arch Ges Physiol 1895； 61:291~332 Bardeoheuer H，Schrader J. Relationship between myocardial oxygen consumptjon，coronary flow，and adenosine release in an improved isolated working heart preparation of guinea pigs Circ pigs．Circ Res 1983; 51：263-271 51 263-271 Scholz W, Albus U, Martorana P, et al. Effects of Na+/H+ exchange inhibtors in cardiac ischemia. J Mol Cell Cardiol. 1992; 24:731740 彭章平、朱建华主编 现代缺血性心脏病学。 北京：人民军医出版 社，2000
离体心脏灌流方法 离体心脏灌流方法
两栖类动物： 蟾蜍、青蛙等 Straub Straub法、八木法
哺乳类动物：大鼠、家兔、猫等 Langendroff 法
经典的离体蛙心灌流——Straub法 法 经典的离体蛙心灌流
特点： 灌流途径与正常循环途径不同，蛙心插管 通过主动脉瓣直接插入心室腔内，灌流液通过 同一蛙心插管进入心室腔和流出，前负荷和后 负荷相等。
Bardenheuer 等 (1983) ： 小 球 囊 插 入 左 心 室 的 方 法 与 Gottlieb等的方法相似，但并不测量左心室等容压力，而是通过一 个插管将球囊内的液体泵人一个体外的闭合循环通路中，并由两个 弹性瓣膜控制其单向流动。每次心脏收缩时，由球囊排除的液体量 相当于心脏的每搏输出量，可以通过顺序连接的一个流量计探头和 一个积分仪进行测量。前负荷和后负荷可以分别调整。经主动脉逆 灌进入冠状动脉的灌注液流量也可单独记录下来。 离体工作心脏（isolated working heart preparation）
八木法离体蛙心灌流
特点： 灌流途径按正常循环途径设计，一根蛙心插管插入 左肝静脉并进入静脉窦，另一根蛙心插管仅插入主动 脉，并不穿过主动脉瓣进入心室腔内，可以根据实验 要求设定不同的前负荷和后负荷。
实验步骤
1. 破坏蟾蜍脑脊髓，暴露心脏。 2. 依次将右主动脉、左右前腔静脉、左右肺静脉、后腔静脉和右肝 静脉分离穿双线，双结扎后剪断，只保留左主动脉和左肝静脉。在左肝 静脉下穿线打虚结备用，在左肝静脉剪一斜口，将充有任氏液的蛙心插 管插入左肝静脉，结扎固定。 3．用任氏液将心脏中血液冲洗干净后、在左主动脉下穿线打虚结， 在动脉壁上剪一小口将另一根蛙心插管插入，若立即有液体流入插管， 说明插管正确，将插管口结扎固定。 4．在左主动脉、左肝静脉结扎部位外侧剪断与心脏相连的组织， 将插有蛙心插管的心脏取出与记录装置连接。
4.用新鲜任氏液反复换洗 蛙心插管内含血的任氏液， 直至蛙心插管内无血液残留。 将蛙心插管固定在支架上， 用蛙心夹在心室舒张期夹住 心尖，并将蛙心夹的线头连 至张力传感器上，记录蛙心 搏动曲线。 5. 改变灌流液成分或在 灌流液中滴加药液，记录和 观察心脏活动的变化。
注 意
① 不能损伤或结扎静脉窦 ② 插管一定要进入心室腔 ③出现作用后立即用新鲜任氏液换洗三次，以免心肌受损 ④ 蛙心插管内液面应保持恒定，以免影响结果
离体心脏灌流百度文库
原理和意义
离体心脏灌流是将动物的心脏从体内取出放入特定 的生理代用液中，根据不同的实验目的和不同种属动物 特点进行恒温、通氧或恒温灌流及建立与动物机体内环 境基本相似的人工环境，以保证心脏维持正常活动状态。 通过一定的检测手段观察并记录其生理活动、病理 变化以及各种药物和试剂等施加因素对其生理生化及形 态变化的影响。
优缺点
优点： 1.排除在整体情况下体内各种复杂因素的干扰，直接观测离 体心脏标本的各项指标。 2.易于严格控制实验环境，方法简便精确，有利于分析作用 机制及对药物的药效作定量研究。 3.易于获得准确、精细的结果。
缺点和局限性： 失去了机体完整统一的内环境和神经体液调控作用，失 去了体内各种组织、细胞之间的相互关系，不能完全反映心 脏在整体情况下的活动规律与正常整体情况。
注
意
① 不能损伤或结扎静脉窦； ② 主动脉内的插管不要过深以免抵住主动脉瓣 ③ 两根插管有一定相对位置，插管前要考虑好方 向，插管后应避免血管扭曲，保证灌流畅通 ④ 避免气泡进人心脏。
哺乳类动物离体心脏灌流 ——Langendorff 法
Langendorff首次描述了保持哺乳动物离体心脏存活的方法，采用恒 压或恒流方式，从主动脉根部逆向用含氧灌流液灌流心脏，这种方式的 逆向灌注关闭了主动脉瓣，使得灌注液经冠状动脉分布，并流入冠状窦 和右心房。 由于在实验过程中心室不充盈，所以不按照容量－压力曲线作功。 后来其实验方法被不断改进，以适应各种不同研究的需要，如在按 上述灌流方法进行灌流以保持心脏存活的同时，在用另一根插管插入右 心房灌流心脏，则可研究压力－容积作功关系。
冠状动脉结扎与心肌缺血再灌： Scholz 等（1992，1993)在进行冠状动脉闭塞实验时，先使用改良 Krebs-Henseleit缓冲液以65 mmHg恒定压力灌注离体工作心20min(缺 血前期)。随后通过钳夹左冠状动脉近端15min，造成急性心肌缺血(缺 血期)。此时再重新开放血管夹，对再灌注期间的变化进行30min监测 (再灌注期)。在冠状动脉结扎和再灌注后，心脏会发生室颤. 留取冠状动脉流出液样本，可用于检测乳酸、乳酸脱氢酶(LDH)和 肌酸激酶(CK)。实验完成后，可测量心肌组织中的糖原、乳酸、ATP 和磷酸肌酐。 在缺血前或再灌注前5min通过灌注液给予实验药物。在间接体内 试验中，在准备处 死大鼠制备离体心脏前1h经口服给予实验药物。
4. 连接记录装置：将一特制的金属小钩固定在心尖部， 利用张力传感器与多导记录仪相连并描记心脏收缩曲线和测 定收缩力等指标。Langendorff离体心脏灌流装置可用于测 定不同种生理学试剂和药物的直接效应，以及对这些药物的 拮抗作用。还可观察冠脉流量的变化。
注意事项
1. 取心脏和插管操作需迅速。 2. 插管不易过深，以免损伤主动脉瓣。 3. 灌流压大小恰当，如压力过低则冠状动脉灌流量不足，过 高则因主动脉根部过于扩张导致主动脉瓣关闭不全。压力大小以冠 脉流量为7~10 ml / min为宜。 4. 灌流液温度需恒定：37 ℃ （95% O2 + 5% CO2饱和）。
离体心脏灌流方法的改进
Gottlieb等 (1904)：将一个可充入水的小球囊固定在一根导管 末端，经肺静脉、左心房和二尖瓣放入左心室，导管结扎固定于肺 静脉干。球囊内注水量应与左心室容积相等，它相当于前负荷大小， 可根据实验要求选择预定的前负荷或改变前负荷。此时心脏收缩舒 张过程给球囊一个有节律的压力，传导到压力传感器上。这种方法 的优点是：压力变化和前负荷大小可以压力单位mm Hg的形式反 复读出，可以利用左心室收缩曲线作进一步计算，并且使用频率记 录仪就可以很容易地持续记录下心率的变化。
实验方法
1.麻醉、取出心脏：在戊巴比妥钠麻醉和人工呼吸的情况下迅速取出心 脏，置于盛满37 ℃氧饱和的Ringer’s液的盘中，去除粘附的心包和肺组织， 确定主动脉的位置，并恰好在其分支下方切断。 2. 主动脉插管：将一个玻璃或塑料的插管插入主动脉，注意插管不要 过深以免损伤主动脉瓣，结扎固定。 3. 灌流：将心脏转移到一个双层壁的玻璃浴槽（类似于做离体小肠平 滑肌灌流用的恒温浴槽或麦氏浴槽）中，浴槽内加入Ringer’s液或Krebs— Henseheit缓冲液，利用恒温水浴使这一装置保持在37℃。经主动脉插管 灌 注 氧 饱 和 的 Ringer’s 液或 Krebs—Henseheit缓 冲液 ， 并 持 续保 持 400 mmHg灌注压。