烟台海岸海洋放线菌分布规律及抑菌活性研究

供试
拮抗菌
菌 ∥株 Antagonistic bacteria
Te sted strain 株数 ∥株 比例 ∥%
参试靶标菌 Tested target strains
细菌 B acteria
抗细菌总数 ∥株
真菌 Fungi
抗真菌总数 ∥株
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌 Total numbers
青霉
白色假丝酵母
To tal numbers
of bacteria
of fungi
株数 ∥株 比例 ∥% 株数 ∥株 比例 ∥% resistance 株数 ∥株 比例 ∥% 株数 ∥株 比例 ∥% resistance
55
18
32. 7
10
55. 6
4
22. 2
14
4
22. 2
0
0
4
72
25
34. 7
14
56. 0
38卷 5期 常显波等 烟台海岸海洋放线菌分布规律及抑菌活性研究
2219
2. 2 不同采样点拮抗性放线菌分布规律 对从烟台海岸潮 间带泥样中分离得到的 357株放线菌进行琼脂块法筛选表 明 , 69株具有抗大肠杆菌活性 , 25株具有抗金黄色葡萄球菌
活性 , 24株具有抗青霉活性 , 5株具有抗白色假丝酵母活性。 可见 ,具有抗菌活性的共有 118株 ,约占菌株的 38. 9% ,显示 了海洋放线菌在筛选抗生素类化合物方面的优势 。
放线菌 (A ctinom ycetes)是一类高 G + C含量的革兰氏阳 性细菌 ,由于拥有合成多种结构复杂的代谢产物的能力而引 起人们的广泛关注 。目前分离得到的绝大多数放线菌都来 源于土壤 ,陆生放线菌产生的抗生素占天然抗生素的 2 /3以 上 [1] 。随着陆生资源的不断枯竭 ,新的疾病及致病菌抗药性 等问题不断出现 ,使发现新菌种以寻找新型抗生素已迫在眉 睫 [2] 。海洋占地球表面积的 70% ,其中蕴藏着丰富的放线菌 资源。特殊复杂的环境 (高盐度、高压力、低温及特殊的光照 等 )赋予海洋放线菌产生不同于陆地放线菌的特殊产物 [3] , 使得近年来海洋放线菌的研究开始受到重视。为此 ,笔者对 烟台海岸海洋放线菌的分布规律、抗菌活性进行了探讨 ,以 期为更好地开发烟台海岸及其他沿海地区的海洋微生物资 源提供参考 。 1 材料与方法 1. 1 材料 1. 1. 1 放线菌。采自烟台海岸潮间带泥样 ,采集后立即带 回实验室分析研究 。 1. 1. 2 供试培养基。分离培养基为棉子糖 - 组氨酸培养 基 [4] 、淀粉酪素培养基 [5] ,均加入终浓度为 25 μg/m l的萘啶 酮酸和 100μg/m l的制霉菌素 ,分别作为细菌、真菌的抑制 剂 。纯化、保种培养基为酵母膏 - 麦芽膏培养基 [6] 。拮抗试 验培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂 [7]和 PDA 培养基 [7] 。 1. 1. 3 供试靶标菌 。大肠杆菌 ( Escherichia coli) 、金黄色葡 萄球菌 ( S taphyloccocus aureus) 、青霉 ( Penicillium sp. ) 、白色 假丝酵母菌 (Candida albicans) ,由烟台大学环境学院微生物 实验室提供 。
1. 2 方法 1. 2. 1 海洋放线菌的分离 。采用稀释平板涂布法 [7] 分离 , 于 28 ℃培养 7～15 d。根据菌落形态、色素、干燥等特征 ,挑 取形态差异较大的菌落进行划线培养 ,挑取纯化后的单菌落 接种到酵母膏 - 麦芽膏固体斜面培养基 , - 80 ℃保种。 1. 2. 2 抑菌活性试验。从样品中分离纯化的放线菌 ,按照 文献 [ 8 ]的方法进行抗菌活性鉴定 ,测量抑菌圈的大小。 2 结果与分析 2. 1 烟台海岸潮间带泥样中海洋放线菌的分离结果及分布 规律 从烟台海岸潮间带泥样中共分离得到 357株放线菌。 从不同采样地点的样品中 ,都能够分离得到放线菌。不同的 采样点放线菌的分布见图 1。由图 1可知 ,在人为因素影响 相对比较小的、比较天然的采样点 (如养马岛、芝罘岛 ) ,海洋 放线菌的数量明显多于其他地区 。
表 2 拮抗性放线菌对 4种靶标菌的拮抗特征 Table 2 An tagon ism characters of an tim icrob ia l actinom ycetes aga in st four tested organ ism s
菌的种类 Bacteria types
参试靶标菌 Tested target strains
基金项目 烟台大学青年基金项目 (HJ08Z11) ;国家海洋局青岛海洋一 所海洋生态环境科学与工程重点实验室开放基金项目
(MESE22007202) ;国家海洋局海洋生态环境科学与工程重 点实验室开放基金项目 (MESE22007202) 。 作者简介 常显波 (1978 - ) ,女 ,山东即墨人 ,在读博士 ,讲师 ,从事放 线菌资源与应用研究 。
采样地点 Samp ling p laces
金沙滩 芝罘岛 第 1海水浴场 月亮湾 栈桥 第 2海水浴场 养马岛 总数
To tal numbers
表 1 烟台海岸不同采样点拮抗性放线菌分布规律
Table 1 The d istr ibution law of An tim icrob ia l Actinom ycetes of var ious places a long the Coa st Yan ta i
Study on D istr ibution and An tim icrob ia l Activ ity of M ar ine A ctinom ycetes of Coa st Yan ta i CHANG X ian2bo et a l (Department of Marine B iology, Ocean University of China, Q ingdao, Shandong 266100) Abstract [Objective ] The distribution and antim icrobial activity of marine actinomycetes from Coast Yantai was studied. [Method ] The normal isolating and agar block methods were used to do the experiment. [ Result] The results indicated that 357 strains of marine actinomycetes were i2 solated from various p laces along Coast Yantai, and there were more antim icrobial Actinom ycetes against bacteria than fungi, more antim icrobial Ac2 tinom ycetes against G- bacteria than G+ bacteria, and more antim icrobial Actinom ycetes against Penicillium sp. than Candida albicans. The antim i2 crobial action of most antim icrobial actinom ycetes was m idding, and the quantities of broad2spectrum antim icrobial actinomycetes were a few. [ Conclusion ] These study may p rovide the basis for further exp loration of marine - derived actinomycetes from Coast Yantai. Key words M arine actinim ycetes; Antim icrobial activity; Coast Yantai
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri. Sci. 2010, 38 ( 5) : 2218 - 2219, 2222
责任编辑 姜丽 责任校对 况玲玲
烟台海岸海洋放线菌分布规律及抑菌活性研究
常显波 1, 2 , 杨启霞 2 , 刘英霞 2
(1. 中国海洋大学海洋生命学院 ,山东青岛 266100; 2. 烟台大学环境与材料工程学院 ,山东烟台 264005)
收稿日期 2009210222
图 1 烟台海岸放线菌的分布规律及其抗各类微生物的活性 F ig. 1 D istr ibution law of mar ine Actinom ycetes of the Coa st
Yan ta i and its an tim icrob ia l activ ity
强 Strong
株数 ∥株
比例 ∥%
拮抗强度 Antagonism strength
中 M iddle
株数 ∥株
比例 ∥%
弱 W eak
株数 ∥株
比例 ∥%
6
24. 0
19
5
20. 0
1
4
6
30
7
23. 3
5
71. 4
2
28. 6
7
0
0
0
0
0
29
7
24. 1
5
71. 4
0
0
5
2
28. 6
0
0
2
35
10
28. 6
7
70. 0
1
10. 0
8
2
20. 0
0
0
2
40
13
32. 5