多聚赖氨酸的发酵生产
ε-聚赖氨酸生产菌株的诱变及其在葡萄酒发酵中的应用
１１ 试验 材料 ．
ｓ一聚赖氨酸标准 品和甲基橙从水 中重结 晶 ，并 干燥 至
恒重 ， 实验前将两者溶于 ０７ ｏ Ｌ磷酸缓 冲液（Ｈ ． 中。 ． ｍｍ ｌ ／ ｐ ６９ ）
ｅ一聚赖氨酸标准曲线的绘制 ：配制不 同浓度 的 ｓ 一聚
赖氨酸的磷 酸盐溶液 ， 分别 取 ２ ｍＬ与 ２ ｍ ｏ Ｌ甲基橙在 ｍＬ １ ｍ ｌ ／ 室温下混合反 应 ， 剧烈振荡 ３ ｍ ｎ 在 ５ ０ ｒ ｉ ０ ｉ， ００／ ｎ离心 ２ ｍｉ。 ｍ ０ ｎ 取上 清液稀释 ２ ０倍 ，用分光光度法在 ４ ５ ｍ下 以磷 酸缓冲 ６ｎ 液作 为参 比进行 吸光度 的测定。 ｓ一聚赖氨酸含量为横坐标 值 ， 为纵坐标值 ， Ａ 得到 ｓ一聚赖氨酸含量 的标准 曲线。 白色链霉菌 的发酵液 中 ８一聚赖氨酸产量的测定 ：培养 ７ ｈ ２
脂） ， 为去离子水 。 其余
１ ． 试验 方 法 ２
１ ． 子液 培养条件优化正交实验设计 方案 ． １种 ３ 选取 ｅ一聚赖氨酸高产菌株进行发 酵试验 ，以发酵液中 选取 ８一聚赖氨酸含量作为指标 ， 选取温度 、 培养时间和摇 床 转速三个因素 ， 过 （ 正交表进行培养优化实验 ， 通 ３） 以得 到 最佳种子成熟条 件。实验设计方案见表 １ 。
ｃ ｍｐ ｕ ｄｏ ｔｉ ｍ ｈ ｏ ｄ ｂ ａｎ ｈ ｇ — ｉｌ ｔ ｉ ｓｏ ￡－ ｏｙｙ ｉ ｅ Ａｆ ｒｔｓｉｇ ｔ ｅｅ ｍｉ ｅｉ ｓ ｅ ｓ ｆ ｕ ｄｏ ｔ ｚ ｔ ｎ ｏ ｒ ｃ ｓ ｏ ｏ ｎ ｆ ｉ ｕ ｃ ｌ ｒ ｅ ｔ ｏ ｔ ｉ ｉｈ ｙｅ ｄｓｒ ｎ ｆ ｐ ｌｌ ｓ ． ｔ ｔ ｄ ｔ ｒ ｎ ｅ ｄ ｉ ｐ ｉ ａ ｉ ｆ ｏ ｅ ｓ ｌ ｈ ｉ ｏ ａ ｎ ｅ ｅ ｎ ｏ ｆ ｏｆ ｌ ｍｉ ｏ ｐ
聚赖氨酸发酵流程
聚赖氨酸发酵流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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多聚赖氨酸处理
配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
我曾用过多聚赖氨酸包被培养瓶,但浓度是0.1mg/ml,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。
我们这里的老师说，多聚赖氨酸不能用紫外线照射。
1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时，应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ；2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低，我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20－30ug/ml；3.包被时间一般为6－7h，或者过夜也可；4.使用时应该先用灭菌水洗三次＋PBS（起平衡盐作用）洗一次，洗液的量应该大于包被液的量；5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？”，我包被时间最长的经历有过48h,最后只是多聚赖氨酸随着时间延长蒸发一些而量变少了，但是对细胞生长并无大碍，这是我曾经有过的经历，所以我会负责地告诉你；6.“多聚赖氨酸能在4度冰箱里放多久？”，最好置于－20度保存，放置数月乃至半年都可以。
gibco多聚-d-赖氨酸 用法
gibco多聚-d-赖氨酸用法
Gibco多聚D赖氨酸是一种生物化学试剂，用于生命科学研究中的细胞培养和实验。
具体用法如下：1. 培养基中的添加物：可以将Gibco多聚D赖氨酸添加到细胞培养基中，作为细胞的营养物来源之一。
通常的用量是每升培养基添加10-50 mg的多聚D赖氨酸。
2. 包被培养皿表面：可以在培养皿表面预先涂覆Gibco多聚D赖氨酸，从而提供细胞附着的基质。
在培养皿中加入适量的多聚D赖氨酸水溶液，让其在表面均匀涂敷，并在室温下干燥。
3. 组织工程和支架材料：Gibco多聚D赖氨酸也可以用于组织工程和支架材料的制备。
可以将多聚D赖氨酸加入到生物降解材料中，用于细胞生长和组织修复。
需要注意的是，具体的用法可能因研究目的、细胞类型和实验条件而有所不同。
在使用Gibco 多聚D赖氨酸前，最好参考相关的文献或咨询厂家提供的技术手册，以获取更详细的用法指导。
多聚赖氨酸产生菌的筛选与理化性质研究
摘
要： 对采 自长 白山的 ２ ０个土样进行 多聚赖氨酸产 生菌的筛选， 通过 富集培养 ， 释平板 稀
法得到单菌落。通过形 态培养特征 观察和显微 形态特征观察 以及 明胶 液化 、 淀粉 水解 等生理 生
化试验对土样进行初 筛， 用滤纸片抑 菌圈法进行 复筛， 最后 筛选 出 ２个菌株 ， 气生菌丝为 白色至 其
可溶性色素等 。显微特征观察 ： 以。
１ １３ 主要 培养 基 ．．
高 氏一号合 成培 养基 ： Ｓ ￣・ Ｍｇ Ｏ
７ ０ ． ／ Ｆ Ｓ ０ ０ ／ ＫＮ０３ ／ Ｎａ １ ． Ｈ２ ０ ５ｇ Ｌ， ｅ Ｏ４ ． １ｇ Ｌ， ｇ Ｌ， Ｃ ０ ５ ｌ
表2发酵后两种土样筛选菌产r聚赖氨酸3结论通过用形态特征各种链霉菌有不同形态的孢子丝而且形状较稳定是进行分类鉴定的重要依据和生理生化特征对土样进行初筛用滤纸片抑菌圈法进行复筛然后用摇瓶发酵测定聚赖氨酸产量
维普资讯
北 方 园 艺 ２ ７ ）５ １ ０ （ ：～ ７ ０８１
化学防腐剂受到严峻挑战 ， 食品防霉 防腐剂 的天然化 已 成为今后的发 展趋势 。天 然防霉 防腐剂 是近 年来国 内 １５ ， 化 钠 ０ ５ ， １００ ｍ 牛 肉 膏 ０ ３ ， ． 氯 ． 水 ０ Ｌ， ． ｐ ． 。 Ｈ ７２ 明胶液化培养 基 ： 白胨 ５ｇ 明胶 １０ ５ ， 蛋 ， ０ ￣１０ｇ 水 １ ０ Ｌ，Ｈ ７２ ． （ ０ ０ ｍ ｐ ～７４采用间歇灭菌） ． 。种子和发酵
外倡 导、 开发和寻求 的新 型产品 ， 开发抗菌 性强 、 安全无 毒的天然防霉 防腐剂 已成 为各 国科技工 作者 的研究 热 点 。它不但对人体健康无害 ， 的还具有 一定的营养价 有 值， 是今后开发的 方向［ 。ｅ多聚 赖氨酸 是 目前天 然 防 １ 一 ］ 腐剂 中具有优 良防腐性 能 和 巨大商 业潜力 的微生 物类 食品防腐剂。它是 日本酒 井平一 和岛 昭二两位博 士在 大量筛选有价值 的放线 菌时发 现的一种新型聚合物 ， 用 由 ２ ￣３ ５ ０赖氨酸残基 聚合而成 ， 经过进一步研 究发现其
多聚赖氨酸包被方法
多聚赖氨酸包被方法多聚赖氨酸（polylysine）是一种具有多种应用潜力的天然生物高分子材料。
其在医学、食品及其他领域中有着广泛的应用前景。
然而，多聚赖氨酸的应用受到其在水溶液中聚集和沉淀的限制。
为了克服这一问题，研究人员开发了多种多聚赖氨酸包被方法，用以稳定多聚赖氨酸的分散态，提高其应用效果。
一、电化学沉积法电化学沉积法是一种常用的多聚赖氨酸包被方法，在这种方法中，通过在多聚赖氨酸溶液中施加电压，利用电化学反应将多聚赖氨酸沉积到基体表面。
这种方法具有简单、可控性高的优点，可以调控包被层的厚度和组成，从而实现不同应用需求。
二、化学交联法化学交联法是另一种常见的多聚赖氨酸包被方法。
在这种方法中，利用化学反应将多聚赖氨酸交联到基体表面，形成稳定的包被层。
常用的交联剂包括戊二醛、硫酸氯化钠等。
化学交联法可以使多聚赖氨酸形成致密的包被层，提高其稳定性和抗溶解性，适用于一些需要长时间稳定性的应用。
三、共沉淀法共沉淀法是一种将多聚赖氨酸与其他物质一起沉淀到基体表面的方法。
通过调节多聚赖氨酸和其他物质的配比和沉淀条件，可以实现多聚赖氨酸的包被。
这种方法适用于多聚赖氨酸与其他物质共同发挥应用功能的场景，如药物缓释系统、生物传感器等。
四、物理吸附法物理吸附法是一种简单而有效的多聚赖氨酸包被方法。
将多聚赖氨酸溶液滴在基体表面，使其通过物理相互作用（如静电相互作用）与基体表面相互吸附，形成包被层。
这种方法不需要特殊实验条件，成本低廉，适用于一些对包被层要求不高的应用。
综上所述，多聚赖氨酸包被方法的选择应根据实际应用需求和条件来确定。
不同的包被方法具有各自的特点和适用范围，在多聚赖氨酸的应用中起着重要的作用。
未来随着科技的不断进步和对多聚赖氨酸功能的深入研究，相信会有更多创新的包被方法出现，进一步拓宽多聚赖氨酸的应用领域。
多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine）的配制、保留、应用总结[最新]
![多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine）的配制、保留、应用总结[最新]](https://img.taocdn.com/s3/m/14811bc0185f312b3169a45177232f60ddcce7e5.png)
因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。
个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。
注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。
一般一段话来自某一位战友。
一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。
二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ ml，过滤后使用。
工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。
多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。
四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。
答：PH应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠溶液调pH 值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？答：Sigma的产品说明书上写的很明白的。
另外，有本书上是这么写的，供参考：Poly-ly sine-coated tissue culture surf acesTo coat cov erslips: Prepare a stock solution by dissolv ing 25 mg/ml poly ly sine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine an d poly-D-lysine are used to coat tissue culture surf aces; check specif ic protocol f or choice of isomer) and f ilter sterilize throu gh a 0.22-μm f ilter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize cov erslips by autoclav ing prior to coating. Dip cov erslips in the working solution, then inc ubate 15 min to sev eral hours in a humidif ied 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surf ace to dry.To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolv ing 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surf aces; check specif ic protocol f or choice of isom er) and f ilter sterilize through a 0.22-μm f ilter. Store in 5-ml aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute 1 part stock solutio n with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working soluti on and incubate 1 hr in a humidif ied 37°C, 5% CO2 incubator, then remov e solution by v acuum aspiration and allow surf ace to dry.Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。
多聚赖氨酸包被培养皿原理
多聚赖氨酸包被培养皿原理多聚赖氨酸（Polylysine）是一种由赖氨酸分子组成的聚合物，具有一定的生物活性和生物相容性。
多聚赖氨酸包被培养皿是一种利用多聚赖氨酸在培养皿表面形成覆盖层的技术，用于改善细胞粘附和生长的培养方法。
本文将介绍多聚赖氨酸包被培养皿的原理及其在细胞培养中的应用。
多聚赖氨酸包被培养皿的原理是利用多聚赖氨酸分子的亲水性和静电吸附作用，使其在培养皿表面形成一层覆盖层。
多聚赖氨酸分子中的赖氨酸具有阳离子性，能够与细胞表面的阴离子结合，从而增强细胞与培养皿表面的相互作用力，促进细胞的附着和生长。
多聚赖氨酸包被培养皿的制备过程相对简单。
首先，将多聚赖氨酸溶液加入到无细胞培养皿中，然后将培养皿静置一段时间，使多聚赖氨酸分子在培养皿表面形成一层均匀的覆盖层。
接下来，将多聚赖氨酸包被培养皿置于无菌条件下，用适当的培养基培养细胞。
多聚赖氨酸包被培养皿在细胞培养中具有多个优点。
首先，多聚赖氨酸包被培养皿能够提供高度的细胞附着和生长支持。
多聚赖氨酸分子的阳离子性能够与细胞表面的阴离子结合，增强细胞与培养皿表面的黏附力，使细胞能够更牢固地附着在培养皿上，减少细胞脱落和死亡的情况。
多聚赖氨酸包被培养皿能够提供良好的细胞生长环境。
多聚赖氨酸分子的亲水性能够增加培养基与细胞之间的接触面积，促进养分和氧气的传输，有利于细胞的生长和代谢活动。
此外，多聚赖氨酸包被培养皿还可以调节细胞外基质的组成，模拟体内细胞所处的微环境，提供更适宜的细胞生长条件。
多聚赖氨酸包被培养皿具有良好的生物相容性。
多聚赖氨酸是一种天然存在的多聚物，具有较低的毒性和免疫原性，不会对细胞的正常生理功能产生不良影响。
因此，使用多聚赖氨酸包被培养皿进行细胞培养可以提高成功率和细胞生存率。
多聚赖氨酸包被培养皿在细胞培养中得到了广泛的应用。
它可以用于各种类型的细胞培养，如肿瘤细胞、干细胞、神经细胞等。
同时，多聚赖氨酸包被培养皿也可以用于细胞外基质的研究和组织工程学的研究。
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发酵生产
发酵法ε -聚赖氨酸以玉米淀粉为原料，经 液化、糖化制得高质量糖液，既而经基因 工程菌发酵、陶瓷膜过滤、连续脱盐、脱 糖、浓缩、脱色、结晶、干燥、包装得到 ε -聚赖氨酸产品。生产可采用国内外具有 世界领先水平高产酸、高转化率菌种、成 熟的先进技术，使ε -聚赖氨酸生产工艺达 到更高水平。
研究展望
ε- PL目前的低生产量导致的高成本成为了应用 的瓶颈。为改善这一缺点，ε- PL的产量提高应 集中于生产菌的菌株筛选、菌株发酵工艺等方 面并做出相应改善。 此外，ε- PL的含量检测技术也有待进一步提高， 尤其是食品产品阶段的微量检测方法及技术亟 需完善。
发酵生产
精制工艺 条件及控 制
4
1
发酵原料
2
艺 流程
发酵生产
（1）发酵原料。 采用淀粉糖作为主要的碳源，同时辅以适量 的无机盐和其他微量元素。 （2）发酵工艺流程。 种子→种子罐→主罐。 （3）发酵工艺条件及控制。 ε -聚赖氨酸生产菌是一种基因工程菌杆菌， 在培养过程可以通过调节适当罐压、培养温 度、溶氧控制水平、底料物料添加量等方面 进行控制，保证发酵过生产稳定。
水溶性及 热稳定性
ε -PL易溶于水，微溶于乙醇，但 不溶于乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂， 具有很高的稳定性和抑菌效果。
抑菌机理
结构：表 面氨基， 分子内亚 甲基，分 子外羧基 和氨基。
破坏细菌 细胞膜
抑菌作用
抑菌机理
同时ε一PL还作用于生物膜系统和蛋白 合成系统，其与核糖体结合抑制蛋白和 酶等生物大分子的合成。 ε- PL 对细菌、真菌、酵母的最低抑制 浓度不同, 原因可能是他们细胞表面结 构不同。ε- PL 既可以抑制革兰氏阳性 菌生长又可以抑制革兰氏阴性菌生长。
ε- 聚赖氨酸的发酵生产和应用
目录
理化性质 抑菌机理
发酵生产 应用展望
ε- 聚赖氨酸(ε- PL)是一种天然防腐剂, 水溶性 强, 安全性高, 抗菌性强。
理化性质
ε-聚赖氨酸是由25-35个L-赖氨酸通过其α羧基与ε-氨基缩合形成的一种同型氨基酸聚 化学结构 合物。
最适pH值
ε -PL抑菌的最适pH为5-8。
4、脱色与纯化： 脱色过程中控制活性炭用量，过多影响收率， 过少又达不到脱色效果。 5、浓缩、结晶、干燥：脱色后的发酵液经 浓缩结晶处理，浓缩结晶后的发酵液经离心 分离干燥包装等工序得到成品ε-聚赖氨酸。
应用展望
· 应用
食品防腐剂
乳化剂
食疗剂
ε- PL 的应用
研究展望
对不易贮存的新鲜果蔬等食品进行涂膜保 鲜试验。 与其它天然防腐剂或防腐增效剂的复配应 用也是ε- PL防腐应用研究的热点。
发酵生产
发酵
陶瓷膜过滤 连续脱盐
脱糖
浓缩
脱色
浓缩、结 晶、干燥
发酵生产
1、发酵： 发酵液的质量高低决定着精制收率与产品质量， 所以发酵液必须经过处理。 2、陶瓷膜或纳滤分离技术： 去除发酵液中菌体及部分蛋白质、大分子色素、 杂质等，此时料液的透光率越高越好，以利提高 提取收得率和提高产品质量。 3、脱盐、脱糖： 进一步去除物料中杂酸、阴阳离子及物料中残留 的糖。