阿氏液(Alsever液) - 360文档中心

血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)

1、注意抗原相的差异
2、注意消除非特异性因素
禽类血清中，尤其是水禽血清，往往含有非特异性血凝抑制因子，在做禽流感血凝抑制试验时会出现2-3孔有凝集现象。因此，在利用血凝抑制试验进行血清抗体测定之前，有必要对血清中非特异性因子进行排除。
常用消除方法（FAO推荐）
1、鸡的红细胞吸附法 1.1试剂鸡的红细胞：要充分洗涤； PBS： pH7.5，4℃保存；阳性对照血清；阴性对照血清。 1.2方法加入25µL鸡的红细胞到100µL血清中； 4℃，用微量振荡器振荡20-30min；加入100µL灭菌PBS (用RDE处理的血清除外)； 4000转离心1min；取出上清，进行HI试验；用阳性对照血清和阴性对照血清验证处理的彻底性用于消除除鸡以外的其它禽类的血清非特异性反应。
3、热灭活法
3.1鸡血清取100µL血清样品放入一灭菌离心管中；各取100µL阳性血清和阴性血清加入到另2个灭菌离心管中； 56℃水浴30min。 3.2 其它禽类血清血清用鸡的红细胞处理后，分别取100µL样品、阳性血清、阴性血清放入灭菌离心管中，56℃水浴30min。热灭活是一种排除非特异性因子的有效方法，但对特异性抗体破坏较大。
三、实验步骤
（以禽流感为例，参照禽流感防治技术规范）
1 阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸 0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。
2 1%鸡红细胞液的制备
2.2原理特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。

从菠菜中提取叶绿素实验报告10篇

从菠菜中提取叶绿素实验报告10篇从菠菜中提取叶绿素实验报告11.设计方案(1)写出实验原理(推导周期公式及如何计算k和m0 ).由滑块所受合力表达式证明滑块运动是谐振动.给出不计弹簧质量时的T.给出考虑弹簧质量对运动周期的影响,引入等效质量时的T.实验中,改变滑块质量5次,测相应周期.由此,如何计算k和m0 ?(2)列出实验步骤.(3)画出数据表格.2.测量3.进行数据处理并以小论文形式写出实验报告(1)在报告中,要求有完整的实验原理,实验步骤,实验数据,数据处理和计算过程.(2)明确给出实验结论.两弹簧质量之和M= 10-3㎏ = N/m = 10-3㎏i m10-3㎏ 30Ts T2s2 m010-3㎏ i m10-3㎏ 20Ts T2s2 m010-3㎏ KN/m1 42 53 64.数据处理时,可利用计算法或作图法计算k和m0的数值,并将m0与其理论值 M0=(1/3)M( M为两弹簧质量之和)比较, 计算其相对误差 .究竟选取哪种数据处理方法自定.书中提示了用计算法求k和m0的方法.若采用,应理解并具体化.从菠菜中提取叶绿素实验报告21样品的保存及试验前处理1.1 采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧烈震动。

1.2 一般情况下，在5天内检测的样品可放置在4℃的冰箱中冷藏，否则低温冷冻保存。

1.3 在检测前血清样品应充分混匀，混匀时采用上下缓慢颠倒几次的方法即可，切忌剧烈振荡而引起产生气泡及血清中蛋白变性。

1.4 对出现胶冻状的血清样品，可采用反复搅动几下再离心的方法有助于缓解该状态。

胶状物是含纤维蛋白和纤维蛋白原的血清，可能是由于放置时间不够造成的血清未完全析出状态。

不建议直接吸取其中少量的清亮血清。

1.5 水禽等样品为排除非特异性反应，还应相应进行灭能反应。

具体操作方法：56℃水浴锅30min或加等量10%鸡红细胞，轻摇后静置30分钟，离心，收集上清液即可。

微生物常用试剂和溶液的配制

微生物常用试剂和溶液的配制关键词：微生物试剂溶液一、3%酸性酒精溶液浓盐酸3 ml95%酒精97 ml二、中性红指示剂中性红0.04 g95%乙醇28 ml蒸馏水72 ml中性红pH6.8-8，颜色由红变黄，常用浓度为0.04%。

三、淀粉水解试验用碘液（卢戈氏碘液）碘片1 g碘化钾2 g蒸馏水300 ml先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。

四、溴甲酚紫指示剂溴甲酚紫0.04 g0.01 mol/L NaOH 7.4 ml蒸馏水92.6 ml溴甲酚紫pH5.2~6.8，颜色由黄变紫，常用浓度为0.04%。

五、溴麝香草酚蓝指示剂溴麝香草酚蓝0.04 g0.01 mol/L NaOH 6.4 ml蒸馏水93.6 ml溴麝香草酚蓝pH6.0~7.6，颜色由黄变蓝，常用浓度为0.04%。

六、甲基红试剂甲基红（Methylred）0.04 g95%酒精60 ml蒸馏水40 ml先将甲基红溶于95%酒精中，然后加入蒸馏水即可。

七、V.P.试剂1. 5%α-萘酚无水酒精溶液α-萘酚5 g无水乙醇100 ml2. 40%KOH溶液KOH 40 g蒸馏水100 ml八、吲哚试剂对二甲基氨基苯甲醛2 g95%乙醇190 ml浓盐酸40 ml九、格里斯氏（Griess）试剂A液：对氨基苯磺酸0.5 g10%稀醋酸150 mlB液：α-萘胺0.1 g蒸馏水20 ml10%稀醋酸150 ml十、二苯胺试剂二苯胺0.5 g 溶于100 ml 浓硫酸中，用20 ml 蒸馏水稀释。

十一、阿氏（Alsever）血液保存液柠檬酸三钠·2H2O 8 g柠檬酸0.5 g无水葡萄糖18.7 gNaCl 4.2 g蒸馏水1000 ml将各成分溶解于蒸馏水后，用滤纸过滤，分装，0.56~0.70 kg/cm2（8-10磅/英寸2），灭菌20分钟。

冰箱保存备用。

十二、肝素溶液取一支含12500单位的注射用肝素溶液，用生理盐水稀释500倍，即成为每毫升含25单位的肝素溶液。

乐氏液

北京雷根生物技术有限公司
乐氏液
简介：
平衡盐溶液(Balanced Salt Solution ，BSS)与细胞生长状态下的pH 值、渗透压等环境状态一致，具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用，可满足体外实验中细胞生存并维持一定代谢的基本需要。

Leagene 乐氏液也属于平衡盐溶液的一种，主要由氯化钠、磷酸盐、氯化钙、葡萄糖等组成，不含HEPES 。

用于哺乳动物离体实验，肌体灌流、清洗组织，并维持离体组织的正常生理功能。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、根据实验具体要求，保存或清洗离体组织。

注意事项：
1、由于乐氏液含钙离子，容易产生沉淀。

如果产生少许沉淀，可以加热溶解或过滤后使用，产生大量沉淀应弃用。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 6个月有效。

相关：
编号名称 CZ0048 Storage 乐氏液 500ml 4℃ 使用说明书 1份编号名称 CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁) CC0022 D-Hanks 平衡盐溶液(1×,含酚红) CC0032
Hanks 平衡盐溶液(1×HBSS,含酚红) CZ0047
任氏液 CZ0063
改良台氏液 DH0006
苏木素伊红(HE)染色液 R00228 Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH8.0)。

鸭禽流感免疫抗体血凝检测及其应用

鸭禽流感免疫抗体血凝检测及其应用梁明珍;靳兴军;沈光年【摘要】@@ 鸭是禽流感传播链中的一个重要环节,能否有效防控鸭禽流感的关键之一是使用科学的检测方法.目前,是参照禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验标准(GB/T18936-2003)[1],但是,鸭体内含有非特异性抑制因子,血清中的唾液酸残基会模拟红细胞受体,同红细胞受体竞争与流感病毒血凝素的结合,因而会导致非特异性抑制结果(假阳性)的出现,用鸡红细胞悬液检测水禽禽流感血清抗体时,常常存在非特异性凝集现象,出现前带和后带现象,有时能严重影响结果的判定.为此,本文采用不同种家禽的红细胞悬液做重复试验,探讨水禽血清的处理方法及不同种的家禽红细胞悬液对水禽禽流感血清抗体检测的影响, 在临床应用中,可为鸭禽流感免疫技术提供参考依据.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2010(046)003【总页数】3页(P24-26)【作者】梁明珍;靳兴军;沈光年【作者单位】北京市兽医实验诊断所,北京,朝阳,100101;北京市兽医实验诊断所,北京,朝阳,100101;北京市兽医实验诊断所,北京,朝阳,100101【正文语种】中文【中图分类】S852.4+3鸭是禽流感传播链中的一个重要环节,能否有效防控鸭禽流感的关键之一是使用科学的检测方法。

目前,是参照禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验标准(GB/T18936-2003)[1],但是,鸭体内含有非特异性抑制因子,血清中的唾液酸残基会模拟红细胞受体,同红细胞受体竞争与流感病毒血凝素的结合,因而会导致非特异性抑制结果(假阳性)的出现,用鸡红细胞悬液检测水禽禽流感血清抗体时,常常存在非特异性凝集现象,出现前带和后带现象,有时能严重影响结果的判定。

为此,本文采用不同种家禽的红细胞悬液做重复试验,探讨水禽血清的处理方法及不同种的家禽红细胞悬液对水禽禽流感血清抗体检测的影响,在临床应用中,可为鸭禽流感免疫技术提供参考依据。

血凝血抑试验

血凝试验(HA)定义：某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination，HA)，也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验(HA)血凝抑制试验(HI)定义：当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。

这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验(HI) 。

原理：特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。

用于禽流感、新城疫等具有血凝性病毒的鉴定根据抗原与相应抗体的特异性中和反应原理，给未知病毒悬液中加入已知的抗禽流感病毒阳性血清或已知的抗新城疫病毒阳性血清，相应病毒便丧失了其凝集红细胞的能力。

因此，可利用从发病的鸡、鸭、鹅体内分离的病毒作HA和HI试验。

病毒悬液能凝集红细胞，并且能被已知的抗血清（阳性血清）所抑制，那么该病毒即是已知阳性血清相对应的病毒。

如用新城疫阳性血清完全抑制了未知病毒培养物的血凝性，那么，这个未知病毒培养物就是新城疫病毒；如果病毒悬液虽然能凝集鸡红细胞，但不能被鸡新城疫血清所抑制，说明不是鸡新城疫病毒，可能是其他有血凝性的病毒。

阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH 值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL，取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合，放入装10mL阿氏液的离心管中混匀。

2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液，轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL，轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。

鸡胚法病毒分离培养作业指导书

1.目的规范本中心分离和鉴定各型流感病毒的操作方法，确保结果准确、可靠和实验室生物安全。

2.依据标准《流行性感冒诊断标准》WS285-2008附录A<仅限A1，A2.1>,附录G《全国流感监测技术指南》附件1<一、四、五>3.适用范围适用于各型流感病毒的分离和鉴定4.实验室生物安全级别及个人防护对采集自属于感染流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-2实验室内进行，并遵循生物安全二级个人防护。

在特殊情况下（如新型流感病毒的分离培养工作等），应根据实际情况调整实验室生物安全级别及个人防护级别。

5.标本的采集、处理和储存5.1推荐采集的呼吸道标本种类及拭子的选择发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。

气管插管的病人也应收集气管吸取物。

标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置于4 ℃冰箱，并马上送至实验室。

标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做柄。

不推荐棉拭子和木柄。

标本采集管应包含3毫升病毒采样液（含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）。

5.2标本处理实验操作人员在处理流感样病例标本时必须在BSL-2实验室的生物安全柜中进行。

标本在实验室内/间转运时需有双层防护包装。

标本在离开生物安全柜前，应使用75%酒精或新鲜配制的含氯消毒液（有效氯含量2000mg/L）对容器表面进行消毒。

收到标本后，应尽快处理并进行分离，避免反复冻融。

按标本类型不同分别处理：鼻、咽拭子标本应将管内拭子在管壁反复挤压后，弃去拭子；鼻腔、气管吸取物标本应用干净灭菌的毛细吸管反复吹打，以便打碎粘液；鼻腔或咽部冲洗液标本应充分振荡标本管，将粘液打碎。

咽拭子在进行挤压时，动作要轻柔勿剧烈操作，以防止产生气溶胶和液体溅出。

处理前将合适尺寸的纱布在新鲜配制的含氯消毒液（有效氯含量1000mg/L）中浸泡并拧干，平铺于生物安全柜内操作区。

E花环形成试验

实验二 E花环形成试验实验者：学号：同组者：一．实验目的1.掌握T淋巴细胞E花环试验的原理、正常值，了解其方法和用途。

2.熟悉光镜下E花环的形态和计数方法。

二．实验原理人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞（SRBC）的受体，可与SRBC结合形成花环样细胞团（即E花环）。

由于T细胞的异质性，其中在4℃放置1h以上，所形成的花环数代表T 细胞总数，称为总花环(Et花环)，而T细胞与SRBC混合后不经4℃作用立即反应形成的花环数称为活性花环（Ea花环）。

三．实验用品1.实验试剂：肝素抗凝静脉血、Hanks液（实验中以过期1640培养基代替）、PBS缓冲液、淋巴细胞分离液、绵羊红细胞悬液、0.8% 戊二醛、瑞氏染液。

2.实验器材：吸管、玻片、试管、离心机、显微镜。

四．实验过程1.淋巴细胞悬液的制备取肝素抗凝血2ml，加入2ml Hanks液稀释液后叠加于2ml分离液上，离心2000r/min，20min；用毛细吸管吸出位于血浆和分离液之间的乳白色单个核细胞层（如图1所示），加入5ml Hanks 液洗2次（1500r/min，10min），弃上清液，用Hanks 液配制成1-2×106/ml细胞。

图1 淋巴细胞分离示意图2.绵羊红细胞悬液的配制将保存于Alsever’s液中的绵羊红细胞，用5-10倍量生理盐水洗3次（1500r/min，离心10min）弃上清液，用生理盐水配制成0.5%的SRBC悬液（108个细胞/ml）。

3.Et花环试验(1)取2ml 0.5%SRBC悬液和1ml含淋巴细胞的PBS加入离心管中，混匀，置37℃水浴5min(2) 取出离心500r/min 5min,置4℃1-2h 或过夜。

(3) 沿管壁加入0.8%戊二醛2ml,置4℃ 20min 。

(4) 弃适量上清，约留2ml,轻轻吹吸混匀沉淀细胞。

(5) 结果观察 ①湿片法观察：取1d 细胞悬液滴加于载玻片上，加少许吉姆萨-瑞氏染液染色，加盖玻片后高倍镜下观察；②干片法观察：取细胞悬液涂片，自然干燥，用吉姆萨-瑞氏染液染10min ，水洗，干燥，高倍镜或油镜下观察。

血液标本采集实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除血液标本采集实验报告篇一：血液科-标本采集的操作和取材单血液科标本保存血液标本采集和保存标准流程一、目的血液是容易得到的生物资源，可能是正常病人唯一可得到的资源。

标本库主要贮存血清、血浆和白细胞层。

标准化的采集和贮存步骤可以保证提供高质量的标本。

二、权限1．只采集签写知情同意书的患者，并确定采集的时间2．血液只能在生物安全级别2（含或以上）的实验室操作，血液只能由受过培训的人员操作，所有操作按照生物安全标准进行3.在采集到供者血液的30分钟内处理血液标本4.在采血前，将供者的信息录入标本库的信息系统三、使用范围标本库的组成人员及经审批授予使用权限的人员。

四、材料和设备血液采集盒包括：医用（5ml和10ml）一次性注射器、一次性乳胶手套、止血带、碘酒、无菌拭子、血清储藏管、标本标签、创可贴、可封口塑料袋、标本采集表格、带有冰袋的冰壶、污物桶、笔、试管架。

通风橱-80°c冰箱离心机移液器灭菌枪头冻存管存放冻存管的48孔板2个聚苯乙烯架smartscansolo2D读码器线性条码扫描仪计算机五、具体步骤1.血液科病房的管理人员将知情同意书发放给患者，参与者或参与者的合法代理人在清醒，正常的精神状态下，仔细阅读知情同意书，同意后签字。

2确定采血时间，将知情同意书交给标本库。

3患者在采血前8－12小时之内没有进食或酒精或咖啡因4护士采血前口头肯定病人的身份，核对知情同意书上的姓名、性别和签名。

5通知标本库的人员来去血标本，以确保30分钟内处理标本6利用标本库提供的采血盒，采血用的医疗用品符合gb15980-1995标准的产品。

采血盒内包含2个含2％eDTA抗凝剂的紫帽管，2个无eDTA的红帽管，将管按1－4进行标记如下：1)2％eDTA抗凝剂的紫帽管2)2％eDTA抗凝剂的紫帽管3)无eDTA的红帽管4)无eDTA的红帽管7.检查采血试剂盒的完整性和日期，如果有破损，需送还标本库8.将采血管按照数字顺序1－4，收集20ml血液。