食品中苏丹红的检测方法
食品中苏丹红检测方法探讨
食品中苏丹红检测方法探讨中国质量新闻网 2008-11-26 15:17:25摘要本文介绍了食品中苏丹红检测方法的研究进展，主要包括高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、薄层层析法等。
关键词苏丹红高效液相色谱液相色谱-质谱气相色谱-质谱联用薄层层析近年来，一些国家和地区不断发生食品污染等恶性事件。
特别是随着科技的发展，一些原来认为无害的食品添加剂，发现存在慢性或致癌作用,原来检测不出的有害物质被查出等。
苏丹红是偶氮苯类人工色素，属于工业染料，主要用于油、蜡、鞋等的增光着色。
由于苏丹红I、II、III、IV及其代谢产物具有致癌性，国家禁止作为色素添加剂在食品中使用。
苏丹红I、II、III、IV的检测方法有高效液相色谱法[1]、液相色谱-质谱法[2]、气相色谱-质谱联用法[3]、薄层层析法[4]等。
1. 高效液相色谱法对食品中苏丹红的检测高效液相色谱法是一种以液体为流动相的现代色谱柱分离分析方法，它是在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术发展起来的[5]。
原则上讲，只要能溶解在流动相中的物质都可以用高效液相色谱法分析。
在目前已知的有机化合物中，有80%的有机化合物能用高效液相色谱法分析[6]。
高效液相色谱法主要有以下几种：1.1 欧洲委员会推荐的液相色谱法[7]该方法是将样品经匀浆化或粉碎后，加入乙睛(苏丹红III、IV加入氯仿)提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。
苏丹红I、苏丹红II的检测波长为478nm，苏丹红III、苏丹红IV则为520nm。
苏丹I的检测限是0.013μg/ml、最低浓度为0.106μg/ml、在辣椒粉样品中的添加回收率高于90%。
1.2 国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会发布的高效液相色谱法该方法在欧洲委员会公布的检验方法的基础上作了改进。
苏丹红检测方法国家标准采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，使用目前国内已广泛应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。
薄层色谱_紫外可见分光光度法测定食品中的苏丹红_
薄层色谱- 紫外可见分光光度法测定食品中的苏丹红Ⅲ庞艳玲王怀友(菏泽学院化学与化工系,菏泽274015 ) (山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南250014 )摘要建立了测定食品中苏丹红Ⅲ号的新方法薄层色谱- 紫外可见分光光度法。
用薄层色谱分离杂质,优化了分析条件,讨论了影响测定的因素。
方法的线性回归方程为A = 0. 090 96 c- 0. 003 54, 在0. 50 ～15. 0 μg /mL 之间苏丹红Ⅲ号的浓度与吸光度成线性关系,相关系数r = 0. 999 2 ,检出限为0. 05 μg /mL。
关键词苏丹红Ⅲ 薄层色谱紫外可见分光光度法分离苏丹红Ⅲ号是一种人工合成的化工染料,化学名称是1 2[ 4 2(苯基偶氮) 苯基]偶氮22 2萘酚。
苏丹红Ⅲ号为致癌物质[ 1 , 2 ] , 被禁止作为食品添加剂使用。
我国和欧盟标准检测方法为液相色谱法[ 3 , 4 ] , 许多分析化学工作者对苏丹红染料的测定开展了研究, 建立了一些有价值的测定方法, 如H P LC 法[ 5～7 ] 、分子印迹固相萃取法[ 8 ] 、毛细管液相色谱- 质谱法[ 9 ] 、电离质谱同位素稀释法[ 10 ]已应用于苏丹红染料的测定。
但是上述方法由于仪器和试剂昂贵而难以普及。
笔者研究了样品的处理方法,样品提取液用薄层展开后以分光光光度法测定,所用设备简单,分析结果与国家标准H P LC法准确度相当。
1 实验部分1. 1 主要仪器与试剂双光束紫外可见分光光度计: T U - 1901 型,北京普析通用仪器有限责任公司;旋转浓缩器: R - 250型,上海亚荣分析仪器厂;高效液相色谱议: W a t e r s 2695 型, 美国W a t e r s 公司;超声波萃取仪: FS - 300 型, 上海超声有限公司;硅胶板: H S G型,烟台化工研究所;苏丹红Ⅲ号标准品: 中国医药集团上海化学试剂公司;苏丹红Ⅲ号标准溶液: 100 μg /mL。
食品中苏丹红的快速检测方法课件
苏丹红检测的意义
提高公众健康水平
提升食品安全监管水平
通过苏丹红检测，能够减少含有苏丹 红的食品对公众健康的危害，提高整 体健康水平。
苏丹红检测技术的不断发展和完善， 有助于提高食品安全监管机构的监管 能力和水平。
规范食品行业秩序
加强苏丹红检测能够促使食品企业自 律，遵守食品安全法规，规范行业秩 序。
趋势分析
对多次实验结果进行趋势分析， 了解苏丹红含量的变化趋势。
因素分析
分析影响实验结果的各种因素， 为改进实验方法提供依据。
结果解读与报告撰写
结果解读
对实验结果进行深入解读，理解苏丹红在食品中 的存在状态和潜在风险。
报告撰写
根据实验结果和分析结论撰写实验报告，包括数 据记录、结果分析和建议措施等。
根据实验需要，准备适量的苏丹 红标准品、提取剂、缓冲液等试 剂，确保其质量和纯度。
实验操作步骤
提取
将处理好的样品加入适 量的提取剂中，进行充 分搅拌、纯 化，去除杂质，提高检
测准确性。
显色反应
加入适量的缓冲液和苏 丹红标准品，进行显色
反应。
检测
使用分光光度计在 550nm波长处测定吸光 度值，根据标准曲线计
算苏丹红含量。
05
实验结果分析
数据处理与结果判定
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括 平均值、标准差等。
结果判定
根据实验数据判定食品中是否含有 苏丹红，以及苏丹红的含量是否超 标。
可信度评估
对实验结果的可信度进行评估，确 保结果的准确性和可靠性。
结果分析方法
对比分析
将实验结果与标准值进行对比， 分析差异原因。
气相色谱-质谱联用法
总结词
有毒有害物质的快速检测
第二十页，编辑于星期五：十点 十一分。
（3）消毒液有效氯的快速测定
消毒液在食品加工过程中使用广泛，控制消毒液的有效浓度是一个重要的环节。 目前使用较多的是含氯消毒液，测定有效氯的方法有两种试纸法。
方法：于盛有2mL牛乳的试管中加入2mL玫瑰红试剂，乳中无碱性物质则呈黄色，有碱性物质时呈玫瑰红色，其碱性物质的存在量与反应颜色的深浅成正比。
0.00 0.03 0.06 0.09
相当于掺入碳酸钠的百分含量
第五页，编辑于星期五：十点 十一分。
5、牛乳中淀粉和麦芽糊精的快速检测
意义：牛乳掺水后乳密度会降低，很容易检出，加入淀粉和麦芽糊精后乳密度会升高，但营养成份并未增加。检测淀粉和麦芽糊精是否存在，主要是检测牛乳是否掺假。 方法：取5mL牛乳注入试管中（有条件时稍稍煮沸，待冷却后），加入数滴淀粉检测试液，如有淀粉和麦芽糊精存在时，则有蓝色或青蓝色沉淀物出现。
第十七页，编辑于星期五：十点 十一分。
三、 食品加工贮藏安全度的快速测定
食品中心温度、食品加工和贮藏温度 消毒间紫外线辅照强度 消毒液有效氯 游离性余氯
第十八页，编辑于星期五：十点 十一分。
（1）食品中心温度、加工和贮藏温度的快速测定
细菌生长最适宜的温度在10～60℃范围之内。因此,食品的储存温度应控制在10℃以下。食品加工应当烧熟煮透其中心温度应在70℃以上并保持一定的时间才可杀灭细菌。 在烹饪后至食用前超过2小时的食品，应当在高于60℃或低于10℃的条件下存放。需要冷藏的熟制品，应当放凉后在0～10℃之间冷藏。 煎炸食品时，油温最高不得大于250℃，一般不得超过190℃。 温度对于食品的质量起着重要作用。国家卫生部《餐饮业食品卫生管理办法》中对各环节的温度控制有明确的规定 。采用食品中心温度计和红外线瞬时测温仪可有效加以监控。
超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红
超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红陈 英（周至县食品药品检验检测中心，陕西西安 710400）摘 要：运用超高效液相-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ。
通过优化萃取试剂、样品基质效应的消除、色谱及质谱条件等参数，检测方法的灵敏度和适用性。
在电喷雾离子源正离子模式下，多反应监测（MRM）方式检测，外标法定量。
苏丹红Ⅰ～Ⅳ线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.999，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在3个添加水平下，回收率范围为85.1%～104.9%，标准偏差（RSD）均小于6.2%，检出限和定量限为1.0～6.0μg/kg。
本方法处理过程简单、分析时间短、准确度高，适用于辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋和鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测，可用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
关键词：超高效液相-串联质谱法；苏丹红；非法添加苏丹红共有4个组分，为苏丹红Ⅰ～Ⅳ，是一种红色颗粒或粉末状的红色染料常用于工业上色如鞋、地板等的增光，因为有致癌作用危害人体健康，我国和欧盟都禁止其用于食品生产[1]。
市面上有一些不法分子为了产品成色漂亮好出售，依然违法添加工业染料。
目前，苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法主要有薄层色谱法[2]、紫外可见分光光度法[3]、近红外显微成像光谱法[4]、液相色谱法[5-6]、液相色谱-质谱联用法[7-8]和化学发光分析法[9]，这些方法前处理复杂、试剂用量大、检测周期长、准确度不高，不适应实际工作中遇到的多种复杂基质中苏丹红的筛查测定。
本试验通过对色谱条件和质谱参数的研究、优化，建立了高效液相色谱-串联质谱同时分析苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。
本方法前处理简单，7 min即可同时测出苏丹红Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速简单，结果准确，可以用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
1 材料与方法1.1 仪器与试药液相色谱-串联质谱联用仪：Qtrap 5500三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）；配有电喷雾离子源（ESI）；LC20A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；MS1003S电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；MFV-24智能氮吹仪（广州德泰仪器科技有限公司）。
苏丹红最新检测方法
苏丹红最新检测方法下载苏丹红检测套装：固相萃取柱：HiCapt Sudan苏丹红专用柱(500mg/3mL，订货号：22-05003)液相色谱柱：HiSep C18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm（订货号：0246150）苏丹红是偶氮苯类人工色素,由于苏丹红具有潜在的致癌性, 中国和欧盟等多数国家都禁止其作为色素添加剂在食品中使用。
然而, 仍有不少食品生产企业为了改善食品色泽、降低成本将其作为食用色素。
我国质量监督部门检出了包括几家知名企业生产的众多含有苏丹红的食品, 引起了整个社会的关注。
因此，建立快速可靠的检测方法至关重要。
目前报道的苏丹红的检测方法主要是采用液相色谱法。
由于辣椒油、辣椒粉等食品成分复杂,液相色谱分离困难,易导致假阳性结果。
国家标准的方法是采用正已烷作为萃取溶剂，用氧化铝固相萃取柱净化样品。
但该方法样品处理过程复杂，而且氧化铝的活性不易控制，方法回收率难以得到保证。
因此我们开发了HiCapt Sudan苏丹红专用固相萃取柱，建立了同时检测食品中四种苏丹红的高效液相色谱分析方法，较好地解决了这一问题。
方法的优势：∙专利创新的苏丹红专用萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰∙回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷∙方法简单、快速、节省溶剂∙优化的色谱分离条件，有效去除杂质干扰1. 样品处理：1.1 样品提取：（参考国标GB/T 19681—2005）1.1.1辣椒粉等粉状样品称取0.5 g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入5mL正己烷，超声10min，5000 r/min离心5 min 后取上清液3 mL，待净化。
1.1.2辣椒油等油状样品称取0.5 g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入3mL正己烷溶解，涡旋1分钟混匀，待净化。
1.1.3腊肠样品将腊肠切成小丁，称取3.0 g, 放入10 mL离心管中，加入5 mL正己烷，超声10分钟，然后步骤同辣椒粉样品。
食品中苏丹红的检测
高效液相色谱法（HPLC）
我国国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管 理委员会发布的高效液相色谱法在欧洲委员会公 布的检测方法基础上做了改进。 国标法的提取液由乙腈改为正己烷，将液体、浆 状样品混合均匀，固体样品磨细后用正己烷提取、 过滤，必要时加入无水硫酸钠脱水后稍加温溶解， 用旋转蒸发仪蒸发浓缩，然后慢慢加入氧化铝层 析柱中萃取净化后用丙酮转移定容待测。
苏丹红的分析技术
高效液相色谱法（HPLC）
迄今为止，国际上食品中苏丹染料的常用检测方 法是高效液相色谱法，而高效液相-质谱联用法和 前面所述的电喷雾解析电离质谱法等用于检测结 果的确证。 欧洲委员会推荐的液相色谱法是由样品经匀桨化 或粉碎后，加入乙腈（Sudan Ⅲ、Sudan Ⅳ加入 氯仿）提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪 进行色谱分析。以波长可变的紫外-可见检测器定 性和定量。
苏丹红的结构，合成与危害
合成方法 苏丹红属偶氮染料，可用芳胺做为前体通过重氮 化反应生成重氮离子再通过亲电取代反应和萘酚 偶联体还原酶的作用下在体内生成相应的 胺类物质。在多项化学与生物实验中发现，苏丹 红的致毒性与代谢生成的胺类及萘酚类物质有关。 Sudan I在体内的代谢如下图所示。
苏丹红的结构，合成与危害
分类及结构 苏丹红为亲脂性偶氮化合物，外观呈暗红 色或深黄色片状晶体，难溶于水，主要包 括Ⅰ、Ⅱ、III 和Ⅳ4 种类型。其中II、III 和IV 均为I 的化学衍生物。结构和IUPAC命 名如下所示
苏丹红的结构，合成与危害
Sudan Sudan Sudan Sudan
苏丹红的分析技术
高效液相色谱法（HPLC）
检测波长：Sudan Ⅰ、Sudan Ⅱ在478nm 波长有 最大吸收，Sudan Ⅲ、Sudan Ⅳ在520nm波长有 最大吸收。 Sudan Ⅰ的检测限是13微克/升，定量的最低浓 度为106微克/升，在辣椒粉样品中的添加回收率 高于90％。
三食品中苏丹红染料的测定
实验十、食品中苏丹红染料的测定标准依据：GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的测定（高效液相色谱法）一、目的要求学习食品中苏丹红染料测定的原理和方法。
二、实验原理苏丹红色素是应用于油彩蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成的着色剂，非食用色素，长期食用具有致癌致畸作用。
苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。
三、仪器与试剂（一）试剂1、乙腈色谱纯2、丙酮色谱纯、分析纯3、甲酸分析纯4、乙醚分析纯5、正己烷分析纯6、无水硫酸钠分析纯7、层析柱管：1cm (内径) 5cm (高)的注射器管。
8、层析用氧化铝（中性100目~200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL 水降活，均匀后密封，放置12h 后使用。
9、氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL 正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。
10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。
11、标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%。
12、标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg （按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250m L。
（二）仪器1、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）2、分析天平：感量0.1mg3、旋转蒸发仪4、均质机或匀浆机5、粉碎机6、离心机7、0.45μm有机滤膜四、实验步骤（一）样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。
（二）样品处理：1、红辣椒粉等粉状样品称取1g ~ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入10mL ~20mL 正己烷，超声处理5min，过滤，用10 mL 正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。
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• 谢谢观看
• 将薄层色谱分离和分光光度法结合测 定了苏丹红Ⅰ含量［21］。该方法便 捷、可靠、经济实惠。
5 拉曼光谱法
• 根据苏丹红中 N=N 官能团产生的 拉曼信号，利用拉曼光谱技术检测了 苏丹红含量［22］。该方法无须对样 品进行特殊处理，可直接测量固体粉 末，隔瓶测定液体，快速方便。
6 共振瑞利散射法
食品中苏丹红的检测方法
检测食品中苏丹红的特点及其研究进展
苏丹红的简介
• 苏丹红是人工合成的亲脂性偶氮化合物，属工业染料，不溶于水，易溶于有 机溶剂，可作为化学合成着色剂应用于蜡、油彩、地板蜡等化工产品生产中; 但苏丹红却被作为食品添加剂而广泛应用。在食品中添加苏丹红的主要目的 是增色，苏丹红对光线的敏感性不强，食品中添加苏丹红后能长期保持鲜红谱法是在经典液相色谱法的基础上， 引入气相色谱理论和技术而发展起来的现代色谱 柱分离分析方法。。该方法以液体为流动相，具 有速度快、效率高、灵敏度高等特点。目前高效 液相色谱法检测苏丹红主要有欧洲委员会推荐方 法、国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管 理委员会发布方法( 国标法) 和凝胶柱净化－ 高 效液相色谱法。
来兴起的电喷雾解吸电离质谱法可以对吸
附在表面的物质直接解吸电离，从而进行
高质量质谱测定。该方法主要分为液相色
谱－ 质谱联用法( LC/MS ) ［15 － 16］
和气相色谱－ 质谱联用法( GCMS) ［17
－ 18］。
4 分光光度法
• 利用分光光度法研究了苏丹红Ⅰ、 Ⅲ、Ⅳ在极性,溶剂和非极性溶剂中的 紫外光－ 可见光光谱特征［20］。
2 薄层色谱法(TLC)
• 采用薄层色谱法分离样品中的苏丹红，主 要是利用样品溶液中苏丹红理化性质如吸 附力、分子极性等的差异，由于各组分受 固定相阻力与流动相推力的影响不同，因 而各组分在两相间的分配不同，从而使各 组分以不同流速流动，从而达到分离的目 的。
3 色谱－ 质谱联用法
•
质谱法比高效液相色谱法更灵敏，近年