苏丹红的检测
食品中苏丹红检测方法探讨
食品中苏丹红检测方法探讨中国质量新闻网 2008-11-26 15:17:25摘要本文介绍了食品中苏丹红检测方法的研究进展，主要包括高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、薄层层析法等。
关键词苏丹红高效液相色谱液相色谱-质谱气相色谱-质谱联用薄层层析近年来，一些国家和地区不断发生食品污染等恶性事件。
特别是随着科技的发展，一些原来认为无害的食品添加剂，发现存在慢性或致癌作用,原来检测不出的有害物质被查出等。
苏丹红是偶氮苯类人工色素，属于工业染料，主要用于油、蜡、鞋等的增光着色。
由于苏丹红I、II、III、IV及其代谢产物具有致癌性，国家禁止作为色素添加剂在食品中使用。
苏丹红I、II、III、IV的检测方法有高效液相色谱法[1]、液相色谱-质谱法[2]、气相色谱-质谱联用法[3]、薄层层析法[4]等。
1. 高效液相色谱法对食品中苏丹红的检测高效液相色谱法是一种以液体为流动相的现代色谱柱分离分析方法，它是在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术发展起来的[5]。
原则上讲，只要能溶解在流动相中的物质都可以用高效液相色谱法分析。
在目前已知的有机化合物中，有80%的有机化合物能用高效液相色谱法分析[6]。
高效液相色谱法主要有以下几种：1.1 欧洲委员会推荐的液相色谱法[7]该方法是将样品经匀浆化或粉碎后，加入乙睛(苏丹红III、IV加入氯仿)提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。
苏丹红I、苏丹红II的检测波长为478nm，苏丹红III、苏丹红IV则为520nm。
苏丹I的检测限是0.013μg/ml、最低浓度为0.106μg/ml、在辣椒粉样品中的添加回收率高于90%。
1.2 国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会发布的高效液相色谱法该方法在欧洲委员会公布的检验方法的基础上作了改进。
苏丹红检测方法国家标准采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，使用目前国内已广泛应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。
饲料中苏丹红测定注意事项
饲料中苏丹红测定注意事项饲料中苏丹红的测定是为了检测饲料中是否存在苏丹红等禁用染料，以保障饲料的安全性。
以下是饲料中苏丹红测定的注意事项：1. 样品采集：在进行苏丹红测定之前，应正确采集饲料样品。
采样时要注意避免污染，避免样品和外界环境接触，尽量避免样品接触到阳光直射。
2. 样品保存：采集好的样品应当迅速进行处理，如果不能立即测试，应将样品保存在低温（4以下）环境中，避免样品变质。
3. 样品制备：将样品进行有效的制备，以提高测定的准确性和精确性。
常用的样品制备方法包括样品粉碎、样品溶解、样品筛选等等。
4. 选择合适的测定方法：根据实际需求和实验条件，选择适合的苏丹红测定方法。
常见的苏丹红测定方法有高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）、薄层色谱法（TLC）等。
选择合适的方法能够保证测定结果的准确性和可靠性。
5. 校准曲线的制备：校准曲线是进行苏丹红测定的重要依据，应当合理选取校准曲线的浓度范围和点数，以确保测定结果的准确性和可靠性。
6. 控制实验条件：控制实验条件对测定结果的准确性也非常重要。
应注意控制实验室的温度、湿度等环境因素对实验结果的影响。
此外，还应控制实验操作的一致性，如每次操作使用相同的工具、试剂和仪器。
7. 质量控制：在进行苏丹红测定时，应当配备适当的质量控制样品，以确保测定结果的准确性和可靠性。
质控样品应具有合适的浓度范围，一般用于检测方法的验证和实验室日常质控，也可用来判断测定方法的稳定性和准确性。
8. 数据分析和结果判定：测定完毕后，应对数据进行科学的分析和处理，以得出正确的结论。
根据测定结果，判断样品中苏丹红的含量是否符合相关标准和法规的要求。
9. 结果报告和记录：进行苏丹红测定后，应将结果及时记录，并生成合格的测定报告。
需要保留样品、记录和报告，以备日后的查验和验证。
总之，饲料中苏丹红测定需要严格控制实验条件，合理选择测定方法，进行样品制备和质量控制，科学地分析和处理测定结果。
食品中苏丹红的快速检测方法课件
苏丹红检测的意义
提高公众健康水平
提升食品安全监管水平
通过苏丹红检测，能够减少含有苏丹 红的食品对公众健康的危害，提高整 体健康水平。
苏丹红检测技术的不断发展和完善， 有助于提高食品安全监管机构的监管 能力和水平。
规范食品行业秩序
加强苏丹红检测能够促使食品企业自 律，遵守食品安全法规，规范行业秩 序。
趋势分析
对多次实验结果进行趋势分析， 了解苏丹红含量的变化趋势。
因素分析
分析影响实验结果的各种因素， 为改进实验方法提供依据。
结果解读与报告撰写
结果解读
对实验结果进行深入解读，理解苏丹红在食品中 的存在状态和潜在风险。
报告撰写
根据实验结果和分析结论撰写实验报告，包括数 据记录、结果分析和建议措施等。
根据实验需要，准备适量的苏丹 红标准品、提取剂、缓冲液等试 剂，确保其质量和纯度。
实验操作步骤
提取
将处理好的样品加入适 量的提取剂中，进行充 分搅拌、纯 化，去除杂质，提高检
测准确性。
显色反应
加入适量的缓冲液和苏 丹红标准品，进行显色
反应。
检测
使用分光光度计在 550nm波长处测定吸光 度值，根据标准曲线计
算苏丹红含量。
05
实验结果分析
数据处理与结果判定
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括 平均值、标准差等。
结果判定
根据实验数据判定食品中是否含有 苏丹红，以及苏丹红的含量是否超 标。
可信度评估
对实验结果的可信度进行评估，确 保结果的准确性和可靠性。
结果分析方法
对比分析
将实验结果与标准值进行对比， 分析差异原因。
气相色谱-质谱联用法
总结词
超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红
超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红陈 英（周至县食品药品检验检测中心，陕西西安 710400）摘 要：运用超高效液相-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ。
通过优化萃取试剂、样品基质效应的消除、色谱及质谱条件等参数，检测方法的灵敏度和适用性。
在电喷雾离子源正离子模式下，多反应监测（MRM）方式检测，外标法定量。
苏丹红Ⅰ～Ⅳ线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.999，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在3个添加水平下，回收率范围为85.1%～104.9%，标准偏差（RSD）均小于6.2%，检出限和定量限为1.0～6.0μg/kg。
本方法处理过程简单、分析时间短、准确度高，适用于辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋和鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测，可用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
关键词：超高效液相-串联质谱法；苏丹红；非法添加苏丹红共有4个组分，为苏丹红Ⅰ～Ⅳ，是一种红色颗粒或粉末状的红色染料常用于工业上色如鞋、地板等的增光，因为有致癌作用危害人体健康，我国和欧盟都禁止其用于食品生产[1]。
市面上有一些不法分子为了产品成色漂亮好出售，依然违法添加工业染料。
目前，苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法主要有薄层色谱法[2]、紫外可见分光光度法[3]、近红外显微成像光谱法[4]、液相色谱法[5-6]、液相色谱-质谱联用法[7-8]和化学发光分析法[9]，这些方法前处理复杂、试剂用量大、检测周期长、准确度不高，不适应实际工作中遇到的多种复杂基质中苏丹红的筛查测定。
本试验通过对色谱条件和质谱参数的研究、优化，建立了高效液相色谱-串联质谱同时分析苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。
本方法前处理简单，7 min即可同时测出苏丹红Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速简单，结果准确，可以用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
1 材料与方法1.1 仪器与试药液相色谱-串联质谱联用仪：Qtrap 5500三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）；配有电喷雾离子源（ESI）；LC20A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；MS1003S电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；MFV-24智能氮吹仪（广州德泰仪器科技有限公司）。
苏丹红最新检测方法
苏丹红最新检测方法下载苏丹红检测套装：固相萃取柱：HiCapt Sudan苏丹红专用柱(500mg/3mL，订货号：22-05003)液相色谱柱：HiSep C18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm（订货号：0246150）苏丹红是偶氮苯类人工色素,由于苏丹红具有潜在的致癌性, 中国和欧盟等多数国家都禁止其作为色素添加剂在食品中使用。
然而, 仍有不少食品生产企业为了改善食品色泽、降低成本将其作为食用色素。
我国质量监督部门检出了包括几家知名企业生产的众多含有苏丹红的食品, 引起了整个社会的关注。
因此，建立快速可靠的检测方法至关重要。
目前报道的苏丹红的检测方法主要是采用液相色谱法。
由于辣椒油、辣椒粉等食品成分复杂,液相色谱分离困难,易导致假阳性结果。
国家标准的方法是采用正已烷作为萃取溶剂，用氧化铝固相萃取柱净化样品。
但该方法样品处理过程复杂，而且氧化铝的活性不易控制，方法回收率难以得到保证。
因此我们开发了HiCapt Sudan苏丹红专用固相萃取柱，建立了同时检测食品中四种苏丹红的高效液相色谱分析方法，较好地解决了这一问题。
方法的优势：∙专利创新的苏丹红专用萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰∙回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷∙方法简单、快速、节省溶剂∙优化的色谱分离条件，有效去除杂质干扰1. 样品处理：1.1 样品提取：（参考国标GB/T 19681—2005）1.1.1辣椒粉等粉状样品称取0.5 g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入5mL正己烷，超声10min，5000 r/min离心5 min 后取上清液3 mL，待净化。
1.1.2辣椒油等油状样品称取0.5 g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入3mL正己烷溶解，涡旋1分钟混匀，待净化。
1.1.3腊肠样品将腊肠切成小丁，称取3.0 g, 放入10 mL离心管中，加入5 mL正己烷，超声10分钟，然后步骤同辣椒粉样品。
食品中苏丹红的检测
高效液相色谱法（HPLC）
我国国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管 理委员会发布的高效液相色谱法在欧洲委员会公 布的检测方法基础上做了改进。 国标法的提取液由乙腈改为正己烷，将液体、浆 状样品混合均匀，固体样品磨细后用正己烷提取、 过滤，必要时加入无水硫酸钠脱水后稍加温溶解， 用旋转蒸发仪蒸发浓缩，然后慢慢加入氧化铝层 析柱中萃取净化后用丙酮转移定容待测。
苏丹红的分析技术
高效液相色谱法（HPLC）
迄今为止，国际上食品中苏丹染料的常用检测方 法是高效液相色谱法，而高效液相-质谱联用法和 前面所述的电喷雾解析电离质谱法等用于检测结 果的确证。 欧洲委员会推荐的液相色谱法是由样品经匀桨化 或粉碎后，加入乙腈（Sudan Ⅲ、Sudan Ⅳ加入 氯仿）提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪 进行色谱分析。以波长可变的紫外-可见检测器定 性和定量。
苏丹红的结构，合成与危害
合成方法 苏丹红属偶氮染料，可用芳胺做为前体通过重氮 化反应生成重氮离子再通过亲电取代反应和萘酚 偶联体还原酶的作用下在体内生成相应的 胺类物质。在多项化学与生物实验中发现，苏丹 红的致毒性与代谢生成的胺类及萘酚类物质有关。 Sudan I在体内的代谢如下图所示。
苏丹红的结构，合成与危害
分类及结构 苏丹红为亲脂性偶氮化合物，外观呈暗红 色或深黄色片状晶体，难溶于水，主要包 括Ⅰ、Ⅱ、III 和Ⅳ4 种类型。其中II、III 和IV 均为I 的化学衍生物。结构和IUPAC命 名如下所示
苏丹红的结构，合成与危害
Sudan Sudan Sudan Sudan
苏丹红的分析技术
高效液相色谱法（HPLC）
检测波长：Sudan Ⅰ、Sudan Ⅱ在478nm 波长有 最大吸收，Sudan Ⅲ、Sudan Ⅳ在520nm波长有 最大吸收。 Sudan Ⅰ的检测限是13微克/升，定量的最低浓 度为106微克/升，在辣椒粉样品中的添加回收率 高于90％。
红辣椒粉中苏丹红Ⅰ的检测
A
4
u j A u A 4 r A A
r
eff
A
u c W
u A
A
4
W
4
u As
A s
As
4
V W Cs M AS
A=2349、As=2955、Cs=1.52ug/mL、 V=5mL、M=5.0000g代入上式得
W=1.208mg/kg
A
误差分析：
V W Cs M AS A
0.001 u j (M ) 0.00058( g ) 3
2 2 (M) (M) u u j u f (M) 0.00058( g )
有效自由度
eff
4 u C 4 4 4 u A s s uV 4 u M u A As Cs V A M A A M s Cs V
u c W 4 W
公式简化为
其中
A
j
u A 4
样品峰面积 序 号 1
样品
2
3
4
5
6
7381 2290 2229 2345 2465 2437 2316 2349 积
标准工作液峰面积
序 号
1
2
3
4
5
6
7
8
平 均
峰面 2931 2989 3005 2985 2907 2954 2981 2888 2955 积
样品中的苏丹红Ⅰ的含量：
已知：
苏丹红Ⅰ纯度95%±1%；液相色谱面积不确
鸡蛋中苏丹红判定标准
鸡蛋中苏丹红判定标准
鸡蛋中苏丹红判定标准是指对于鸡蛋中苏丹红的检测结果进行
判定的标准。
通常情况下，鸡蛋中苏丹红的含量越高，对人体的危害也就越大。
因此，对于含有苏丹红的鸡蛋进行判定，是非常重要的。
根据相关的规定和标准，对于鸡蛋中苏丹红的判定主要分为以下几个等级：一级、二级、三级和四级。
其中，一级为不合格品，二级为可疑品，三级为合格品，四级为特级品。
具体来说，若鸡蛋中苏丹红含量不超过0.01mg/kg，属于特级品；若含量在0.01mg/kg至0.05mg/kg之间，则属于合格品；若含量在0.05mg/kg至0.1mg/kg之间，则属于可疑品；若含量超过0.1mg/kg，则属于不合格品。
除此之外，还需要注意的是，苏丹红的检测方法也需要符合相关的标准和要求，以确保检测结果的准确性和可靠性。
同时，在生产和销售过程中也应该加强对鸡蛋的监管和管理，以确保鸡蛋的质量和安全。
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中华人民共和国国家标准
食品中苏丹红染料的检测方法
高效液相色谱法
1 范围
本标准适用于食品中苏丹红染料的检测。
本标准规定了食品中苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ的高效液相色谱测定方法。
方法最低检测限：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ均为10ug/kg.
2 术语和定义
2.1 苏丹红
属偶氮系列化工合成染料。
3 方法要点
样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱——紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。
4 试剂与标准品
4.1 乙腈色谱纯
4.2 丙酮色谱纯、分析纯
4.3 甲酸分析纯
4.4 乙醚分析纯
4.5 正己烷分析纯
4.6 无水硫酸钠分析纯
4.7 层析柱管：1cm（内径）×5cm（高）的注射器管。
4.8 层析用氧化铝（中性100目~200目）：105℃干燥2h，与干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL水降活，混匀后密封，放置12h后使用。
注：不同厂家和不同批号氧化铝的活度有差异，须根据具体购置的氧化铝产品略做调整，活度的调整采用标准溶液过柱，将1ug/mL的苏丹红的混合标准溶液1mL加到柱中，用5%丙酮正己烷溶液60mL完全洗脱为准，4种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ，可根据每种苏丹红的回收率作出判断。
苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ的回收率较低表明氧化铝活性偏低，苏丹红Ⅲ的回收率偏低时表明活性偏高。
4.9 氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用。
4.10 5%丙酮的正己烷液：吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。
4.11 标准物质：苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红；纯度≧95%/
4.12 标准储备液：分别称取苏丹红、苏丹红、苏丹红及苏丹红各10mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。
4 仪器与设备
5.1 高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）
5.2 分析天平：感量0.1mg
5.3 旋转蒸发仪
5.4均质机
5.5 离心机
5.6 0.45um有机滤膜
6 样品制备
将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需磨细。
7 操作方法
7.1 样品处理
7.11 红辣椒粉等粉状样品
称取1g~5g（准确至0.001g）样品与三角瓶中，加入10mL~30mL正己烷，超声5min，过滤，用10mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中（4.9），为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全过程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。
控制氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂志的多少用10ml~30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL（4.10）洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45um有机滤膜过滤后待测。
7.1.2红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品
称取0.5g~2g（标准至0.001g）样品与小烧杯中，加入适量正己烷溶解（约1mL~10ml），难溶解的应品可于正己烷中加温溶解。
按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱……过滤后待测”操作。
7.1.3辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品
称取10g~20g （准确至0.01g）样品于离心管中，加10mL~20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品对加水，加入30mL正己烷：丙酮=3：1，匀浆5min，吸出正己烷层，于下层再加入20mL×2次正己烷匀浆，离心，合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL正己烷溶解残渣后，按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱……过滤后待测”操作。
7.1.4香肠等肉制品
称取粉碎样品10g~20g（准确至0.01g）于三角瓶中，加入60mL正己烷充分匀浆。