2015版中国药典 丹参中丹参酮类的测定
外标法测定丹参中丹参酮ⅡA的含量
外标法测定丹参中丹参酮ⅡA的含量外标法测定丹参中丹参酮?的含量 A参照实验六十一外标法测定丹参中丹参酮?的含量 P134A 一、目的要求1、练习使用高效液相色谱仪。
2、学会使用外标法定量分析。
二、实验原理外标法可以分为外标一点法、外标二点法及标准曲线法。
当标准曲线法的截距为零时，可用外标一点法定量。
在药物分析中，为了减少实验条件对分析结果的影响，采用随行外标一点法，即每次测定都同时进行对照品和试样溶液。
三、仪器与试剂1、美国戴安液相色谱仪(二极管阵列检测器，自动进样器)、C反相色谱柱、18棕色容量瓶50mlL、超声波提取器、滴管。
2、丹参药材、丹参酮?对照品、甲醇(色谱纯)、重蒸馏水。
A四、实验内容与步骤1、色谱条件C反相色谱柱;流动相为甲醇—水90?10;检测波长270nm;流速1mL/min;18 按丹参酮?计算n不低于2000。
A2、对照品溶液的制备精密称取丹参酮?对照品0.8mg，置于50mL棕色的容量瓶中，加入甲醇至A 刻度，摇匀，即得。
(每mL含丹参酮?16μg)。
A3、试样溶液的制备取丹参药材(过2号筛)0.3285g，精密称定置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，塞密，称定重量，超声30分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
4、测定分别精密吸取对照品溶液与试样溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，并计算含量丹参药材中含有的丹参酮?含量X，计算公式如下: AAMP，，ybbX (%),，100%AM，by1A——丹参药材的峰面积。
yA——丹参酮?对照品的峰面积。
bAM——丹参药材的称样量，g。
yM——丹参酮?对照品的称样量，g。
bAP——丹参酮?对照品的含量，99.99%。
bA五、实验记录记录各个原始数据(共4个)，计算出丹参药材中丹参酮?的含量，附上丹A参药材的液相色谱图，实验结论(即测定的丹参药材中含有多少的，丹参酮?)。
高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量
高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量何玲玲【摘要】目的建立高效液相色谱法测定中药丹参不同部位中丹参酮IIA 的含量.方法采用反相高效液相色谱法,选择色谱柱Hypersil ODSC18 柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇∶水=75:25;流速为1.2mL/min;柱温为30℃;检测波长为268 ～ 270nm.结果丹参酮IIA 浓度在1.25 ～21.45μg/mL(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.83%,RSD=2.04%(n=6).结论采用反相高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA 的含量,该方法快速、灵敏、准确,可以为丹参的种植、品质鉴定、扩展药用部位以及控制丹参药材的质量提供测定依据.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2012(010)011【总页数】2页(P36-37)【关键词】高效液相;丹参;丹参酮IIA;色谱柱【作者】何玲玲【作者单位】佛山市中医院,广东,佛山,528000【正文语种】中文【中图分类】R282.710.3丹参（Salvia Miltiorrhiza Bunge）为唇形科（Labiatae）鼠尾草属多年生草本植物，传统以根入药。
丹参味苦，性微寒，具活血化瘀、凉血消痈、清心除烦之功效。
活性成分主要包括脂溶性成分和水溶性成分，丹参酮IIA是其脂溶性代表成分之一，相对含量较高，有扩张冠脉，抗心肌缺血等作用[1]。
目前，高效液相色谱法（HPLC）已经成为控制中药质量的最为有效的手段，而且很多资料中记录了对丹参高效液相色谱的研究[2,3]，但对丹参的根、茎、叶中丹参酮IIA的含量测定鲜有报道，本文通过对丹参各部位中丹参酮IIA含量的测定，以为今后中药丹参的采集、部位选择及加工提供一定的理论参考，现将研究结果报道如下。
1 实验材料1.1 实验仪器Waters 700高效液相色谱仪（美国 Waters公司）；Waters 700紫外检测器；色谱柱Hypersil ODSC18柱（4.6mm×250mm，5μm ）；BS110S电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；干燥箱（浙江省金坛市正基仪器有限公司，型号CS-202），电热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂，型号：HH S11-2），超声仪（ AUTOSC I ENCE，型号：AS5150A ）。
高效液相色谱法测定丹参片中丹参酮Ⅱ A含量的方法
高效液相色谱法测定丹参片中丹参酮ⅡA 含量的方法褚晶晶【摘要】 目的 观察采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量进行测定的效果。
方法 本研究检测供试品溶液以超声波提取法对丹参片进行制备, 对照品采用丹参酮ⅡA, 测定方法采用高效液相色谱法, 选择合适的色谱柱、流动相以及检测波长, 并控制适宜的流速以及进样量, 测定温度选择为室温。
结果 在0.5126~4.8700 μg/ml 范围内丹参酮ⅡA 与峰面积具有良好的线性关系, 求的回归方程为Y =1425.3X +28.75, r =0.9996, n=5；平均回收率为99.63%, RSD 值为1.46%(n=9)。
结论 采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量进行测定具有操作方法简便, 测定结果稳定的优势, 适用于丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量控制, 值得推广。
【关键词】 高效液相色谱法；丹参片；丹参酮ⅡA ；含量测定DOI ：10.14164/11-5581/r.2017.12.112作者单位：123000 阜新市药品检验所业务办公室丹参片在2015年版《中国药典》中质量标准只有丹酚酸B 的含量测定, 本文采用高效液相色谱法对丹参片中丹参酮ⅡA 的含量测定方法进行了研究。
1 仪器与材料本研究采用的高效液相色谱仪为美国waters E2695高效液相色谱仪。
丹参片(批号分别为161011, 161012, 161013), 丹参酮ⅡA 对照品(中国药品生物制品检定所, 批号为0766-200201)。
本研究所用甲醇均为色谱纯, 所用水为纯化水。
2 方法与结果2. 1 色谱条件 选择规格为(4.6 mm×250 mm, 5 μm)的waters symmetry C18色谱柱, 以甲醇-水(80∶20)为流动相, 控制流速为1.0 ml/min, 选取270 nm 为检测波长, 并控制适宜的冲柱比例以及进样量。
2. 2 溶液的制备 ①对照品溶液：称取20 mg 丹参酮ⅡA 对照品, 将其放于100 ml 棕色量瓶中, 采用甲醇溶解后稀释至刻度。
不同产地丹参药材中丹参酮ⅡA与丹酚酸B的含量测定
38中国处方药 第18卷 第10期·实验研究·采用乙腈-0.1%磷酸系统进行梯度洗脱。
③本试验考察了不同柱温、流速对分离度及基线是否平稳的影响。
本试验考察的柱温为25℃，30℃和35℃，试验结果表明，柱温对其的影响较小，因此本试验柱温采用30℃；还考察3种不同流速0.8 ml/min 、1.0 ml/min 、1.2 ml/min 对分离度的影响，试验结果表明1.0 ml/min 时分离度较好，基线也较平衡，故本试验采用的流速为1.0 ml/min 。
参考文献[1]尚云冰，曲夷.再论大承气汤[J].山东中医药大学学报，2016，40（2）：135-136.[2]魏江存，秦祖杰，谢臻，等.大黄不同炮制品对大承气汤泻下作用变化研究[J].中华中医药杂志，2018，33（12）：5392-5396.[3]张保国，梁晓夏，刘庆芳.大承气汤现代药效学研究[J].中成药，2009，31（9）：1427-1430.[4] Peigen X ， Liyi H ， Liwei W.Ethnopharmacologic study of Chinese rhubarb[J].J Ethnopharmacol ，1984，10（3）：275-293.[5]魏江存，陈勇，谢臻，等.中药大黄炮制品的化学成分及药效研究进展[J].中国药房，2017，28（25）：3569-3574.[6]阴健，郭力弓.中药现代研究与临床应用[M].北京：学苑出版社，1993：492.[7]刘学仁，张莹，林志群.橙皮苷和橙皮素生物活性的研究进展[J]. 中国新药杂志，2011，20（4）：329-333，381.[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S]. 2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：23-24.[9]历淑芬. 大承气汤传统煎煮工艺及质量控制研究[D].杭州：浙江中医药大学，2012.[10]李丽，肖永庆.大黄饮片炮制前后物质基础变化规律研究[J].中华中医药杂志，2012，27（4）：803-813.表5：DCQT 样品测定结果（n ＝6）成分/样品平均质量浓度（μg/ml）RSD （%）柚皮苷867.24 1.55橙皮苷22.86 2.29新橙皮苷482.81 1.26芦荟大黄素 6.90 2.05大黄酸27.84 2.21和厚朴酚19.60 2.53厚朴酚74.04 2.64大黄素13.57 3.01大黄酚38.69 2.75大黄素甲醚14.212.83丹参属于唇形科植物丹参的根茎与干燥根，同时也属于我国传统珍贵中药材，历史悠久[1]。
应用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量
应用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量目的：分析高效液相色谱法在中药丹参不同部位中丹参酮IIA含量测定中的应用价值。
方法：建立反相高效液相色谱测定模式，选用Hypers110DS（C18）色谱柱，以75甲醇/25水为相液流动相比例，分别检测丹参不同部位有效成分丹参酮IIA的含量，并通过实验验证这一方法的有效性、稳定性等。
结果：丹参酮IIA面积和浓度呈线性相关，在1.25-21.45yg/ml浓度范围内线性最佳；加样溶液丹参酮IIA回收率平均为99.52%，相对标准偏差值为2.02%；丹参茎、叶未含丹参酮IIA。
结论：反相高效液相色谱法，可在短时间内精准获知丹参不同部位丹参酮IIA的含量，为丹参品质鉴定、药用价值和剂量研究工作提供可靠参考资料。
标签：高效液相；丹参；丹参酮IIA；色谱柱丹参是药用价值极高的草本植物，其根部内含丹参酮，常被入药调经疏络、活血祛瘀、消肿镇痛，其中丹参酮IIA是丹参脂溶性成分的代表物质，被广泛用于冠心病防治。
但是，丹参入药采购、运输、选品等各个环节均存在危险因素，如部分不法分子试图用伪劣品以假乱真牟取利益，制药工作人员专业水平不达标不能准确鉴别真伪、优劣，严重影响了中医药学的发展。
鉴于此，本院开展了丹参不同部位丹参酮IIA含量测定研究，旨在证实高效液相色谱法的应用价值并为丹参药用研究提供参考资料。
1 材料和设备1.1 实验材料本实验研究材料包括由中国药品生物制品检定所提供的丹参酮IIA标准品，江阴祥辉化工有限公司提供的色谱纯甲醇，广州致信中药饮片有限公司提供的干燥丹参根（6个月龄）、茎和叶子，实验用超纯水。
1.2 实验设备本实验研究设备包括高效液相色谱仪（杭州汉泽仪器有限公司，型号为LC-2010HT），紫外检测器（Genesys系列）、色谱柱（Hypersi10DSC18，长度为250mm，内径为4.6mm，填料颗粒直径为Sμm）、电子分析天平（瑞士梅特勒一托利多AB-S系列）、精密可程式干燥箱（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司，BXH-130S）、电热恒温水槽（上海精密仪器仪表有限公司，CU系列）、实验室色谱超生仪（必能信超声上海有限公司，SB2200）。
一测多评法测定药材丹参中4种丹参酮类成分的含量
一测多评法测定药材丹参中4种丹参酮类成分的含量目的：采用一测多评法测定丹参4种酮类成分含量。
方法：使用HPLC，对照品选取丹参酮ⅡA，用外标法测定其含量。
测得丹参酮ⅡA和丹参酮Ⅰ、二氢丹参酮、隐丹参酮之间的相对校正因子。
计算获得其余成分的含量，达到一测多评。
结果：4种丹参酮类成分的含量与相对校正因子计算的结果无明显差异，相对校正因子的重现性均较好。
结论：采用一测多评法对药材丹参中的4种丹参酮类成分的含量进行测定具有较好的适用性。
主题词：一测多评法；丹参；相对校正因子；酮类成分含量一测多评法最早由王智民等提出[1]，通过仅对一种已获取的成分测定，作为对照品，并同时实现多组分同步检测。
目前实际可行的包括有三七、人参、关黄柏等中药药材可以使用一测多评法进行检测[2]。
丹参由于各种因素的影响，其主要成分会有较大的差异[3]。
本文旨在采用一测多评法测定药材丹参中4种丹参酮类成分的含量，现汇报如下。
1 仪器与试药：采用美国Waters公司生产的Waters2695型HPLC仪，美国戴安公司生产的Dionex UltiMate3000型HPLC仪。
色谱柱：采用上海欧尼科技生产的Shim-pack PREP-ODS（H）KITC18（250mm×4.6mm，5μm，S），以及杭州汉泽仪器生产的Welch Material C18（250mm×4.6mm，5μm，W），以及美国Waters公司生产的Waters SunFire C18（4.6mm×250mm，5μm）。
混合对照品购买情况：二氢丹参酮Ⅰ（成都曼斯特生物科技有限公司，批号A0060）、丹参酮ⅡA（批号110766-200619）、丹参酮Ⅰ（批号0867-200205）、隐丹参酮（批号110852-200305）均购于中国药品生物制品检定所，均由中国食品药品检定研究院鉴定，纯度>98%。
乙腈为山东禹王生产的色谱纯，水超纯水。
一测多评法测定复方丹参片中4种丹参酮类成分的含量_吴笛
品（ CⅠ； 4 － 丹参酮Ⅱ A
Fig. 1
Chromatograms of reference standard （ A ） ， sample of
。 一测多
评法适用于对照品难得或制备成本高或不稳定的情 ［2 ］ 况下同类多成分的同时测定 。 目前一测多评法 《中国药典》 2010 年版一部收录， 用于黄连的含 已被 量测定。 复方丹参片由丹参、 三七、 冰片 3 味中药组成， 其中丹参为主要成分。丹参的活性成分按化学结构 分为两大类： 脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹参酚 酸类， 而丹参酮类化合物中， 二氢丹参酮 Ⅰ （ dihydrotanshinone Ⅰ） 、 隐丹参酮（ cryptotanshinone ） 、 丹参酮 Ⅰ（ tanshinone Ⅰ ） 和丹参酮 Ⅱ A （ tanshinone Ⅱ A ） 的
［1 ］
［311 ］ ， 含量较高 但对光和热不稳定。 《中国药典》 2010 年版一部复方丹参片项下丹
参酮类的含量测定方法仅以丹参酮 Ⅱ A 作为单一检 测指标， 不能全面反映复方丹参片的质量。 为提高 复方丹参片的质量标准， 以更好地控制复方丹参片 的质量， 同时基于丹参酮类化合物的不稳定性 ， 本实 验以相对较稳定且标准品易得的丹参酮 Ⅱ A 为内 标， 采用一测多评法建立复方丹参片中主要活性成 分二氢丹参酮 Ⅰ、 隐丹参酮、 丹参酮 Ⅰ、 丹参酮 Ⅱ A ， 的含量测定方法 并将一测多评法与常规外标法进 分析一测多评法用于复方丹参片中丹参酮 行比较， 类成分含量测定的可行性。 1 仪器与试药 Waters 2695 高效液相 色 谱 仪 （ 美 国 Waters 公 Dionex UltiMate 3000 高效液相色谱仪， Dionex 司） ，
2015年版《中国药典》药材修订内容汇总.
鉴别（1）
照黄曲霉毒素测定法（通则2351）测定。 33-麦芽 检查-黄曲 本品每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5μ g，黄曲霉 霉毒素 毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉 毒素B1总量不得过10μ g。 饮片-检查 -黄曲霉毒 同本品每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5μ g，黄曲霉 霉毒素 毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉 34-远志 毒素B1总量不得过10μ g。 饮片-检查 同药材。 -黄曲霉毒 本品粉末灰棕色至棕色。种皮表皮细胞淡黄色， 表面观呈长条形，常与下皮细胞上下层垂直排列 。下皮细胞含棕色或红棕色物。色素层细胞多皱 纹，内含深红棕色物。油细胞类圆形或长圆形， 54-豆蔻 鉴别（1） 含黄绿色油滴。内种皮厚壁细胞黄棕色、红棕色 或深棕色，表面观多角形，壁厚，胞腔内含硅质 块；断面观为1列栅状细胞。外胚乳细胞类长方形 或不规则形，充满细小淀粉粒集结成的淀粉团， 有的含细小草酸钙方晶。 特征图谱 37-羌活 饮片 略 ……体轻，质脆。香气，味微苦而辛。 【鉴别】【检查】【特征图谱】【浸出物】【含 量测定】同药材。
23-山楂
性状 47-川芎
饮片
取本品粉末1g，加乙醇5ml，超声处理15分钟，离 心，取上清液作为供试品溶液。另取丹参对照药 材1g，同法制成对照药材溶液。再取丹参酮ⅡA对 照品、丹酚酸B 对照品，加乙醇制成每1ml分别含 0.5mg 和1.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照 薄层色谱法（通则0502)试验，吸取上述三种溶液 各5μ l，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条 鉴别（2） 状，以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6 : 4 : 8 : 1 : 4 ) 为展开剂，展开，展至约4cm， 取出，晾干，再以石油醚（60〜90°C)-乙酸乙酯 24-丹参 （4 : 1)为展开剂，展开，展至约8cm，取出，晾 干，分别在日光及紫外光（365nm)下检视。供试 品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应 的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。