毛细管电泳电化学联用在药物分析中的应用

３４６西北药学杂志２００７年１２月第２２卷第６期・综述・毛细管电泳电化学联用在药物分析中的应用

熊凤梅，唐玉海，王楠楠（西安交通大学理学院分析科学研究所．陕西西安７１００６１）

中田分类号：Ｒ９１７文献标识码：Ａ文章编号：１００４—２４０７（２００７１０６－０３４６—０２

毛细管电泳（ｃａｐｉＨａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＣＥ）是以高电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分的淌度和分配行为的差异进行分离的一种技术。自１９８７年Ｅｗｉｎｇ首次将电化学检测技术用于毛细管电泳后，电化学检测已成为ＣＥ的一种检测技术。笔者就毛细管电泳电化学的联用在药物分析中的应用作简要综述。１毛细瞥电泳的分离模式１．１毛钿管区带电泳（ｃａｐｉｌｌａｒｙ－ｚｏｎｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｉｓ，ＣＺＥ）ＣＺＥ基于缓冲溶液中各分离物质荷质比的差异而实现分离ｔ具有工作条件简单，通过对分离条件（如柱温、柱尺寸、进样量、分离时问、检测体积和样品浓度等）的优化，柱效高等优点。１．２毛细营肢束电动色谱（Ｍｉｃｅｌｌａｒｅｌｅｅｔｒｏｋｉｎｅｔｌｅｃａｐｉｌｌａｒｙｅ—ｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＭＥＣＣ）ＭＥＣＣ是在缓冲溶液中加人大于临界胶束浓度的表面活性剂，在毛细管内形成胶束相和水相，待测组分在两相中的分配系数不同而分离。其优点是可分离不带电荷的中性化舍物。１．３毛细管凝胶电泳（ｃａｐｉｌｌａｒｙｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｉｓ，ＣＧＥ）ＣＧＥ是以凝胶作为毛细管支持物进行分离的，凝胶具有多孔性，类似于分子筛的作用，不同体积的待测物在凝胶中得以分离。ＣＧＥ分离度极高，适用于生物大分子的分析，还可用于聚合酶链反应的产物分析。１．４毛细管等电豪燕电泳（ｃａｐｉｌｌａｒｙｉｓｏｅｌｅｔｒｉｃｆｏｃｕｓｉｎｇ，ＣＩＥＦ）ＣｌＥＦ用两性电解质在毛细管内建立ｐＨ梯度．具有不同等电点的药物在电场作用下迁移至等电点相同的ｐＨ处聚集沉淀而分开。ＣｌＥＦ可分离等电点差异小于０．０１ｐＨ单位的两种蛋白。１．５毛钿管等遣电泳（ｃａｐｉｌｌａｒｙｉｓｏｔａｃｈｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＣＩＴＰ）ＣＩＴＰ基于待测组分在给定的ｐＨ下淌度和电离度不同而实现分离。其缺点是不能同时分离阴离子和阳离子，采用不连续缓冲体系、空间分辨率较低。１．６毛细管电色谱（ｃａｐｉｌｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｃｈｒｏｍａｍｇｒａｐｈｙ，ＣＥＣ）ＣＥＣ系将高教液相色谱的固定相徽粒填充剜毛细管中，以电渗流为驱动力，依据待测物质在流动相与固定相中的分配系散及自身电泳精度的差异进行分离。ＣＥＣ的优点是既能分离中性物质，又能分离带电组分．ＴａｋａｓｈｉＫｏｉｄｅ等ｏ’将冠醚衍生物与聚丙烯酰胺凝肢共价结合，再键合于熔融石英管壁上作固定相，从０．２ｍｏｌ・Ｌ．１三乙醇胺和０．３ｍｏｌ・Ｌ１硼酸缓冲体系中分离了ｌｚ种胺类化台物。２电化学检舅方法电化学检测可避免光学类检测器遇到的光程太短的问题，在检测电活性组分时具有灵敏度高、选择性好、进样量少、对检测部位的透光性无要求、易于集成化与微型化等优点一２．１安培法安培法是根据电话性物质在恒电位电极上发生氧化还原反应产生响应电流信号进行分析，灵敏度高，并且线性范围宽。安培法检测可以使用极细孔径的毛细管，适合进行单个细胞分析和话体分析，有利于进行生物微环境组分分离检测，尤其是用于单个神经细胞中神经递质的分离检测。Ｌ蚰Ｚｈａｎｇｏ’用碳电极分离和检测左旋多巴和卡比多巴・线性范围分别是１．２～１００．０ｇ・ｍｌ；１和１，２～１５０．０ｇ・ｍＬ－１，检铡限分别是０．６和０．３ｇ・ｍＬ－‘。Ｇａｎｇｃｈ曲ｏ’等用碳电极测定了芦丁和槲皮索含量。ＨｕＱ“’等分离检测生物体内的柔红霉素，线性范围是２×ｌｆｆ６～２×１０。ｍｏｌ・Ｌ－ｌ。Ｈａｌ２ｓ－ＨｅｒｍａｎｎＲｕｔｔｉｎｇｅｒａ∞等用高分辨率的毛细管电泳对粗制的打碗花精分离。线性范围为２～２００ｍｇ・Ｌ－１。２．２电导法电导法是检测恒电流下流过两个指示电极检电导的变化。主要用来检测无电化学活性的物质，尤其是无机和有机离子。根据电极与待测溶液接触与否，可分为接触电导检测唧和不接触电导检测ｏ’．不接触电导检测中工作电极环在毛细管外，可有效防止电极污染及高压电场的干扰。电极寿命长．不需要参比电扳，适用于较窄的电泳通道。但检出限受制干背景的波动情况，故要求电极尽量与通道靠近。电导法应用的报道有以柠檬酸一柠檬酸钠为缓冲体系，铜盐为络合剂，ｐＨ为４．５环境中分离麻黄碱和伪麻黄碱∞｝以氢氧化钠和争ＣＤ作为运行液，拆分联萘酚对应体“３，在ｐＨ８．５的环境下，以Ｔｒｉｓ－Ｈ。ＢＯ，为介质检测双黄连粉针剂中黄芪苷的含量“”｝在Ｔｒｉｓ－Ｈ｝Ｂｏｓ运行介质中，成功分离日夜百服宁中的４种有效成分：对乙酰氨基酚、盐酸伪麻黄碱、氢溴酸右美沙芬和马来酸氯苯那敏“”。以Ｔｒｉｓ—Ｈ。Ｂ０ａ（ｐｉｌｌ０）为运行缓冲液，分离水杨酸类药物水杨酸、乙酰水杨酸和磺基水杨酸。”ｆ测定复方维生素Ｂ片中的主要成分维生索Ｂｌ、Ｂ１２，Ｂ６和ｃ的舍量０３’｝在ｐＨ为１０的０．０２５ｍｏｌ・Ｌ－１三羟甲基氨基甲烷和０．２２５ｔｏｏｌ・Ｌ”１柠檬酸缓冲体系中分离小檗红碱和四氢小檗碱ｎｏ。测定了中药牡丹皮中的丹皮酚，线性范围为２．０～１０５ｍｇ・Ｌ－１…’。２．３计时电住法计时电位型监测器是将微恒电流施加于导电膜接口式毛细管电泳电化学计时电位型检测器的工作电极与辅助电极之间，记录工作电极一参比电极问的一阶导数计时电位信号。该信号的峰高与被测金属离子浓度在约３个数量级范围内呈线性关系；阮湘元等ｏ。用计时电位法检测碱金属离子和碱土金属离子，检出限为１～８Ｍｇ・Ｌ１。

２．４电化擘发光法电化学发光是在电极卜施加一定的电

压使电板反应产物之间或电极反应产物与溶液中某组分进行化学反应而产生的一种光现象。电化学发光法保留了化学发光法灵敏度高、线性范围宽等优点＃但发光由电极上施加的电压所引发和控制，有化学发光方法无法比拟的优点．如重现性好、试剂稳定和一些试剂可以重复使用等优点，可广泛应用于草酸，有机胺、葡萄糖、蛋白质、核酸、药物、抗氧剂等生化物质的分析测定。ＥｒｋａｎｇＷａｎｇ等以钉联吡啶作为发光体幕．测定了苯海拉明“”、雷尼替丁“”、双氧异丙嚷“”、地莽尼多“”、丙环定。”、毗二丙胺。”等药物。３展望综上所述，ＣＥ技术具有分离效率高、快速、检测手珐多、

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应用面广等优点｝电化学检测手段具有小巧、微型化、灵敏度高等诸多方面的优势。毛细管电泳电化学检测的发展已给药物分析领域带来了生机，特别是安培检测的高灵敏度、易于集成等优点，在中成药复方制剂的分析和药动学研究中发挥重要的作用。但是，遮一新型分离检测手段也有它的不足，如稳定性和精密度不够高．还有赖于科学工作者的进一步探讨．参考文献：（１）ＴａｋａｓｈｉＫｏｉｄｅ，ＫｙｏｊｉＵｅｎｏｎａｎｔｌｏｍｅｒｉｃ．Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｌｅ

ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓｏｆｐｒｉｍａｒｙａｍｉｎｏｃｏｍｐｏｕｎｄｓｂｙｃａｐｉｌｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐ虹ｗｉｔｈｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃｃｈｉｒａｌｓｔａｔｉｏｒｍ—

ｒｙｐｈａｓｅｓｏｆｃｈｉｒａｌｃｒｏｗｎｅｔｈｅｒ＿ｂｏｎｄｅｄｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ

ｃｈａｒｇｅｄｐｏｌｙａｅｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ

ｏｆＣｈｒｏｍａ—

ｔｏｇｒａｐｈｙＡ，２００１，９０９：３０５～３１５．［２）ＬａｎＺｈａｎｇ，ＧｕｏｎａｎＣｈｅｎ，ＱｉｎＨｕ．Ｓｅｐａｒａｆｉｏｎａｎｄｄｅ—

ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｌｅｖｏｄｏｐａａｎｄｃａｒｂｉｄｏｐａｉｎｃｏｍｐｏｓｉｔｅ

ｔａｂｌｅｔｓｂｙｃａｐｉｌｌａｒｙｚｏｆｌｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｗｉｔｈａｍｐｅｒｏ—

ｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌ－Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａ

Ｃｂｅｍｉｃａ

Ａｅｔａ，２００１，

４３１：２８７～２９２．

（３３ＧａＩｌｇ（ｈｅｎ，ＨｏＩｌｇ，ｗｄ

Ｚｈａｎｇ，Ｊｈｎｎｏｎｇ№Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

ｏｆｒｕｔｉｎａｎｄｑｕｅｒｃｃｔｉｎｉｎｐｌａｎｔｓｂｙｃａｐｉｌｌａｒｙｄｅｃｔｒｏＦＩｈｃＩｍｓｉｓ

ｗｉｔｌＩｄｅｃｔｍｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｌｏｎ［】］．Ａｎａｌｙｔｉｃａ

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，２０００，４２３；６９～７６．（４３ＱｉｎＨｕ，ｈ１１Ｚｈａｎｇ．ＴｉａｎｓｈｕＺｈｏｕ，ｅｔａｌ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａ—ｔｉｏｎｏｆｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎｉｎｈｕｍａｎｕｒｉｎｅｂｙｃａｐｉｌｌａｒｙｚｏｎｅｅ—

ｌｅｅｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｗｉｔｈａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ａｎａｌｙｔｉｃａ．Ｃｈｅｍｉｃａ．Ａｅｔａ，２０００，４１６：１５～１９．（ｓ］Ｈａｎｓ－ＨｅｎＴｌａｔＬｒｌＲｕｔｔｉｎｇｅｒ，］￥ｉｒｇｉｔＤｒａｇｅｒ．Ｐｕｌｓｅｄａｍｐｅｒｏ—

ｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃａｌｙｓｔｅｇＪｎｅｓｓｅｐａｒａｔｅｄｂｙｃａｐｉｌｌａｒｙｄｅｃ‘ｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉ５［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＡ．２００１。９２５＃

２９１～２９６．（６３ＲｏｂｅｒｔＢｏｄｏｒ。ＤｕｓａｎＫａｎｉａｎｓｋｙ．ＭａｒｉａｎＭａｓａＬＣｏｎ—

ｄｕｃｔｉｖｉｔｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｃｅｌｌ／ｏｒｃａｐｉｌｌａｒｙｚｏｎｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅ—

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ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｗｉｔｈｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓｌ－Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ

ｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＡ．２００１，９１６ｔ３１～４０．

［７］ＴｏｍｍｙＣｈｖｏｉｋａ，ＩｖａｎＪｅｌｎｅｋ，Ｆｒａｎｔｉｅｋ（】ｐ出盯，ｅｔａＬＤｕａｌｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ－ｃｏｎｔｅｃｔｌｅｏｓｏ。ｎｄｕｃｔｏｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｏｒｆｏｒｃａｐｉｌｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ［Ｊ１Ａｎａｌｙｔｉｃａ．Ｃｌｍｍｌｃａ．Ａｃｔａ，

２００１。４３３：１３～２１．（ｓ３郑一宁，谢天尧，莫金垣，等．高效毛细管电泳分离电导检测麻黄碱和伪麻黄碱［Ｊ］．高等学校化学学报２００２，２３（２）：１９９～２０２．［９３郁一宁，谢天尧，莫金垣，等．高效毛细管电泳一电导检测拆分联萘酚对映体ＥＪ］．应用化学，２００１，１８（２）；１１２～１１６．（１０３郑一宁，谢天尧，莫金垣，等．双黄连粉针剂中黄芩苷的高效毛细管电泳一电导法测定［Ｊ］．分析测试学报２００１．２０（６）：２１～２４．（１１］郑一宁．谢天尧，莫金垣ｔ等．非水介质毛细管电泳电化学检测日夜百服宁中的有效成分Ｉ－Ｊ］．高等学校化学学报，２００２，２３（３）ｚ３７１～３７５．（１２３韦寿莲．莫金垣．水和非水毛细管电泳一电导检测法分