猪胚胎培养常用配方
猪预混料配方
猪预混料配方猪舍建筑常见技术问题日期：2010-9-26 11:27:16 点击次数1344 发布单位：中国养殖信息网录入：李清猪舍建筑在很多养殖户的猪舍存在很多问题，特别是专业养殖户和中小型猪场。
下面是本人发现的问题及改建方案的建议，仅供养殖户建设、改建猪舍参考。
养猪的主要硬件是猪舍，包括粪便处理、饮水、通风、采光、保温等系统。
是投入较少资金饲养出好猪的重要条件之一。
硬件不合格，软件运行就困难重重。
在建设合理的猪舍中，优良品种、免疫保健、饲料营养、饲养管理才会发挥最大的效益。
目前猪舍存在的问题：很多专业养殖户和小型猪场问题最多。
投资也不少但很不合理。
包括很多大型猪场，甚至把南方的建筑方式全都拿到北方。
甚至有本来比较合理的猪场改建成了弊病很多的猪场。
什么样的猪场才算是合理的猪场呢?其实很简单。
下面几个问题非常普遍：一、采光系统：采光不合理最为突出。
座南朝北的方位最合理，简单的来讲就是小学大都是座南朝北的。
然后是窗户大多太小。
一个合理的猪舍我们首先看窗户。
母猪舍窗户一定要大，尽量的大。
让人一眼就看出来这个建筑是猪舍而不是鸡舍，不是牛舍，不是学校，不是住房。
我在下面参观了很多养殖户的猪舍，建设的成本也不小，本来可能更小的投资可以建设更好的猪舍，却往往看到别人这么做就去模仿了。
特别是母猪舍用大棚对仔猪保暖效果非常差，育肥可以用半敞开式，冬天用大棚，这样减低成本。
二、粪便处理系统：大多没有沉淀池。
污染严重的猪场一定是疾病不断。
单从投药保健、免疫、消毒等措施效果差而且投资巨大!最省钱的防病方法应该是环境卫生、消毒。
其次是免疫、保健、治疗。
而往往养殖户把这个顺序倒过来。
得到的结果却是投入大量的钱效果却始终不如意。
比如有个养殖户200猪的规模，进猪用了保健药，猪瘟脾、淋苗也做过。
因为连续的阴雨天猪先后腹泻，大量咳嗽，采食下降。
用药效果缓慢。
最主要的原因是就猪舍建筑不合理引发的问题。
有的粪便都扔窗外了。
蚊蝇滋生。
母猪胚胎移植的注意事项
母猪胚胎移植的注意事项母猪胚胎移植是一项重要的猪群遗传改良技术，它可以加速种猪选育进程，提高猪群的遗传水平。
在进行母猪胚胎移植之前，我们需要注意以下几点：1. 选择合适的供体母猪：供体母猪应该处于健康的状态，没有慢性疾病或遗传缺陷。
同时，供体母猪需要具备良好的生殖能力和胚胎质量，以确保移植的胚胎能够顺利发育。
2. 确定适宜的移植时期：母猪胚胎移植的最佳时期是供体母猪的发情期。
在进行移植前，需要对供体母猪进行细致的观察，确定其发情时期。
这个时期通常是供体母猪发情后的12-24小时，胚胎在这个时间段内容易成活和嵌着。
3. 确保胚胎的质量：移植的胚胎质量对于成功率有着决定性的作用。
胚胎的质量取决于供体母猪和种猪的遗传信息，以及胚胎的保存、处理和转运过程。
为了确保胚胎的质量，需要选择高质量的母猪作为供体，进行严格的胚胎筛选和检测，并采取合适的保存和处理方法。
4. 选择合适的受体母猪：受体母猪的选择也是非常重要的。
受体母猪应该具备良好的生殖能力和猪群内的遗传水平。
同时，受体母猪的发情周期应与供体母猪匹配，以确保受体母猪子宫的适宜状态。
5. 确保术前准备工作的充分：母猪胚胎移植是一项精细的操作，需要进行充分的术前准备工作。
这包括准备好所需的设备和药品、对供体母猪和受体母猪进行适当的饲养管理、进行术前检测和筛选等。
6. 术中操作的细致和精确：母猪胚胎移植需要进行准确的操作，包括子宫角的开切、胚胎的移植和子宫的缝合等。
这些操作需要在无菌条件下进行，并确保操作的准确和快速，以提高移植胚胎的存活率。
7. 术后的适当护理：移植成功后，需要对受体母猪进行适当的护理，包括提供充足的饲料和水源、保持合适的环境温度、进行必要的防疫措施等。
此外，还需要密切观察受体母猪的行为和健康状况，确保移植的胚胎能够成功嵌着并发育。
总而言之，母猪胚胎移植是一项复杂而精细的技术，需要进行细致的准备和操作。
只有做好相关的注意事项才能提高移植成功率，实现猪群的遗传改良和提高繁殖效益。
后备母猪妊娠母猪哺乳母猪全价料配方
后备母猪、妊娠母猪、哺乳母猪全价料配方1、后备母猪1一般情况下：玉米粉63%、发酵豆粕10%、普通豆粕8%、麦麸15%、4%型后备母猪预混料、磷酸氢钙%、赖氨酸%、苏氨酸%;每100公斤饲料中再添加免疫多维金赛维20克、复合酶制剂粗饲料降解剂25克;后备母猪饲料中喂养时不加保健液;2如果后备母猪快进入发情期时,配方如下：玉米粉56%、发酵豆粕10%、普通豆粕11%、麦麸16%、食用油3%、4%型哺乳母猪预混料、磷酸氢钙%、赖氨酸%、苏氨酸%;每100公斤饲料中再添加免疫多维金赛维20克、复合酶制剂粗饲料降解剂25克;添加10%保健液夏天则用5%保健液;2、妊娠母猪玉米粉56%、发酵豆粕13%、菜粕2%、麦麸25%、4%型妊娠母猪预混料、磷酸氢钙%、赖氨酸%、苏氨酸%;每100公斤饲料中再添加免疫多维金赛维20克、复合酶制剂粗饲料降解剂25克;另外,临产前的饲料改用哺乳期母猪饲料：玉米粉56%、发酵豆粕10%、普通豆粕11%、麦麸16%、食用油3%、4%型哺乳母猪预混料、磷酸氢钙%、赖氨酸%、苏氨酸%;每100公斤饲料中再添加免疫多维金赛维20克、复合酶制剂粗饲料降解剂25克;添加10%保健液夏天则用5%保健液,发酵豆粕中也有益生菌作用;注意,需要按冬天,夏天,而使用不同的哺乳母猪饲料配方,配方调整主要是油脂和赖氨酸,在冬天,可以把油脂减少到%,赖氨酸减少到%;夏天则维持这个配方;妊娠期注意多喂点青绿饲料,一是补充维生素,二是增加粗纤维,以防止便秘等;3、哺乳母猪玉米粉56%、发酵豆粕10%、普通豆粕11%、麦麸16%、食用油3%、4%型哺乳母猪预混料、磷酸氢钙%、赖氨酸%、苏氨酸%;每100公斤饲料中再添加免疫多维金赛维20克、复合酶制剂粗饲料降解剂25克;添加10%保健液夏天则用5%保健液,发酵豆粕中也有益生菌作用;。
氧分压_培养基及生长因子对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响
Effect of Oxygen Tension, Culture Media and Growth Factors on in vitro Development of Porcine Somatic Cloned Embryos
PAN Deng-ke, LIU Ji, FENG Shu-tang, MU Yu-lian, ZHANG Li
Key words: Pig; Somatic cell nuclear transfer; Oxygen tension; Growth factor; Culture medium
收稿日期：2006-11-22；接受日期：2007-02-14 基金项目：国家“十五”科技攻关项目（2004BA717B） 作者简介：潘登科（1972-），男，吉林九台人，博士，研究方向为猪转基因克隆和干细胞。Tel：010-62815893；Fax：010-62899982；E-mail：pand@
。通讯作者冯书堂（1945-），男，河北大名人，研究员，研究方向为小型猪培育和生物技术。E-mail：fst508@
4期
பைடு நூலகம்
潘登科等：氧分压、培养基及生长因子对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响
1187
0 引言
【研究意义】目前，体细胞克隆猪效率较低，克 隆胚胎的囊胚发育率在 10%左右，囊胚细胞数约 25～ 35，而体内囊胚的细胞数约为 200。Machaty 等[1]研究 发现体外培养的囊胚总细胞数低于体内胚，Koo 等[2] 发现猪的体细胞克隆胚胎（NTEs）以及体外受精胚胎 （IVFEs）的细胞数，均明显低于体内胚胎，这反映 了猪的体外培养体系还不理想。因此，胚胎体外培养 体系的改进将推动猪胚胎体外生产技术的发展，提高 体细胞克隆猪的效率。【前人研究进展】近年来猪孤 雌激活以及体细胞核移植胚胎的培养方面已经取得了 较大进展，但与体内生产的胚胎相比，体外培养胚胎 的早期发育率还很低，发育环境不理想[3]。胚胎培养 基是影响胚胎发育的一个重要因素。目前，用于猪早 期胚胎体外培养比较成功的培养基有 NCSU-23、 PZM-3 和 G2[4]等，其中 NCSU-23 是最常用的[5]。然 而该培养基尚有不足，如胚胎发育延迟，细胞数较少。 用 Yoshioka 研究出的 PZM-3 培养猪的体内受精胚， 囊胚率和细胞数都得到了提高[6]。氧浓度影响胚胎体 外培养是近期研究的一个热点[7~11]。胚胎体外培养通 常采用 5% CO2，95%空气（20% O2）的气相环境；另 一种培养气相是 5% CO2﹕5%～7% O2﹕88%～90% N2，接近生殖道的氧浓度[12]。理论上，低氧可减少培 养中自由基和活性氧（ROS）的形成，而活性氧对细 胞有毒害作用，易造成 DNA 损伤和脂质过氧化反应[13]。 由于猪的卵黄富含脂滴，猪胚胎对脂质过氧化反应特 别敏感，因此低氧可能有利于胚胎的发育。目前，两 种气相究竟哪种更好还有争议，研究表明有的培养基 在低氧环境下更有利于胚胎发育，而有些培养基在普 通气相较好。胚胎在体内发育过程中，母畜生殖道分 泌的生长因子对附植前的胚胎发育起着重要的作用[14]， 如胰岛素、胰岛素样生长因子、表皮生长因子（EGF） 以及碱性成纤维因子（bFGF）等。在体外培养胚胎过 程中，向培养液内添加生长因子是否对胚胎的发育具 有促进作用，研究表明各种类型胚胎在不同阶段的添 加效果并不统一[15~17]，对胚胎囊胚发育率和总细胞数 的影响也不一致。【本研究切入点】目前，猪的胚胎 体外培养的系统仍还不够理想，胚胎体外发育能力较 差。【拟解决的关键问题】研究对不同氧分压、几种 培养基及添加生长因子（EGF 和 bFGF）对体细胞核 移植克隆胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数的影响，优 化猪体细胞克隆胚胎体外培养条件，提高克隆胚胎的
(猪禽生产学课件)第二节 妊娠母猪
三．妊娠母猪营养需要的特点
1.合成代谢效率高
妊娠母猪对饲料营养不仅具有较强的同化能 力，而且当营养不足时，还可以分解自身 体内营 养，以保证胎儿发育。妊娠母猪在激素（孕酮、生 长激素）作用下，对能量和蛋白质的利用率提高（ 同一饲粮，妊娠母猪对消化N利用率为99％，而空 怀母猪为69％）。
妊娠母猪在低能量、低蛋白水平下，仍能获得满 意的产仔数和仔猪初生重即基于上述原因。NRC 在20年内，将妊娠母猪的营养需要下降33％。
表4－4. 母猪代谢体重和维持能量需要
胎次 初重kg 1 145 2 170 3 195 4 220 5 245 >6 270
末重kg 190 215 240 265 290 290
平均体重kg 167.5 192.5 217.5 242.7 267.5 280.5
代谢体重W0.75 46.6 51.6 56.6 61.4 66.1 68.4
第二节妊娠母猪的饲养管理
猪的妊娠期为114天，变动范围102－128天。为便于 记忆，可记为“三、三、三”，即三月三周零三天。
1一.妊.妊娠娠的鉴鉴定定
意义： 1.对未妊娠的母猪及时采取措施，缩短空怀期，降低生 产成本。 2.对没有繁殖能力的母猪及时淘汰。
3.对已妊娠的母猪要转入妊娠期的饲养管理。
（二）妊娠中期的诊断（20～30天）
维持能量MJ/天 21.42 23.77 26.07 28.28 30.42 31.46
表4－5.妊娠母猪的饲养标准（我国兼用型），％
化易引起多精子入卵受精，形成多倍体，多于17天 前死亡。
b. 配种的次数 两次配种比一次配种的产仔数多。 c. 公猪遗传基因的影响 凡经常出现寡胎或屡配不 孕的亲本要淘汰。
动物克隆 第三章胚胎干细胞分离培养
第三章胚胎干细胞分离培养1981年，Evens等首次发现小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)在体外具有稳定增殖并维持未分化状态及分化全能性潜能的特性，并成功建立小鼠ESCs系[1]。
由于ESCs独特的生物学特性，ESCs方面的研究迅速成为生命科学研究领域的热点之一，1999年－2000年连续两年被评为世界十大科技新闻。
ESCs已成为分子遗传学、发育生物学、细胞工程、组织工程等研究的重要工具，在研究细胞分化机制、临床治疗、转基因等方面有着重要的意义。
随着对干细胞研究的不断深入，人们将逐渐掌握和利用干细胞，还将推动相关学科的发展。
文章综述了ESCs的研究概况、体外分离培养、生物学特性、鉴定方法、影响ESCs分离培养的因素、存在问题以及应用前景等。
1 胚胎干细胞研究概况ESCs的研究最早要追溯到畸胎瘤细胞的发现，但真正意义上的开始却是1981年Evens等首先从延缓着床的胚泡分离培养到小鼠的ESCs，并建立小鼠的ESCs系，之后ESCs研究迅速发展，已在大鼠、仓鼠、猪、牛、水貂、兔、山羊、绵羊、恒河猴和人等多种哺乳动物上建立了类ESCs系[2]。
近几年来，ESCs研究在ESCs来源与培养方法、探索建立和维持ESCs系的条件、定向诱导分化、遗传操作、疾病动物模型的治疗等方面取得了一定的进展。
研究人员利用体细胞核移植技术进行胚胎重建，从克隆胚胎中成功得到小鼠、兔和人等多种哺乳动物ESCs[3-5]；利用孤雌激活技术建立小鼠和非人灵长类孤雌激活胚胎源的ESCs系[6]，这些为ESCs的分离克隆开辟了新的途径。
利用定向诱导分化技术成功将ESCs分化为造血细胞、内皮细胞、肝细胞、脂肪细胞、软骨细胞、神经细胞、胰岛细胞、心肌细胞、成骨细胞，甚至滋养层细胞和生殖细胞等所有3 个胚层的细胞类型[7-13]。
试验表明，人ESCs 能有效治疗心肌梗死、糖尿病、中风等疾病。
国内在ESCs方面的研究起步较晚，但发展迅速，在相关领域做了大量的研究。
人猪杂交实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景随着医学技术的不断发展，器官移植已成为治疗多种疾病的重要手段。
然而，供体器官的短缺、免疫排斥反应等问题严重制约了器官移植的广泛应用。
近年来，科学家们尝试通过生物技术手段，将人类干细胞植入动物胚胎中，以期培育出可供移植的器官。
本实验旨在探讨人猪杂交的可能性，为解决人类器官移植难题提供新的思路。
二、实验目的1. 验证人猪杂交胚胎的培育技术；2. 探究人类干细胞在猪胚胎中的生长和发育情况；3. 为未来人类器官移植提供实验依据。
三、实验材料与方法1. 实验材料- 人类干细胞- 猪胚胎- 代孕母猪- 实验室设备（显微镜、培养箱、离心机等）2. 实验方法（1）提取人类干细胞：从健康志愿者体内采集血液，分离出单个核细胞，经过体外培养和诱导分化，得到人类干细胞。
（2）制备猪胚胎：从健康母猪体内采集卵母细胞，经过体外成熟、受精、胚胎培养等步骤，得到早期猪胚胎。
（3）人猪杂交胚胎的制备：将人类干细胞与猪胚胎进行体外融合，形成人猪杂交胚胎。
（4）胚胎移植：将人猪杂交胚胎移植到代孕母猪体内，观察胚胎的发育情况。
（5）组织学观察：对移植后的胚胎进行组织学观察，分析人类干细胞在猪胚胎中的生长和发育情况。
四、实验结果1. 成功制备人猪杂交胚胎：通过体外融合技术，成功制备了人猪杂交胚胎。
2. 胚胎发育：将人猪杂交胚胎移植到代孕母猪体内，观察到胚胎在28天内正常发育，形成了心脏、肝脏等器官的前体。
3. 组织学观察：对移植后的胚胎进行组织学观察，发现人类干细胞在猪胚胎中成功整合，并参与了胚胎的发育过程。
五、实验讨论1. 人猪杂交胚胎的培育成功，为人类器官移植提供了新的思路。
通过将人类干细胞植入动物胚胎中，有望培育出可供移植的器官，解决供体器官短缺问题。
2. 本实验成功地将人类干细胞整合到猪胚胎中，表明人类干细胞可以在猪胚胎中生长和发育。
这为未来人类器官移植提供了实验依据。
3. 然而，人猪杂交实验仍处于初步阶段，存在伦理、技术等方面的问题。
猪的胚胎冷冻移植方法
猪的胚胎冷冻移植方法猪的胚胎冷冻移植是一种利用现代生物技术来保存和传播猪种资源的方法。
它通过将猪的胚胎冷冻保存，并在需要时通过移植到合适的母猪体内进行恢复和发育，实现猪种资源的有效利用和保护。
胚胎冷冻移植技术的全过程主要包括胚胎的获取、冷冻保存和移植三个环节。
首先，获取猪的胚胎是冷冻移植的前提。
常用的获取方法有两种：一种是从捐赠母猪中获取受精卵，通过人工授精或自然交配方式获得受精卵；另一种是通过体外受精技术，利用体外受精器或显微操作将卵子和精子进行体外受精，得到受精卵。
在获取胚胎的过程中，要保证胚胎的质量和数量，确保移植后能够正常发育和生长。
接下来是冷冻保存的步骤。
冷冻保存旨在通过降低胚胎的新陈代谢以及抑制任何可能对胚胎发育产生不利影响的因素，达到保护和延长胚胎存活时间的目的。
具体操作包括调整胚胎渗透压、添加保护剂以及采用合适的冷冻速率等。
常用的冷冻保护剂包括甘油、乙二醇和胸腺素等，它们能够有效地保护胚胎细胞，减少冷冻过程中的细胞损伤。
在冷冻保存过程中，胚胎要经过一系列的步骤，如预冷、冷冻、真空干燥和封存等，以确保胚胎的冷冻质量和存活率。
最后是胚胎移植环节。
胚胎移植主要包括胚胎解冻、移植和后续管理三个步骤。
解冻胚胎时，要通过逐渐升温的方式将胚胎从冷冻状态解冻，以避免温度过快变化对胚胎造成伤害。
解冻后的胚胎要尽快移植到合适的母猪体内，在移植过程中要注意避免任何对胚胎的伤害和感染，以提高移植成功率。
移植后，要进行相应的饲养和管理，定期检查胚胎的发育情况，保证母猪的生产和繁殖效果。
总的来说，猪的胚胎冷冻移植技术可以有效地保存和传播猪种资源，使其能够更好地应用于猪种改良和繁殖。
这项技术需要在保证胚胎质量和数量的前提下，进行胚胎的获取、冷冻保存和移植等步骤，以确保冷冻移植的效果和成功率。
未来，随着生物技术的进一步发展和应用，猪的胚胎冷冻移植技术将会取得更加重要的应用价值和研究成果。
猪饲料配方
猪饲料配方作者—阳光2017.8生活在城市中的您，多久没有吃过正真的猪肉了……猪肉，是我们每餐必不可少的食物，但目前市场上卖的100%都是饲料猪肉，猪都是吃饲料长大的！我们都知道饲料的成分，添加有生长激素、瘦肉精、增白增亮剂、药物等等，曾无数次被媒体报道。
更有甚者，很多病死猪肉也直接在市场上销售，但我们每次去菜市场买肉有谁知道这些肉的来路？所以现在为什么越来越多的人得癌症、慢性疾病、肥胖、儿童早熟等等，都是和我们长期吃了这些不安全、不健康的食物有关系！猪在生长过程中的营养需求主要来自于饲料，饲料营养价值的高低将直接决定猪的生产性能，而饲料成本约占整个养猪成本的70%以上，因此饲料配制的合理性又将决定养猪者的经济效益。
仔猪、生长育肥猪、母猪和种公猪等不同类的饲养对象营养需求也不同，按照不同饲养阶段、不同种类、不同饲养目的以及原料特点等合理配制饲料，方能获得最大的生产收益。
一、饲料配制的原则①选择饲养标准应根据生产实际情况，并按照猪可能达到的生产水平、健康状况、饲养管理水平、气候变化等适当调整;②因地制宜，因时制宜，尽量利用当地现有饲料资源;③注意饲料的适口性，避免选用发霉、变质或有毒的饲料原料：④注意考虑猪的消化生理特点，选用适宜的饲料原料，并力求多样搭配：⑤配合饲料要注意经济的原则，尽量选用营养丰富、质优价廉的饲料原料。
二、常用猪饲料适宜配比1.粮食类饲料主要包括玉米、大麦、小麦、高梁、蚕豆、豌豆等。
一般用量为饲料总量的50%，最多不超过60%。
2.饼类饲料主要包括菜籽饼、花生饼、棉籽饼、大豆饼、芝麻饼等。
饼类饲料的配合比例为饲料总量的10%～20%。
大豆饼、花生饼营养好，可配25%;菜子饼、棉籽饼应低于10%。
菜籽饼和棉籽饼作饲料要先脱毒，其他饼类只需蒸煮或炒熟并配合饲喂即可。
仔猪饲料不宜加饼类。
3.糠类饲料该类饲料有米橡，麦糠、甘薯藤糠、花生藤糠、蚕豆叶糠等。
一般用量为饲料总量的10%～15%，最多不超过20%。
猪胚胎体外生产技术的初步研究的开题报告
猪胚胎体外生产技术的初步研究的开题报告题目：猪胚胎体外生产技术的初步研究一、研究背景和意义现代畜禽生产中，猪是重要的经济性动物之一，其肉类和副产品的需求量不断增长。
然而，传统的繁殖技术存在着很多局限性，如受精率低、死胎率高、疾病易传染等等。
传统的繁殖技术已经难以满足畜禽生产的需求，因此，对猪胚胎体外生产技术的研究显得尤为重要。
该技术可以大大提高受精率，降低死胎率，减少疾病传播的风险，提高繁殖效率和经济效益，是现代猪业发展所必须的。
二、研究内容和重点本文的研究主要围绕猪胚胎体外生产技术展开。
具体研究内容包括：（1）猪胚胎的体外培养条件优化：基于前人的研究成果，本文将在细胞培养基、温度、CO2浓度、营养成分等方面进行优化，以建立适合猪胚胎体外生产的培养体系。
（2）猪胚胎的体外孕育技术：本文将通过体外受精和体外培养等途径，探究不同条件下猪胚胎的发育情况，比较各种体外孕育方法优缺点，找到最优的孕育方法。
（3）猪胚胎的体外移植试验：建立体外生产的猪胚胎移植到母猪子宫内的实验模型，探究猪胚胎的体外生产是否能够成功地进行猪的繁殖，比较体外生产与传统方法的效果差异。
三、研究方法和流程（1）猪胚胎的体外培养条件优化采用响应面试验和正交试验两种方法，寻找细胞培养基、温度、CO2浓度、营养成分对猪胚胎生产的影响，找到适合猪胚胎体外生产的最优条件。
（2）猪胚胎的体外孕育技术采用体外受精和体外培养两种方法进行比较研究，观察猪胚胎的发育情况，记录胚胎发育速度、质量和数量等指标，分析不同方法下孕育效果，找到最优的孕育方法。
（3）猪胚胎的体外移植试验建立体外生产的猪胚胎移植到母猪子宫内的实验模型，观察移植后的胚胎存活率、发育情况和成活率等指标，比较体外生产与传统方法的效果差异。
四、研究预期结果和贡献通过对猪胚胎体外生产技术的研究，本文将找到最优的体外孕育方法和移植方案，并建立适合猪胚胎体外生产的培养体系，为现代猪业的发展提供基础理论和实践指导。
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9
Cysteine
0.57mM
0.006g
10
超纯水
50ml
(5)猪洗清液（DPBS）（pH=7.8）
1
KCl
2.7mM
0.0201g
2
K3
MgCl2
0.5mM
0.0048g
4
NaCl
138.0mM
0.8065g
5
Na2HPO3·12H2O
8.1mM
0.2901g
0.0308g
8
L-glutamine
1.00mM
0.0073g
9
hypotaurine
5.00mM
0.0273g
10
BME amino acid*
20ml/L
1ml
11
MEM non-essential amino acid*
10ml/L
0.5ml
12
超纯水
50ml
*定容后加
（4）猪受精液（mTBM）
常用
（1）猪卵母细胞体外成熟培养液
1
TCM-199
0.95g
2
聚乙烯醇
0.1%
0.1g
3
D-葡萄糖
3.05 mM
0.0549g
4
丙酮酸钠
0.91mM
0.01g
5
NaHCO3
0.22g
6
青霉素
75μg/ml
0.0075g
7
链霉素
50μg/ml
0.005g
8
胱氨酸
0.57mM
0.006g
9
LH(100×)*
0.3mol/L
5.4651g
2
氯化钙
0.0147g
3
氯化镁
0.0020g
4
HEPES
0.0120g
注
氯化钙，氯化镁用皿称0.147g和0.20g。溶于1ml水作10*浓储，100ml体系加100μL。
细胞分离液配制
45%细胞分离液：用等量的90％细胞分离液与洗精液混匀，过滤除菌，4℃备用
90%细胞分离液：45ml Percoll加5ml lO×洗精液，混匀后，弃去3.75ml，再加3.75ml水，过滤除菌，4℃备用。
6
D-Glucose
5.6mM
0.1009g
7
Phenol Red
0.01mM
0.0004g
8
Na-pyruvate
0.33mM
0.0036g
9
青霉素
75μg/ml
0.0075g
10
链霉素
50μg/ml
0.005g
11
BSA
0.1%
0.1g
12
超纯水
100ml
电融合液（100ml）
1
Mannitol(甘露醇)
1
NaCl
113.1mM
0.3305g
2
KCl
3.0mM
0.0112g
3
CaCl2·2H20
7.5mM
0.0051g
4
Tris
20.0mM
0.1211g
5
Glucose
11.0mM
0.0991g
6
Na-pyruvate
5.0mM
0.0275g
7
caffeine
2.0mM
0.0194g
8
BSA
0.2%
1
NaCl
108.00mM
0.3156g
2
KCl
10.00mM
0.0373g
3
KH2PO4
0.35mM
0.0024g
4
MgSO4·7H2O
0.40mM
0.0024g
5
NaHCO3
25.07mM
0.1055g
6
Na-pyruvate
0.20mM
0.0011g
7
Ca-（lactate）2·5H2O
2.00mM
50μg/mL
10
FSH(100×)*
50μg/mL
11
EGF(1000×)*
10μg/mL
12
ddH2O
100ml
*临用四小时前加
（2）猪体外操作液
1
TCM-199
0.95g
9
0)2
NaHCO3
0.22g
3
Hepes
0.5958g
4
BSA
0.3g
5
ddH20
100ml
(3)猪胚胎培养液（PZM-3）