DNA与蛋白质分离与鉴定巩固习题

DNA与蛋白质分离与鉴定巩固习题
DNA与蛋白质分离与鉴定巩固习题

DNA与蛋白质分离鉴定巩固练习

姓名:_______________ 学号:________ 成绩:________________

一、选择题。

1.下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述,正确的是 ( )

A.DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的升高而增大

B.DNA对洗涤剂的耐受性差,对高温的耐受性强

C.在沸水浴的条件下,DNA遇二苯胺试剂会被染成蓝色

D.可以选择新鲜的猪血、花椰菜等作为实验材料

2.DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同;DNA不溶于酒精溶液,而细胞中的某些物质溶于酒精溶液。下图为“DNA的粗提取”实验的相关操作步骤,其操作目的错误的是()

A.①是洗涤红细胞、去除红细胞表面的杂质

B.②是稀释NaCl溶液至0.14mol/L,析出DNA

C.③是选用2mol/LNaCl溶液,溶解粘稠物中的DNA

D.④是纯化DNA,去除溶于95%酒精的杂质

3.在利用洋葱进行DNA粗提取的实验中,加入洗涤剂和食盐的作用分别是 ( )

A.破坏细胞壁;溶解DNA

B.破坏细胞膜;溶解DNA

C.破坏细胞壁;溶解蛋白质

D.破坏细胞膜;溶解蛋白质

4.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 ( )

A.析出DNA时要缓慢地加蒸馏水,当析出黏稠物时即不再加水

B.在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中,自变量是洗涤剂和食盐

C.提取的DNA溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色

D.将含有DNA的滤液放在60~75℃的恒温水浴箱中保温后过滤,能去除蛋白质杂质

5.去除DNA杂质时,可直接在滤液中加入(),反应10-15min

A.嫩肉粉

B.蒸馏水

C.2mol/lNaCl

D.酒精

6.在向溶解DNA的NaCl溶液中,不断加入蒸馏水的目的是()

A.加快溶解DNA的速度

B.加快溶解杂质的速度

C.减少DNA的溶解度,加快DNA析出

D.减小杂质的溶解度,加快杂质的析出

7.下列操作中,对DNA的提取量影响较小的是()

A.使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂,发出DNA等核物质

B.搅拌时,要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动

C.在析出DNA粘稠物时,要缓缓加蒸馏水,直至溶液中粘稠物不再增多

D.在用酒精沉淀DNA时,要使用冷酒精,甚至再将混合液放入冰箱中冷却

8.在研究DNA的基因样本前,采集来的血样需要蛋白水解酶处理,然后用有机溶剂除去蛋白质。用蛋白水解酶处理血样的目的是()

A.除去血浆中的蛋白质

B.除去染色体上的蛋白质

C.除去血细胞表面的蛋白质

D.除去血细胞中的所有的蛋白质,使DNA释放,便于进一步提纯

9.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验原理与方法的叙述,错误的是 ( )

A.DNA在NaCl溶液中的溶解度随着溶液浓度的减小而减小

B.向鸡血细胞中加入蒸馏水的目的是使其吸水涨破,释放出其中的DNA

C.向滤液中加入冷却的酒精的目的是除去DNA中的杂质,纯化DNA

D.向初步纯化的DNA中加入二苯胺溶液,沸水浴后可观察到溶液显蓝色

10.与析出DNA粘稠物有关的叙述,不正确的是 ( )

A.操作时缓缓滴加蒸馏水,降低DNA的溶解度

B.在操作A时,用玻璃棒轻缓搅拌,以保证DNA分子完整

C.加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度,两者均可析出

0 D.当丝状粘稠物不再增加时,此时NaCl 的浓度相当于0.14mol/L

11.本实验中有三次过滤:

⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 ⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl 溶液

⑶过滤溶解有DNA 的2mol/LNaCl 溶液,以上三次过滤分别为了获得 ( )

A.含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA 的滤液

B.含核物质的滤液、滤液中DNA 粘稠物、含DNA 的滤液

C.含核物质的滤液、滤液中DNA 粘稠物、纱布上的DNA

D.含较纯的DNA 滤液、纱布上的粘稠物、含DNA 的滤液

12.对“DNA 的粗提取和鉴定”实验的叙述,正确的是 ( )

A.利用DNA 能溶于酒精溶液,而蛋白质不溶于酒精溶液,可将DNA 与蛋白质分离

B.利用高温能使蛋白质变性,却对DNA 没有影响的特性,可将DNA 与蛋白质分离

C.在溶有DNA 的2mol /L 氯化钠溶液中缓缓加入蒸馏水,轻轻搅拌后过滤,取滤液进行以后的实验

D.在DNA 滤液中加入嫩肉粉,通过木瓜蛋白酶的作用,可将DNA 与蛋白质分离

13.凝胶色谱法可以有效的分离蛋白质的根据是 ( )

A.分子的大小

B.相对分子质量的大小

C.带电荷的多少

D.溶解度

14.使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中,不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 ( )

A.电荷的多少

B.分子的大小

C.肽链的多少

D.分子形状的差异

15.有关凝胶色谱法和电泳法的说法正确的是: ( )

A.它们都是分离蛋白质的重要方法

B.它们的原理相同

C.使用凝胶色谱法需要使用缓冲溶液而电泳不需要

D.以上说法都正确

16.SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS 的作用是 ( )

A.增大蛋白质的相对分子质量

B.改变蛋白质的形状

C.掩盖不同种蛋白质问的电荷差别

D.减少蛋白质的相对分子质量

17.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子,其分子大小、电荷的性质和数量情况如右图所示,下列有关蛋白质分离的叙述正确的是 ( )

A.将样品装入透析袋中透析12h ,若分子乙保留在袋内,则分子丙也保留在袋内

B.若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质,则分子甲移动速度最快

C.若将样品以2000r/min 的速度离心10min ,分子戊存在于沉淀中,则分

子甲也存在于沉淀中

D.若用SDS —聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子,

则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最远

18.下列实验装置可用于生物技术实践的相关实验,相关叙述不正确的是 (

)

A.装置甲可用于果酒或腐乳的制作

B.装置乙可用于血红蛋白提取和分离过程中对装于Ⅱ中的样品的处理

C.装置丙可先用于果酒的制作,后用于果醋的制作

D.使用装置丁进行蛋白质的分离时,Ⅱ中为待分离的样品

19.下列有关蛋白质提取和分离的说法,错误的是 ( )

A.透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质不能通过半透膜的特性

B.采用透析法使蛋白质与其他小分子化合物分离开来

C.离心沉降法通过控制离心速率使分子大小、密度不同的蛋白质分离

D.蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动

20.选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料,有何好处 ( )

A.血红蛋白是有色蛋白

B.红细胞无细胞核

C.红细胞蛋白质含量高

D.红细胞DNA 含量高

21.为了提取血红蛋白,从学校附近的屠宰场索取新鲜的猪血,对猪血处理的正确操作是 ( )

A.要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠

B.重复洗涤直到上清液呈红色为止

C.将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌

D.取血回来后,马上进行高速长时间离心

22.洗涤红细胞的目的是()

A.去除血清

B.去除杂蛋白

C.除去血小板

D.除去水

23.下列关于DNA和血红蛋白的提取与分离属于的叙述中,错误的是 ( )

A.可用蒸馏水涨破细胞的方法从猪红细胞中提取到DNA和蛋白质

B.用不同浓度的NaCl溶液反复溶解于析出DNA可去除部分杂质

C.透析法分离蛋白质的依据是利用蛋白质不能通过半透膜的特性

D.进一步分离与纯化血红蛋白可用凝胶色谱法、离心法、电泳法等

24.下列关于血红蛋白提取和分离实验中样品处理步骤的描述,正确的是 ( )

A.红细胞的洗涤:加入蒸馏水,缓慢搅拌,低速短时间离心

B.血红蛋白的释放:加入生理盐水和甲苯,置于磁力搅拌器上充分搅拌

C.分离血红蛋白:将搅拌好的混合液离心、过滤后,用分液漏斗分离

D.透析:将血红蛋白溶液装入透析袋,然后置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12h

25.以下关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述正确的是 ( )

A.红细胞洗涤过程中要加入5倍体积的蒸馏水,重复洗涤三次

B.将血红蛋白溶液放在质量分数为O.9%的NaCl溶液透析12小时

C.凝胶装填在色谱柱内要均匀,不能有气泡存在

D.蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较大的移动速度慢

26.下列对DNA和血红蛋白的提取与分离(鉴定)实验的分析正确的是 ( )

A.提取DNA或血红蛋白都可用猪的红细胞

B.DNA的粗提取与鉴定实验中,两次DNA析出的方法相同

C.实验中都要去除杂质以便得到较纯净的DNA或血红蛋白

D.提取出的血红蛋白溶解在双缩脲试剂中即可观察到紫色

27.下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作,其中正确的是 ( )

A.可采集猪血作为实验材料

B.用蒸馏水重复洗涤红细胞

C.血红蛋白释放后应低速短时间离心

D.洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液

28.在血红蛋白的整个提取过程中,不断用磷酸缓冲液处理的目的是 ( )

A.防止血红蛋白被O2氧化

B.血红蛋白是一种碱性物质,需要酸中和

C.磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程

D.让血红蛋白处在稳定的pH范围内,维持其结构和功能

29.下列关于DNA和血红蛋白的提取与分离实验的叙述,错误的是 ( )

A.提取动物细胞中的DNA和蛋白质都可以采用蒸馏水涨破细胞的方法

B.采用不同浓度的NaCl溶液反复溶解与析出DNA的方法可去除蛋白质等杂质

C.蛋白质纯化过程中采用透析法可去除溶液中的小分子杂质

D.血红蛋白只能采用凝胶色谱法纯化,DNA则可采用电泳、盐析等方法纯化

30.下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中,错误的是()

A.采集血样后要高速短时间离心获得血细胞

B.洗涤三次后如上清液仍有黄色,可增加洗涤次数,否则血浆蛋白无法除净。

C.在蒸馏水和甲苯的作用下,细胞破裂,释放出血红蛋白

D.释放血红蛋白后再经过离心,就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来

31.下列有关“血红蛋白提取和分离”的相关叙述中,正确的是 ( )

A.用蒸馏水进行红细胞的洗涤,其目的是去除细胞表面杂蛋白

B.将血红蛋白溶液进行透析,其目的是去除相对分子质量较大的杂质

C.血红蛋白释放时加入有机溶剂,其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂

D.整个过程不断用磷酸缓冲液处理,是为了维持血红蛋白的结构

32.在装填凝胶柱时,不能有气泡存在的原因是 ( )

A.气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果

B.气泡阻碍蛋白质的运动

C.气泡与蛋白质发生化学反应

D.气泡在装填凝胶的时候,使凝胶不紧密

33.装填凝胶色谱柱时,下端的尼龙管应 ( )

A.先打开后关闭

B.关闭

C.先关闭后打开

D.打开

34.样品的加入和洗脱的叙述正确的是 ( )

A.先加入1ml透析后的样品

B.加样前要使缓冲液缓慢下降全部流出

C.如果红色带均匀一致的移动,说明色谱柱制作成功

D.洗脱时可以用缓冲液也可以用清水

35.样品的加入和洗脱的操作不正确的是()

A.加样前,打开色谱柱下端的流出口,使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面

B.加样后,打开下端出口,使样品渗入凝胶床内

C.等样品完全进入凝胶层后,关闭下端出口

D.用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端,不要破坏凝胶面

36.下列关于血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳试验的说法,不正确的是()

A.实验所用的巴比妥缓冲液的PH为8.6

B.点样是在薄膜的光泽面上进行的

C.实验后可以得到五条色带

D.整个实验最关键的步骤是点样

37.血清蛋白电泳时通常用PH为8.6的缓冲液,此时各种蛋白质带有的电荷为()

A.清蛋白带正电荷,其他球蛋白带负电荷

B.清蛋白带负电荷,其他球蛋白带正电荷

C.清蛋白与其他球蛋白均带负电荷

D.清蛋白与其他球蛋白均带正电荷

38.某蛋白质pI为7.5,在pH为6.0的缓冲液中进行自由界面电泳,其泳动方向为()

A.向负极移动

B.向正极移动

C.不运动

D.同时向正极和负极移动

二、多项选择题。

1.下面是植物细胞中DNA提取过程流程图,下列叙述正确的 ( )

A.植物组织置于液氮中可防止DNA被水解

B.本实验运用的原理之一是DNA不溶于苯酚

C.操作流程图中的A代表“上清液”

D.为鉴定A中含有DNA,需使用二苯胺等试剂

2.有关DNA粗提取的操作,正确的是 ( )

A.盛放鸡血细胞液的容器最好是塑料容器

B.将鸡血细胞液与蒸馏水混合,用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,释放DNA

C.向溶解DNA的烧杯中加蒸馏水的目的是漂洗DNA

D.用漏斗和滤纸过滤析出的DNA,得到DNA粘稠物

3.在“DNA的粗提取和鉴定”实验中,发现DNA提取量不足。下列有关原因分析正确的是 ( )

A.经蒸馏水处理的红细胞用玻璃棒搅拌的时间过短

B.用NaCl进行盐析,所调制的NaCl溶液浓度未达到2mol/L

C.DNA再溶解时,玻璃棒搅拌方向是单向的

D.用玻璃棒搅拌时力量过猛

4.与析出DNA粘稠物有关的叙述,正确的是()

A.操作时缓缓滴加蒸馏水,降低DNA的溶解度

B.在操作A时,用玻璃棒轻缓搅拌(可以加速细胞的破裂),以保证DNA分子完整

C.加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度,两者均可析出

D.当丝状粘稠物不再增加时,此时NaCl的浓度相当于0.14mol/L

5.关于DNA的粗提取与鉴定实验的表达哪项是正确的()

A.离心后除去血液中的上清液是为了除去杂质

B.离心沉淀的血细胞中加水是为了提取DNA

C.向溶解的DNA烧杯中加蒸馏水是漂洗DNA

D.NaCl溶液的物质的量浓度为2mol/L时,DNA溶解

6.下列DNA粗提取的实验操作中,经离心或过滤后取上清液或滤液的有()

A.在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠,混合均匀后离心

B.在盛有血细胞的塑料烧杯中加蒸馏水,快速搅拌后过滤

C.在2mol/L的氯化钠溶液中放入丝状物,轻轻搅拌后过滤

D.在溶有DNA的氯化钠溶液中缓缓加入蒸馏水,轻轻搅拌后过滤

7.下列关于DNA和血红蛋白的提取与分离实验的叙述中,正确的有 ( )

A.提取动物细胞中的DNA和蛋白质可以采用蒸馏水涨破细胞的方法

B.采用不同浓度的NaCl溶液反复溶解与析出DNA的方法可去除蛋白质等杂质

C.蛋白质纯化过程中采用透析法可去除溶液中的大分子杂质

D.DNA粗提取过程中,用体积分数为95%的冷酒精可以进一步纯化DNA

8.下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中,正确的是()

A.采集血样后要高速短时间离心获得血细胞

B.洗涤三次后如上清液仍有黄色,可增加洗涤次数,否则血浆蛋白无法除净。

C.在蒸馏水和甲苯的作用下,细胞破裂,释放出血红蛋白

D.释放血红蛋白后再经过离心,就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来

9.下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述正确的是()

A.样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液

B.通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质,此为样品的粗提取

C.可通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去,即样品的纯化

D.可通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度

10.蛋白质的分离与提纯技术是蛋白质研究的重要技术,下列有关叙述正确的 ( )

A.根据蛋白质分子不能通过半透膜的特性,可将样品中各种不同蛋白质分离

B.根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小,可通过电泳分离蛋白质

C.根据蛋白质相对分子质量的大小,可通过凝胶色谱法分离蛋白质

D.根据蛋白质的分子大小、密度不同,可通过离心沉降法分离蛋白质

三、非选题。

1.某同学以菜花为实验材料,进行“DNA的粗提取与鉴定”实验,步骤如下:

步骤一:称取30g菜花,去梗取花,切碎。

步骤二:将碎菜花放入研钵中,倒入10mL研磨液,充分研磨10min。

步骤三:在漏斗中垫上滤纸,将菜花研磨液过滤到烧杯中。在冰箱中放置几分钟,取上清液。

步骤四:将一倍体积的上清液倒入两倍体积的某溶液中,并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液。将絮状物缠绕在玻璃棒上。

请回答下列问题:

(1)请指出并改正该同学实验操作中的错误:___________________。

(2)步骤二的目的是使菜花细胞破碎,释放DNA,加入研磨液的主要成分有____和___等。(3)如要使步骤三所得上清液中杂质减少,可进行______操作后再置于冰箱。

(4)步骤四中所用两倍体积的某溶液为_________________,需“缓缓、轻轻地”搅拌溶液的原因是______________。

(5)简要说明鉴定步骤四所得絮状物是DNA的基本实验设计思路:____________________ ____________________________________________________________________________。2.某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动,具体步骤如下:材料处理:称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份,每份10 g。剪碎后分成两组,一组置于20℃、另一组置于-20℃条件下保存24 h。DNA粗提取:

第一步:将上述材料分别放入研钵上,各加入15 mL研磨液,充分研磨。用两层纱布过滤,取滤液备用。

第二步:先向6只小烧杯中分别注入10 mL滤液,再加入20 mL体积分数为95%的冷酒精溶液,然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌,使絮状物缠绕在玻璃棒上。

第三步:取6支试管,分别加入等量的2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮状物。

DNA检测:在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂,混合均匀后,置于沸水中加热5 min,待

分析上述实验过程,回答下列问题:

(1)该探究性实验课题名称是:_________________________________________________。

(2)第二步中“缓缓地”搅拌,这是为了减少______________________________________。

(3)根据实验结果,得出结论并分析。

①结论1:与20℃相比,相同实验材料在-20℃条件下保存,DNA的提取量较多。

结论2:____________________________________________________________。

②针对结论1,请提出合理的解释:__________________________________________。

(4)氯仿密度大于水,能使蛋白质变性沉淀,与水和DNA均不相溶,且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度,依据氯仿的特性,在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是:_______________________________________________________________________,然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。

9.右图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置,请回答下列问题:

(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有___________功能。我们通常选用猪、牛、羊等动物的血液进行实验实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,

马上进行离心,收集血红蛋白溶液。其中加入柠檬酸钠的目

的是。

(2)甲装置中,B是血红蛋白溶液,则A是__________;

乙装置中,C溶液的作用是_______________________。

(3)甲装置用于_________,目的是________________。用

乙装置分离蛋白质的方法叫_____________________,

是根据______________________分离蛋白质的有效方法。在

装填凝胶柱时不得有气泡的原因是_ _ 。

(4)用乙装置分离血红蛋白时,待______________________________时,用试管收集流出液,每5mL收集一管,连续收集。

(5)最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电脉进行,在电泳过程中,影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的、以及分子的形状等。

4.下面是某研究小组开展的“猪血浆某白蛋白的提取及分子量测定”研究,请协助完成有关问题:

材料仪器:新鲜猪血、低速冷冻离心机、透析袋、电泳仪等

化学试剂:pH值为7.4的缓冲液、柠檬酸钠、奈氏试剂(与NH4+反应出现黄色或红棕色沉淀)、饱和(NH4)2S O4溶液、生理盐水等

实验步骤:

⑴样品获取:向新鲜猪血中加入,静置一段时间后取上层血浆。

⑵盐析法粗提蛋白质:

①向血浆中加入一定体积饱和(NH4)2S O4溶液,使(NH4)2S O4的浓度达到 50%,充分混合后静置、离心,取沉淀物。

②向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解,再向其中加入一定体积的饱和(NH4)2S O4溶液,使(NH4)2S O4的浓度达到 33%,充分混合后静置、离心,取沉淀物。

③重复步骤①、②2-3次,最后用生理盐水将沉淀溶解即得粗提品。

盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是,重复步骤①、②的主要目的是。

⑶透析除盐:将粗提品装入透析袋,以pH值为7.4的缓冲液作透析液,每隔4h更换一次透析液,每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH4+量。利用缓冲液做透析液的目的

是。检测中,若观察到透析液时,即可终止透析。

⑷凝胶色谱法分离:透析后的样品经凝胶柱洗脱,获得纯净血浆某白蛋

白样品。

⑸分子量测定:化学物质SDS能使蛋白质变性,解聚成单条肽链。在聚

丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS,电泳迁移率完全取决于肽链的

分子大小。右图为本实验中用SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白

蛋白的结果。根据电泳结果,某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两

条肽链”的结论,这种说法可靠吗?理由是。

答案

1—5CABDA, 6—10CBDAC, 11—15ADBBB, 16—20CADDA, 21—25ABACC, 26—30CADDA, 31—35DADCA, 36—38BCA, 1AD, 2AB, 3ABD, 4ABD, 5ABD, 6BC, 7ABD, 8BCD, 9ACD, 10BCD, 1.(1)滤纸应改为纱布(或尼龙布)(2)洗涤剂 NaCl (3)离心

(4)体积分数为95%的冷酒精防止DNA断裂

(5)将絮状物溶于0.015mol/L(或2mol/L)的NaCl溶液中,加入二苯胺试剂,沸水浴加热,观察颜色变化,同时用相应浓度的NaCl做对照实验。

2.(1)探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响

(2)DNA断裂

(3)①等质量的不同实验材料,在相同的保存温度下,从蒜黄提取的DNA量最多

②低温抑制了相关酶的活性,DNA降解速度慢

(4)将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混和,静置一段时间,吸取上清液

3.(1)运输防止血液凝固(2)磷酸缓冲液洗脱血红蛋白(3)透析(粗分离)去除样品中分子量较小的杂质凝胶色谱法相对分子质量的大小气泡会搅乱洗脱液

中蛋白质的洗脱次序,减低分离效果(4)红色的蛋白质接近色谱柱底端(5)纯度鉴定,带电性质分子大小

蛋白质的提取与检测

蛋白质的提取与检测

蛋白质的提取与检测 第一节细胞总蛋白的提取及含量测定 【基本原理】 蛋白质含量测定法是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种经典的方法,即定氮法、双缩脲法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有两种近年普遍使用起来的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)与二辛可宁酸法(BCA法)。值得注意的是,上述方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质,因为一种蛋白质溶液用这几种方法测定有可能得出不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的,都有其优缺点。在选择方法时应考虑:①实验对测定所要求的灵敏度和精确度;②蛋白质的性质;③溶液中存在的干扰物质;④测定所要花费的时间。 Lowry法:蛋白质与碱性铜溶液中的二价铜离子络和使得肽键伸展,从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与磷钼钨酸反应并产生深蓝色,在750nm有最大光吸收值。在一定浓度范围内,反应液颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比,由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同,因此在测定时需使用同种蛋白质作标准。 Bradford法:蛋白质与染料考马斯亮蓝G-250结合,使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm,溶液的颜色由棕黑色变为蓝色。在一定的线性范围内,反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。

BCA (Bicinchoninic acid)法:二价 铜离子在碱性 的条件下,可以 被蛋白质还原 成一价铜离子 (Biuret reaction)并与 BCA相互作用 产生敏感的颜 色反应。两分子 的BCA螯合一 个铜离子,形成 紫色的反应复 合物。该水溶性 的复合物在 562nm处显示 强烈的吸光性, 吸光度和蛋白 浓度在广泛范 围内有良好的 线性关 0.118 0.05 0.154 0.1 0.213 0.2 0.283 0.3 0.329 0.4 0.404 0.5 第二节SDS-PAGE电泳 【基本原理】

(完整版)质粒DNA的提取、纯化与鉴定

分子生物学实验报告 题目:质粒DNA的提取、纯化与鉴定 姓名:学号:班级:时间: 一、实验目的: 1.学习并掌握凝胶电泳进行DNA的分离纯化的实验原理。 2.学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。 3.学习并掌握凝胶中DNA的分离纯化方法。 4.掌握碱变性提取发的原理及各种试剂的作用。 5.掌握碱变性法提取质粒DNA的方法。 二、实验原理: 1.质粒DNA的提取——碱变性提取法: 提取和纯化质粒DNA的方法很多,目前常用的有:碱变性提取法、煮沸法、羟基磷灰石柱层析法、EB-氯化铯密度梯度离心法和Wizard法等。其中,碱变性提取法最为经典和常用,适于不同量质粒DNA的提取。该方法操作简单,易于操作,一般实验室均可进行。提取质粒DNA纯度高,可直接用于酶切、序列测定及分析。EB-氯化铯密度梯度离心法,主要适合于相对分子质量与染色体DNA相近的质粒,具有纯度高、步骤少、方法稳定,且得到的质粒DNA多为超螺旋构型等优点,但提取成本高,需要超速离心设备。少量提取质粒DNA还可用沸水浴法、Wizard法等,沸水浴法提取的质粒DNA中常含有RNA,但不影响限制性核酸内切酶的消化、亚克隆及连接反应等。 碱变性法提取质粒DNA一般包括三个基本步骤:培养细菌细胞以扩增质粒;收集和裂解细胞;分离和纯化质粒DNA。 在细菌细胞中,染色体DNA以双螺旋结构存在,质粒DNA以共价闭合环状形式存在。细胞破碎后,染色体DNA和质粒DNA均被释放出来,但两者变性与复性所依赖的溶液pH值不同。在pH值高达12.0的碱性溶液中,染色体DNA氢键断裂,双螺旋结构解开而变性;共价闭合环状质粒DNA的大部分氢键断裂,但两条互补链不完全分离。当用pH值4.6的KAc(或NaAc)高盐溶液调节碱性溶液至中性时,变性的质粒DNA可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中;但染色体DNA不能复性,而是与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心,与复性的溶于溶液的质粒DNA分离。溶于上清的质粒DNA,可用无水乙醇和盐溶液,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,使之凝聚而形成沉淀。由于DNA与RNA性质类似,乙醇沉淀DNA的同时,也伴随着RNA沉淀,可利用RNase A将RNA降解。质粒DNA溶液中的RNase A以及一些可溶性蛋白,可通过酚/氯仿抽提除去,最后获得纯度较高的质粒DNA。 2.凝胶电泳进行DNA分离纯化: 电泳(electrophoresis)是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定pH条件下,可以解离成带电荷的离子,在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质,它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中,其中的电离子会发生移动,移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异,就可

基因的分离定律专题复习

基因的分离定律 1.若选用玉米为实验材料,重现孟德尔的研究历程.下列因素对得出正确实验结论几乎没有影响的是( ) A .所选实验材料是否为纯合子 B.所选相对性状的显隐性是否易于区分 C.所选相对性状是否受一对遗传因子控制 D.是否严格遵守实验操作流程和统计分析方法 2.孟德尔在豌豆杂交试验中,成功利用“假说一演绎法”发现了两个遗传定律。下列有关分离定律发现过程的叙述中不正确的是( ) A.提出的问题是:为什么F2出现了3∶ 1的性状分离比 B .假设的核心是:F1 产生了数量相等的带有不同遗传因子的两种配子 C.根据假设对测交实验结果进行演绎并进行测交实验验证假设 D.做了多组相对性状的杂交试验,F2 的性状分离比均接近3∶1,以验证其假设 3.关于孟德尔的一对相对性状杂交实验和摩尔根的果蝇杂交实验,下列叙述不正确的是( ) A .实验中涉及的性状均受一对等位基因控制 B.两实验都采用了统计学方法分析实验数据 C.两实验都设计了测交实验对推理过程及结果进行检验 D.前者采用“假说一演绎法”,后者采用“类比推理”的研究方法 4.在生物科学史上,有一些著名的假说,这些假说是科学家通过一定的实验后提出来的。以下对应关系正确的是( ) A.豌豆一对相对性状的杂交实验——不同的遗传因子在形成配子时自由组合 B.果蝇的眼色伴性遗传实验——遗传的染色体学说 C.肺炎双球菌的活体转化实验——S 型菌可能有遗传因子 D.达尔文父子的向光性实验——有某种化学物质从苗尖传递到了苗尖下部 5.在下列实例中,分别属于相对性状和性状分离的是( ) ①狗的长毛与卷毛 ②兔的长毛和猴的短毛 ③人的单眼皮和双眼皮 ④高茎豌豆与矮茎豌豆杂交,后代全为高茎豌豆⑤高茎豌豆与矮茎豌豆杂交,后代有高有矮,数量比接近1∶ 1 ⑥圆粒豌豆的自交后代中,圆粒豌豆与皱粒豌豆分别占3/4 和1/4 A.③⑥B.①④ C.②⑤D.③④ 6.孟德尔一对相对性状的杂交实验中,实现3 ∶1 的分离比必须同时满足的条件是( ) ①观察的子代样本数目足够多②F1形成的两种配子数目相等且生活力相同③雌、雄配子结合的机会相等④F2不同基因型的个体存活率相等⑤等位基因间的显隐性关系是完全的⑥F1 体细胞中各基因表 达的机会相等 A .①②⑤⑥ B.①③④⑥ C.①②③④⑤ D.①②③④⑤⑥ 7.蜜蜂的雄蜂由未受精的卵细胞直接发育而成,雌蜂(蜂王) 、工蜂由受精卵发育而成。蜜蜂的体色中,褐 色相对于黑色为显性,控制这一相对性状的一对等位基因位于常染色体上,现有褐色雄蜂与黑色蜂王杂交, 则F1 的体色将( ) A .全为褐色 B.褐色个体数:黑色个体数=3∶1 C.蜂王、工蜂全为褐色,雄蜂全为黑色

11.6 生化实验报告 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析

血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析 【实验目的】 1、了解蛋白质分离提纯的总体思路。 2、掌握盐析法、凝胶层析法和离子交换层析的实验原理及操作技术 3、掌握电泳法分离纯化蛋白质的方法。 【实验原理】 1、蛋白质的粗提——盐析法 胶体的盐析是加盐,盐中的带电粒子使蛋白质周围的水化膜减弱,胶粒溶解度降低,形成沉淀析出的过程,是胶体的聚沉现象的一种。向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用就叫做盐析。盐析不能使蛋白质变性,可以复原。利用这个性质,可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质。蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目,亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后,由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质,致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时,离子强度发生改变,蛋白质表面的电荷大量被中和,蛋白质溶解度更加降低,之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同,不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同,从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液,使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏,导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。由于清蛋白的亲水性比球蛋白大,且清蛋白的分子比球蛋白小,所以清蛋白需要高浓度的盐溶液才能够发生盐析,低浓度的时候球蛋白发生盐析。盐析法分离蛋白质:各种蛋白质的颗粒大小、亲水程度、pI不同,盐析所需的盐浓度也不一样。调节盐浓度可使不同的蛋白质沉淀,从而达到分离的目的。 常用中性盐:硫酸铵、硫酸钠等。 硫酸铵:温度系数小,溶解度大,蛋白谱广,盐析效果好,不易引起变性。可用硫酸/氨水按需要调节pH值。 本实验中清蛋白分子小,亲水性强,在饱和硫酸铵溶液中可沉淀析出,而球蛋白分子大,亲水性弱,在半饱和硫酸铵溶液中即可沉淀析出。因此调节盐浓度可使球蛋白与清蛋白分离。 2、脱盐——凝胶层析法 凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析等。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。凝胶层析是按照蛋白质分子量大小进行分离的技术,又称之凝胶过滤,分子筛层析或排阻层析。 单个凝胶珠本身象个"筛子"。不同类型凝胶的筛孔的大小不同。如果将这样的凝胶装入一个足够长的柱子中,作成一个凝胶柱。当含有大小不同的蛋白质样品加到凝胶柱上时,比凝胶珠平均孔径小的蛋白质就要连续不断地穿入珠子的内部,这样的小分子不但其运动路程长,而且受到来自凝胶珠内部的阻力也很大,所以

蛋白质分离纯化的步骤

蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤: (一)材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有: 1. 机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。 2. 渗透破碎法 这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。 3. 反复冻融法 生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。 4. 超声波法 使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。 5. 酶法 如用溶菌酶破坏微生物细胞等。 (二)蛋白质的抽提 通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100 等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。(三)蛋白质粗制品的获得选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法: 1.等电点沉淀法不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。 2.盐析法 不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。 3.有机溶剂沉淀法 中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作,选择合适的有机溶剂浓度。 (四)样品的进一步分离纯化

DNA与蛋白质分离与鉴定巩固习题

DNA与蛋白质分离鉴定巩固练习 姓名:_______________ 学号:________ 成绩:________________ 一、选择题。 1.下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述,正确的是 ( ) A.DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的升高而增大 B.DNA对洗涤剂的耐受性差,对高温的耐受性强 C.在沸水浴的条件下,DNA遇二苯胺试剂会被染成蓝色 D.可以选择新鲜的猪血、花椰菜等作为实验材料 2.DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同;DNA不溶于酒精溶液,而细胞中的某些物质溶于酒精溶液。下图为“DNA的粗提取”实验的相关操作步骤,其操作目的错误的是() A.①是洗涤红细胞、去除红细胞表面的杂质 B.②是稀释NaCl溶液至0.14mol/L,析出DNA C.③是选用2mol/LNaCl溶液,溶解粘稠物中的DNA D.④是纯化DNA,去除溶于95%酒精的杂质 3.在利用洋葱进行DNA粗提取的实验中,加入洗涤剂和食盐的作用分别是 ( ) A.破坏细胞壁;溶解DNA B.破坏细胞膜;溶解DNA C.破坏细胞壁;溶解蛋白质 D.破坏细胞膜;溶解蛋白质 4.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 ( ) A.析出DNA时要缓慢地加蒸馏水,当析出黏稠物时即不再加水 B.在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中,自变量是洗涤剂和食盐 C.提取的DNA溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色 D.将含有DNA的滤液放在60~75℃的恒温水浴箱中保温后过滤,能去除蛋白质杂质 5.去除DNA杂质时,可直接在滤液中加入(),反应10-15min A.嫩肉粉 B.蒸馏水 C.2mol/lNaCl D.酒精 6.在向溶解DNA的NaCl溶液中,不断加入蒸馏水的目的是() A.加快溶解DNA的速度 B.加快溶解杂质的速度 C.减少DNA的溶解度,加快DNA析出 D.减小杂质的溶解度,加快杂质的析出 7.下列操作中,对DNA的提取量影响较小的是() A.使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂,发出DNA等核物质 B.搅拌时,要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动 C.在析出DNA粘稠物时,要缓缓加蒸馏水,直至溶液中粘稠物不再增多 D.在用酒精沉淀DNA时,要使用冷酒精,甚至再将混合液放入冰箱中冷却 8.在研究DNA的基因样本前,采集来的血样需要蛋白水解酶处理,然后用有机溶剂除去蛋白质。用蛋白水解酶处理血样的目的是() A.除去血浆中的蛋白质 B.除去染色体上的蛋白质 C.除去血细胞表面的蛋白质 D.除去血细胞中的所有的蛋白质,使DNA释放,便于进一步提纯 9.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验原理与方法的叙述,错误的是 ( ) A.DNA在NaCl溶液中的溶解度随着溶液浓度的减小而减小 B.向鸡血细胞中加入蒸馏水的目的是使其吸水涨破,释放出其中的DNA C.向滤液中加入冷却的酒精的目的是除去DNA中的杂质,纯化DNA D.向初步纯化的DNA中加入二苯胺溶液,沸水浴后可观察到溶液显蓝色 10.与析出DNA粘稠物有关的叙述,不正确的是 ( ) A.操作时缓缓滴加蒸馏水,降低DNA的溶解度 B.在操作A时,用玻璃棒轻缓搅拌,以保证DNA分子完整 C.加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度,两者均可析出

基因分离定律练习题一

1.1孟德尔的豌豆杂交实验(一)(I) 1.两株高茎豌豆杂交,后代高茎和矮茎植株数量的比例如图所示,则亲本的遗传因子组成可表示为() A.GG×gg C.Gg×Gg B.GG×Gg D.gg×gg 2.下列有关叙述中,正确的是() A.兔的白毛与黑毛、狗的长毛与卷毛都是相对性状 B.隐性性状是指生物体不能表现出来的性状 C.纯合子的自交后代中不会发生性状分离,杂合子的自交后代中不会出现纯合子 D.性状表现相同的生物,遗传因子组成不一定相同 3.下列叙述正确的是() A.生物体没有显现出来的性状称为隐性性状 B.亲本之中一定有一个表现为隐性性状 C.若子代中出现显性性状,则亲代中必有显性性状个体 D.在一对相对性状的遗传实验中,双亲只具有一对相对性状 4.水稻的晚熟和早熟是一对相对性状,晚熟受显性遗传因子(E)控制。现有纯合的晚熟水稻和早熟水稻杂交,下列说法不正确的是() A.F的遗传因子组成是Ee,性状表现为晚熟 1 B.F自交时产生的雌雄配子数量之比为1∶1 1 C.F自交后得F,F的遗传因子组成是EE、Ee和ee,其比例为1∶2∶1 122 D.F的性状表现为晚熟和早熟,其比例为3∶1 2 5.一对相对性状的亲本杂交子二代中()

A.所有的统计结果都等于3∶1B.统计的样本足够大时才符合3∶1 C.性状按3∶1的比例出现D.统计的样本越小越接近3∶1 6.下列为一对相对性状的杂交实验中性状分离现象的假设性解释,其中错误的是() A.生物的性状是由遗传因子决定的 B.体细胞中的遗传因子成对存在,互不融合 C.在配子中只含有每对遗传因子中的一个 D.生物的雌雄配子数量相等,且随机结合 7.孟德尔选用豌豆作为遗传实验材料的理由及对豌豆进行异花传粉前的处理是()①豌豆是闭花受粉植物②豌豆在自然状态下是纯种 ③用豌豆作实验材料有直接经济价值 ④豌豆各品种间具有一些稳定的、差异较大而且容易区分的性状 ⑤开花时期母本去雄,然后套袋⑥花蕾期母本去雄,然后套袋 A.①②③④;⑥C.①②④;⑥B.①②;⑤⑥D.②③④;⑥ 8.某水稻品种茎秆的高矮是一对相对性状,对两个纯合亲本杂交产生的F 1进行测交,其后代中杂合子的概率是() A.0B.25%C.50%D.75% 9.孟德尔在对一对相对性状进行研究的过程中,发现了分离定律。下列有关分离定律的几组比例中,能直接说明分离定律实质的是() A.F的性状表现比为3∶1B.F产生配子的比为1∶1 21 C.F的遗传因子组成比为1∶2∶1D.测交后代的比为1∶1 2 10.如图为豌豆的一对相对性状遗传实验过程图解,请仔细阅图后回答下列问题:

DNA与蛋白质分离与鉴定 巩固习题.docx

DNA 与蛋白质分离鉴定巩固练习 姓名: ______________ 学号: __________ 成绩: __________________ 一、选择题。 1. 下列有关“DNA 的粗提取与鉴定”实验的叙述,正确的是 ( ) A. DNA 在NaCl 溶液屮的溶解度随NaCl 浓度的升高而增大 B. DNA 对洗涤剂的耐受性差,对高温的耐受性强 C. 在沸水浴的条件下,DNA 遇二苯胺试剂会被染成蓝色 D. 可以选择新鲜的猪血、花椰菜等作为实验材料 2. DM 在不同浓度的NH1溶液屮溶解度不同;DNA 不溶于酒精溶液,而细胞屮的某些物质溶于酒精溶 液。下图为“DNA 的粗提取”实验的相关操作步骤,其操作目的错谋的是 ( ) 含DNA 的 浓NaCl 溶液 ④ A. ①是洗涤红细胞、去除红细胞表面的杂质 B. ②是稀释NaCl 溶液至0. 14mol/L,析出DNA C. ③是选用2mol/LNaCl 溶液,溶解粘稠物中的DNA D. ④是纯化DNA,去除溶于95%酒精的杂质 3. 在利用洋葱进行DNA 粗提取的实验屮,加入洗涤剂和食盐的作用分别是 ( ) A.破坏细胞壁;溶解DNA B.破坏细胞膜;溶解DNA C.破坏细胞壁;溶解蛋白质 D.破坏细胞膜;溶解蛋片质 4. 下列关于DNA 粗提取与鉴定的说法正确的是 ( ) A. 析出DNA 时要缓慢地加蒸憎水,当析出黏稠物时即不再加水 B. 在探究洗涤剂对植物细胞DNA 提取的影响实验中,H 变量是洗涤剂和食盐 C. 提取的DNA 溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色 D. 将含有DXA 的滤液放在60?75°C 的恒温水浴箱中保温麻过滤,能去除蛋H 质杂质 5. 去除DNA 杂质时,可直接在滤液屮加入( ),反应lO-lbmin A.嫩肉粉 B.蒸馆水 C.加ol/lNaCl D.酒精 6. 在向溶解DNA 的NaCl 溶液屮,不断加入蒸馄水的目的是 ( ) A. 加快溶解DNA 的速度 B.加快溶解杂质的速度 C.减少DNA 的溶解度,加快DNA 析出 D.减小杂质的溶解度,加快杂质的析岀 7. 下列操作屮,对DNA 的提取量影响较小的是 ( ) A. 使鸡血细胞在蒸催水屮充分破裂,发岀DNA 等核物质 B. 搅拌时,要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动 C. 在析出D\A 粘稠物时,要缓缓加熬憎水,直至溶液屮粘稠物不再增多 D. 在用酒精沉淀DNA 时,要使用冷酒精,甚至再将混合液放入冰箱屮冷却 8. 在研究叽A 的基因样木前,采集来的血样需要蛋H 水解酶处理,然示用有机溶剂除去蛋片 质。用蛋白水解酶处理血样的目的是 ( ) A. 除去血浆屮的蛋白质 B.除去染色体上的蛋白质 C.除去血细胞表瓯的蛋白质 D. 除去血细胞屮的所有的蛋白质,使DNA 释放,便于述一步提纯 9. 下列关于“DNA 的粗提取与鉴定”实验原理与方法的叙述,错误的是 ( ) A. DNA 在NaCl 溶液屮的溶解度随着溶液浓度的减小而减小 B. 向鸡血细胞中加入蒸催水的目的是使其吸水涨破,释放岀其屮的DNA C. 向滤液中加入冷却的酒精的目的是除去DNA 中的杂质,纯化DNA D. 向初步纯化的DNA 屮加入二苯胺溶液,沸水浴后可观察到溶液显蓝色 10. 与析出DNA 粘稠物有关的叙述,不正确的是 ( ) 黏稠物 2DDO 】/U NaCl 溶液 ③ 95%酒特

蛋白质提取、纯化、鉴定的方法(二)

蛋白质提取、纯化、鉴定的方法(二) 一、层析技术 1.离子交换层析的亲和洗脱这种技术结合了离子交换与亲和层析。如在某一pH时,目的蛋白质带正(负)电荷,用阳(阴)离子交换剂吸附,这一过程去除了很大一部分不吸附的杂蛋自。然后用该目的蛋白质的配体来洗脱,该配体特异性地结合目的蛋白质并使之洗脱,但不洗脱其他吸附的蛋白质,达到纯化的目的。注意,该配体需带有一定量的阴(阳)电荷,有效降低目的蛋白质与阳(阴)离子交换剂之间的电荷相互作用。 2.固相金属亲和层析重组蛋白质可在C-或N-端引入组氨酸标签,一般为6个组氨酸残基(His-tag)。这些组氨酸残基与过渡金属(transitionalmetals)Ni2+或Co2+形成配位键。用固相化的Ni2+或Co2+(如商品化的树脂,Ni-NTA)可吸附带有His-tag的重组蛋白质,用含有咪唑(imidazole)的缓冲液可洗脱重组蛋白质。注意,有些含有较多组氨酸的蛋白质也可与吸附剂结台,但较弱,因此可用低浓度的咪唑洗脱;在层析过程中不能引入金属螯合剂如EDTA;避免使用还原剂如DTT或DTE,但可用低浓度的巯基乙醇。 该技术也用于提取磷酸化的蛋白质。将螫合剂交联到树脂,螯合三价铁或三价镓,该亲和吸附剂可吸附混合物中的磷酸化的蛋白质。洗去不吸附的非磷酸化蛋白质后,用磷酸缓冲液即可将磷酸化蛋白质从该亲和吸附剂上洗脱。要注意的是酸性蛋白质也可被不同程度地吸附。 3.凝胶过滤该技术过去也被称为分子筛。构成凝胶的小珠(bead)中有大小不一的孔,分子量大的分子能进入较大的孔而不能进入小的孔,分子量小的则不仅能进入较大的孔也能进入小的孔,因此在层析过程中,小分子经过的路程较长而大分子经过的路程较短,如此就可分离分子量不同的蛋白质。然而,分子量相近的蛋白质非常多,因此,用这种技术得到的蛋白质是分子量相近的混合蛋白质。然而这种技术在某些研究中很有用,如丙酮酸激酶M2(PKM2)由四个相同的亚基组成,PKM2在细胞中以三种形式存在——单体、二聚体、四聚体,这三种形式的功能不同,若要鉴定细胞中PKM2的各种形式的量,先用凝胶过滤技术分离细胞裂解液中的PKM2的三种形式,之后用Western blot对每一种形式的PKM2做相对定量。 4.反相层析该技术是指用疏水固相的一种层析技术。“反相”是相对“正相”而言,正相是指亲水的固相如硅胶表面带有硅羟基(silanol group),硅羟基可与被分离的化台物相互作用,被分离的化合物的亲水性越强,则滞留在正相

基因分离定律归类习题有答案

孟德尔的豌豆杂交实验一(基因分离定律) 一基础概念 【相对性状】(同种生物同一性状的不同表现类型) 1下列性状中不属于相对性状的是() A.高鼻梁与塌鼻梁 B.卷发与直发 C五指与多指 D.眼大与眼角上翘 2.下列属于相对性状的是() A.人的身高与狗的体重 B.兔的长毛与短毛 C.棉花的细绒与长绒 D.猫的白毛与狗的黑毛 3.下列各组中不属于相对性状的是() A水稻的早熟与晚熟 B豌豆的紫花与红花 C家兔的长毛与细毛 D小麦的抗病和不抗病(易染病) 【选用豌豆原因】 4.豌豆做遗传实验是孟德尔获得成功重要原因之一,因为豌豆是() ①自花传粉植物②异花传粉植物③闭花传粉植物 ④具有易于区分的相对性状⑤豌豆花大,易于去雄和人工授粉 ⑥是单性花,易于进行人工授粉 A ②③④⑥ B ①③④⑤ C ①③⑤ D ②④⑥ 5、进行豌豆杂交试验时,为避免其自花传粉,孟德尔采取的措施() ①花蕾期,不去雄蕊②花蕾期,去雄蕊③去雄后,套上纸袋 ④去雄后,不套纸袋⑤待花成熟时,采集另一株植物花粉涂在去雌蕊柱头 ⑥待花成熟时,拿开纸袋任其在自然状况下传粉受精 A ②④⑥ B ①③⑥ C ②③⑤ D ②④⑥ 6科学研究过程一般包括发现问题,提出假设,实验验证,数据分析,得出结论等。在孟德尔探究遗传规律的过程中,导致孟德尔发现问题的现象是() A.成对的遗传因子彼此分离 B.具一对相对性状亲本杂交,F2表现型之比为 3:1 C.F1与隐性亲本测交,后代表现型之比为1:1

D.雌雄配子结合的机会均等 7、分离定律的实质是() A.F2(子二代)出现性状分离 B.F2性状分离比是3:1 C.成对的控制相对性状的遗传因子彼此分离 D.测交后代性状分离比为1:1 8、基因型为Aa的植物体产生的雌雄配子的数量是() A.雌配子∶雄配子=1∶1 B.雄配子比雌配子多 C.雄配子∶雌配子=3∶1 D.雄配子A∶雌配子a=1∶3 9.有关纯合体与杂合体的叙述正确的是() A.纯合体自交,后代不发生性状的分离 B.杂合体杂交,后代不发生性状分离 C.纯合体自交,后代发生性状分离 D.杂合体自交,后代不发生性状分离 10.以豌豆的一对相对性状为研究对象,将纯合显性个体和隐性个体间行种植, 隐性一行植株上所产生的子一代将表现为() A、显隐性个体的比例为1:1 B、都是隐性个体 C、显隐性个体的比例为3:1 D、都是显性个体 【显隐性判断及基因型判断测交性状分离】 11.对隐性性状的正确表述是() A 后代中表现不出来的性状 B后代中不常出现的性状 C 杂种F1未出现的亲本性状 D F2未出现的亲本性状 12.一对有耳垂的父母生了一个无耳垂的孩子,这说明() A有耳垂为显性性状 B无耳垂为显性性状 C有耳垂为隐性性状 D不能说明问题 13.大豆白花和紫花是一对相对性状,下四组杂交能判断显性和隐性关系() ①紫花×紫花→紫花,②紫花×紫花→301 紫花+101白花, ③紫花×白花→紫花,④紫花×白花→98紫花+102白花。 A ①和② B ③和④ C ①和③ D ②和③ 14.下列杂交组合(遗传因子E控制显性性状,e控制隐性性状)产生的后代, 哪一组符合性状分离的概念会发生性状分离() A EE×ee B EE×Ee C EE×EE D Ee×Ee 15.绵羊的白毛(W)对黑毛(w)为显性,一只白毛绵羊与一只黑毛绵羊杂交, 生了6只小羊,其中3白3黑,这两个亲本的遗传因子组合可能性最大的是()

基因分离定律练习题一

基因分离定律练习题一

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1.1孟德尔的豌豆杂交实验(一)(I) 1.两株高茎豌豆杂交,后代高茎和矮茎植株数量的比例如图所示,则亲本的遗传因子组成可表示为( ) A.GG×gg?B.GG×Gg C.Gg×Gg D.gg×gg 2.下列有关叙述中,正确的是( ) A.兔的白毛与黑毛、狗的长毛与卷毛都是相对性状 B.隐性性状是指生物体不能表现出来的性状 C.纯合子的自交后代中不会发生性状分离,杂合子的自交后代中不会出现纯合子 D.性状表现相同的生物,遗传因子组成不一定相同 3.下列叙述正确的是( ) A.生物体没有显现出来的性状称为隐性性状 B.亲本之中一定有一个表现为隐性性状 C.若子代中出现显性性状,则亲代中必有显性性状个体 D.在一对相对性状的遗传实验中,双亲只具有一对相对性状 4.水稻的晚熟和早熟是一对相对性状,晚熟受显性遗传因子(E)控制。现有纯合的晚熟水稻和早熟水稻杂交,下列说法不正确的是( ) A.F1的遗传因子组成是Ee,性状表现为晚熟 B.F1自交时产生的雌雄配子数量之比为1∶1 C.F1自交后得F2,F2的遗传因子组成是EE、Ee和ee,其比例为1∶2∶1 D.F2的性状表现为晚熟和早熟,其比例为3∶1 5.一对相对性状的亲本杂交子二代中( )

A.所有的统计结果都等于3∶1 B.统计的样本足够大时才符合3∶1 C.性状按3∶1的比例出现 D.统计的样本越小越接近3∶1 6.下列为一对相对性状的杂交实验中性状分离现象的假设性解释,其中错误的是( ) A.生物的性状是由遗传因子决定的 B.体细胞中的遗传因子成对存在,互不融合 C.在配子中只含有每对遗传因子中的一个 D.生物的雌雄配子数量相等,且随机结合 7.孟德尔选用豌豆作为遗传实验材料的理由及对豌豆进行异花传粉前的处理是( )①豌豆是闭花受粉植物②豌豆在自然状态下是纯种 ③用豌豆作实验材料有直接经济价值 ④豌豆各品种间具有一些稳定的、差异较大而且容易区分的性状 ⑤开花时期母本去雄,然后套袋⑥花蕾期母本去雄,然后套袋 A.①②③④;⑥ B.①②;⑤⑥ C.①②④;⑥D.②③④;⑥ 8.某水稻品种茎秆的高矮是一对相对性状,对两个纯合亲本杂交产生的F1进行测交,其后代中杂合子的概率是( ) A.0 B.25% C.50% D.75% 9.孟德尔在对一对相对性状进行研究的过程中,发现了分离定律。下列有关分离定律的几组比例中,能直接说明分离定律实质的是( ) A.F2的性状表现比为3∶1B.F1产生配子的比为1∶1 C.F2的遗传因子组成比为1∶2∶1 D.测交后代的比为1∶1 10.如图为豌豆的一对相对性状遗传实验过程图解,请仔细阅图后回答下列问

实验十蛋白质的表达、分离纯化和鉴定

实验十蛋白质的表达、分离纯化和鉴定 第一部分蛋白质的表达、分离纯化 目的要求 (1)了解重组蛋白表达的方法和意义。 (2)了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。 实验原理 目的基因在宿主细胞中的高效表达及表达的重组蛋白的分离纯化对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理,同时目的基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统,其表达外源基因产物的水平远高于其它表达系统,表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。本实验中,携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中,在37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白N端带有6个连续的组氨酸残基,可通过固相化的镍离子(Ni2+)亲和层析介质加以分离纯化,称为金属熬合亲和层析(MCAC)。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。 试剂和器材 一、试剂 [1] LB液体培养基:Trytone 10g, yeast extract 5g, NaCl 10g, 用蒸馏水配至1000mL。 [2] 氨苄青霉素:100mg/mL。 [3] 上样缓冲液(GLB):100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8M Urea, 1 mM β-巯基乙醇, pH8.0。 [4] 清洗缓冲液(UWB):100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8 M Urea, pH6.3。 [5] 洗脱液缓冲液:100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8M Urea, 500 mM 咪唑, pH8.0。 [6] IPTG 二、器材 摇床,离心机,层析柱(1 10 cm),蠕动泵 操作方法 一、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导 1. 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白表达载体的大肠杆菌BL21(DE3)菌株于5mL

蛋白表达、分离和纯化

蛋白质的表达、分离、纯化和鉴定 来源:易生物实验浏览次数:2704网友评论0 条第一部分蛋白质的表达、分离、纯化克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理,同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作 结构与功能的研究。 第二部分蛋白质的鉴定电泳可用于分离复杂的蛋白质混合物,研究蛋白质的亚基组成等。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的孔径,蛋白质的电荷,大小,性质等因素共同决定了蛋白质的电泳迁移率。 关键词:蛋白质蛋白质表达克隆基因聚丙烯酰胺凝胶电泳氯霉素酰基转移酶十二烷基硫酸钠SDS聚丙烯酰 胺凝胶 第一部分蛋白质的表达、分离、纯化 目的要求 (1)了解克隆基因表达的方法和意义。 (2)了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。 实验原理 克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理,同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统,其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统,表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。本实验中,携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属熬合亲和层析(MC AC)。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。 试剂和器材

一、试剂 [1] LB液体培养基:Trytone 10g, yeast extract 5g, NaCl 10g, 用蒸馏水配至1000mL. [2] 氨苄青霉素:100mg/mL [3] 上样 缓冲液:100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8M Urea, 10 mM2-ME, pH8.0 [4] Washing Buffer:100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8 M Urea, pH6.3 [5] Elution Buffer:100 mM NaH2PO4, 10 mMTris, 8M Urea, 500 mM Imidazole, pH 8.0 [6] IPTG 易生物仪器库:.ebioe./yp/product-list-42.html 易生物试剂库:.ebioe./yp/product-list-43.html 二、器材 摇床,离心机,层析柱(1′10 cm) 操作方法 一、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导 1. 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白的大肠杆菌BL21菌株于5mL LB液体培养基中(含100ug/mL 氨苄青霉素),37℃震荡培养过夜。 2. 转接1mL过夜培养物于100mL(含100ug/mL 氨苄青霉素)LB液体培养基中,37℃震荡培养至OD600 = 0.6 - 0.8。取10ul 样品用于SDS-PAGE 分析。 3. 加入IPTG至终浓度0.5 mmol/l, 37℃继续培养1-3h.

最新基因分离定律测试题

基因分离定律测试题

基因分离定律质量检测 生物试题 注意事项: 1.本试卷分第Ⅰ卷和第Ⅱ卷两部分。第Ⅰ卷为选择题,共60分;第Ⅱ卷为非选择题,共40分。满分100分。 2.答第Ⅰ卷前务必将自己的姓名、考号、考试科目涂写在答题卡上。考试结束后,第Ⅱ卷和答题卡一并收回。 第Ⅰ卷(选择题共60分) 本卷共40小题,每小题1分,每小题只有一个选项最符合题意。 1、在某种牛中,基因型为AA的个体的体色是红褐色的,aa是红色的。基因型为Aa的个体中雄牛是红褐色的,而雌牛是红色的。一头红褐色母牛生了一头红色小牛,这头小牛的性别及基因型为 A.雄性或雌性,aa B.雄性,Aa C.雌性,Aa D.雌性,aa或Aa 2、通过饲养灰鼠和白鼠(基因型未知)的实验,得到结果如右 表,如果亲本一栏中杂交组合Ⅳ中的灰色雌鼠和杂交组合Ⅱ中的 灰色雄鼠交配,子代表现为( ) A.都是灰色 B.都是白色 C.3/4是灰色 D.1/4是灰色 3、给你一粒黄色玉米(玉米是雌雄同株、雌雄异花的植物),请你从下列方案中选一个既可判断其基因型又能保持纯种的遗传特性的可能方案( ) A.观察该黄色玉米,化验其化学成分 B.让其与白色玉米杂交,观察果穗 C.进行同株异花传粉,观察果穗 D.让其进行自花受粉,观察果穗 4、有关一对相对性状遗传的叙述,正确的是( ) A.在一个种群中,若仅考虑一对等位基因,可有4种不同的交配类型 B.最能说明基因分离定律实质的是F2的表现型比为3∶1 C.若要鉴别和保留纯合的抗锈病(显性)小麦,最简便易行的方法是自交 D.通过测交可以推测被测个体产生配子的数量 5、某男性与一正常女性婚配,生育了一个白化病兼色盲的儿子。右图为此男性的一个精原细胞示意图(白化病基因a、色盲基因b)。下列叙述错误的是( ) A.此男性的初级精母细胞中的染色体数等于其神经细胞的染色体数 B.在形成此精原细胞的过程中不可能出现四分体 C.该夫妇所生儿子的色盲基因一定来自于母亲 D.该夫妇再生一个表现型正常男孩的概率是3/8 6、某种品系的鼠毛色灰色和黄色是一对相对性状,科学家进行了大量的杂交实验得到了如下结果,由此推断 不正确的是( ) A.杂交A后代不发生性状分离,亲本为纯合子B.由杂交B可判断鼠的黄色毛基因是显性基因C.杂交B后代黄色毛鼠既有杂合子也有纯合子D.鼠毛色这对相对性状的遗传符合基因的分离定律杂交亲本后代 杂交A 灰色×灰色灰色 杂交B 黄色×黄色2/3黄色,1/3灰色杂交C 灰色×黄色1/2黄色,1/2灰色

经典高中生物--基因的分离定律-练习题

课后·分层训练 (时间:30分钟满分:100分) 1.(2016·深圳调研)基因分离定律的实质是() A.子二代出现性状分离 B.子二代性状分离比为3∶1 C.等位基因随同源染色体的分开而分离 D.测交后代分离比为1∶1 解析基因分离定律的实质是减数分裂过程中等位基因随着同源染色体的分开而分离,C正确。 答案 C 2.某养兔场有黑色兔和白色兔,假如黑色(B)对白色(b)为显性,要想鉴定一头黑色公兔是杂种(Bb)还是纯种(BB),最合理的方法是() A.让该公兔充分生长,以观察其肤色是否会发生改变 B.让该黑色公兔与黑色母兔(BB或Bb)交配 C.让该黑色公兔与多只白色母兔(bb)交配 D.从该黑色公兔的表现型即可分辨 解析鉴定显性表现型动物个体的基因型可采用测交的方法,即让该黑色公兔与多只白色母兔(bb)交配,如果后代全为黑色兔,说明该黑色公兔的基因型为BB,如果后代中出现了白色兔,说明该黑色公兔的基因型为Bb。 答案 C 3.基因型为Aa的大豆植株产生的配子及比例是() A.雌A∶雄a=1∶1 .雌A∶雄a=3∶1 C.雄A∶雄a=3∶1 .雌A∶雌a=1∶1 解析基因型为Aa的大豆植株产生的雄配子数量远多于雌配子,根据基因分离定律可知,Aa产生的雄配子和雌配子各有A、a两种,并且两种雄(或雌)配子的数量相等。 答案 D 4.(2016·山东日照调研)下列遗传实例中,属于性状分离现象的是()

①高茎豌豆与矮茎豌豆杂交,后代全为高茎豌豆②高茎豌豆与矮茎豌豆杂交,后代有高有矮,数量比接近1∶1③圆粒豌豆的自交后代中,圆粒豌豆与皱粒豌豆分别占3/4和1/4④开粉色花的紫茉莉自交,后代出现红花、粉花、白花三种表现型 A.①③ B.①④ C.②③ D.③④ 解析①中后代无性状分离现象;②中不符合性状分离的条件。 答案 D 5.(经典题)在家鼠中短尾(T)对正常尾(t)为显性。一只短尾鼠与一只正常尾鼠交配,后代中正常尾与短尾比例相同;而短尾类型相互交配,子代中有一类型死亡,能存活的短尾与正常尾之比为2∶1,则不能存活类型的基因型可能是() A.TT B.Tt C.tt D.TT或Tt (短尾鼠)∶tt(正常尾鼠)=2∶1,解析由题干可知,Tt(短尾鼠)×Tt(短尾鼠)→T - 又因短尾鼠×tt(正常尾鼠)→正常尾鼠∶短尾鼠=1∶1,得出存活的短尾鼠一定是杂合子(Tt),所以排除其他致死因素,则致死的小鼠一定是纯合短尾鼠。 答案 A 6.(2017·西安模拟)豌豆的圆粒(R)对皱粒(r)为显性,其控制性状的基因在染色体上。将纯种圆粒豌豆与纯种皱粒豌豆杂交,产生的F1全是圆粒;然后将F1自交,获得的F2中圆粒与皱粒之比约为3∶1(第一个实验)。再进行测交实验(第二个实验)。根据题意回答: (1)上述实验是由________及其________两个实验构成的。 (2)观察第一个实验,由此提出的问题是____________________________。 (3)观察第一个实验,由此提出的假说是____________________________。 (4)第二个实验得出的结果是______________________________________。 (5)由此可见,分离规律的细胞学基础是________;研究分离规律的方法是________;分离规律的实质是杂合子在形成配子时,存在于一对同源染色体上的具有独立性的________________的分开而分离,独立地随配子遗传给后代。 解析(1)题干中的实验包括杂交实验(两纯种亲本杂交及F1自交)和测交实验。

基因分离克隆和功能鉴定.

动物遗传学读书报告 之 新基因的分离克隆及功能鉴定 学院班级:动物科技学院动物科学10级2班 新基因分离克隆及功能鉴定方法研究进展 前言 随着DNA 分子双螺旋结构、密码子等的被发现,几种模式生物基因组测序和人类基因组计划的相继完成,使人们对基因的研究很快进入后基因组时代。基因组学时代的主要任务是图谱制作性和序列测定,后基因组学时代则是进行基因组功能注释,这也是功能基因组学的主要研究目标。而PCR 技术的诞生,推动了许多新技术和方法的应用。 1. 基因的分离克隆 基因克隆是指通过分子生物学手段进行基因分离,从而进一步研究其结构功能。分子克隆是指在体外对不同生物的DNA 分子进行人工剪切,重新组合得到新的遗传物质通过载体转入到宿主菌或细胞中表达,扩增带目的基因的重组DNA 。基因克隆的目的是分离基因,分子克隆是分离基因的最终手段。 1.1基因的分离克隆主要方法 基因分离与克隆是基因工程的第一步,它是利用分子克隆技术获取用于转化、控制目的性状相关的基因。一般方法是先建立文库(基因组文库或cDNA 文库,再利用适当的探针,通过分子杂交从基因文库分离出目的基因,这是应用最早,目前最为成熟的一种方法。而对于未知序列,常采用步移的方法,其原理是如果知道离开该基因一定距离上的DNA 序列,则可用这个DNA 序列作探针,通过染色体步移来逐步接近并最后达到待克隆的基因。先用探针筛查文库,得到阳性克隆后,将

这个重组载体中的插入片段分离出来,然后用这个片段的末端部分(注意不能包含重复序列作为新一轮筛查文库的探针;得到新的重组载体中的插入片段,同上一个插入片段的末端部分(即探针序列是重叠的,共有的。也就是这两个片段是在同一条染色体上相互邻接的。于是,再用新得的插入片段的末端部分作为探针,再去筛查文库。通过一系列的操作,得到的插入片段逐渐连接延伸,最后可以步移到待克隆的基因。以下对目的基因分离和克隆方法作一总结。 1.1.1功能性克隆 通过基因产物的克隆技术在传统遗传学占主导地位的时代,人们以基因产物为导向来分离克隆基因。由于基因产物的结构、功能已知,可通过分析部分多肽或末端氨基酸序列,反推其核苷酸序列,设计探针或引物从基因组DNA 文库或cDNA 文库中筛选克隆,也可以制备产物抗体,从表达载体构建的cDNA 文库中筛选相应克隆,进而分离目的基因。若可得到足够多的纯化目的蛋白以用于制备特异性抗体时,可以采用经典的免疫筛选表达文库的方法,筛选阳性克隆获取其目的基因。除了免疫筛选方法外,也可根据目的蛋白的生物学功能,利用同位素标记的配体来筛选受体表达的阳性克隆。当所分离的目的蛋白较难大量获得,但纯度较高时,可利用其中的一段氨基酸序列,反推出其基因序列,据此合成寡核苷酸用于cDNA 文库的筛选;或根据所获得的基因序列,指导5’端的引物合成,根据mRNA 3’端poly —A 序列指导合成poly —T 的3’端引物,用PCR 技术从制备细胞的mRNA 或直接从胞浆内溶物中合成相应的cDNA ,将该cDNA 克隆到表达载体上进行产物表达。 1.1.2同源性序列克隆技术 随着基因研究的不断深入,人们发现几乎所有的基因与其他的基因都有一定的联系:生物的种、属之间编码基因序列的同源性高于非编码区的序列。基于此原理,在其他种属同源基因被克隆的前提下,构建cDNA 文库或基因组文库,然后用已知分子高保守序列设计简并引物,并用简并引物对含有目的基因的DNA 文库

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