干扰素说明书
干扰素说明书
篇一：重组人干扰素α1b说明书
重组人干扰素α1b说明书
【中文名称】
重组人干扰素α1b
【产品英文名称】
Recombinant Human Interferon α2b
【功效主治】
本品适用于治疗病毒性疾病和某些恶性肿瘤。已批准用于治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病。已有临床试验结果或文献报告用于治疗病毒性疾病如带状疱疹、尖锐湿疣、流行性出血热和小儿呼吸道合胞病毒肺炎等有效，可用于治疗恶性肿瘤如慢性粒细胞白血病、黑色素瘤、淋巴瘤等。
【化学成分】
主要组成成分:重组人干扰素α1b
【药理作用】
本品具有广谱的抗病毒、抗肿瘤及免疫调节功能。干扰素与细胞表面受体结合，诱导细胞产生多种抗病毒蛋白，从而抑制病毒在细胞内的复制；可通过调节免疫功能增强巨噬细胞、淋巴细胞对靶细胞的特异细胞毒作用，有效的遏制病毒侵袭和感染的发生；增强自然杀伤细胞活性，抑制肿瘤细
胞生长，清除早期恶变细胞等。
急性毒性试验:小白鼠尾静脉注射人用量3倍(按体重计算)的本品，无急性毒性反应。长期毒性试验:狗注射人用剂量5.6倍和28倍；大白鼠注射人用剂量的5.6倍、28倍和140倍(均按体重计算)，分别连续注射3个月
【药物相互作用】
使用本品时应慎用安眠药及镇静药。
【不良反应】
本品不良反应温和，最常见的是发热、疲劳等反应，常在用药初期出现，多为一次性和可逆性反应；其他可能存在的不良反应有头痛、肌痛、关节痛、食欲不振、恶心等；少数病人可能出现颗粒白细胞减少、血小板减少等血象异常，停药后可恢复。如出现上述患者不能忍受的严重不良反应时，应减少剂量或停药，并给予必要的对症治疗。
【禁忌症】
1 已知对干扰素制品过敏者。
2 有心绞痛、心机梗塞病史以及其他严重心血管病史者。
3 有其他严重疾病不能耐受本品的副作用者。
4 癫痫和其他中枢神经系统功能紊乱者。
【产品规格】
10μg
【用法用量】
猪干扰素研制及应用
猪干扰素基因在腺病毒的表达及应用 崔尚金 （中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病 研究室, 黑龙江哈尔滨 150001） 多年来，疫苗免疫接种一直是一种预防大范围传染病爆发的最为有效的措施之一。目前被广泛用来进行免疫控制传染病以及自身免疫病和癌症等疾病的治疗。免疫接种的优点是促使先天性免疫细胞产生免疫记忆细胞，从而使机体针对特定的病原体产生持久的免疫保护。疫苗接种不仅可以通过注射灭活苗或弱毒苗实现，还可以通过注射亚单位疫苗(如纯化的类毒素)实现，也可以由其它方式将抗原呈递给免疫系统。 尽管疫苗接种非常成功，但免疫失败也时常出现（例如猪瘟疫苗），而且屡见不鲜，具体原因尚未明确。有些疫苗能够提供短期保护，不能使机体产生免疫记忆；有些疫苗能够使机体产生免疫记忆，但却不能使机体针对抗原产生有效的免疫保护。强烈的免疫反应并不不一定保证形成保护性免疫。例如，呼吸道的感染可以导致保护性免疫失效，而且现在形成了很多综合症，如猪圆环病毒、猪呼吸与繁殖综合症病毒等都是以综合征来危害动物机体。从疫苗开发的角度来看，在没有保护性免疫的干扰下，产生稳固的免疫应答的感染是一个非常有前景的研究领域。在免疫学领域，一些新的、功能强大的研究工具已经开始广泛使用，这主要归功于在宿主与病原体相互作用方面得到了新的见解，并进一步理解了以细胞和分子为基础的保护性免疫。保护性免疫应答不仅仅是抗原特异性的结果，更是体内环境各种因素、各种因子相互作用、相互影响的综合结果。因此，疫苗开发的重点应当从目前只考虑抗原特异性向抗原特异性和体内环境综合考虑转变，这必定是今后发展的新方向，也是目前大家对自然免疫、天然免疫研究非常火热的最重要的原因之一。新知识和新技术的获得必将使研究人员按照新的方式改造疫苗和体内环境综合考虑来对抗传染病，从而研制更为有效、更容易形成具有选择性保护和持久性的免疫记忆的新的免疫疫苗及相关产品。其中，干扰素作为研究的非常彻底的一种细胞因子，起到了很好的疗效，本文主要介绍猪I型干扰素。 1957 年 Isaac 和 Lindenman 进行鸡胚细胞流感病毒感染试验中首次发现一类能干扰和抑制病毒复制的可溶性细胞分泌物，故取名为干扰素（ interferon Wheelock 与 Green 分别于 1965 年和 1969 年相继发现免疫活性细胞经丝裂原或抗原刺激后，发生一类对酸敏感的干扰素，称为免疫干扰素。目前依据干扰素对酸的敏感性通常分为 I 型干扰素（酸敏感型）和 II 型干扰素（耐酸型）两类。几乎所有脊椎动物均可产生这两类干扰素，根据发生干扰素细胞种类不同，I 型干扰素至今已发现 INF- α、β、ω、κ、τ、δ等 6 种类型，而 II 型干扰素迄今为止仅发现 INF- γ一种（ Domeika, 2003 由于干扰素具广谱、高效抗病毒功能，及其对免疫系统起关键调节作用，因此成为当今免疫学、遗传学和分子生物学研究最为活跃的领域之一。 1、细胞因子及干扰素概念 细胞因子是由机体各种细胞合成分泌的具有多种生理活性和参与病理反应的小分子可溶性蛋白质。
基因工程重组人干扰素概述(
根据来源、基因序列和氨基酸组成分类 I 型干扰素： IFNα、IFNβ、IFN τ、IFN ω 来源：白细胞、成纤维细胞、病毒感染的组织细胞等 功能：抗病毒感染、抗肿瘤生长 免疫调节(较弱） 其中IFN-α为多基因产物，有23种以上的亚型。 II 型干扰素：干扰素γ（IFN ) 来源：活化的T细胞和NK细胞产生 功能：免疫调节 提高单核巨噬细胞、树突状细胞的抗原提呈能力 增强Tc细胞和NK细胞的杀伤活性 抑制TH2细胞形成，下调体液免疫应答 趋化作用 抗病毒和抗肿瘤作用（次要）
2. 根据动物来源确定分类，例如人干扰素（HuIFN），小鼠干扰素（MuIFN）。 免疫调节作用表现在对宿主免疫细胞活性的影响，如对巨噬细胞、T细胞、B细胞和NK细胞等均有一定作用。 ●对巨噬细胞的作用：IFNγ可使巨噬细胞表面MHCⅡ类分子的表达 增加，增强其抗原递呈能力；此外还能增强巨噬细胞表面表达Fc 受体，促进巨噬细胞吞噬免疫复合物、抗体包被的病原体和肿瘤细胞。 ●对淋巴细胞的作用：干扰素对淋巴细胞的作用较为复杂，可受剂 量和时间等因素的影响而产生不同的效应。在抗原致敏之前使用大剂量干扰素或将干扰素与抗原同时投入会产生明显的免疫抑制作用；而低剂量干扰素或在抗原致敏之后加入干扰素则能产生免疫增强的效果。在适宜的条件下，IFNγ对B细胞和CD8+T细胞的分化有促进作用，但不能促进其增殖。IFNγ能增强TH1细胞的活性，增强细胞免疫功能；但对TH2细胞的增殖有抑制作用，因此抑制体液免疫功能。IFNγ不仅抑制TH2细胞产生IL-4，而且抑制IL-4对B细胞的作用，特别是抑制B细胞生成IgE。 ●对其它细胞的作用：IFNγ对其他细胞也有广泛影响：①刺激中性 粒细胞，增强其吞噬能力；②活化NK细胞，增强其细胞毒作用；
注射用重组人干扰素2b说明书
注射用重组人干扰素α 2b 说明书请仔细阅读说明书并在医师指导下使用警示语：1.对重组人干扰素α 2b 或该制剂的任何成份有过敏史者禁用。2.患有严重心脏疾病者禁用\。3.严重的肝、肾或骨髓功能不正常者禁用。4.癫痫及中枢神经系统功能损伤者禁用。5.有其他严重疾病不能耐受本品者，不宜使用。[药品名称]通用名称：注射用重组人干扰素α 2b 商品名称：利分能英文名称：Recombinant Human Interferon α 2b for Injection 汉语拼音：Zhusheyong Chongzu Ren Ganraosu α 2b [成份]主要成份为重组人干扰素α 2b，由高效表达人干扰素α 2b 基因的腐生型假单孢菌，经发酵、分离和高度纯化制成。辅料为人血白蛋白、甘露醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠。[性状]应为白色薄壳状疏松体，加入标示量注射用水后应迅速复溶为澄明液体。[适应症]1.用于治疗某些病毒性疾病，如急慢性病毒性肝炎、带状疱疹、尖锐湿疣。 2.用于治疗某些肿瘤，如毛细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤、非何杰金氏淋巴瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞癌、喉乳头状瘤、卡波氏肉瘤、卵巢癌、基底细胞癌、表面膀胱癌等。[规格]3×106IU/支，复溶后体积1.0 毫升。[用法用量]本品可以肌肉注射、皮下注射和病灶注射。 1.慢性乙型肝炎：皮下或肌肉注射，3—6×106IU/日，连用四周后改为3 次/周，连用16 周以上。2.急慢性丙型肝炎：皮下或肌肉注射，3—6×106IU/日，连用四周后改为 3 次/周，连用16 周以上。 3.丁型肝炎：皮下或肌肉注射，4—5×106IU/日，连用四周后改为3 次/周，连用16 周以上。4.带状疱疹：肌肉注射，1×106IU/日，连用6 天，同时口服无环鸟苷。5.尖锐湿疣：可单独应用，肌肉注射，1—3×106IU/日，连用四周。也可与激光或电灼等合用，一般采用疣体基底部注射，1×106IU/次。6.毛细胞白血病：2—8×106IU/m2/天，连用至少3 个月。7.慢性粒细胞白血病：3—5×106IU/m2/天，肌肉注射。可与化疗药物羟基脲、Ara—c 等合用。8.多发性骨髓瘤：作为诱导或维持治疗，3—5×106IU/m2，肌肉注射，3 次/周，并与VMCP 等化疗方案合用。9.非何杰金氏淋巴瘤：作为诱导或维持治疗，3—5×106IU/m2，肌肉注射，3 次/周，并与CHVP 等化疗方案合用。10.恶性黑色素瘤：6×106IU，肌肉注射，3 次/周，与化疗药物合用。11.肾细胞癌：6×106IU，肌肉注射，3 次/周，与化疗药物合用。12.喉乳头状瘤：3×106IU/m2，肌肉注射或皮下注射，每周3 次（隔日1 次）。13.卡波氏肉瘤：50×106IU/m2/天，连续5 天，每次静脉滴注30 分钟。至少间隔9 天再进行下一个5 天的治疗期。14.基底细胞癌：5×106IU，瘤灶内注射，3 次/周，3 周。15.卵巢癌：5—8×106IU，肌肉注射，3 次/周，与化疗药物合用。[不良反应]使用本品常见有发烧、头痛、寒战、乏力、肌痛、关节痛等症状，常出现在用药的第一周，不良反应多在注射48 小时后消失。如遇严重不良反应，须修改治疗方案或停止用药。一旦发生过敏反应，应立即停止用药。少数病人还可出现白细胞减少、血小板减少等血象异常，停药后即可恢复正常。偶见有厌食、恶心、腹泻、呕吐、脱发、高（或低）血压、神经系统紊乱等不良反应。[禁忌]1.对重组人干扰素α 2b 或该制剂的任何成份有过敏史者。2.患有严重心脏疾病者。3.严重的肝、肾或骨髓功能不正常者。4.癫痫及中枢神经系统功能损伤者。5.有其他严重疾病不能耐受本品者，不宜使用。[注意事项]1.本品冻干制剂为白色疏松体，溶解后为无色透明液体，如遇有浑浊、沉淀等异常现象，则不得使用。包装瓶有损坏、过期失效不能使用。2.以注射用水溶解时应沿瓶壁注入，以免产生气泡，溶解后宜于当日用完，不得放置保存。[孕妇及哺乳期妇女用药]孕妇用药经验有限，孕期内安全使用本品的方法尚未建立，因此，给孕妇注射，须在病情十分需要，并由临床医生仔细斟酌后确定。[儿童用药]儿童用药经验仍有限，对此类病例应小心权衡利弊后遵医嘱用药。[老年用药]对有心脏病的老年患者，老年癌症晚期患者，在接受本剂治疗前及治疗期中都应做心电图检查，遵医嘱做剂量调整或停止用本品。[药物相互作用]干扰素可能会改变某些酶的活性，尤其可减低细胞色素酶P450 的活性，因此西咪替丁、华法令、茶碱、安定、心得安等药物代谢受到影响。在与具有中枢作用的药物合并使用时，会产生相互作用。[药物过量]尚未有药物过量的报告，但大剂量应用时，
干扰素
干扰素抗病毒研究进展 摘要: 干扰素（IFN）是一种广谱感病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性 IFN具有毒副作用小，高剂量仅有一般生物制剂的常见反应，抗原性弱，可反复应用等优点。随着IFN基因工程产品在临床上的推广应用，将大大提高病毒性疾病的治疗效果，具有广阔的应用。 关键词：干扰素；抗病毒活性；抗肿瘤免疫;生物学特性； 1 干扰素的分类和生物学活性 IFN蛋白家族基于它们的基因序列、染色体定位和受体特异性[2]分为3型，即Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型干扰素，Ⅰ型包括IFN-α、β、ω、ε、κ [3]、δ、τ、δ[4]等，但IFN-δ、τ、δ只在猪、牛、反刍动物和鼠体内检测到，在哺乳动物中IFN-α/β是多基因家族，IFN-α包括25个以上的亚型[5]。Ⅱ型干扰素由单基因家族IFN-γ构成，又称为免疫干扰素。Ⅲ型干扰素是一种新发现的细胞因子，与Ⅰ型干扰素关系密切，称为IFN-λ[6-7]，研究认为Ⅲ型干扰素有特殊的生理学功能[8]。干扰素本身并非直接抗病毒物质，其抗病毒作用体现在多方面。IFN对于病毒复制的任何阶段都具有靶向作用，包括穿入、转录、RNA稳定性、翻译起始、成熟、装配和释放过程。 2 干扰素的研究意义
近年来，国际反病毒和抗癌研究领域，在自然免疫调节和抗病毒物质，作为一种天然抗病毒蛋白质干扰素人类开发更多的关注。干扰素将成为一个21世纪的反病毒，防癌，其中最广泛使用的药物之一。α-干扰素治疗慢性乙型肝炎是目前抗病毒药物的第一选择是，对肝炎的药物治疗总有效率约为20％-30％。慢性肝炎的药物干扰素代表发展方向。它是唯一的C型肝炎病毒的药物有效的治疗，它是最广泛的肿瘤细胞因子的临床治疗。病毒性皮肤病，慢性宫颈炎，呼吸道病毒感染和妇科疾病，丘疹皮疹，造血系统恶性肿瘤，淋巴瘤，其主要标志。β-干扰素治疗多发性硬化症复发静脉使用。主要γ-干扰素治疗类风湿关节炎。γ-干扰素的免疫功能比α，β-干扰素强1000倍，不仅能增强机体免疫功能，自身免疫性疾病，还可以调整过渡到接近正常水平的免疫力。干扰素还用于生殖器衣原体感染，膀胱癌，生殖器疣，皮肤疾病，血液病，艾滋病相关综合征的治疗。世界上许多国家已批准生产和使用基因重组干扰素制剂为许多疾病的治疗。治疗后的临床应用表明，通常不严重的副作用，干扰素治疗，临床适应症正在不断发展扩大了干扰素的新用途 3.干扰素的生物学特性 研究表明，IFN生物学活性的发挥有赖于诱导的多种效应蛋白质的合成，其并不直接作为反应作用因子对其效应分子的基因组进行调控，而是通过受体介导的信号转导系统引发一系列特定的生化反应，最终达到效应分子表达的目的，而且IFN具有很强的活性，其活性呈多样性。 3.1抗病毒作用 IFN 、IFN—B、IFN 均有抗病毒作用一。动物试验证明，抗病毒活性远较I型低，和IFN—p能相互加强抗病毒作用。干扰素抗病毒具有广谱性，但它对细胞抗病毒作用是间接的，而且是非特异性的。当干扰素与细胞表面的干扰素受体 结合后，可诱导细胞内产生有酶活性的抗病毒蛋白(AndviralProtein，AVP)。已知的AVP至少有三种：蛋白激酶，磷酸二脂酶和2～5腺酸合成酶，前两种能破坏
白塞病的诊断要点和诊断标准
白塞病的诊断要点和诊断标准 白塞病又称眼、口、生殖器综合征，是一种以细小血管炎为病理基础的多系统疾病，口腔、眼、生殖器及皮肤为本病的好发部位，也可出现多系统改变。 一、白塞病诊断要点： 1.临床表现 病程中有医生观察和记录到的复发性口腔溃疡、眼炎、生殖器溃疡以及特征性皮肤损害，如结节性红斑、毛囊炎、痤疮样皮疹，另外出现大血管或神经系统损害高度提示白塞病的诊断。 2.实验室检查 本病无特异性实验室异常。活动期可有血沉增快、C反应蛋白升高;部分患者冷球蛋白阳性，血小板凝集功能增强。HLA-B51为易感抗原，其在白塞病患者中阳性率57%~88%，与眼、消化道病变相关。 3.针刺反应试验(Pathergytest) 用20号无菌针头在前臂屈面中部斜行刺入约0.5cm沿纵向稍作捻转后退出，24~48小时后局部出现直径>2mm的毛囊炎样小红点或脓疱疹样改变为阳性。此试验特异性较高且与疾病活动性相关，阳性率约60%~78%。静脉穿刺或皮肤创伤后出现的类似皮损具有同等价值。 4.特殊检查 a.神经白塞病常有脑脊液压力增高，白细胞数轻度升高。 b.脑CT及磁共振(MRI)检查对脑、脑干及脊髓病变有一定帮助。 c.急性期MRI的检查敏感性高达96.5%，可以发现在脑干、脑室旁白质和基底节处的增高信号。慢性期行MRI检查应注意与多发性硬化相鉴别。MRI可用于神经白塞病诊断及治疗效果随访观察。 d.胃肠钡剂造影及内窥镜检查、血管造影、彩色多普勒有助诊断病变部位及范围。 e.肺X线片可表现为单或双侧大小不一的弥漫性渗出或圆形结节状阴影，肺梗塞时可表现为肺门周围的密度增高的模糊影。高分辨的CT或肺血管造影、同位素肺通气/灌注扫描等均有助于肺部病变诊断。 二、诊断标准
重组猪_干扰素的纯化及生化性质鉴定
重组猪α-干扰素的纯化及生化性质鉴定 邵 菁 1,2 ,于瑞嵩 2,3 ,董世娟 2,3 ,朱于敏 2,3 ,沈世缘 2,3 ,曹祥荣1,李 震 2,3 (1.南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046)(2.上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106)(3.上海市农业遗传育种重点实验室,上海201106) [摘要] 对巴斯德毕赤酵母高效分泌表达的猪α2干扰素(Po I F N 2α)纯化工艺和纯化后重组蛋白的部分生化特性进行了研究,结果表明:猪α2干扰素(Po I F N 2α)发酵液经离心、透析、过滤处理之后,依次利用亲和层析和离子交换层析使目的蛋白得到了纯化.经N 端氨基酸测序,W estern 2bl ot,对酸、热、巯基乙醇的稳定性和糖基化程度等检测后发现,所表达的猪α2干扰素N 端氨基酸序列(前5个)正确,对酸和热基本稳定,二硫键对目的蛋白的活性至关重要,没有发现目的蛋白的糖基化. [关键词] 重组猪α2干扰素(Po I F N 2 α),亲和层析,离子交换层析,糖基化,生化性质[中图分类号]S852.4 [文献标识码]A [文章编号]100124616(2008)022******* Pur i f i ca ti on of Recom b i n an t Porc i n e 2 αI n terferon and the Iden ti f i ca ti on of its B i ochem i ca l Character isti cs Shao J ing 1,2 ,Yu Ruis ong 2,3 ,Dong Shijuan 2,3 ,Zhu Yum in 2,3 ,Shen Shiyuan 2,3 , Cao Xiangr ong 1 ,L i Zhen 2,3 (1.School of L ife Science,Nanjing Nor mal University,Nanjing 210046,China ) (2.Ani m al Husbandry and Veterinary Research I nstitute,Shanghai Acade my of Agricultural Sciences,Shanghai 201106,China ) (3.ShanghaiMunici pal Key Laborat ory of Agri 2Genetics and B reeding,Shanghai 201106,China ) Abstract:I n this study,we devel oped the technique f or purifying recombinant porcine 2 αinterfer on (Po I F N 2α)that was efficiently exp ressed by Pichia Past oris and studied the bi oche m ical characteristics of Po I F N 2α.Recombinant porcine I F N 2 αwas purified t o homogeneity by affinity chr omat ography and i on 2exchange chr omat ography stepwisely after centrifu 2gati on 、dialysis and filtrati on .The results of its bi oche m ical characteristics showed that the first five a m ino acids of N -ter m inal of the purified p r otein was correct .The p r otein was heat and acid 2stable and the dithi olate 2bond was crucial t o the p r otein activity .No glycosylati on were f ound on the target p r otein . Key words:recombinant porcine α2interfer on (Po I F N 2 α),affinity chr omat ography,i on 2exchange chr omat ography,glyco 2sylati on,bi oche m ical characteristics 收稿日期:2007207202. 基金项目:上海市农业科学院青年科技发展基金(农青年科技2005-02)资助项目.通讯联系人:李 震,研究员,研究方向:动物生物技术,E 2mail:zhenli@https://www.360docs.net/doc/0210760058.html, 干扰素(I nterfer on,I F N )是一类重要的细胞因子,具有种属特异性,在同种细胞上具有广谱的抗病毒、抗细胞增殖、免疫调节等多种生物活性.根据干扰素的来源和性质可分为Ⅰ型干扰素和Ⅱ型干扰素[1,2] . 猪干扰素(Po I F N )也可分为I 型和Ⅱ型,I 型包括α、β、ω和τ4种,Ⅱ型仅有γ1种.I 型猪干扰素基因无 内含子,基因组中一般含有多个I 型猪干扰素基因[3] .猪I F N 2α(Po I F N 2α)基因家族分为二类同源的、但明 显不同的基因类型:Po I F N 2 α1和Po I F N 2α2.目前,Po I F N 2α1基因已经在真核和原核细胞中得到表达,但相关的分离纯化报道很少.通过研究表明,Po I F N 2 α可被用作动物疫苗的免疫增强剂和猪病毒病的治疗剂 [4,5] ,因此,在获得较高水平表达产物的基础上,探索重组Po I F N 2 α的分离纯化工艺,具有重要的理论意— 79—第31卷第2期2008年6月 南京师大学报(自然科学版) JOURNAL OF NANJ I N G NOR MAL UN I V ERSI TY (Natural Science Editi on ) Vol .31No .2Jun,2008
重组干扰素的生产 (2)
题目浅析重组干扰素的生产 姓名杨胜德学号11113173 专业生物工程学院微生物 指导教师鞠守勇 二零一二年十一月
目录 摘要﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍3 关键词﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍3 Abstract﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍3 Key words﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍3 前言﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍4 1.基因工程菌的构建﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍4 1．1目的基因的获取﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍4 1．1.1干扰素mRNA的获取﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍4 1．1.2 cDNA的合成﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍4 1．1.3 cDNA第二链的合成﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 1．2 大肠杆菌质粒的获取﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 1．3重组质粒的获取﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 1．3.1重组质粒的合成﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 1．3.2 重组DNA的转化﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 1．3.3重组体的筛选与鉴定﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 2.目的基因的表达﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 3.产物的提取与纯化﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 4.质量控制和要求﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍6 4.1半成品检定﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍6 4.2成品检定﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍6 5.参考文献﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍7 6.致谢﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍8
重组猪_干扰素基因定点突变及在大肠杆菌中的表达
18卷3期2002年5月 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal o f Biotechnology V ol.18 N o.3 May 2002 收稿日期:2001212217,修回日期:2002202228。 基金项目:上海市农科院重点学科青年科技骨干培养基金。 3通讯作者。 T el :86221262200389;Fax :86221262207858;E 2mail :zhenli60@https://www.360docs.net/doc/0210760058.html, 重组猪α干扰素基因定点突变及在大肠杆菌中的表达 陈 涛1 于瑞嵩 2,3 刘惠莉 2,3 李 震 2,33 曹祥荣 1 1(南京师范大学生命科学学院,南京 210097) 2(上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106)3 (上海市农业遗传育种重点实验室,上海 201106) 摘 要 用巨引物PCR 法介导的定点突变把猪α干扰素(P oIFN 2α)第86位Cys (TG C )突变为T yr (T AC ),同时将其成熟蛋白N 端第一个密码子TG T 同义突变大肠杆菌偏爱的密码子TG C ,构建了大肠杆菌融合基因表达载体pGEX 2 IFN ,表达产物占菌体总蛋白的20%。将以包涵体形式表达的目的蛋白经变、复性处理,并以FP LC 进一步纯化,得 到了具有较高生物活性的产物(5200I U Πmg )。 关键词 猪α干扰素,巨引物PCR ,定点突变,包涵体 中图分类号 Q78 文献标识码 A 文章编号100023061(2002)0320339204 干扰素是动物中目前所知出现最早、作用最快的第一抵御病毒体系。人和鼠的干扰素已得到深入研究,但对于猪的干扰素研究相对较少。我国是养猪大国,而猪的病毒性疾病种类多、危害大,发展具 广谱抗病毒效应的猪干扰素无疑有重要意义。 猪α型干扰素(P oIFN 2α)基因无内含子,蛋白糖基化修饰也不重要 [1] ,因而方便利用原核表达载体 表达。我们在研究中克隆到编码猪α型干扰素成熟肽部分的基因片段[2] 并在大肠杆菌中进行了表达,发现其活性较低,估计其编码肽段的第86位Cys 可能影响了干扰素的抗病毒活性[3] 。本实验参照 P oIFN 2α1序列[1] 将此位点突变为T yr ,然后用大肠杆菌融合表达系统表达出G ST 2IFN 融合蛋白,目的产物纯化后具有较高的抗病毒活性。 1 材料与方法 111 材料 菌种和质粒:受体菌E .coli DH5α、E .coli BL21为本室保藏菌种;p GEX 24T 23载体购自Pharmacia 公司;pUCm 2IFN 质粒为本室构建、保存。 工具酶和试剂:P fu DNA 聚合酶购自上海生工生物工程公司,限制酶、T 4DNA 连接酶、S1核酸酶 购自T aK aRa 公司,HuIFN 2 α标准品购自卫生部上海生物制品研究所,Sephecyic 200购自Phamacia 公司,其它试剂均为国产分析纯。 人羊膜上皮细胞(WISH )及水疱性口炎病毒(VS V )购自卫生部上海生物制品研究所。112 方法 11211 定点突变:采用巨引物PCR 法[4] 。根据所得 P oIFN 2 α序列[2]设计3条引物:P1:5′G AT CCTG C G ACCTG CCT C A 3′;P2:5′G CTG AT CC AG T CC AG TG T AG AAC3′;P3:5′C AG AATT CAG AATGGG CTTG 3′。 其中P1处于IFN 基因的5′端,斜体C 为引入 的突变碱基,并在前面加了G AT CC (下划线部分),以便与经Bam HI 酶切后用S1核酸酶削平的载体进行平端连接构成新的Bam HI 酶切位点。P2处于IFN 基因内部,斜体T 为引入的突变碱基。P3处于IFN 基因的3′末端,下划线部分为引入的Eco RI 酶切位点(引物示意参见图1) 。 图1 引物示意图 Fig.1 P osition of primers The asterisk (3)indicates the sites to be mutated
重组人干扰素a2a栓
重组人干扰素 【批准文号】国药准字S1******* 【中文名称】重组人干扰素a2a栓
【产品英文名称】Recombinant Human Interferonα2a In Suppository Form 【功效主治】重组人干扰素用于治疗阴道病毒性感染引起的慢性宫颈炎、宫颈糜烂、阴道炎，预防宫颈癌。 【化学成分】重组人干扰素α 2a 【药理作用】药理：重组人干扰素α2a具有广谱抗病毒作用，其抗病毒机制主要通过干扰素同靶细胞表面干扰素受体结合，诱导靶细胞内2-5（A）合成酶、蛋白激酶PKR、MX蛋白等多种抗病毒蛋白，阻止病毒蛋白质的合成、抑制病毒核酸的复制和转录而实现。干扰素还具有多重免疫调节作用，可提高巨噬细胞的吞噬活性和增强淋巴细胞对靶细胞的特异性细胞毒等，促进和维护机体的免疫监视、免疫防护和免疫自稳功能。毒理：1、急性毒性试验：最
大剂量静脉或肌内注射小鼠，全部健存，无死亡，未测出LD50。2、长期毒性试验：大白鼠连续给药一个月，全部动物健存，未见异常反应。 【药物相互作用】重组人干扰素α 2a与其他药物同时使用，对药效无影响。 【不良反应】极少数病人初次用药后出现轻微腰腹酸痛，偶见一过性低热，外阴、阴道不适，可自行消失，不影响治疗。 【禁忌症】重组人干扰素α 2a儿童、孕妇禁用。 【产品规格】6万单位 【用法用量】将栓剂置于阴道后窟窿，每次一枚，隔日一次，睡前使用，6-10次为一个疗程或遵医嘱。
【贮藏方法】重组人干扰素α 2a应于避光、光燥、于2-8度保存。有效期18个月。 【注意事项】用药期间禁止坐浴和性生活，经期停止用药。如使用时环境温度过高，栓体变软（不影响疗效），请先置于4℃冰箱或冷水中3～5分钟，撕开塑料取出使用。
干扰素常识
一、什么是干扰素 1、是通过基因工程技术生产的高科技、绿色抗病毒生物兽药。 2、是一类蛋白多肽，具有多功能的细胞因子、具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调 节作用的可溶性糖蛋白。 3、能诱导动物细胞产生多种广谱抗病毒蛋白。 4、抑制病毒增殖，增强机体免疫应答。 5、在动物抵抗病毒感染过程中起着重要作用。 6、是目前所知发挥作用最快的病毒防御体系，几分钟内使机体处于病毒状态。 7、使机体在1－3周时间内对病毒的重复感染有抵抗作用。 二、干扰素的分类 根据产生干扰素细胞种类不同分为︱型和‖型 ︱型干扰素包括α、β 、δ、τ、ω 等亚型，最具有典型代表的是a亚型，具有强烈的抗病毒功能，因此又称抗病毒干扰素（IFN-α） ‖型干扰素目前只发现y亚型，具有强烈的免疫调节功能，因此又称免疫干扰素（IFN-y） ︱型和‖型均具有抗病毒、调节免疫、抗肿瘤的作用 区别：抗病毒方面IFN－a﹥IFN－y 免疫调节方面IFN－y﹥IFN－a 三、干扰素的药理 GTPase 阻断病毒穿入 2?，5?-Aase 阻断病毒脱壳 抗病毒蛋白表达———Pkas ——细胞呈现抗病毒状态——阻断病毒复制 2?-PDEas 阻断病毒合成 活化NK细胞 MO吞噬功能亢进 激活免疫细胞——加强KT细胞功能——杀伤病毒感染细胞 ADCC活性增强 四、干扰素作用 1、抗病毒、抗肿瘤作用 干扰素进入机体后产生多种广谱抗病毒蛋白分解病毒RNA阻断病毒蛋白合成导致tRNA与氨基酸不能结合消除病毒感染。 2、免疫调理、免疫增强作用：激活T淋巴细胞，活化巨噬细胞，吸引淋巴细胞向 炎性组织移动。 五、吉莱德系列干扰素具有的显著特点和优势： 1、高浓缩型 ①每毫升的活性单位高达100多万，无须加量使用。
猪_干扰素的研究进展
猪β-干扰素的研究进展 徐蕙,刘德辉,郭霄峰 (华南农业大学兽医学院,广州 510642) 摘要:干扰素是由干扰素诱生剂诱导生物细胞所产生的一类高活性多功能的糖蛋白,干扰素自被发现以来,由于其广谱抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用而受到研究者们的重视。在其基因结构、作用机理及体外重组表达等方面都取得了巨大突破。作者综述了猪β-干扰素的基本特性、作用机理及其临床应用。 关键词:猪β-干扰素;基本特征;作用机理 中图分类号:S852.4 文献标识码:A 文章编号:1671-7236(2009)12-0120-03 干扰素(IFN )是一种广谱抗病毒糖蛋白,是1957年由英国病毒生物学家A lick Isaacs 和瑞士研究人员Jean Lindenmann 在利用鸡胚绒毛尿囊膜研 究流感干扰现象时发现的,并将其命名为干扰素。干扰素的分子质量一般在20～100ku ,不能透过普通透析膜,但可通过滤菌器,比病毒颗粒小,沉淀病毒的离心力不能沉降干扰素。干扰素的天冬氨酸、谷氨酸和亮氨酸含量较高,不含核酸,所以不被DNA 酶或RNA 酶破坏,但易被胰蛋白酶、乙醚、氯仿、酮基等破坏,-20℃条件下可长期保存。I 型干扰素具有耐酸性,在pH 2时稳定。Ⅱ型干扰素不耐酸,也不耐热,即在pH 2时不稳定,在56℃条件下30min 会被破坏。干扰素具有广谱性,可抗多种病毒和微生物。 1 IFN -β的类别与组织细胞来源 由于研究角度的不同,干扰素的分类方法有也不同。根据干扰素蛋白质的氨基酸结构与免疫原性的不同,可将干扰素划分为IFN -α、IFN -β、IFN -γ。其中又根据其对酸的不同敏感性,分为Ⅰ型干扰素和Ⅱ型干扰素。Ⅰ型干扰素对酸的耐受性较大,分别有IFN -α、IFN -β、IFN -ω、IFN -δ、IFN -κ、IFN -τ6种类型(银晓等,2008),Ⅱ型干扰素对酸敏感,迄今为止只有IFN -γ一个成员。近年来Ko tenko 等(2003)将Sheppard 鉴定的干扰素新家族命名为IFN -λs (IFN -λ1、IFN -λ2和IFN -λ3)。人类基因组组织(human genome org anizatio n ,H UGO )暂时将它们命名为IL -29、I L -28A 和IL -28B 。IFN -λs 与Ⅰ 收稿日期:2009-05-05 作者简介:徐蕙(1983-),女,广东人,硕士,研究方向:预防兽医 微生物。 通信作者:郭霄峰,男,博导。E -mail :xfgu o @scau .edu .cn 型IFN 有着几乎相同的功能,是否具有独特功能,正在进一步的研究之中(李珊等,2005)。正常的细 胞不产生干扰素,只有合成干扰素的潜力(高建忠等,2004),当细胞受到病毒感染或是诱生剂作用时产生。IFN -β主要由纤维母细胞受诱生剂作用而产生,IFN -α来源于白细胞,而IFN -γ来源于淋巴细胞。2 IFN -β的结构IFN -β因种属不同氨基酸序列也不同。猪与人、牛、马的IFN -β氨基酸同源性分别为65.1%、65.1%和66.1%(曾芸等,2007)。而同一种属的不同品种中,氨基酸序列略有不同,但都在98.5%以上。Antho ny (2002)对干扰素基因研究,得出IFN -α和IFN -β基因位于人9号染色体和小鼠的4号染色体,并连锁在一起。IFN -α和IFN -β氨基酸的同源性为26%～30%(武迎红等,2007)。2.1 猪IFN -β的结构 猪IFN -β基因含有一个561bp 的ORF ,编码186个氨基酸,分子质量约为22ku 。ORF 前21个氨基酸为信号肽,成熟蛋白为分泌型蛋白,有3个潜在的N 端糖基化位点Asn 94、Asn 101、Asn 173,氨基酸序列分别为Asn Asp Se r 、Asn G lu Th r 及A sn A sp Ser ,受体为Asn 上的N 原子。曾芸等(2007)对广西巴马猪的IFN -β进行蛋白质结构预测,得出在成熟的IFN -β蛋白中含有5个α-螺旋结构,分别位于第23-43,72-92,101-128,139-157和160-183位氨基酸残基。第27-177位氨基酸残基区域为IFN -β蛋白与其在细胞表面的Ⅰ型干扰素共有受体的结合区域。M ark 等(1984)报道可用任何氨基酸替代第17位的Cy s ,从而获得一系列IFN -β的同系物。替换第17位的Cys 可采用核苷酸点突变技术,将第17位的Cy s 变成中性氨基酸,如丝氨酸或酪氨酸。第17位的Cy s 对保持IFN -β的空间结构无明显的作用,该Cy s 被Ser 替 · 120·疾病防治中国畜牧兽医 2009年第36卷第12期
国内动物干扰素的研究进展
近年来，随着病原菌新毒株、变异株的不断出现，我国动物疾病的防制面临严峻的挑战，目前的预防和治疗措施已经不能经济而有效地控制疫病的发展，尤其是病毒性疾病的危害日益严重，因此迫切需要一种有效的防治措施。 自１９５７年Ｉｓａａｃｓ和Ｌｉｎｄｅｎｍａｎｎ发现干扰素以来，干扰素已经显示出了极强的抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节活性和应用前景。因而，干扰素的研究越来越受到人们的广泛关注。目前动物干扰素主要停留在基础研究和临床试验阶段，且大多数集中于猪、鸡、鱼等少数动物，但近年来也取得了不小的进步，目前已有商品化的猪、犬、鸡等重组干扰素产品面市。本文就近年来国内动物干扰素的研究进展综述如下。 一、概况 干扰素 ＩＦＮ 是一类具有广泛生物学活性的蛋白质，具有调节机体免疫功能、抗病毒、抗肿瘤等多种作用，是机体防御系统的重要组成部分。ＩＦＮ的抗病毒活性是通过宿主细胞而间接完成的，并具有严格的种属特异性及选择性。根据其来源和结构，ＩＦＮ可分为α、β、γ三种类型，近年来，还发现了ω、τ等类型的干扰素。ＩＦＮ—α主要由单核细胞产生；ＩＦＮ—β主要由纤维母细胞产生，血管内皮细胞也可产生；ＩＦＮ—γ由抗原及ＰＨＡ等有丝分裂原刺激Ｔ细胞后产生，此外，ＮＫ细胞也可产生。ＩＦＮ—τ是反刍动物孕体附植时滋养层细胞分泌的特有的妊娠识别信号因子，在妊娠识别中发挥着重要的作用。 ＩＦＮ—α、ＩＦＮ—β尽管结构不同，但有许多相似之处，它们来自同一个祖先基因，结合相同的细胞表面受体，并发挥相似的生物学效应，因而将它们一起划归为Ⅰ型干扰素。其中ＩＦＮ—α是２０个结构相关的分子量约为１８ｋＤａ的多肽家族，每个由独立的基因编码；ＩＦＮ—β是个单基因产物，是分子量２０ｋＤａ的糖蛋白。ＩＦＮ—γ属Ⅱ型干扰素，由大约２１～２４ｋＤａ的亚基组成的以同源双体形式存在的糖蛋白。ＩＦＮ一γ对５６℃、ｐＨ２和０．１％ＳＤＳ敏感。 二、干扰素的生物学活性 干扰素在１９５７年被发现时，抗病毒活性被认为是其唯一特性，但随后研究发现干扰素除具有抗病毒增殖作用外，还有一系列其他生物学活性，如抗肿瘤、免疫调节作用等。大量研究表明，干扰素的生物学活性的发挥有赖于其诱导的多种效应蛋白质的合成。干扰素并不直接作为反式作用因子对其效应分子的基因组进行调控，而是通过受体介导的信号转导系统引发一系列特定的生化反应，最终达到效应分子的表达目的。此外，干扰素活性很高，并且其活性呈明显的多样性。现将其主要活性分述如下。 （一）Ⅰ型干扰素的主要生物学活性 抑制病毒复制，主要是通过诱导细胞合成多种酶 ２’—５’寡聚腺苷酸合成酶等 和旁分泌作用。 抑制细胞的增殖 如肿瘤细胞等）。 加强ＮＫ细胞杀伤病毒感染细胞的能力（ＮＫ细胞具有干扰素受体 。 改变ＭＨＣ分子的表达，增强ＭＨＣⅠ类分子的表达而抑制ＭＨＣⅡ类分子的表达。（二）Ⅱ型干扰素的主要生物学活性 ＩＦＮ—γ抗病毒活性较Ⅰ型低，但它的免疫调节和抗细胞增殖的作用较强，所以又称免疫干扰素，它是一种强的巨噬细胞、ＮＫ细胞、血管内皮细胞活化剂，能激活巨噬细胞并促进其活性；能直接作用于Ｔ和Ｂ淋巴细胞，促进分化；能增强ＭＨＣⅠ类分子和ＭＨＣⅡ类分子的表达。
干扰素的作用
干扰素的作用 近两年，由于畜禽免疫抑制性疾病的危害日趋严重，免疫增强剂在畜牧生产中被广泛应用。动物受到疫病威胁或处于应激状态，特别是畜禽处于免疫抑制时使用免疫增强剂是有效的。随着科学技术的进步及现代畜牧业的需要，免疫增强剂的预防、保健作用越来越受到重视，特性确定、高效、稳定、无毒的理想免疫增强剂将是未来防治畜禽疾病的主要物质，猪用免疫增强剂主要包括干扰素、猪用转移因子、免疫球蛋白、低聚糖、黄芪多糖等，本文主要介绍干扰素的用法、功效和注意事项等。 1 免疫增强剂的概念与分类 免疫增强剂是指单独使用或者与抗原联用均能增强机体免疫应答的物质，具体讲就是能够通过增强巨噬细胞强活性和非特异性物质的免疫原性的稳定物质。免疫增强剂分为两大类，即主动性免疫增强剂和被动性免疫增强剂。主动性免疫增强剂又分为特异性和非特异性免疫增强剂。常用的特异性免疫增强剂有灭活的细菌、病毒，或由其提取的抗原成分，如大家很熟悉的猪瘟、猪伪狂犬、猪乙型脑炎等各种疫苗，机体受这些免疫刺激剂的作用后，会产生一系列的免疫反应和相应的抗体，可防止相应的疾病的发生。这类免疫增强剂特异性强、疗效肯定且作用持久，已广泛应用于临床。非特异性免疫增强剂作用于机体，可促进机体的非特异性免疫反应，如使白细胞、巨噬细胞的噬菌功能增强。我们平常所说的黄芪多糖、左旋咪唑等属于非特异性免疫增强剂，当与疫苗一起使用时也具有特异性免疫增强剂的作用。 2 干扰素（Interferon, IFN） 1957年，英国病毒生物学家Alick Isaacs和瑞士研究人员Jean Lindenmann，在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感干扰现象时了解到，病毒感染的细胞能产生一种因子，后者作用于其他细胞，干扰病毒的复制，故将其命名为干扰素。1966-1971年，Friedman发现了干扰素的抗病毒机制，引起了人们对干扰素抗病毒作用的关注，而后，干扰素的免疫调控及抗病毒作用、抗增殖作用以及抗肿瘤作用逐渐被人们认识。1976年，Greenberg等首先报道用人白细胞干扰素治疗4例慢性活动性乙肝，治疗后有2例HBeAg消失。但是由于人白细胞干扰素原材料来源有限，价格昂贵，因此未能大量应用于临床。1980-1982年，科学家用基因工程方法在大肠杆菌及酵母菌细胞内获得了干扰素，从每升细胞培养物中可以得到20～40ml干扰素。从1987年开始，用基因工程方法生产的干扰素进入了工业化生产，并大量投放市场。 干扰素是多种诱导剂（病毒、细菌和大分子等）诱导细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的一类蛋白质。而且认为是在特定的诱导物（包括病毒与非病毒物质）作用下，由细胞基因组编码产生的一种或多种蛋白质，即为干扰素。这种蛋白质并非直接作用于病毒，其活性又受到另一组细胞基因的调控，即在干扰素作用于细胞时，又诱生另一类基因产物，这类基因产物引起细胞具有广泛的抗病毒活性，抑制细胞分裂和肿瘤细胞增殖以及调控免疫系统功能的活性。干扰素是机体受病毒或其他干扰素诱生剂刺激巨噬细胞、淋巴细胞及体细胞产生的具有高活性的多功能糖蛋白，在正常机体的脾脏、肝脏、肾脏、外周血淋巴细胞和骨髓中都可以检出。 2.1干扰素的主要功能 2.1.1抗病毒功能
重组人干扰素α2b喷雾剂(假单胞菌) (新增)
重组人干扰素α2b喷雾剂(假单胞菌) Chongzu Ren Ganraosu α2b Penwuji （Jiadanbaojun） Recombinant Human Interferon α2b Spray（P.putida） 本品系由高效表达人干扰素α2b基因的腐生型假单胞菌，经发酵、分离和高度纯化后制成。含适宜稳定剂、防腐剂。 1.基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2.制造 2.1 工程菌菌种 2.1.1 名称及来源 重组人干扰素α2b工程菌系由带有人干扰素α2b基因的重组质粒转化的腐生型假单胞菌菌株(Pseudomonas putida VG-4)。 2.1.2 种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 2.1.3 菌种检定 主种子批和工作种子批菌种应进行以下各项全面检定。 2.1. 3.1 划种ＬＢ琼脂平板 应呈典型的腐生型假单胞菌集落形态，无其他杂菌生长。 2.1. 3.2 染色镜检 应呈棒状，可运动，有荚膜，无芽孢。涂片染色应呈典型的革兰阴性。 2.1. 3.3 对抗生素的抗性 应与原始菌种相符。 2.1. 3.4 电镜检查（工作种子批可免做） 应为典型的腐生型假单胞菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。 2.1. 3.5 生化反应 不液化明胶、不水解淀粉和聚β-羟基丁酸酯（附录ⅪⅤ），不能利用反硝化作用进行厌氧 2.1. 3.6 干扰素表达量 在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。 2.1. 3.7 表达的干扰素型别 应用抗α2b型干扰素参考血清做中和试验，证明型别无误。 2.1. 3.8 质粒检查 该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。 2.1. 3.9 目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做） 目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。 2.2原液制备