盐酸克伦特罗的免疫检测技术
新疆农业大学
专业文献综述
题目: 肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术姓名: 郑峰
学院: 食品科学与药学学院
专业: 食品科学
班级: 2013级研究生
学号: 1340020279
成绩：
指导教师: 王子荣职称: 教授
200 年4月24日
新疆农业大学教务处制
肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术
郑峰指导老师：王子荣教授
摘要：本文介绍了盐酸克伦特罗的理化特性和生理作用，分析了它在肉制品中残留对人体造成的危害，同时综述了肉品中残留盐酸克伦特罗的胶体金免疫检测技术和酶联免疫检测技术的原理和操作要点，分析了两种免疫检测技术的特点，总结了两种免疫检测技术的技术优势并提出自己的观点。
关键词：盐酸克伦特罗；生理；胶体金检测；酶联免疫
The detection of Clenbuterol hydrochloride residues Absttact:This paper describes the effects in physiology of the clenbuterol hydrochloride remained in meat products,and analyzes the harms which caused by the residues in meat; The artical also summarizes the characteristics of technology principles with gold and enzyme-linked immunoassay to analyze the residues in meat and the operation points in immunoassay technique,contrasting the two immunoassay techniques.Finally the advantages of both immunoassay techniques were summarized and views were put forward on.
Key words:Clenbuterol;DIGFA;ELISA
目前食品安全问题已经成为国内最为关注的问题，其关系到每个人的将抗发展。畜产品在人类饮食结构中占有重要的地位，如何确保畜产品的安全是目前急需解决的问题。市面上畜肉产品的安全卫生主要由两方面因素决定，即宰前因素和宰后因素，宰前因素主要是由动物的养殖方式和病害控制对肉品质产生的影响；宰后因素主要表现在宰后检验、运输、加工、包装等方面。随着一系列由饲料问题引起的肉品安全问题的发生（二噁英、疯牛病、苏丹红和瘦肉精），人们渐渐认识到饲料安全在保障畜产品安全中的重要性。饲料安全性关系到畜产品的质量与人类的健康。
盐酸克伦特罗（Clenbuterol Hydrochloride，CL）俗称瘦肉精是国家违禁药物中的一种[1]。盐酸克伦特罗是一种β-肾上腺素受体激动剂，曾作为药物用于治
疗人的呼吸系统疾病（哮喘等），1984年被发现其具有提高动物胴体瘦肉率的效果，所以CL被违规添加到动物饲料中，尤其在猪的养殖中。饲料中添加CL喂养畜禽会导致其在动物组织中残留蓄积，食用此类的肉制品会引起急性或慢性的中毒反应[2]。因此，世界上许多国家都禁止在畜禽的饲养中使用CL，中国农业部1997年发文禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用，商务部自2009年12月9日起，禁止进出口盐酸克伦特罗，2001年12月27日—4月9日，农业部分别下发文件禁止使用β-激动剂类药物作为饲料添加剂[1]。但是受到利益的驱使，CL 的滥用现象仍屡禁不止。2011年3月15日河南“瘦肉精”案件被央视曝光，不仅使公众持续高度关注，也暴露出监管中出现的问题。
1 盐酸克伦特罗的理化特性及作用机理
2.1 盐酸克伦特罗的理化特性
盐酸克伦特罗(Clenbuterol，CL)，俗名瘦肉精，是β2-肾上腺素受体激动剂的一种[3]，呈白色结晶状，略苦，易溶于水、甲醇、乙醇等溶剂，不易溶于氯仿，其化学性质比较稳定，超高温度下才能发生缓慢分解现象。研究表明，含有CL 的畜禽产品经100℃沸水煮过后，所含该药的残留物基本不变。动物食用后在消化吸收系统内迅速吸收，20min内起效，2.5h后血液浓度达到峰值，其作用时间长达5h，消除半衰期时间较长，一个半衰期大约一天，其主要残留在动物眼睛、毛发和内脏中，其中动物肝脏中残留最多[4]。在CL的应用数年内国际上发生多起食用残留CL肉制品的中毒事件，人们逐渐注意到CL的毒副作用。
1.2 CL的作用机理
CL作为一种β2-受体激动剂，起到拟交感神经的作用。最初，它作为治疗疾病的药剂被使用，医学研究表明其可用于治疗支气管炎、哮喘性慢性支气管炎以及呼吸系统疾病所导致的支气管痉挛[4]。这是由于其具有松弛支气管肌肉的作用，明显增加支气管纤毛运动促进粘液溶解，有利于病人痰液的顺利排出。
其生化机理表现在CL首先能促使细胞内环状腺苷酸(cAMP)的合成，激活cAMP参与的蛋白激酶，被激活的激酶在细胞脂肪组织内可以抑制乙酰辅酶A、羟化酶和甘油三酯合成酶的活性，提高了脂肪分解酶的活性，参与调节三羧酸循环，加快脂肪的分解[5]。CL在动物饲养中提高了动物胴体品质，使瘦肉率增加12%左右，骨骼肌内脂肪降低10%左右。另一方面，CL可以降低动物血液中的Mg+的浓度提高肌肉的兴奋度，并改变细胞膜的通透性，抑制脂肪的合成和蛋白
质的分解，从而使大量的氮转化为蛋白质（瘦肉）。其作用图如下：
克伦特罗
↓
受体→修饰受体
↓
腺苷酸环化酶（无活性）→腺甘酸环化酶（无活性）蛋白质激酶（无活性）
↓ ↓
ATP → cAMP → 蛋白质激酶（有活性）
激素敏感酯酶（无活性）→↓
激素敏感酯酶（有活性）
甘油三酯→↓
脂肪酸+甘油[5]
2 盐酸克伦特罗的危害
少量的盐酸克伦特罗可以用于治疗呼吸道疾病，大量使用CL对动物有害，如果动物饲料中含有CL，动物会表现为：血管急剧扩张、心率加快、呼吸速度加快、体温的上升、心脏和肾脏负担加重等反应，长期将其喂食动物会大量减少机体内受体数量，对CL敏感性降低，导致动物自身体内促肌肉生长激素减少从而自生生长效应逐渐丧失[6]。
人食用了含有CL残留的肉制品会出现类似于动物甚至比动物更严重的症状，人类使用超过标准的肉后会出现急性中毒症状发生头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢麻木等一系列不良反应。血液检查可见白细胞增多、血钾偏低、血液中丙酮酸含量升高。长期食用含有盐酸克伦特罗的肉和内脏会引起人体心血管系统和神经系统的疾病，降低血管壁弹性、血管周围的神经被扩张的血管压迫产生心肌收缩加强、心跳加快、呼吸加剧等不良反应，严重了还能引起机体代谢紊乱。
研究表明，盐酸克伦特罗能使大鼠SOD活性显著降低，MDA含量明显升高，使大鼠胸腺和脾脏发生一系列的病理损伤，说明该物质能破坏动物的免疫器官，对动物机体有较大的危害[7]。
3免疫分析技术在检测肉品中残留盐酸克伦特罗的应用
免疫检测分析技术是建立在免疫学基础上的一项检测技术，以抗原抗体特异性结合反应为基础原理。为检测特异性的微生物及其毒素，相应抗体被广泛用于免疫检测方法中[8]。其中大部分抗体都来源于鼠或兔血清，其主要评价指标包括特异性和灵敏性，分为多克隆抗体与单克隆抗体。多克隆抗体因为在制备过程中操作较简单、制备周期较短，因此，在免疫学检测中应用的比例较大。但多克隆抗也有其自身缺点，由于动物免疫反应具有可变性和偶然性，所以特异性方面没有单克隆抗体可靠、稳定，免疫检测技术由于其操作方便，出结果较快所以被应用于肉品种CL残留量的检测[9]。免疫分析技术主要包括滴金免疫技术(DIGFA) 、酶联免疫技术(ELISA)、生物免疫传感器技术(BS)和放射免疫分析技术(RIA)等[8]。
3.1胶体金检测盐酸克伦特罗
3.1.1 原理：
胶体金法检测原理是样品在检测卡上从加样孔开始依次向检测线（T 线）、质控线（C 线）泳动。加入CL样品后，金标CL 单抗体会被T 线上固定化的CL 捕获，形成一条棕红色的T 线；此时过量的金标CL 单抗继续涌动被C 线上固定化的二抗捕获形成一条棕红色的 C 线[10]。如果样品呈阳性，CL 将与固定化在T 线上的人工抗原竞争有限的胶体金标记单抗，样品中CL含量越多，那么检测线的颜色越浅。
3.1.2 检测技术
将样本约4g 绞碎装入5mL 的离心管，90℃以上水浴加热10min 后取出冷却至室温。吸取2-3滴PBST 和样品渗出液到1.5mL离心管混合后，取 3 滴滴加于加样孔中，加3滴8ppb 的甲醇克伦特罗，4-5min 后读取结果[11]。
3.1.3 胶体金法检测特点
以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术检测畜肉中盐酸克伦特罗的残留。如果待测样中无盐酸克伦特罗，则金标抗体能顺利地与固相载体结合，形成肉眼可见的红色带[12]；若待测样中含有盐酸克伦特罗，则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合，竞争性地占去了金标抗体与固相载体结合的机会，使金标抗体与固相载体的结合量减少，无法形成肉眼可见的红色带。胶体金免疫层析技术是将克伦特罗的抗体与胶体金结合形成免疫金，制成检测结果肉眼可见的试纸条。此法有特异性好、灵敏度高、简便、快速、对实验条件和操作
者要求不高等特点，适合用作大批量样本的初步筛选和现场检测，缺点是假阳性率较高[13]。
3.2 酶联免疫分析技术(EIA)
3.2.1 原理
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性[11]。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。洗涤使载体上形成的抗原抗体复合物与未结合的其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例[11]。加入酶反应相应的底物，底物被酶催化发生变色反应，产物生成的量与标本中受检物质的量有直接关系，所以可以根据颜色反应的变化程度来进行定性和定量分析。酶的催化率比较高，可以放大效果，从而使测定方法达到很高的敏感度[13]。
3.2.2 检测方法
称取 2.0左右去除肥肉和筋膜的瘦肉样本绞碎，置于10mL离心管中；加入6mL 组织样本提取液，振荡混匀，静置约10min；2500r/min 离心12min；取1mL 上清液，加入20μL氢氧化钠溶液混匀后2500r/min 离心7min，冷藏备查。取出微孔板，对应微孔编号，每个样本做 1 孔，标准做 2 孔，阴、阳性对照各2 孔[14]。每孔滴加样本20μL，再加入50μL CL 酶标物，再加入CL 抗体试剂80μL 振荡混匀后置25℃避光环境中反应30min。洗涤 5 次后加入底物液A、B 液50μL 振荡混匀，25℃避光环境中反应15～20min 后加入终止液50μL 振荡混匀，于双波长450/630nm 检测，5min 内读完每孔OD 值
3.2.3酶联免疫分析技术特点
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：
①固相的抗原或抗体[15]。
②酶标记的抗原或抗体。
③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
ELISA 是一种常用固相酶免疫测定方法[8]，以酶或辅酶作为标记物来标记抗原或抗体，再通过酶促反应的放大作用来显示免疫学反应。ELISA 法具有选择性强，所用试剂易保存、性质稳定，结果判断客观、样品处理量大等优点。
4 总结
胶体金免疫层析技术是将克伦特罗的抗体与胶体金结合形成免疫金，制成检测结果肉眼可见的试纸条。此法有特异性好、灵敏度高、简便、快速、对实验条件和操作者要求不高等特点，适合用作大批量样本的初步筛选和现场检测，缺点是假阳性率较高。
酶免疫分析技术是将抗原和抗体亲和反应的特异性、专一性与酶对底物的高效催化作用结合起来的固相免疫测定技术。陈继明等研究用酶免法检测饮料、尿样与脏器中克伦特罗含量，其检测结果与高效液相色谱法的检测结果大体一致。与胶体金法相比，ELISA法有特异性强、灵敏度高，可作定性与定量分析、结果更准确等特点。
根据目前国内外检测CL各种方法的进展情况以及CL滥用及残留的严峻性，建立一种克服上述各种检测方法缺点的简便、快速、精确、准确、可实现现场检测的测定CL技术势在必行。
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间接免疫荧光法检测抗核抗体的结果分析
间接免疫荧光法检测抗核抗体的结果分析 目的探讨间接免疫荧光法（IIFA）检测抗核抗体在自身免疫性疾病（AID）患者中的结果应用分析。方法分别采用IIFA和胶乳法检测50例自身免疫性疾病患者血清样本抗核抗体（ANA）。结果IIFA法检测血清ANA的灵敏度为76%，胶乳法检测血清ANA的灵敏度为58%，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论IIFA 法检测ANA的敏感度明显高于胶乳法，提高了临床的阳性检出率。IIFA法用于ANA的筛查，阳性标本在进行滴度检测，有助于临床诊断。 标签：抗核抗体；间接免疫荧光法；胶乳法 [Abstract] Objective To discuss the results of indirect immunofluorescence in detecting the antinuclear antibodies in patients with autoimmune diseases. Methods The antinuclear antibodies of serum samples of 50 cases of patients with autoimmune diseases were detected respectively by the IIFA and emulsion method. Results The difference in the sensitivity degree of ANA detected by IIFA method and emulsion method had statistical significance（76% vs 58%）（P＜0.01）. Conclusion The sensitivity degree of ANA detected by IIFA method is obviously higher than that detected by the emulsion method，which improves the positive detection rate in clinic，the application of IIFA method for ANA screening and the application of positive specimens for titer detection contribute to clinical diagnosis. [Key words] Antinuclear antibodies；Indirect immunofluorescence；Emulsion method 抗核抗体（ANA）包括细胞核的自身抗体和细胞质内的核酸和核蛋白的所有成分的自身抗体，是指哺乳动物的细胞中以细胞核为靶抗原的自身抗体的总称[1]。ANA在系统性红斑狼疮、干燥综合征、硬皮病、慢性活动性肝炎等自身免疫疾病中均呈不同程度的阳性。因此在自身免疫性疾病的临床诊断、鉴别以及评价预后中，ANA检测已成为重要的筛查指标[2]。临床上ANA检测方法较多，现阶段最常用、最有效的检测方法是IIFA法。由于不同检测方法检测灵敏性、准确性不同，往往影响到检测结果，使检测结果存在一定的差异，尤其在ANA 呈弱阳性的标本中，不同检测方法的检测成为争议的焦点。为进一步确认IIFA 法和乳胶法检测ANA的效果，进而客观评价该两种检测方法差异性，该文2015年10—12月间选取该院确诊或疑似为AID的患者50例作为观察对象，同时采用IIFA法和乳胶法检测，报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 所有标本均来自2015年10—12月到该院确诊或疑似AID的门诊和住院患者50例，男性15例，女性35例，年龄15～65岁。
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(CE)等. 1.气相色谱一质谱联用法(GC—MS) 气相色谱一质谱联用法是我国CLB测定中的确证性方法 fNY/T468—2001].是最常用的CLB测定方法,能在多种残留物同时存在情况下对某种特定的残留物进行定性,定量分析.具有灵敏度高,假阳 性率低等特点.测定时一般需要柱前衍生,最常用的衍生试剂是双三甲 基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本办法具有前处理过程烦琐,检测时间 长,需贵重仪器等缺点. 吴银良等建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱 克多巴胺残留量的固相萃取一气相色谱一质谱分析方法.样品在碱化 条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取,浓缩后用乙酸乙酯溶解,经SCX固相萃取(SPE)柱净化,经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,外标法定量.盐酸克伦特罗的检出限为O.301~g/kg.盐酸 克伦特罗添加浓度在1.O～5.01zg/kg范围内,添加回收率为77.4%～88.3%;相对标准偏差(RSD)为3.1%～5.1%.胡明友等[21建立了克伦特罗的测定方法,用甲醇提取,正己烷脱脂净化,然后旋转蒸发冷冻离心浓 缩后加0.1mmol/L的盐酸溶解,加样到净化柱上,用4%氨化乙酸乙酯 洗脱后氮气吹干,甲苯溶解后加BSTFA衍生,用气相色谱一质谱法进行测定,内标定量.结果表明:添加56~10-9540x10(∞)浓度水平的克伦 特罗,方法回收率在89.3%～107%,相对标准偏差为7.3%～16.5%,线性相关系数r为0.998,克伦特罗的最低检测限为2.0xl0f∞).PeterBa—tioens等[31用气相色谱一质谱联用法测定了牛,羊,猪粪便中的盐酸克伦特罗含量,最低检测限为2n. 2.高效液相色谱法(HPLC) 高效液相色谱法是检测CLB残留常见的分析检测手段之一,适合 大批量样品的快速测定.我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证法.HPLC法中常用的检测器有电化学检测器,紫外检测器;其优点是 检测精确度高,其最低检测限范围为1～15ng/g,而且假阳性率低,与GC—MS法相比样品不必衍生;缺点是检测过程繁琐,检测时间长,需贵
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免疫组化和免疫荧光的区别[参照材料]
请问你曾经被IHC、ICC和IF所困扰过吗？ 作者：北京义翘神州 在实验中，有没有一种感觉，就是对免疫组化(IHC)，免疫细胞(ICC)，以及免疫荧光(IF)傻傻分不清，那么今天我们就来讨论一下这三者的区别，先贴图上来以便有个大致的区分。 从图中我们可以看出，免疫检测技术可以根据报告标签的不同，分为免疫化学和免疫荧光两类，而根据样品类型不同，可以分为组织和细胞检测技术。因此，才会延伸出三个相近的概念。 为了更好的区分这三个概念，我们还可以根据他们的英文词根来分析一下，他们的英文名分别是免疫组织化学Immunohistochemistry (IHC)，免疫细胞化学Immunocytochemistry (ICC)，免疫荧光Immunofluorescence (IF)。 词根分析： Immuno-指的是免疫技术（例如，抗体和抗原的结合） Histo-指的是组织（细胞以及它周围的细胞外基质） Cyto-指的是细胞（不包含细胞外的基质） Chemistry-在这里指的是化学检测方法（例如，颜色的变化）
Fluorescence-对被激发的荧光团的检测 通过对词根的解释，相信你在心中不再迷茫了吧。 这三个应用技术都属于免疫技术，都是将抗原与抗体的结合可视化，即通过一定的方法可以直接看到实验结果。而常用的方法就是化学显色和荧光显色。如果报告标签是酶促的，就是免疫化学，如果是荧光的，就是免疫荧光。 其实我们纠结免疫荧光的一个原因还在于免疫荧光的英文名字Immunofluorescence (IF)，但若是写成免疫组织荧光(IHF)或是免疫细胞荧光(ICF)，那我们是不是就豁然开朗了。虽然这两个词汇在英文文献中应用的还不是很广泛，但绝对不是我自己杜撰的哦，已经有些学者在使用了，规范化应该也只是时间的问题。 可能文字描述还是有些晦涩难懂，那我们就直接上图吧。先不看下面答案，仅从几张图片，你能明白哪张图代表哪种应用吗？ A免疫组织化学：兔EGFR单克隆抗体（10001-R043-50）—人胎盘
免疫荧光检测
免疫荧光技术（检测抗核抗体（ANA）的实验方案） 荧光免疫技术是以荧光物质标记的特异性抗体或抗原作为标准试剂，用于相应抗原或抗体的分析鉴定和定量测定。荧光免疫技术包括荧光抗体染色技术和荧光免疫测定两大类。荧光抗体染色技术是用荧光抗体对细胞、组织切片或其他标本中的抗原或抗体进行鉴定和定位检测，可在荧光显微镜下直接观察结果，称为荧光免疫显微技术，或是应用流式细胞仪进行自动分析检测，称为流式荧光免疫技术。荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定和荧光偏振免疫测定等。本次实验以荧光免疫显微技术检测抗核抗体(ANA)为例进行实习。 抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。 抗核抗体实验原理 以小鼠肝细胞或某些培养细胞(如Hep-2)作抗原片，将病人血清加到抗原片上。如果血清中含有ANA，就会与细胞核成分特异性结合。加入荧光素标记的抗人IgG抗体又可与ANA结合，在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光。 试剂与器材 1．抗原片现多用商品试剂。如需自行制备，方法如下： (1)肝印片制备：取4-8周龄小鼠，断颈杀死后，剖腹取肝。将肝脏剪成平面块，用生理盐水洗去血细胞，用滤纸吸干渗出的浆液。将切面轻压于载玻片上，使其在载玻片上留下薄层肝细胞。冷风吹干，乙醇固定，冰箱可保存1周。
(2)Hep-2细胞抗原片制备：Hep-2细胞是建株的人喉癌上皮细胞。经适宜培养在载玻片上形成单层细胞抗原片，用洗涤洗去培养基。干燥后，用无水乙醇固定。 (3)肝切片制备：取小鼠肝组织作冰冻切片，厚4μl。-30℃保存备用。 2．异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗人IgG抗体(FITC-抗人IgG抗体)有商品供应，临用时按效价稀释。 3．L PBS 4．缓冲甘油取甘油9份加PBS 1份。 5.待测血清、阳性和阴性对照血清临床标本筛选获得。 6．器材荧光显微镜、孵箱、有盖湿盒、染色缸、吸管、试管等 操作方法 1．准备：检查加样板，生物载片恢复室温，标记。 2．稀释：PBS-Tween缓冲液稀释血清，设阴阳性对照。 3．加样：加样板放于泡沫塑料板上，加25μl稀释后血清，至加样板的每一反应区，避免气泡。加完所有标本后开始温育。 4．温育：将生物薄片盖于加样板的凹槽里，反应开始，室温温育30分钟。 5．冲洗：用烧杯盛PBS-Tween缓冲液流水冲洗生物薄片，然后立即将其浸入盛有PBS-Tween缓冲液的小杯中至少1分钟。不必混摇。 6．加样：滴加20μl荧光素标记的抗人球蛋白（结合物）至一洁净加样板的反应区，完全加完方可继续温育。荧光素标记的抗人球蛋白用前需混匀并以PBS-Tween缓冲液稀释。
《动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法》
ICS 备案号： DB34 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定 —胶体金免疫层析法 Determination of clenbuterrol residue in animal tissues Colloidal gold immunochromatographic method （征求意见稿） 安徽省市场监督管理局 发布
DB34/T 824—2008 II 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准代替DB/T 824-2008《动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法》，除编辑 性修改外主要技术变化如下： ——修改了范围（见1）； ——修改了规范性引用文件（见2）； ——修改了检测步骤（见5）； ——修改了结果判断（见6）； ——修改了结果确认（见7）。 本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所。 本标准起草人：许世富、。 本标准2008年8月发布，本次为第一次修订。
DB34/T 824—2008 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法 1 范围 本标准规定了动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留测定的胶体金免疫层析法。 本标准适用于动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留的快速检测。 本标准检测限为3μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 本试验采用胶体金竞争抑制法。将氯金酸用枸橼酸钠还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，将样本滴加在胶体金检测条样品垫一端，使液体慢慢向吸水纸另一端渗移。在样本移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上的盐酸克伦特罗人工抗原的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显紫红色，结果为阴性。 4 试剂和材料 4.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的二级水。 注：不同检测卡制造商间的产品组成和操作会有细微的差别，应严格按说明书要求规范操作。 4.2 胶体金免疫层析快速检测卡组成 4.2.1 盐酸克伦特罗抗体单克隆抗体。 4.2.2 胶体金。胶体金溶液采用氯金酸还原法制备，应为带负电的紫红色疏水胶体金溶液，金颗粒大小应在30 nm～60 nm之间。 4.2.3 硝酸纤维素膜。硝酸纤维素膜表面应平整、光滑、白净，没有划痕、凹印、小孔、水迹、橘皮状或其他肉眼能见的瑕疵，无灰尘、油渍或其他杂物。硝酸纤维素膜宽度为（2 5.4±0.5）mm，长度在（100±2）mm，厚度在（185±19）μm，毛细流速度为（180±45）s/40 mm。 4.2.4 聚酯纤维膜。聚酯纤维膜表面形状应为基本均匀的矩形，无明显歪斜现象。色泽好，白色，表面洁净，均匀度好，无破损，无起皱，无污点，无色斑，无霉点，无异味，无杂质及灰尘。聚酯纤维膜重量在（98.3±10.0）g/m2，厚度在（0.42±0.07）mm，长度为（30 5.0±2.5）mm，宽度为（254.0±2.5）mm。 4.2.5 吸水纸。 4.2.6 底板。 4.2.7 塑料盒。 4.2.8 塑料吸管。 4.2.9 提取液。 4.3 电子天平：感量分别为0.01mg和1mg。 1
猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/0212514259.html, 猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法 作者：宋瑞张彩云何立宁张蕾 来源：《科技资讯》2011年第15期 摘要:本文介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精)的性质、危害性以及主要的检测方法。 关键词:盐酸克伦特罗残留检测方法 中图分类号:S859.84 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2011)05(c)-0104-01 1 盐酸克伦特罗的性质 盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为“4-氨基-α-[(叔 丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐”,常温下为白色或微黄粉末状固体,熔点为170℃～176℃,极易溶于水、甲醇和乙醇,微溶于氯仿,不溶于苯,是一种β2一肾上腺素能激动剂。20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。但是近年来,因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生,且后果极其严重,引起了世界各国的高度重视,为了保证猪肉产品质量安全,保护人类健康,许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。 2 危害性 2.1 对猪的影响 在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状,并出现采 食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。后期会使猪体内糖降解作用不足,导致猪肉品质下降,同时容易发生蹄损伤和跛行,大运动量或高温条件会造成死亡。 2.2 对人的影响 人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用,出现心悸、头 痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列 腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。
(瘦肉精)盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害
┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊装┊┊┊┊┊订┊┊┊┊┊线┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊ 第1章盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害 1.1 盐酸克伦特罗的理化性质 盐酸克伦特罗又称“瘦肉精”，是一种从天然儿茶酚胺衍生合成的化合物，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素分子式为C12 H19 C13 N20，相对分子质量为313．5，熔点为174 ～175.5 ℃，其制剂常用盐酸盐，又称为盐酸双氯醇胺氨双氯醇胺呈白色或类白色的结晶粉末状，熔点161℃，无臭，味苦，化学性质稳定，溶于水、乙醇，微溶于丙酮。不溶于乙醚，加热到172 ℃才能分解，盐酸克伦特罗的化学结构稳定，在体内不会被破坏分解，能耐受100 ℃高温，126 ℃油煎5min才能破坏减半，常规烹调对盐酸克伦特罗残留起不到破坏作用。 1.2盐酸克伦特罗的主要危害 对人的危害：人食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉及其制品后，会发生急性中毒通常表现为肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状，特别是原有心律失常的病例会引起心室早搏，ST段与T波幅压低，还可引起代谢紊乱，产生酮体，对糖尿病病人可发生酮中毒或酸中毒，对心律失常、高血压、青光眼、糖尿病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大等疾病的患者更容易产生急性中毒症状，严重的可导致死亡，因食用猪肉中残留有盐酸克伦特罗的急性中毒病人，临床症状以交感神经系、统兴奋性增高为主要表现，并在患者血尿中检出较高含量的盐酸克伦特罗。人食用残留有盐酸克伦特罗的畜产品后表现为肌肉兴奋性增强，有的人中毒后表现为肌肉震颤，重症者腓肠肌痉挛；同时引起心肌收缩加强，心率加快；对高血压患者危害更大，盐酸克伦特罗分解脂肪成游离脂肪酸进入血液，使血管壁弹性降低，引起血压升高，微循环血管膨胀，压迫刺激周围的神经，引起头痛头晕；引起人内脏横纹肌和平滑肌+兴奋性增强，表现为呕吐和腹泻。盐酸克伦特罗中毒的患者群中，对患心、脑血管疾病、糖尿病、甲状腺机能亢进、青光眼、前列腺肥大者可造成威胁生命的恶果。孕妇中毒又可导致癌变、胎儿致畸的严重危害性。 对动物的危害:虽然盐酸克伦特罗的毒性并不很强，小鼠、豚鼠静脉注射的半数
盐酸克伦特罗快速检测
盐酸克伦特罗快速检测 摘要 本实验采用了百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡对样品进行定性检测。盐酸克伦特罗快速检测卡适用于尿样、瘦肉、肝脏、肺脏、肾脏和饲料等样本中盐酸克伦特罗的测定。检出限为3ng/mL（3ppb）。 关键词盐酸克伦特罗快速检测卡定性检出限 前言 盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB),又名瘦肉精,分子式为C12H18Cl2N2O?HCl,药品名为克喘素、氨哮素等,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化学性质稳定;它是一种人工合成的B-肾上腺素受体激动剂,具有扩张支气管的作用,常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病(Mersmann,1998)。当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉积减少,因此将其俗称为瘦肉精,在养猪业中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到饲料中(Kuip-er,1998),用以改善胴体的品质,但同时也造成了猪肉中盐酸克伦特罗的残留。当人们食用含有盐酸克伦特罗残留的肉品后,常常造成心动过速,低血钾,低磷酸盐血症,肌肉震颤,头晕,口干,失眠甚至于瘫痪等中毒症状,对心脏病患者更有生命危险。国家农业部农牧发[2002]1号文5关于发布食品动物禁用的兽药及其他化合物清单的通知6中,盐酸克伦特罗被列为所有食品动物禁止使用。 1实验步骤 （1）使用前将待测样本溶液恢复至室温 （2）取出检测卡平放，用移液枪吸取待测样品溶液100ul，垂直加于加样孔，开始计时 （3）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
【结果判断】 2 实验结果 实验结果如下图 1 由图可知，左边表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于 3 ng/mL ，或不含有盐酸克伦特罗；右边样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。 3结果与讨论 3.1实验原理 若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA 偶联物)金标盐酸克伦特罗单抗 复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线); 测试端多余的金标盐酸克伦特阴性（-）：两条紫红色条带出现。表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL ，或不含有。 阳性（+）：检测T 线无显色，则表示样品中盐 酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。 无效：未出现质控C 线，表明操作过程不正确 或检测卡已失效。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)
综述盐酸克伦特罗的 药理作用、在机体内的残留性及检测技术 摘要：由瘦肉精引起的中毒事件屡见不鲜，而品种繁多的瘦肉精中盐酸克伦特罗是使用最普遍的一种，本文从盐酸克伦特罗的理化性质、药理作用、残留性、检测方法等方面详细介绍其对人体的危害，为我们更好的认识和抵制瘦肉精提供参考。 关键词：理化性质；药理作用；毒性；残留性；检测方法 瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。 1. 盐酸克伦特罗的理化性质及药理作用 1.1 理化性质 中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名：盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)，又称氨哮素、克喘素氨双氯醇胺，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种平喘药。该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。相对分子量：313.7，分子式：C12-H18-Cl12-N2-O·HCl； 图1盐酸克伦特罗结构式 盐酸克伦特罗的外观与性状：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦；熔点：174～175.5°C；溶解性：溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚[1]。 1.2 药理作用 20世纪70年代中后期,克伦特罗作为一种伦特罗1000～3000 μg 具有促进新的、选择性的β肾上腺受体激动剂逐步应用于临床试验,它能够引起交感神经兴奋在治疗剂量下,强而持久地松弛支气管平滑肌,口服治疗剂量仅为30～40 μg/d, 对支气管哮喘和伴随有逆性气道梗塞的慢性支气管炎均有良好的效果,能较长时间地增加肺的最高呼气量(PEFR)，用药剂量仅为舒喘宁片的1%, 副作用和对心血管系统的作用不明显。克伦特罗可作为支气扩张剂治疗慢性梗塞性肺部疾病,用吸入法给药,有效剂量可低至12ug；口服效果是特布他林的170倍，对心率和血压的影响不明显。克伦特罗进入机体后, 与广泛分布于呼吸道效应细胞膜上的β2受体结合,导致受体构型改变,激活腺苷酸环化酶,催化细胞内ATP转化为cAMP,后者激活cAMP依赖性蛋白激酶,促使胞浆中游离钙浓度下降钾通道开放引起平滑肌松弛而缓解喘息等症状除松弛支气管平滑肌外克伦特罗也激活β2肾上腺受体克伦特罗能增加神经生长因子的表达而起到保护神经系统的作用,也能防止大鼠诱导性肝细胞凋亡。此外,克伦特罗可能具有治疗过敏性炎症的作用并可以在抑制失神经肌萎缩的同时不影响或很少影
免疫荧光技术的实验方法及其分类
免疫荧光技术的实验方法及其分类 一、免疫标记法及其分类 1.荧光免疫法 原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min 内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。 以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体。除去未结合抗体，然后加受检标本，使其中的蛋白抗原与固相抗体形成抗原抗体复合物。洗涤除去未结合物，接着加入荧光标记的抗体，使之与抗原特异性结合，形成抗体—抗原—抗体复合物。最后根据荧光强度，即可对蛋白抗原进行定量。 传统的荧光免疫法受本底荧光的干扰较大，时间分辨荧光免疫测定法是以具有特长寿命的稀土金属如铕，作为标记物，加入正常液后激发测定，能有效去除短寿命本底荧光的干扰。
2.放射免疫法 放射免疫法是以过量的未标记抗原与放射性物质标记的抗原，竞争性地与抗体结合，形成有放射性的抗原—抗体复合物与无放射性的抗原—抗体复合物，并有过剩的标记抗原与未标记的抗原。然后通过离心沉淀等方法，将抗原—抗体复合物与游离抗原分离，分别测定其放射性强度与标准曲线比较，即可对未标记的待测抗原进行定量。 RIA法测定血清蛋白灵敏度高、特异性强，可准确定量到ng/ml 水平。但早期的方法操作麻烦，耗时长，且有放射性污染。近年来，随着单克隆抗体的应用，RIA的灵敏度又有了较大提高，且操作大为简化，并已有商品试剂盒供应，使用方便。 3.酶联免疫法(ELISA) ELISA法有竞争法和夹心法两种。竞争法是基于标准或血清Mb 和微孑L板上包被的Mb竞争性地与单克隆抗体相结合的原理而建立，该法的最低检测限为10μg/L，线性范围达1 000ug/L。夹心ELISA 法与EIA具有良好的相关性(r=0.92)。ELISA法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，操作简单，适用于多份标本的检测，不需特殊仪器设备等优点，易于推广普及。但不适合急诊的快速检测。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡说明书
盐酸克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡说明书 【产品名称】 产品名称：盐酸克伦特罗快速检测卡（胶体金法） 英文名称：Clenbuterol Rapid Test Card(Colloidal Gold) 【产品简介】 盐酸克伦特罗（瘦肉精主要成分）是为提高猪肉瘦肉率而使用的兴奋剂药物，在动物可食性组织中蓄积，危害食用者的健康，我国已经禁止用其做动物饲料添加剂。 本产品用于快速检测猪肉和其他肉类肌肉组织中盐酸克伦特罗残留，检测过程只需20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构快速筛查。 【产品组成】盐酸克伦特罗快速检测卡（5条）；200μL刻度吸管（5支）；提取瓶（内含盐酸克伦特罗提取液0.5mL，5瓶）；小勺（1个）。 【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。 【检测限】本产品检测方法对肌肉组织中盐酸克伦特罗的检出限为5 μg/kg。 【使用方法】 1、取一小块瘦肉，用刀切成碎肉，用小勺将碎肉装入提取液的瓶盖内，高度与瓶盖相平（约 2.0g）。 2、将瓶盖量取的碎肉转移到提取瓶内，盖紧瓶盖后振荡，使碎肉与提取液充分混匀，放入盛有热水(>80℃)的容器中热水浴10分钟后取出，冷却至室温。 3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用吸管从提取瓶中吸取肉品提取液，垂直滴加2-3滴于加样孔（S孔）中。 4、室温环境计时5分钟，对照结果判断示意图判定检测结果，其他时间判定无效。 【结果判断】 阴性（-）：C线和T线都显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于检出限。 阳性（+）：C线显色，T线不显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度等于或高于检出限。 无效：C线未出现，表明操作过程不正确或检测卡已失效。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。 【注意事项】 1、请按照使用方法进行测试，检测卡打开包装后1小时内使用，检测前将检测卡恢复至室温。 2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面，检测时避免阳光直射。 3、本检测卡为一次性产品，请勿重复使用。 4、提取瓶内液体不可食用，避免儿童接触，检测完后可倒入下水道，瓶体可丢在垃圾桶。 5、本产品检测结果仅供参考，如需确证，请参照国家相关标准方法。 【储存及有效期】 原包装应储存于4～30℃，阴凉避光干燥处，切勿冷冻；有效期12个月。
盐酸克伦特罗完全抗原的合成及其偶联工艺的优化
2009 年 4 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Apr. 2009文章编号：1003-9015(2009)02-0355-05 盐酸克伦特罗完全抗原的合成及其偶联工艺的优化 杨香瑜, 黄鹤 (天津大学化工学院生物化工系系统生物工程教育部重点实验室, 天津 300072) 摘要：为获取用于快速免疫分析的免疫抗原和包被抗原，本实验采用重氮化反应制备盐酸克伦特罗(Clenbuterol hydrochloride, CL)完全抗原，在强酸条件下CL先经重氮化，再与鸡卵清白蛋白(OV A)发生共价取代制备了盐酸克伦特 罗包被抗原(OV A-CL)，并以正交实验确定了共价取代反应的关键影响因素，进一步采用单因素实验确定了反应所需的 最佳条件，并通过紫外扫描对制得的包被抗原进行了鉴定。结果表明，投料比例是盐酸克伦特罗完全抗原合成的关键 因素，搅拌转速和反应时间也起着至关重要的作用。而且偶联反应在1 h内基本完成，延长反应时间对提高产物偶联 比影响不大。当投料比例为30:1，pH值约为8，低速搅拌状况下，包被抗原和免疫抗原的偶联比分别高达29:1和48:1，盐酸克伦特罗完全抗原合成条件的优化筛选取得了预期的效果。 关键词：盐酸克伦特罗；重氮化反应；完全抗原；偶联比 中图分类号：O625.14 文献标识码：A Synthesis of Clenbuterol Hydrochloride Complete Antigen and Optimization of its Conjugation Conditions YANG Xiang-yu, HUANG He (Key Laboratory of Systems Bioengineering, Ministry of Education, Department of Biochemical Engineering, School of Chemical Engineering and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China) Abstract: In order to synthesize the immunogen and coatigen used for the rapid immunoassay, the diazotization was adopted to prepare the Clenbuterol hydrochloride (CL) complete antigen. During which, the CL was firstly activated under strongly acidic conditions, and the activated CL was then conjugated with ovalbumin (OV A) to form coatigen OV A-CL. The important factors affecting the conjugating reaction were determined by orthogonal experiments, and the optimum value of those important factors was confirmed by single factor experiments. The prepared OV A-CL was characterized by UV scan. It was found that the CL/OV A dropping proportion is the key factor for preparing the complete antigen, while the stirring speed and reaction time are important too. The conjugating reaction can be completed within one hour and prolonging the reaction time has little effect on the increase of coupling ratio. When the CL/OV A dropping proportion (molar ratio) is 30:1, the pH value is 8 and at a low stirring dispersion speed (<250 r?min?1), the coupling ratio of coatigen and immunogen can be up to 29:1 and 48:1, respectively. It indicates that the optimization of the conjugation conditions of Clenbuterol hydrochloride complete antigen achieves the expected results. Key words: Clenbuterol hydrochloride; diazotization; complete antigen; coupling ratio 1前言 盐酸克伦特罗是一种β2-肾上腺受体激动剂 [1]。大量用其作为饲料添加剂，可显著提高畜禽生长速率，瘦肉相对增加[2]。但该药易在牲畜体内沉积，人食用含有该药残留的动物产品后可引起食物中毒，严重 收稿日期：2008-01-29；修订日期：2008-06-02。 基金项目：天津市自然科学基金资助项目(06YFJMJC13200)。 作者简介：杨香瑜(1983-)，女，河北省沧州人，天津大学硕士生。通讯联系人：黄鹤，E-mail：huang@https://www.360docs.net/doc/0212514259.html,
第八章荧光免疫技术
第八章荧光免疫技术 FluoreSCenCe ImmunoaSsay 第一部分目的要求和教学内容 一、目的要求 掌握：荧光免疫技术原理、类型及临床应用，常用的荧光物质；熟悉：荧光免疫技术 的技术要点；了解：荧光标记物的制备与保存，镧系稀土元素标记物的制备，荧光免疫技术主要类型的技术要点。 二、教学内容 1．荧光标记物的制备：荧光和荧光物质，荧光标记物的制备。 2．荧光免疫显微技术：基本原理，技术类型，技术要点，方法评价，临床应用。 3．荧光免疫测定技术：时间分辨荧光免疫测定(基本原理，技术类型，技术要点，方法评价和临床应用)；荧光偏振免疫测定(基本原理，技术类型，技术要点，方法评价和临床应用)。 第二部分测试题 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.如下有关荧光免疫技术正确的提法 A．直观性检测抗原和抗体 B．直观性检测抗原 C．直观性检测抗体 D．间接检测抗原或抗体 E．间接检测抗原和抗体 2．荧光素易受温度影响，操作时通常选择较佳的温度 A．10～15℃ B．15～20℃ C．20～25℃ D．25～30℃ E．30～35℃ 3．荧光抗体保存3～4年，应选择 A．小量分装、4℃ B．瓶分装、4℃ C．瓶分装、-10℃ D．瓶分装,-20℃ E．小量分装、-20℃ 4．下列组成荧光显微镜的结构中，与普通光学显微镜相同的是 A．光源 B．聚光器 C．目镜 D．物镜 E．滤光片
5．下列哪项方法不属于荧光免疫显微技术类型 A．直接法 B．夹心法 C．间接法 D．补体法 E．双标记法 6．荧光抗体染色标本的观察时间 A．当天 B.第二天 C．第三天 D．1周内 E．5天 7．荧光抗体闭接法应标记 A．抗原 B．抗体 C．补体 D．抗抗体 E．抗体及补体 8．荧光显微技术常用于检验血清中各种自身抗体和多种病原体抗体的方法是 A．直接法 B．间接法 C．双抗体夹心法 D．补体法 E．双标记法 9．荧光抗体间接法可检测 A．抗原 B．抗体 C.补体 D．蛋白质 E．抗原和抗体 lO．在荧光显微镜检查中直接影响检测结果的是 A．抗原荧光染色 B．抗体荧光染色 C．补体荧光染色 D．特异性荧光染色 E．非特异性荧光染色 11．主要用于测定各种激素、蛋白质、酶、药物及病毒抗原的技术 A．荧光偏振免疫测定 B．荧光免疫显微技术 C．时间分辨荧光免疫测定 D．底物标记荧光免疫测定 E．流式荧光免疫技术 12．临床药物浓度检测的首选方法
瘦肉精(盐酸克伦特罗)快速检测卡
猪瘟抗体快速检测试剂盒 ——（胶体金法）使用说明书 一、原理：本试纸采用酶联免疫原理和胶体金层析技术制成快速检测猪血清中的猪瘟抗体。将猪瘟抗原包被在硝酸纤维素膜的检测线（T）上，兔抗猪瘟抗体包被在硝酸纤维素膜的质控线（C）上，用胶体金标记的猪瘟抗原干燥后置于玻璃纤维素膜下端。当血清加入加样孔内，由于层析的原理，血清开始沿纸条移动，当遇上干燥的金标抗原，将其溶解，并带着金标抗原继续往上移动，至硝酸纤维素膜的检测线。如果样品中有猪瘟抗体存在时，会与玻璃纤维素上的金标猪瘟抗原和包被在检测线上的猪瘟抗原，在检测上形成一个夹心的免疫复合物，呈一条紫红色线。样品中的抗体越高，色线颜色越深，判定为阳性。如果样品中没有猪瘟抗体，检测线（T）线上没有色带出现，判定为阴性。样品和金标抗原继续往上移至质控线时，此处的兔抗猪瘟抗体将会同金标猪瘟抗原结合，在质控线（C）上形成一条紫红色线，证明本试纸有效。整个试验仅需20分钟。操作简便、快速、准确、灵敏度高，直观、结果容易判定。 二．产品组成：1、检测卡(1个)：由一特制的塑料检测卡将猪瘟抗体检测试纸条夹于卡内，卡面上设有加样孔和观察孔。加样孔作为加入待检血清，观察孔内为试剂检测线（T），试剂质控线（C）。一个检测试剂卡用一个铝箔袋包装，内装干燥剂。2、吸样管1个；3、5份塑料手套；4、使用说明书一份。 三．操作方法：1．用1.5ml样品管，采血0.5~1ml待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟左右，使血清析出。2．将检测卡平置于桌面上，用吸样管吸取被检血清，在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80~100ul。在室温下反应20分钟判定结果。（检测卡如在4℃保存，必须恢复至室温后方可进行检测） 四．结果判断：1．阳性：在检测线（T）处，质控线（C）处，各出现一条紫红色条带，判定为阳性；检测线（T）处条带色泽的深浅，依检测样品中猪瘟抗体效价的高低而变化，效价越高色带越深，反之越浅。2．阴性：在质控线（C）处，出现一条紫红色条带，检测线（T）处未出现一条紫红色条带，说明检测样品中无猪瘟抗体存在。3．无效：在检测线（T）处，质控线（C）处，都无明显条带出现，判定为试纸条无效。 五．诊断参考：被检样品加样后20分钟可与对照卡的色带滴度进行参考比较。1．当被检样品检测线（T）条带的色泽≥对照卡中1：16效价时，说明检测样品中猪瘟抗体的滴度较高，暂不需要进行猪瘟疫苗的接种免疫。2．当被检样品检测线（T）条带的色泽＜对照卡中1：16效价时，说明检测样品中猪瘟抗体效价不能抵御猪瘟强毒攻击的最低保护滴度，为进行猪瘟疫苗接种时间。3．当被检样品检测线（T）处无明显色带出现，说明被检测样品中没有猪瘟抗体。如果猪群健康，应当及时进行猪瘟疫苗接种。