PBS及胰酶的配制
PBS的配制
步骤：
1.称取所需量组分（注意剂量的换算）于一1L的锥形瓶中
2.量筒取1000ml液相水，倒取适量于锥形瓶中，使固体物质溶解后加至1000ml
3.0.45um微孔滤膜过滤（抽滤器）
4.121度高压灭菌20min
EDTA-0.25%胰酶配制（按1L量计算）：（用不加酚红的D-Hanks液溶解）
1.取所需量组分（包括D-Hanks液和EDTA-2Na量，EDTA浓度为0.02%）于1L锥形瓶
中，1L液相水溶解，称取所需量胰蛋白酶（0.25%）倒于该锥形瓶中，磁力搅拌器搅拌约4h
2.0.45um微孔滤膜过滤
3.0.22um微孔滤膜过滤分装，-20度长期保存
各种浓度各种PH的PBSTrisHCl缓冲液配制
各种浓度各种P H的P B S T r i s H C l缓冲液配 制 文件排版存档编号：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]
一、PBS 缓冲液 1.1 母液的配制： 0.2M Na 2HPO 4：称取 71.6g Na 2HPO 4-12H 2O ，溶于 1000ml 水 0.2M NaH 2PO 4：称取 31.2g NaH 2PO 4-2H 2O ，溶于1000ml 水 1.2不同PH 值PBS 配制 各种PH 值的 0.2M PBS （100ml)配方 ： pH 0.2M NaH2PO4（ml ） 0.2M Na2HPO4（ml ） 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5 6.3 7 7.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 3 7.5
6.7 56.5 43.5 6.8 51 49 6.9 45 55 7.0 38 62 7.1 33 67 7.2 28 72 7.3 23 77 7.4 19ml 81ml 7.5 16 84 7.6 13 87 7.7 10.5 0.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7 93 8.0 5.3 94.7 以配制100ml 0.2M PBS 为例，先配制母液，按照配方表分别取19ml 0.2mol/L 的 NaH 2PO 4和81ml 0.2mol/L 的 Na 2HPO 4,混合即可。 1.3 不同浓度PBS 的配制
只需将0.2M PBS按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PBS（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PBS，加水稀释至 1000ml 即可。 0.01M PBS（PH=7.4）：取50ml 0.2M PBS，加水稀释至 1000ml 即可。 0.02M PBS（PH=7.4）：取100ml 0.2 M PBS，加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCl的话，加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。 二、Tris-HCl缓冲液 某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris 碱溶液与配方表中所示相应体积（单位：ml）的0.1mol/L HCl混合，加水将体积调至100ml 即可。(至于配制0.1M HCl 就是8.58ml浓盐酸用蒸馏水定容到1000ml啦)
胰酶配制
胰酶配制 一、器材与试剂： 干粉型培养基、胰蛋白酶、青霉素、链霉素、纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。 具体步骤： (1)水的制备： 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水。 (2)PBS的制备与消毒（也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制）：1、溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2 HPO4 ?H2 O 1.56g，KH2 PO4 0.2g ） 倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。 2、移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。 (3) 胰蛋白酶溶液的配制与消毒： 胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+ 、Mg2+ 和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+ 、Mg2+ 的BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。 1、称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。搅拌混匀，置于4℃内过夜。 2、用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。然后分装成小瓶于20℃保存以备使用。
磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法
实验方案镧铈对铜胁迫下豌豆种子萌发和生长的影响 https://www.360docs.net/doc/089357357.html,(Ⅲ)、Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌发影响的显效剂量筛选 (1)浓度梯度设计： LaCl3/ CeCl 3溶液配置：先配置1g?L-1的LaCl3/ CeCl 3溶液母液，然后将母液分别稀释成浓度为5、10、20、40，60 mg?L-1梯度浓度，调节PH（HCL/NAOH）至6.5，对照(CK)为PH调节至6.5的去离子水。 重金属Cuso4浓度的设置：10、25、50、100、200、400 mg?L-1，对照用蒸馏水。 (2)试材培养 种子预处理：选取均匀饱满的豌豆种子用0.1%HgCl2溶液消毒15min，分别用自来水和去离子水洗净，常温下晾干备用。 （3）实验设置：CK，La，Ce，Cu（共4组18个浓度57个样品） （4）试材处理： 选取LaCl3、CeCl3和CuSO4各个梯度溶液溶液，豌豆种子经预处理后用各个梯度溶液浸没处理，对照用蒸馏水，置于25±1℃浸种24h后，将处理后种子均匀排列在直径9cm、垫有2层滤纸的培养皿中，每处理加入一定量水培养（以没过种子2/3为标准），每处理3皿重复，每皿20粒。 指标测定方法： 种子发芽第三天测α—淀粉酶，第四天测发芽势，前三天测发芽指数和发芽率，第五天测量根长、茎长，第六天测根系活力、叶绿素含量、可溶性蛋白质、可溶性糖、SOD、POD、CA T、MDA. 2．La(Ⅲ)和Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌发及保护酶的影响 (1)试材培养 种子预处理：选取均匀饱满的豌豆种子用0.1%HgCl2溶液消毒15min，分别用自来水和去离子水洗净，常温下晾干备用。 （2）实验设置：在上一步骤中分别筛选出LaCl3、CeCl3的低剂量、适宜剂量、高剂量三个有效浓度和CuSO4的一个有效浓度，分别记为A1，A2，A3；B1，B2，B3；C。 （3）实验步骤：有以下几组： A+C:A1+C、A2+C、A3+C B+C:B1+C、B2+C、B3+C A+B+C：A1+B1+C 、A1+B2+C 、A1+B3+C、A2+B1+C、A2+B2+C、A2+B3+C、A3+B1+C 、A3+B2+C、A3+B3+C 酸盐缓冲液（PBS）配制方法 磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M） pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.2M NaH2PO4/ml 7.0 61.0 39.0 7.7 89.5 10.5 7.8 91.5 8.5 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05 0.2M溶液含35.61g/L Na2HPO4·12 H2O分子量＝358.22 0.2M溶液含71.64g/L NaH2PO4·H2O分子量＝138.01 0.2M溶液含27.6g/L NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03 0.2M溶液含31.21g/L
PBS缓冲液的配制
PBS缓冲液的配制 PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是总结：母液的制： 0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol... PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是总结： 母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。 若需要NaCl的话，加入NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。 另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方： pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml） 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5 6.3 7 7.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 3 7.5 6.7 56.5 43.5
液体配制及实验方法
（一）液体配制 1.完全培养基 DMEM+10%FBS+1%双抗+（1%HAPS液） 若放置时间长于2周加1%谷氨酰胺 2.PBS 1000ml去离子水中溶解8.0gNaCl、0.2gKCl、2.89gNa2HPO4、0.26gNaH2PO4 3.胰酶 用之前调节PH值至7.6 4.CaCl2 将0.165gCaCl2粉末溶于10ml去离子水中配制成50X的溶液 每5ml胶原酶中加入100μl CaCl2溶液（终浓度3μmol/L）用于激活胶原酶的活性 5.双抗 终浓度：青霉素100万U/100ml 链霉素100万U/100ml 青霉素0.6μg为1个单位链霉素 1.2195μg为一个单位 称取青、链霉素粉末各0.6、1.2195g溶于10mlPBS中再定容至100ml 6.两性霉素B 100mg两性霉素B粉末溶于40mlPBS中，制成浓度为2.5mg/ml(1000X)的浓缩液 每100ml完全培养基中加入100μl 浓缩液，稀释为终浓度2.5μg/ml 7.细胞冻存液 20%DMSO+80%FBS(1mlDMSO+4mlFBS) 8STZ溶液 STZ溶于柠檬酸和柠檬酸三钠的盐溶液中 称取柠檬酸0.105g溶于5mlPBS 称取柠檬酸三钠0.145g溶于5mlPBS中混合两者制成10毫升的溶解液. 再将100mgSTZ粉末溶于该溶解液中制成浓度1%的STZ溶液，调节PH值至4.5，4°避光保存，由于STZ水溶性不稳定，溶液最好在半小时内使用完毕. 9油红O 原液：油红O 0.6g溶于异丙醇（99% ）100ml 。 稀释液：油红O 原液20ml ，蒸馏水20ml ，过滤后使用。 10茜素红 称取0.1g茜素红粉溶于100mlPBS，调节PH值到7.2，过滤后使用.
PBS缓冲液的配制方法
PBS缓冲液配方 不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是常用配方，供大家参考。 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L，灭菌即可。0.01M PBS缓冲液 称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml 双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。 一般免疫组化用PBS，主要用来清洗，都只包含Na2HPO4?12H2O（磷酸氢二钠）和NaH2PO4?2H2O（磷酸二氢钠）两种组分，母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。
胰酶得配制
查看文章 细胞消化胰酶的配制2008-12-10 12:46适用于，无师兄、师姐、非细心、单独开展细胞培养的实验者 对一般细胞0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin) 配方：100ml PBS,0.25g胰酶 步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O /2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水) 2 称胰酶0.25g 3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜 低速搅拌0.5h冰浴中 4 调PH7.4 5 仍在冰浴中 6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完 tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫， 酶就变性了。低温，防止酶失活 对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%) tip:因为EDTA可以络合Ca2 ，增加消化效力 问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用！多谢！ 答：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。 2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没影响，那么可不离心。 3、EDTA的浓度也是质量体积比。和胰酶一起溶于PBS。 4、注意，血清可终止胰酶的作用，但不能终止EDTA的作用，对有些细胞来说，终止消化后的离心是必要的。 5、胰酶和EDTA在pH 为8左右的时候最易溶解，在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8，注意，胰酶可使溶液变酸，所以要边溶边测pH，随时调整。注意，不可加过量NaOH，否则过碱，细胞会受不了。 6、胰酶EDTA相对比较难溶，可用磁力搅拌器，或放入4度冰箱过夜，待溶解后过滤除菌。 7、可配2－3乘的胰酶，这样比较节约时间和滤器，用的时候对上灭菌PBS即可。
胰酶的配制
胰酶的配制过程 姓名：李达专业：预防兽医学号：2013022060 导师：汤德元一．胰酶-EDTA的配制 1、专用PBS缓冲液配方： 1000mlPBS: 7.000g NaCl 1.100g Glucose·H2O 或 1.000g Glucose 0.3700g KCl 0.2g Na2PO4H 3.000g Tris 0.2400g KH2PO4 0.4000g EDTA 超纯水1000ml 所有试剂全部为细胞培养专用sigma试剂。 0.0010g 酚红 5ml PS 2.5g 胰酶（HyClone 胰蛋白酶1:250 SH30848.018）2、配制步骤： 1）所用容器先泡酸12小时，后用自来水洗至无色后用蒸馏水洗净，再用超纯水洗三遍，最后高压灭菌，烘干。 2）将缓冲液配好后高压灭菌，同时洗好的广口瓶灭一瓶超纯水备用。 3）加入5ml双抗（PS）。 4）以灭菌的超纯水补足高压过程中损失的水分定容至1000ml。 5）转移到1L的试剂瓶中，加入酚红（0.0010g）。 6）调PH至7.2-7.4。 7）低温冰浴中溶解Tryspin2.5g.混匀。此过程避免产生气泡，否则将损失酶活性。8）在细胞间里用0.22um的滤膜过滤，分装入灭菌的50ml或1.5ml离心管中。 此过程避免产生气泡，否则将损失酶活性。-20℃保存。 9）不可反复冻存。每次解冻后4℃保存，并在短期内用完。
3、注意事项： 1）整个分装过程在无菌条件下进行。 2）机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫酶就变性了。低温可防止酶失活。 3）加入的EDTA可以络合细胞外基质中的Ca2+ ，增加消化效力。 4）在调节PH时一定要注意保护探头，防止损伤电极。 5）分装时不要太满，防止冻存后体积增大而溢出。50ml离心管装45ml左右，1.5ml离心管装1.4ml左右。 6）分装后的胰酶尽快转移到-20℃冰箱中冻存。 二．0.25%胰酶（无EDTA）的配制 1、250ml胰酶配制方法 Tryspin 0.625g PS 2.5ml 苯酚红0.1g 所有试剂全部为细胞培养专用sigma试剂。 2、实验步骤 1）实验之前将所用试剂瓶泡酸12小时自来水清洗至无色后再用超纯水冲洗并进行高压灭菌。 2）按前面要求准确称取所需试剂，在容量瓶中用0.01M PBS定容至250ml。3）调节PH至7.4。 4）将所配制的胰酶在细胞间用0.22um的过滤器过滤并分装。 3、注意事项 1）在溶解、分装和过滤过程中要轻轻混匀，避免产生气泡。否则酶的活性会受到影响。 2）为保持酶的活性，应尽量在低温下操作。 3）胰酶配好后应避免反复冻融。因此在过滤后将其分装到1.5ml离心管中。 三．胶原酶的配制方法 1、50ml体系配方组成
磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法
磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法 科研实验 2010-04-20 22:25:48 阅读935 评论0 字号：大中小订阅 0.01M PBS PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2) PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L 称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4℃冰箱中即可。 需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。 母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。 若需要NaCl的话，加入NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。 另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方： pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml） 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5
胰酶胶原酶的配制
胰酶-EDTA的配制 1、专用PBS缓冲液配方： 1000mlPBS: 7.000g NaCl 1.100g Glucose·H2O 或 1.000g Glucose 0.3700g KCl 0.2g Na2PO4H 3.000g Tris 0.2400g KH2PO4 0.4000g EDTA 超纯水1000ml 所有试剂全部为细胞培养专用sigma试剂。 0.0010g 酚红 5ml PS 2.5g 胰酶（HyClone 胰蛋白酶1:250 SH30848.018） 2、配制步骤： 1）所用容器先泡酸12小时，后用自来水洗至无色后用蒸馏水洗净，再用超纯水洗三遍，最后高压灭菌，烘干。 2）将缓冲液配好后高压灭菌，同时洗好的广口瓶灭一瓶超纯水备用。 3）加入5ml双抗（PS）。 4）以灭菌的超纯水补足高压过程中损失的水分定容至1000ml。 5）转移到1L的试剂瓶中，加入酚红（0.0010g）。 6）调PH至7.2-7.4。 7）低温冰浴中溶解Tryspin2.5g.混匀。此过程避免产生气泡，否则将损失酶活性。8）在细胞间里用0.22um的滤膜过滤，分装入灭菌的50ml或1.5ml离心管中。 此过程避免产生气泡，否则将损失酶活性。-20℃保存。 9）不可反复冻存。每次解冻后4℃保存，并在短期内用完。
3、注意事项： 1）整个分装过程在无菌条件下进行。 2）机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫酶就变性了。低温可防止酶失活。 3）加入的EDTA可以络合细胞外基质中的Ca2+ ，增加消化效力。 4）在调节PH时一定要注意保护探头，防止损伤电极。 5）分装时不要太满，防止冻存后体积增大而溢出。50ml离心管装45ml左右，1.5ml离心管装1.4ml左右。 6）分装后的胰酶尽快转移到-20℃冰箱中冻存。 0.25%胰酶（无EDTA）的配制 1、250ml胰酶配制方法 Tryspin 0.625g PS 2.5ml 苯酚红0.1g 所有试剂全部为细胞培养专用sigma试剂。 2、实验步骤 1）实验之前将所用试剂瓶泡酸12小时自来水清洗至无色后再用超纯水冲洗并进行高压灭菌。 2）按前面要求准确称取所需试剂，在容量瓶中用0.01M PBS定容至250ml。3）调节PH至7.4。 4）将所配制的胰酶在细胞间用0.22um的过滤器过滤并分装。 3、注意事项 1）在溶解、分装和过滤过程中要轻轻混匀，避免产生气泡。否则酶的活性会受到影响。 2）为保持酶的活性，应尽量在低温下操作。
磷酸盐缓冲液配制方法
磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法 PBS PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH PBS缓冲液（～）：NaCl 137mmol/L，KCl L，Na2HPO4 L， KH2PO4 L 称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4℃冰箱中即可。 需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。 母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=的配制： 先配 0.2M PB (pH=，100ml)：取19ml L的 NaH2PO4， 81ml L 的 Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.01M PB （PH=）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.02M PB （PH=）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCl的话，加入 NaCl 至%（g/100ml）即可。 另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方：
溶液各种配制
附录：常用试剂配制及应用 一、常用缓冲液、试剂的配制 碳酸盐缓冲液(Carbonate-BicarbonateBuffer) 由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH>9的缓冲液配制（附表1）。 附表1. 0.2mol/L碳酸盐缓冲液（～） 磷酸缓冲液(PhosphateBuffers，PB) 磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa值，所以 用它们配制的缓冲液，pH范围最宽。NaH 2PO4：pKa1＝，pKa2＝；Na 2 HPO4：pKa1 ＝，pKa2＝。 另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小，如L缓冲液稀释10倍其pH变化小于。 磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些化学反应过程，如对某些酶的催
化活性具有一定程度的抑制作用。 NaH 2PO 4 的pH值偏酸性，可用作pH<4的缓冲液。 Na 2HPO 4 的pH值偏碱性，可用作pH>10的缓冲液。 而pH＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaH 2PO 4 与Na 2 HPO 4 两种磷 酸盐混合配制（附表2）。 附表2. 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（～） 磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-bufferedsaline,PBS) 磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。 NaCl8g KCl0.2g Na 2HPO 4 1.44g KH 2PO 4 0.24g 在800ml蒸馏水中溶解，用HCl调节溶液的pH值至～加水定容至1L，15psi （1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存备用。
实验常用试剂,缓冲液的配制方法
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml □组份浓度100mg/ml Ampicillin □配制量50mL □配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 Kan（卡那霉素）50mg/ml □组分浓度50mg/ml卡那霉素 □配制量50mL □配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml □组份浓度24mg/L IPTG □配制量50mL □配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2.加入40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 X- Gal 20mg/m □组份浓度20mg/L X-Gal □配制量50mL □配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。 LB培养基 □组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨）10g Yeast Extract（酵母提取物）5g NaCl（氯化钠）10g 2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。
溶液配制
溶液配制
1.50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 2.PBS(0.1M，pH 7.4)贮存液配方（10倍浓缩） A.152g NaCl 24g无水NaH2PO4 1600ml水 用NaOH调整pH约6.7 加水至2L 室温保存（至少稳定1个月） 1×溶液pH应当为7.3~7.5.终浓度为130mmol/L NaCl和 10mmol/L磷酸钠 B.NaCl 80g Na2HPO4.12H2O 32.3g NaH2PO4.2H2O 4.5g 加蒸馏水至1000ml C .NaCl 80g Na2HPO4.2H2O 11.5g KH2PO4 2g KCl 2g 加蒸馏水至1000ml 贮存液室温下保存一个月 3.3 M 醋酸钠组份浓度3 M 醋酸钠（pH5.2）,配制量100mL A.配置方法 a. 称取40.8gNaAc?3H2O 置于100～ 200mL 烧杯中，加入约40mL 的去离子 水搅拌溶解。 b. 加入冰乙酸调节pH 值至5.2。 c. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 d. 高温高压灭菌后，室温保存。 B. 配置方法:取408g三水合乙酸钠（NaC2H3O2）溶于800ml 水，用3mol/乙酸调至Ph4.8、5.0或5.2（按要求），
加水至1L，高压灭菌。 4.乙酸钾（5mol/L） 5mol/L 乙酸钾60ml 冰乙酸（！）11.5 ml 水28.5 ml 所得溶液的钾的浓度为3 mol/L，乙酸浓度为5 mol/L。室温保存。 5. HEPES溶液 A.1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH 调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 B.500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制 119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH（HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2），然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。 C.加少量盐的HEPES Buffer配方（500ml） HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。 D.2×HEPES缓冲盐溶液的配制 将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M NaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可 E.HEPES缓冲液，不含（Ca,Mg）(HCMF),PH7.4的配置： 8g NaCl （终浓度0.137mmol/L） 0.4g NaCl （终浓度5.4mmol/L） 0.12g Na2HPO4 （终浓度0.347mmol/L） 1.0g葡萄糖 2.38g N-2羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸（HEPES,；终浓度10mmol/L） 加水至1L 用孔径0.45μm的滤器过滤，去除所有杂质 4℃可储存数月 F.HEPES缓冲液 1L HCMF 1ml 1mol/L CaCl2
PBS缓冲液的配方
P B S缓冲液的配方 发布日期:2008-11-11 热门指数:865 PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结： 母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。 若需要NaCL 的话，加入NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。 另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方： pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml） 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5 6.3 7 7.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 3 7.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51 49 6.9 45 55 7.0 38 62 7.1 33 67 7.2 28 72 7.3 23 77 7.4 19ml 81ml 7.5 16 84 7.6 13 87 7.7 10.5 0.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7 93 8.0 5.3 94.7 分子生物学常用溶液配制 发布日期:2008-8-25 热门指数:3471
PBS缓冲液的配制方法
P B S缓冲液的配制方法(总4 页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1 -CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除
PBS缓冲液配方 不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是常用配方，供大家参考。 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L，灭菌即可。 0.01M PBS缓冲液 称取NaCl?8g，KCl?0.2g，Na2HPO412H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。 一般免疫组化用PBS，主要用来清洗，都只包含Na2HPO412H2O（磷酸氢二钠）和NaH2PO42H2O（磷酸二氢钠）两种组分，母液的配制： 0.2MNa2HPO4：称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水 0.2MNaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml?水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配?0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，81ml0.2mol/L的 Na2HPO4,即可。 然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。 0.01MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。 0.02MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。
胰酶的配制
胰酶的配制过程 姓名：李达 专业：预防兽医 学号： 2013022060 导师： 汤德元 NaCl Glucose H 2O 或 I.OOOg Glucose KCl Na 2PO 4H Tris KH 2PO 4 EDTA 1OOOml 所有试剂全部为细胞培养专用 sigma 试剂 O.OO1Og 酚红 5ml PS 2.5g 胰酶（ HyClone 胰蛋白酶 1:25O SH3O848.O18） 2、配制步 骤： 1 ）所用容器先泡酸 1 2 小时，后用自来水洗至无色后用蒸馏水洗净， 再用超纯水 洗三遍，最后高压灭菌，烘干。 2）将缓冲液配好后高压灭菌，同时洗好的广口瓶灭一瓶超纯水备用。 3） 加入 5ml 双抗（ PS ）。 4） 以灭菌的超纯水补足高压过程中损失的水分定容至 1OOOml 。 5） 转移到1L 的试剂瓶中，加入酚红（O.OOIOg ）。 6） 调 PH 至 7.2-7.4。 7） 低温冰浴中溶解Tryspin2.5g.混匀。此过程避免产生气泡，否则将损失酶活性。 8） 在细胞间里用0.22um 的滤膜过滤，分装入灭菌的 50ml 或1.5ml 离心管中。 此过 程避免产生气泡，否则将损失酶活性。-2O C 保存。 9） 不可反复冻存。每次解冻后4 C 保存，并在短期内用完。 一．胰酶 -EDTA 的配制 1、专用 PBS 缓冲液配方： 1000mlPBS: 7.000g 1.100g 0.3700g 0.2g 3.000g 0.2400g 0.4000g 超纯水
3、注意事项： 1）整个分装过程在无菌条件下进行。 2）机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫酶就变性了。低温可防止酶失活。 3）加入的 EDTA 可以络合细胞外基质中的 Ca 2+ ，增加消化效力。 4）在调节 PH 时一定要注意保护探头，防止损伤电极。 5）分装时不要太满，防止冻存后体积增大而溢出。 50ml 离心管装 45ml 左右， 1.5ml 离心管装 1.4ml 左右。 6）分装后的胰酶尽快转移到-20C 冰箱中冻存。 二．0.25%胰酶（无 EDTA ）的配制 1、250ml 胰酶配制方法 2.5ml 苯酚红 所有试剂全部为细胞培养专用 sigma 试剂 2、实验步骤 1） 实验之前将所用试剂瓶泡酸 12小时自来水清洗至无色后再用超纯水冲洗并进 行 高压灭菌。 2） 按前面要求准确称取所需试剂，在容量瓶中用 0.01M PBS 定容至250ml 。 3） 调节PH 至7.4。 4） 将所配制的胰酶在细胞间用0.22um 的过滤器过滤并分装。 3、注意事项 1） 在溶解、分装和过滤过程中要轻轻混匀，避免产生气泡。否则酶的活性会受 到影 响。 2） 为保持酶的活性，应尽量在低温下操作。 3） 胰酶配好后应避免反复冻融。因此在过滤后将其分装到 1.5ml 离心管中。 三．胶原酶的配制方法 1 、50ml 体系配方组成 Tryspin 0.625g PS 0.1g
胰酶、EDTA的使用及注意事项
胰酶(ｐaｎｃｒeaｔｉn）就是一种自猪胰中提取得多种酶得混合物,主要为胰蛋白酶(将蛋白质消化成蛋白胨)、胰淀粉酶（将淀粉消化成糖)与胰脂肪酶(将脂肪消化成甘油与脂肪酸）。其通过在特定位置上降解蛋白,使细胞间结合处蛋白降解,这时细胞由于自身内部细胞骨架得张力作用下成为球形,从而使细胞分开。 不同得组织或者细胞对胰酶得作用反应不一样。胰酶分散细胞得活性还与其浓度、温度与作用时间有关，在pＨ为8、０、温度为37℃时,胰酶溶液得作用能力最强。使用胰酶时,应把握好浓度、温度与时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Cａ２+、Mg２＋与血清、蛋白质克降低胰酶得活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2＋、Ｍｇ2+得BSＳ，如：D-Hａnｋs液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞得作用。 胰酶本身就就是消化蛋白得,而细胞膜又富含各种膜蛋白，消化过头会对细胞造成损伤得。 细胞之间就是通过ＣＡM(细胞粘性分子)相连得,而很多粘性分子只有在有+2价金属离子，如Ca２+,Mｇ2+,得存在下才能行使这种功能。在胰酶中加EDTA得作用就是熬合这些二价离子,使细胞被消化成单细胞形态。 EDTA就是乙二胺四乙酸，一种金属螯合剂。一般与胰蛋白酶配合使用。原因在于,钙,镁等金属离子会降低胰酶活力，故在使用胰酶消化液时要配合加入ＥＤTA。它可以螯合这些离子，消除对胰酶得抑
制。 ED TA用得非常多,一般浓度在0、０2%左右。作用于细胞与间质,对细胞间也有一定作用。注意,它能显著影响pＨ值，而且在弱碱性条件下才易溶。因此,配制时应调节好酸碱度。它不能被中与。因此,消化下来得细胞要拿ＰBS洗一遍。 胰酶 这就是用得最多得,常用浓度在０、25%。作用时间根据细胞种类、作用温度、作用pｈ等因素而变化很大,从几分钟到几十分钟不等。0、25％得胰酶作用于单层贴壁得细胞,在3７度条件下，一般消化１－5分钟就足够了。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁离子得平衡液,否则影响活性。终止就是用血清蛋白,血清含有非特异性胰蛋白酶抑制剂。保存于-20度。 胶原酶。这种方法比较少,一般就是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温与,对细胞损伤较小,价格也较贵,不易保存,使用期限短,中止同样就是用血清蛋白。 胰酶使用注意 1.在使用胰酶细胞消化液得过程中要特别注意避免消化液被细菌、支原体污染。? 2.胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,过长会损伤细胞,导致细胞铺板后生长状况较差。 贴壁细胞得消化?1.吸去培养液,用无菌得PBＳ、Haｎks液或无血清
PBS,铁氰化钾缓冲液的配制
PBS缓冲液的配制 方法一： 母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4。然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释:取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可(0.01M PB （PH=7.4）)。 若需要NaCl的话，加入NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。 方法二： 称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4 12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。 PBS－T缓冲液 含0.05%吐温－20的pH7.4的磷酸盐缓冲液(简称为PBS－T) PBS-T缓冲液 取300μl Tween-20 加入PBS 100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。 PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用，具体试剂一般也有不同的比例配方，在针对性上就有了更好的效果。 PH 7.6 7.4 7.2 7.0 H2O 1000 1000 1000 1000 NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5 Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2 NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4 铁氰化钾缓冲溶液5mM 500ml 铁氰化钾的质量为0.8231g 电极扫描范围为-0.2~0.8V/s 亚铁氰化钾缓冲溶液5mM 500ml 亚铁氰化钾的质量为0.9200g