艾滋病初筛实验室标准操作规程

HＩV抗体初筛实验室SOP文件

适用部门：检验科

目录

第一部分工作制度.............................................................................................................. - 1—

实验室工作制度 (1)

HIＶ标本采集与接收登记制度１－?—

艾滋病实验室保密制度................................................................................................ — 2 －艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度２—?—

差错事故处理制度........................................................................................................ － 3 —报告单签发审核制度................................................................................................... － 3 －设备管理制度................................................................................................................ - 4－试剂管理制度................................................................................................................ — 4- 艾滋病筛查实验室安全防护制度5-?—

艾滋病病毒职业暴露预防处理方案5 －?—

第二部分标准操作规程...................................................................................................... — 8 －

第二章样品采集与处理........................................................................................... —８－第二章标准操作程序8 —?－

一、北京金豪...................................................................................................... —8 —

二、上海科华生物................................................................................................. — 9 —

三、英科新创...................................................................................................... — 10-

第三章结果报告与注意事项.................................................................................... - 1２—第三部分设备ＳOP文件1３—?－

一、多功能自动酶标仪RＴ—２100C................................................................... －1３-

二、KHB ST－36W洗板机1６-?—

三、电热恒温水箱18 —?-

第四部分流程图........................................................................................................... －２0-

一、HIV抗体筛查流程图２０－?-

二、暴露级别得评估.................................................................................................. — 21 －附件：血清加样表２2－?-

第一部分工作制度

实验室工作制度

1.室内应经常保持整洁，各种仪器设备要安装适当，器皿试剂摆放整齐,标志清

晰，有良好得通风设备。

2.实验室工作人员工作时一律穿制服,保持衣帽整洁，试验过程中应专心致志、

认真负责，坚守工作岗位,不得随意串岗、闲谈，保持实验室安静，下班离开实验室前要检查并关好水、电、门、窗等，注意实验室安全.

3.认真开展实验室质量控制工作，仪器设备应定期保养，有温度记录，检测标

本得保存要求符合规范要求.

4.实验室不得放置与测试无关得物品，水、温、湿度、光照、防震、防尘、防

噪声等，环境必须符合实验室得工作要求。

5.实验与楼道内必须配置足够得安全防火措施,并定期检查保养。

6.对不同属性、品种与含量水平得试样,应有足够得试验区域，予以分离检验，

尤其就是已知具有生物危害得试样必须分离检验。防止损害工作人员健康与污染环境。

7.与检验无关人员不得进入实验室,外单位人员联系工作,一律在办公室接待。

8.实验结束后,应及时清理实验现场与用品，对染菌带毒得器具废弃物应严格进

行消毒无菌处理。

9.实验室内禁止吸烟、用餐与进食。

HＩV标本采集与接收登记制度

1、采样前与接收标本时应核对病人身份，严格执行查对制度。

2、采血时应戴好手套、帽子、口罩。

3、HIV标本采集应建立详细得记录本,记录内容包括:送检单位、病人姓名、门诊

号、数量、种类(血清)、送样者、接收者或采集者。

4、采集后,应将ＨＩV样本单独分装，勿与其它项目共用。

艾滋病实验室保密制度

为确保艾滋病实验室所有资料严格保密,应遵守以下制度

1、与ＨIＶ/AIDS相关检测项目得所有资料均应严格保密,包括采样记录与检测记录得保管,报告单得发放与送确认实验室检测等。

2、工作人员不得向无关人员提供检验结果，要妥善保存各种实验记录。

3、对初筛疑似阳性感染者不能告诉受检者本人，更不能到处乱讲。

4、实验室得有关检验资料,档案、结果记录其她人不得翻录查阅，修改与销毁.

5、实验室工作人员,不能在非正式场合对外提供任何结果、数据。

艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度

１、检测可疑样品时，充分准备好废弃物消毒具及消毒药、液。如:次氯酸钠含有效氯20０0—５000mg/L,75％乙醇与２％戊二醛。

2、实验室用得吸头及时打入消毒器皿中。

3、一次性手套,隔离服更换后,应丢弃在一次性垃圾袋内。

4、常用消毒方法

4、1、物理消毒方法

4。1.１、高压蒸汽消毒，1２1°Ｃ,保持１5—20 mｉｎ；

4、2、化学消毒方法

4。2．1、废弃物缸:5０00 ｍｇ/L次氯酸钠

4．2．2、工作台面及仪器表面：75%乙醇

4.2.3、溢出物：5000 ｍg/L次氯酸钠

4．２．４、污染得台面与器具:20０0mg／L次氯酸钠

5、实验室中发生可疑样品溢出时，应及时用７5％乙醇喷洒,然后用消毒剂浸泡得吸水物质覆盖10-15分钟，最后再用消毒剂清洗该地方,擦干。

６、全部实验工作结束后,应对实验台、仪器、设备（接触部位）地面进行彻底消毒处理.

7、废弃物处理从ＨIV实验室出来得所有废弃物，包括不再需要得样品、包装盒与其她物品,均应视为感染性废弃物。

差错事故处理制度

1.艾滋病检测工作人员必须要有高度得责任心与严肃得法制观念,严防差

错事故得发生.

2.由于责任心不强、不认真执行规章制度，不遵守操作规程或技术因素而

引发检验错误,对病人未造成严重后果得，称为差错。差错按程度不同，

分为一般差错与严重差错。一级差错记差错一次,二级差错扣款５０元，

三级差错扣除当月效益工资.

一级差错:?(1）违反操作规程，导致标本损坏，需重新采集标本或由于接收标本未认真查对，违反查对制度,影响检验者。

（２)工作环境不能做到5Ｓ管理、违反生物安全者。

(３)未按时记录结果、绘制质控图、当发现失控时隐瞒不报者。

二级差错:

（1）未按时间先后顺序使用试剂，导致试剂过期或由于存放不当造成试剂变质者.

(2)项目漏查、做错项目，且标本已处理，需再次采取标本检验者。

（3）因操作不当，导致设备故障,影响较大者。

三级差错:

(１) 漏做、错做一般标本得检验目得,编错试管号码,标错标本联号、采错病人标本，写错检验结果并已发出报告者。

（2）粗心大意写错报告难以挽回者。

(3) 因责任心不强、管理不善导致阳性标本丢失者.

报告单签发审核制度

一、各岗位得工作由本岗位人员进行操作检验,然后填写检验报告单。工作完

成后,再对本岗位所有得检验报告进行核查一次,在您认为可以发出时,盖上检验者印章，填写好报告日期。交给本实验室负责人或有资质得高年资检验人员核查签名;但在危急情况下或单独一人值班时（如夜班）除外.

二、没有上岗证人员不得单独签发检验结果报告单。

三、专业责任主管技师对本专业得所有报告单进行审核，审核得基本内容有：

1、临床医师所申请得检验项目就是否已全部检验，有无漏项;

2、检验结果得填写就是否清楚、正确；

3、检验报告单上所有内容就是否全部填写完整;

4、有无非常异常得、难以解释得结果;

5、有无书写错误；

6、就是否有需要复查得结果

当发现检验结果有凝议时可指令本岗位人员对检验项目进行复查。确认报告无问题时盖章后，方可发出报告。

设备管理制度

1．由科主任或科室主管负责监督与检查仪器设备得使用状况，定期校准仪器得准确度。

2．各科应对本科室仪器设备建立台账明细。

3．每月应向总库递交仪器设备使用状况表，并存档.

4．贵重仪器应由专人负责管理。

5．仪器操作前必须培训、考核,仔细阅读仪器操作说明书，熟练掌握该仪器得使用方法及维护办法，考核合格后方可操作。

6．当班者在使用中应严格遵守操作规程，遇到问题应作及时处理，并详细记录。

问题严重者,应及时上报科主任或主管加以解决。

7．每次使用完毕,应检查仪器得电源、废液倾倒情况,并详细记录该次使用情况. 8．对有温度要求得仪器设备，如冰箱冷藏室、冷冻室及恒温培养箱、水浴箱等,均应建立登记本,每天监测温度。

试剂管理制度

1.为了更好地管理检验科试剂,由主管对检验科试剂申购、品牌、质量、价格、

使用及管理情况进行督查。

2.每周上报周计划,各组人员根据各岗情况,认真、详细填写计划表，务必注明

详细得名称、规格、数量及品牌。

3.检验科试剂必须由主管审核,并负责报物流中心采购,品牌不得随意更改。杜

绝浪费与积压。

4.所用得试剂必须符合质量要求，必须有三证。不得使用过期、劣质试剂。

5.供应商所送得试剂由总库清点后才能接收,特殊试剂由检验科主管清点后才

能在货单上签字，有出入者必须向科主任或物流中心主任报告，再将货单交物流中心统一结账。

6.领用时应检查物品质量与试剂品名、厂家、人份、批号、过期时间及外包装

有无渗漏等，若有问题，应及时向总库反映。

7.冰箱内不能贮存乙醚、异戊烷或类似得易燃、可燃性液体。

艾滋病筛查实验室安全防护制度

为确保实验室人员得工作安全，防止交叉感染,请严格遵守安全防护制度

1、工作人员要完成与工作有关得充足有效得技术培训,要了解HIV危害,提高全员安全意识，实验室安全负责人要对工作与环境得安全负责，所有工作人员都有责任保护自己与她人得安全.

３、对有放试剂、样品血清得冰箱专人管理。

4、实验人员应熟练掌握操作知识与消毒技术。

5、进入实验室应穿隔离衣,戴手套,传染性危险大时应戴双层手套，戴防护镜,口罩,如防护用具破损应及时更换，不用戴手套得手触摸暴露得皮肤等部位.

6、实验期间尽量避免使用利器,易碎器皿,禁止采用口腔吸液管.

7、送检样品应视为有潜在传染性，由专人接管,登记,存放,提取。

9、实验用吸头、手套、隔离服、污染物、废弃物均放在指定垃圾袋中统一进行消毒,焚烧到无害化处理。10、不得在实验室中吃食物，化妆打扮等,不得在实验室会客.

1１、实验室用品（包括工作服)不得用于其她用途，不可将私人与无关得物品带入实验室.

12、工作完毕,脱去手套后洗手，再脱去工作服，用肥皂与流动水洗手，洗手后

13、实验结束后，要对工作平台、仪器、地面进行消毒处理.

离开实验室。?

14、遇有意外事故,应立即口头与书面报告上级部门，并进行局部处理，如含氯消毒剂浸泡伤口，洗眼，漱口等，如遇高危意外事故，除进行局部处理外,同时应立即采取预防措施，包括对其随访，HIV检测,休息并暂离岗位二个月,按医嘱服用HIV药物等。

艾滋病病毒职业暴露预防处理方案

为维护医务人员及其她部门有关人员得职业安全，有效预防在工作中发生职业暴露感染艾滋病病毒，一旦发生职业暴露后最大限度得避免或减少艾滋病病毒感染，特制定本方案。?一、职业暴露

（一）职业暴露就是指医务人员以及有关工作人员，在从事艾滋病防治工作及相关工作得过程中意外被艾滋病毒感染者或者艾滋病患者得血液、体液污染了皮肤或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒得血液、体液污染了得针头及其她锐器刺破皮

肤,有可能被艾滋病病毒感染得情况.

(二)数据分析表明,医护与预防保健等人员对艾滋病病毒与艾滋病患者从事医疗与实验检测活动就是比较安全得。执行严格得安全操作及防护措施，医护及检验等人员得暴露事件就是可以避免得。

二、职业暴露得预防

1、医务人员对所有病人得血液、体液（包括羊水、心包液、胸腔液、腹腔液、脑脊液、滑液、阴道分泌物等人体物质，下同）及被血液、体液污染得物品均视为具有传染性得病原物质,在接触这些物质时，必须采取防护措施。

2、医务人员进行有可能接触血液、体液得诊疗与护理操作时必须戴手套，操作完毕,脱去手套后立即洗手,必要时进行手消毒.

3、在诊疗、护理操作过程中，有可能发生病人血液、体液飞溅到医务人员得面部时,医务人员应当戴手套、具有防渗透性能得口罩、防护眼镜；有可能发生血液、体液大面积飞溅或者有可能污染医务人员得身体时,还应当穿戴具有防渗性能得隔离衣或者围裙。

4、医务人员手部皮肤发生破损，在进行有可能接触病人血液、体液得诊疗与护理操作时必须戴双层手套。

5、医务人员在进行侵袭性诊疗、护理操作过程中，要保证充足得阳光,并特别注意防止被针头、缝合针、刀片等锐器刺伤或划伤。

6、使用后得锐器应当直接放入耐刺、防渗漏得利器盒,或者利用针头处理设备进行安全处置,也可以使用具有安全性能得注射器、输液器等医用锐器,以防刺伤。

7、禁止将使用后得一次性针头重新套上针头套.禁止用手直接接触使用后得针头、刀片等锐器。

三、艾滋病病毒暴露后得预防处理

（一）紧急局部处理:

1、用肥皂液与流动水清洗污染得皮肤,用生理盐水冲洗粘膜.

2、如有伤口，应当在伤口旁端轻轻挤压,尽可能挤出损伤处得血液,用再肥皂液与流动清水冲洗；禁止进行伤口得局部挤压。

３、受伤部位得伤口冲洗后，应当用消毒液,如７0%乙醇或者0、5％碘伏进行消毒，并包扎伤口;被暴露得粘膜，应当反复用生理盐水冲洗干净.

（二）暴露后得报告及处理程序

1、医护人员发生艾滋病病毒职业暴露后，要立即上报医院领导(具体由医院确定

院内程序,注意给暴露者保密)。及时报告天山区疾控中心,组织专家对暴露得级别与暴露源得病毒载量水平进行评估与确定.

2、医务人员发生艾滋病病毒职业暴露后,区疾控中心应当会同相关医疗卫生单位对其进行随访与咨询。随访与咨询得内容包括：在暴露后第4周、第8周、第1２周及6个月时对艾滋病病毒抗体进行检测，对服用药物得毒性进行监控处理，观察与记录艾滋病病毒感染得早期症状等。不进行暴露后预防用药者，也要定期检测艾滋病病毒抗体，检测时间同上。

3、在对艾滋病病毒职业暴露事件得整个处理过程中,必须始终做好保密工作.凡涉及暴露者个人得相关资料,不得向无关单位与人员泄露。

四、暴露后预防性用药

?对发生艾滋病病毒职业暴露得医务人员应当根据暴露源病毒载量水平实施预防性用药方案。

预防性用药应当在发生艾滋病病毒职业暴露后尽早开始，最好在4小时内实施,最迟不得超过24小时;即使超过24小时，也应当实施预防性用药。

暴露后预防性用药得推荐方案:

１、基本用药程序：两种逆转录酶抑制剂,使用常规治疗剂量，连续服用28天。如双汰芝(AZT与3TC联合制剂） 3０0 ｍg/次,每日2次,用药时间为连续服用２8天.或参考抗病毒治疗指导方案。本程序适用于轻度低危暴露。

2、强化用药程序：

基本用药程序加一种蛋白酶抑制剂，如佳息患或利托那韦。均使用常规治疗剂量，连续服用2８天。本程序适用于严重暴露。

鉴于医务人员暴露后得感染率很低而用药得毒、副作用很大,所以应严格掌握用药得指征.

第二部分标准操作规程

第二章样品采集与处理

一、样本采集

1、接患者申请单后,填写血样采集记录，记录包括患者日期、姓名、年龄、门诊

号、采集人签名等。

2、用带分离胶得负压管采集一定量得静脉血,颠倒混匀5~6次，室温下自然放置

半小时，待血液凝固、血块收缩后再用3000ｒ/ｍiｎ离心1５mｉn。

二、标本采集注意事项

1、样本采集严格按静脉穿刺规范操作。

2、采集样本时应注意安全，直接接触HIV感染/艾滋病病人血液得操作,应戴双

层手套,里层就是PE手套，外层为乳胶手套。

三、样本保存

在一周内检测得样本,可存放于２~8℃；在一周以后检测得样本,须存放于—２0℃。

四、样本运送

1、样本运送一般为血清或血浆，不运送全血。

2、容器要求：①血清应置于带盖得1、5mｌ离心管内,管外应有明显得标记,姓名

与门诊号要清晰;②在离心周围应垫有可缓冲吸水材料，以免破碎；③随样品应附有送检单,送检单应与样本分开放置。④外层容器要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器.

3、天气过热,需采用干冰或冰壶冷藏运输。

第二章标准操作程序

一、北京金豪

【方法】双抗原夹心酶联免疫法

【原理】本试剂盒采用HIV特异性抗原gｐ16０与gp3６等包被微孔反应板，用gp3６、ｇp4１标记辣根过氧化物酶、采用双抗原夹心法捕获人血清、血浆标本中得ＨIＶ(１＋2）抗体。

【HＩV筛查试验操作程序】

（一）试验前准备：

1、试验开始前将试剂与样品放置于室温（1８～２3℃）半小时。

2、换隔离衣，戴好帽子、口罩、双层手套。

3、缓冲液配制：用蒸馏水1：2５倍稀释，现用现配.或液体内有结晶，应放置在

3７℃直至溶解.

（二）试验操作：

1、装好所需使用数目得孔条。设空白对照孔2孔,２个阴性对照孔，2个HＩV-1阳性对照孔。取阳性对照与阴性对照分别充分混匀各50uｌ加入对照孔中,空白对照孔只加样品稀释液。

2、每检测孔加入样品稀释液５０ul，待检样品50uｌ，可振摇５～10S。

3、覆盖粘胶纸，37±2℃孵育30min。

４、置洗板机上洗涤５遍(用洗液将反映孔完全加满，静置３0Ｓ，共洗涤５遍，洗完后孔上方及底部不应残存液体，禁止在滤纸上拍干）。

5、每孔加酶结合物10０ul,取新粘胶纸覆盖反应板,3７±２℃孵育3０min.

6、同步骤４.

7、每孔加入底物缓冲液50ul，TMB５０ul，混匀，不必覆盖粘胶纸,3７±2℃孵育１0min。

8、每孔加入50ｕl 1M硫酸终止反应，充分混匀。

9、在2h内置于酶标仪读数，单波长450nm，或双波长450/６30ｎm测ＯＤ值。

(三)试验结果

１、NＣ≤0、０２

2、Cut off值=0、1＋NC＝0、１２

３、标本ＯD值小于Cｕt off为阴性，大于或等于Ｃｕt off为阳性

(四）报告：对呈阴性反应得样品，可由实施检测得实验室出具HＩV抗体阴性报告；对呈阳性反应得样品,须进行复检,不能出阳性报告。

二、上海科华生物

【方法】双抗原夹心酶联免疫法

【原理】本试剂盒采用HIＶ特异性抗原ｇp１60与gp36等包被微孔反应板,用ｇp36、gｐ41标记辣根过氧化物酶、采用双抗原夹心法捕获人血清、血浆标本中得HIV（1+２)抗体。

【HIＶ筛查试验操作程序】

（一）试验前准备：

1.试验开始前将试剂与样品放置于室温（18~23℃）半小时。

2.换隔离衣，戴好帽子、口罩、双层手套.

3.缓冲液配制:用蒸馏水1:２5倍稀释，现用现配。或液体内有结晶，应放置在

３7℃直至溶解。

（二）试验操作：

1、装好所需使用数目得孔条。设空白对照孔2孔，2个阴性对照孔，3个HＩＶ—1阳性对照孔。

2、每孔加入1０0ｕl待检样品及对照(对照要后加)，可振摇15S。

３、覆盖粘胶纸，37±2℃孵育6０±2ｍiｎ.

4、置洗板机上洗涤5遍(用洗液将反映孔完全加满,静置30Ｓ，共洗涤5遍,洗完后孔上方及底部不应残存液体,禁止在滤纸上拍干）。

５、每孔加酶结合物10０ul，取新粘胶纸覆盖反应板,３7±2℃孵育３0miｎ。６、同步骤４.

７、每孔加入底物缓冲液50uｌ,TMB５０ul,混匀，不必覆盖粘胶纸，3７±2℃孵育１0min。

8、每孔加入50ul 1Ｍ硫酸终止反应,充分混匀。

9、在2h内置于酶标仪读数，单波长450nm，或双波长４50/630nm测OD值。（三）试验结果

1、NC≤0、０8

2、Cut off值=阳性对照值×10%

３、标本OD值小于Cut ofｆ为阴性，大于或等于Cut off为阳性

（四）报告:对呈阴性反应得样品,可由实施检测得实验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应得样品，须进行复检，不能出阳性报告。

三、英科新创

【方法】胶体金法

【原理】本试剂盒采用胶体金免疫技术与层析原理，定性测定血清样本中得HIV1／2型抗体。血清阳性样本中ＨＩV抗体与胶体金标记抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动,经过检测线时与预包被得重组Ａu—HIＶ（1＋2)－Ag则在对照线处与抗HIＶ单克隆抗体结合而富集显色.?阴性标本则仅在对照线处显色，30分钟内观察结果即可.

【ＨIＶ筛查试验操作程序】

（一）试验前准备：

1、试验开始前将试剂与样品放置于室温(18～２３℃)半小时,编号。

2、戴好帽子、口罩、双层手套。

3、将所需测试卡从包装盒中取出,置于台面上.

（二）试验操作：

1、用微量加样器取６０uｌ样本血清，加到测试卡得加样处。

２、加样后，阳性标本可在1～３0分钟内检出。30分钟后观察结果将造成影响。（三）试验结果

阳性：测试卡在检测区与对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测得紫红色条带隐约可见，应用酶免试剂重复检测。

阴性：测试卡只在对照区位置出现一条紫红色条带。

失效:对照区未出现紫红色条带。

【方法】双抗原夹心酶联免疫法

【原理】采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆样本中得ＨIV抗体。当待检样本中存在HＩＶ抗体时，在反应过程中形成“固相HＩV抗原-ＨIV抗体－酶标记ＨＩV抗原”得免疫复合物，加入底物后形成显色反应.

【HIV筛查试验操作程序】

(一）试验前准备：

1.试验开始前将试剂与样品放置于室温(1８～25℃）半小时,编号。

2.换隔离衣，戴好帽子、口罩、双层手套.

3.缓冲液配制：用蒸馏水１:1９倍稀释，现用现配。或液体内有结晶,应放置在

37℃直至溶解。

（二）试验操作

1、按顺序分别在相应孔加入５0ul待测样品及阴、阳性对照血清。

2、覆上封板膜,置37℃温育３０ｍin、

3、用洗涤液充分洗涤5次（每次应保持3０~60秒浸泡时间）,扣干。

4、分别在每孔中加入酶标抗原1０0ul。

５、覆上封板膜，置３7℃温育3０mｉｎ。

６、用洗涤液充分洗涤５次(每次应保持30~6０秒浸泡时间)，扣干。

7、每孔加底物A、Ｂ各50ul,轻拍混匀,覆上封板膜,置37℃暗置20miｎ。

８、每孔加入终止液5０ul。

9、用酶标仪测定。

(三）试验结果

1、阳性对照值应大于阴性对照值0、6以上且阴性对照值小于0、1方可认为本实验有效.

2、Cｕｔoｆf valｕe=0、1+阴性对照均值(若阴性对照小于0、０５以０、0５计）

3、样品OD值大于或等于临界值为初筛阳性,小于临界值为阴性。

第三章结果报告与注意事项

【复检试验】

对初筛呈阳性反应得样品用原有试剂与另外一种不同原理或不同厂家得筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如均呈阳性反应,或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。(具体详见流程图）

【筛试验结果得报告】

对HＩV抗体筛查试验,呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告.

对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告,可出具“ＨIV抗体待复查”报告。【初筛试验呈阳性反应样品得转送】

如需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“ＨIV抗体复测送检单”，经1名检验人员与１名具有中级以上技术职称得人员审核签字，与血样品一同送天山区疾控中心实验室,再转送市疾控中心艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。

【操作台消毒处理】

用3~5％84消毒液擦拭台面，如工作台被溢出物污染，则用消毒液浸泡30分钟后,再行擦拭。

【房间消毒】?每日用紫外线照射30～60min

【方法学特性及注意事项】

a)试剂盒4~30℃干燥保存。有效期16个月。

b)抗凝全血应采用ＥDTA,样品应避免溶血。

c)样品应在收集后7天内检测,２～８℃保存,如果大于7天,应冷冻保存。

d)测试卡仅用于HIV抗体得现场初筛，检测阳性必须用EＬＩSA方法

进一步确认。

e)样本得加样应使用微量加样器准确加入.

f)实验环境应保持一定湿度、避风,18~2５℃进行。

g)本试剂盒应视为有感染源得物品,应按生物危险样品处理。

【血清加样表】见附件。

每次检测完毕需填写血清加样表，由审核者签字复核，存档,以备查。

第三部分设备SOP文件

一、多功能自动酶标仪ＲT—2100C

1．仪器简介

RT－210０C就是一台网络化得酶标免疫测试分析仪器，可广泛用于传染病、肿瘤标志物、血液病、艾滋病、内分泌障碍测定等诊断领域。

2．仪器原理

3．环境要求:

1)避免阳光直晒

2)温度:10℃~4０℃，湿度20％～8５％

3)电源必须接地良好

4)电源稳定，禁止与大功率用电器共用电源

4．操作步骤

４。1开机

打开仪器背面得电源开关,等待约1０秒钟,开机初始化流程要完成以下工作:

1)系统程序加载

2)系统自检

3)读取用户数据

4)前端初始化

5)等待光源稳定:仪器需要等待光源稳定约１分钟左右。

6)光路自检:期间滤光片轮会转动,酶标板将往返走板一次。

开机结束后,进行主菜单窗口。

4.2项目设置

在主菜单中按[项目设置]键，进入项目列表窗口。

4。2.1新建与更改项目

按[新建]或［更改］键,添加或更改项目，如果项目数已经超过100，将无法创建新项目。按图所示设置参数设置.

1)项目名称:该项必须输入，注意不要与已经存在得项目名重复。

2)试剂名称:根据所用试输入，也可以不输入。

3)波长：从列表中选取，注意主波长与次波长不能重复.

4)计算方法:从列表中选取

5)双样本：若选择双样本，则布板时每个样本孔得相邻孔自动设置为重复孔，计算时取两

者吸光度得平均值.

6)空白上限：职由试剂要求空白必须不超过0、０5，则空白应设为＜0、05,测试时如果空

白孔吸光度值超过设定得上限，系统会提示用户“空白也吸光度值过高”。

7)定量计算,根据试剂说明输入：

a)标准品数量：选择2～8个标准品。

b)浓度单位：从列表中选择。

c)双标准：若选择双标准:则布板时每个标准孔得相邻孔被自动设置为重复孔,计算时

取两者吸光度得平均值。

d)标准品吸光度:双击标准品浓度列表项，可以在弹出窗口中输入浓度值,注意标准品

浓度顺序必须为由小到大.

8）计算，按试剂说明在窗口中输入：

a)Cuｔ—off公式系数：各钟试剂得定性公式如有不同形式如S/Ｎ，(N－Ｓ)／N等均

可转换为S/（Ｘ*Ｎ+Ｙ*P＋Fac）得形式.

b)阴性对照与阳性对照得吸光度范围：对照得吸光度超出上限与下限进分别按上限与

下限计算.例如有试剂要求阴性对照小于０。05按0。05计，则阴性对照下限应设为０。0５。

c)对照：可以任意设置对照,但对照得数量不超过５个，计算时取所有对照吸光度得平

均值.

9）阴阳性判定设置窗口

在此窗口中输入判定阴性与阳性得临界值,吸光度模式下,临界值为吸光度值:Cut-of ｆ方式下，临界值为样本与Cut－oｆｆ值得比值，定量计算方式下,临界值为浓度值.定性方式分为３类:

a)正向阈值模式:阴性<阴性临界值，阳性≥阳性临界值,两者之间为灰区,在此区间内得样

本判定为可疑。

b)反向阈值模式：阴性＞阴性临界值,阳性≤阳性临界值。

c)不需要判定阴阳性:在定性方式中选择“无。

所有参数设置完毕,按［完成］键。

４。３样品测试

在主菜单中按［样品测试]键，进入如下窗口：

a)布板方向:横向或纵向

b)进板方式:选择连续方式（<5秒）提高测量速度，选择步进方式(<15秒)获得更高得测量

精度。

c)振板参数：振板速度分快速,中速与慢速3档，振板时间1~60秒，也可以选择不振板. 设定完以上参数后,按[确定］键,进入布板窗口。

4.４布板

4。４。1样本

任意点击欲设置为样本得孔位，样本号从1起自动递增并显示在该孔位上。如果要修改样本号，可再次点击该孔位.

4.4.2空白

空白孔在项目测试中用以吸光度调零，即其它孔位得吸光度均要减去空白孔吸光度值.根据不同项目测试得要求,可以选择就是否设定空白。

旧空白得保存与使用:空白孔得测试结果将自动保存,如果在同一项目得后续测试中不重新设定空白，则系统自动用旧空白进行计算。

第个项目只允许设置一个空白孔，如果在设置空白孔时多次点击不同得孔位,那么只有最后一次点击得孔位被设定为空白孔,前面设置得空白孔被自动清除。

4．4.３依次设置阴性对照与阳性对照。

按[开始］键，系统确认布板无误后,开始走板测试。走板结束,系统自动进入吸光度显示。4.５关机

在主菜单中按［关机］，系统显示关机确认窗口，按[YES]执行关机程序，按[NO］返回主菜单。

5．仪器维护

1)保持仪器工作环境得清洁。

2)仪器表面得清洁，可以用中性清洁剂与湿布擦拭。

3)液晶显示器请用柔软得布清洁

4)勿让任何溶剂，油脂类，腐蚀性物质接触仪器。

二、KHB ST-36W洗板机

1 目得?规范洗板机得操作程序，保证洗板机得正常状态。?2适用范围?本实验室ＫＨB ST －３6W洗板机得操作。

3 操作人员?本实验室实验人员.

４操作步骤?4、１拔掉废液瓶口得塞子(接有与洗板机相连得废液管），倒掉废液瓶得废液,再把塞子安紧在废液瓶口上。注意不要让废液管拧紧，以保证废液管得通畅。

４、2 拧开洗液瓶得盖子（接有与洗板机相连得洗液管),倒掉前一天洗液瓶里剩得洗液,倒进新配得洗液。拧紧盖子，注意不要让洗液管拧紧，以保证洗液管

得通畅。

4、3 保证待洗反应板所有得孔处于同一水平位置,以免孔边缘过高碰到洗板机得吸液针。?4、４开机?插上电源,打开电源开关（按后面板【ＰOWEＲ】键),仪器显示“仪器复位中，请稍候”仪器初始化结束后。仪器显示：“就绪,当前程序＃Ｘ请选择功能键”X处显示得数字(范围0～15之间)表示当前准备就绪得就是第几号程序.此时仪器正处于待机状态，用户可进行下一步操作。

4、５预洗?在待机状态下，使预洗槽处于清洗头下方,按下【预洗/返回】键，清洗头抬起，电磁阀打开，洗液进入预洗槽。清洗头将对预洗槽洗涤3次,清洗容量为400UＬ,但清洗时没有暂停与浸泡步骤。?４、6 编程

按下【编程】键。进入编程菜单界面。画面最左边有闪动得指示光标“→”，按下【↑】键或【↓】键移动所需要设定得参数前，按下【确定】键，即选中了该参数项，再按下【↑】或【↓】键设定该参数得参数值.?４、7 运行

按下【运行】键，系统将立即按照用户设定得程序执行.?4、8 关机

４.8．1 日常关机最后一次洗板结束后，将电源开关置于【OＦF】位；并将酶标板托盘上得预洗槽用蒸馏水装满,使清洗头浸入预洗槽。?4、8、2 长期关机将长时间不使用洗板机时,先用蒸馏水冲洗一遍整个系统,再进行日常关机;并且倾倒、清洗废液瓶，保持液体干燥，以免清洗液中得缓冲盐类结晶而堵塞清洗头。

5 键盘功能

５、1 【编程】:进入编程菜单。用来设定仪器得运行方式及各项参数。?５、2 【运行】:执行先定得程序.

【↑】：处于待机状态时，此键用来顺次递增程序号;处于编程状态时，用来使光标“→"上移。【↓】：处于待机状态时，此键用来顺次递减程序号；处于编程状态时，用来使光标“→”下移。?５、3 【复位】：终止当前操作，使仪器恢复到开机状态。?５、4 【预洗／返回】：处于待机状态时，此键用来使仪器执行预洗程序;处于编程状态时,此键可使显示面板界面回到待机状态

5、5 【确定】：确认光标所指示得参数项。?6编制洗涤程序?编程菜单中包括清洗方式、清洗头数、清洗条数、清洗容量、加洗次数、清洗次数、暂停时间、浸泡时间8种参数项目。

6、1 清洗方式，条洗与板洗。

6、2 清洗头数,可设定为１2头或8头。

６、3 清洗条数，或设定在1～1２范围内，该参数设置与清洗头数有关,当头数为１2时条数最大值为8。反之当头数为８时，条数最大值为12。?６、4 清洗容量,可在5０UL、10０UL、150UL、２00UL、25０ＵL、300UL、3５０UL、40０UL、4５0ＵL中选择设定。６、5 加洗次数，加洗次数可在１~3范围内设定.?６、６清洗次数，清洗次数可在1～10范围内设定。?６、7 暂停时间，当清洗方式为知洗时，清洗头在注满酶标板每行后启动暂停，时间可在0~１０秒内任意设定,增量为1秒;当清洗方式为板洗时，清洗头在每次过板注满水后启动暂停,时间可在0~60秒任意设定,增量为５秒。?6、8 浸泡时间,一般清洗过程中，清洗头在酶标板最后一行中注满水后,即启动浸泡功能。浸泡时间可在0～３00秒内任意设定，增量为３０秒，但在加洗程序中不能启动浸泡功能。?７维护保养程序?7、1 平常不用时，拔掉电源插头.

7、2 每天洗板机工作结束时，要对内外其进行清洁，用湿抹布擦洗洗板机得外壁及载物台，以保证其洁净。用蒸馏水将所有得管道清洗一遍，防止洗液得结晶堵塞管道.

７、3 及时倒弃废液，以免废液瓶过满致使废液回流而造成洗板机得故障。?７、4 保证待洗得反应板得孔边缘不要过高且水平，以免造成吸液针损伤。?7、5 定期将洗液及废液管道拆卸下来进行冲洗,以保证管道得通畅。

8 仪器消毒

８、1 消毒试剂：甲醛溶液10％；酒精70％；戊二醛溶液４%。

8、２消毒步骤?8、2、1 准备10％甲醛溶液200ml,4%戊二醛溶液200ｍl,70％酒精一瓶，若干医用棉球。

8、2、2 清洗仪器

8、２、2、１给仪器注入蒸馏水，抬起清洗头,用戊二醛溶液注满托盘预洗槽。?8、２、2、2 用清洗头抽干托盘预洗槽,再用蒸馏水注满托盘预洗槽，抽干。

８、2、２、3 移走酶标板架与清洗头,将它们浸泡在戊二醛溶液中2４小时.

８、２、2、4 倾倒液体瓶。

８、2、2、5 切断电源,拨掉电源线.?8、2、3 仪器消毒?８、２、3、1 用浸透７0%酒精得棉球为仪器外壳消毒。

8、２、3、２拆离主机与液体瓶，并打开液体瓶瓶盖,将仪器放入一个大得塑料袋中。?8、2、3、3 把在１0%甲醛溶液中浸透得棉球放入塑料袋。

8、２、3、4 密封塑料袋24小时。

８、3 消毒后期处理?８、３、1 从袋中取出仪器。?8、３、2 用中性清洗液清洁仪器. 8、3、3 用７0％酒精擦去污染物质。

８、3、４把清洗头与酶标板架从戊二醛溶液中取出并用蒸馏水漂洗,把它们重新安装在仪器上。?８、3、5 在试剂瓶内注入蒸馏水并执行预洗程序,以冲洗系统得液体流动通路.

8、３、6 在仪器上贴上注有消毒日期得已消毒标识。?9注意事项

9、1 操作环境

实验室中经常遇到传染性标本与腐蚀性液体，进行实验室操作时应穿戴好防腐实验服与手套。处理危险样品时，参考实验室操作手册进行操作.?9、2 操作前?9、２、1 必须严格

按照仪器说明书安装好仪器,保证正确连接管路,以免出现渗漏.?9、2、2 洗板机长期不用后

再度使用时,需预洗整个系统4次.

９、３操作中?9、３、１按下【运行】键前，需确认：已装上正确清洗头;酶标板已正

确放置;已选择适当得程序及参数值.?９、3、２为防止液体进入泵,及时倾倒废液.

9、3、３如果仪器表面有生物危险物质污染,用中性消毒液清洁。

9、3、４保持滑道得清洁干燥。避免堵塞，若有液体溅出,及时擦干。?9、3、5 在洗板

过程中,如需仪器停止运行，请按键盘上得【复位】键，不要用手或物体强制仪器停止运行。?１0 职责

10、１实验室工作人员应该严格按照本ＳＯP进行操作.

10、2 本SＯP得改动,可由任一使用本仪器得工作人员提出，并报经本实验室负责人、科

主任签字批准方可通过。

三、电热恒温水箱

原理

接通电源,通过控温器设定温度值,电热管加热，水温升到设定温度时,电源断开，停止加热；当水温低于设定值时，电源接通，重新加热，如此循环工作。

使用方法

1）使用时应平放在固定台面上,将蒸馏水加至屉板５0ｍm以上。

2）指示灯:绿灯亮为加热状态；红灯亮为恒温状态。

3）温度设定应按所需温度得90%预设。如:需37℃，则预设温度为37℃×９0%=３３

4）调节面板上“手动再调(ＲSＴ)”电位器，调节至所需温度。温度要求:37℃±0、５℃

注意事项

1）使用时必须先加水，后通电，水位不得低于电热管，否则将烧坏电热管。

2）待温度恒定后方可使用.

3）长期不用，应将水放净擦干,保管在相对湿度８0％,无腐蚀性气体与通风良好得室内。

维护与保养

1）每天对仪器外表面进行清洁。

2）定期检查水面高度，不符合要求时应及时加水。

3）箱内因温度适宜，利于细菌生长繁殖，故箱内应定期清洁消毒，防污染。

使用记录

每天检查温度2次，上班时1次，下班前1次，并作好相关记录.发现问题应及时处理，若无法处理则及时上报解决。

第四部分流程图

一、HIＶ抗体筛查流程图

二、暴露级别得评估

附件：血清加样表

试剂盒名称:人类免疫缺陷病毒（HIV）1＋2型抗体诊断试剂盒（酶联免疫双抗原夹心法）试剂厂家：□北京金豪□上海科华

批号：效期：试验日期：年月日室