【精品】常用试剂的溶解性
常用试剂的溶解性
1 . 二甲胺：有机物和无机物的优良溶剂，溶于水、低级醇、醚、低极性溶剂，
强烈刺激性。
2 . 石油醚：不溶于水，与丙酮、乙醚、乙酸乙酯、苯、氯仿及甲醇以上高级醇
混溶，与低级烷相似。
3 . 乙醚：微溶于水，易溶与盐酸，与醇、醚、石油醚、苯、氯仿等多数有机溶
剂混溶。麻醉性
4 . 戊烷：与乙醇、乙醚等多数有机溶剂混溶，低毒性。
5 .二氯甲烷：与醇、醚、氯仿、苯、二硫化碳等有机溶剂混溶。低毒性，麻醉
性强
7 . 二硫化碳：微溶与水，与多种有机溶剂混溶。麻醉性，强刺激性
8 .丙酮：与水、醇、醚、烃混溶。低毒，类乙醇，但较大
9 . 1，1-二氯乙烷：与醇、醚等大多数有机溶剂混溶。低毒、局部刺激性
10 . 氯仿：与乙醇、乙醚、石油醚、卤代烃、四氯化碳、二硫化碳等混溶。中
等毒性，强麻醉性
11 . 甲醇：与水、乙醚、醇、酯、卤代烃、苯、酮混溶。中等毒性，麻醉性
12 . 四氢呋喃：优良溶剂，与水混溶，很好的溶解乙醇、乙醚、脂肪烃、芳香烃、氯化烃。吸入微毒，经口低毒。
13 . 己烷：与甲醇部分溶解，与比乙醇高的醇、醚、丙酮、氯仿混溶。低毒，
麻醉性，刺激性
14 . 三氟代乙酸：与水、乙醇、乙醚、丙酮、苯、四氯化碳、己烷混溶，溶解
多种脂肪族、芳香族化合物。
15 . 1，1，1-三氯乙烷：与丙酮、、甲醇、乙醚、苯、四氯化碳等有机溶剂混溶。低毒类溶剂
16 . 四氯化碳：与醇、醚、石油醚、冰醋酸、二硫化碳、氯代烃混溶。氯代甲
烷中毒性最强。
17 . 乙酸乙酯：与醇、醚、氯仿、丙酮、苯等大多数有机溶剂互溶，能溶解某
些金属盐。低毒，麻醉性
18 . 乙醇：与水、乙醚、氯仿、酯、烃类衍生物等有机溶剂混溶。微毒类，麻
醉性
19 . 丁酮：与丙酮相似，与醇、醚、苯等大多数有机溶剂混溶。低毒，毒性强
于丙酮
20 . 苯：难溶于水，与甘油、乙二醇、乙醇、氯仿、乙醚、四氯化碳、二硫化碳、丙酮、甲苯、二甲苯、冰醋酸、脂肪烃等大多有机物混溶。强烈毒性
21 . 乙睛：与水、甲醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯、丙酮、醚、氯仿、四氯化碳、
氯乙烯及各种不饱和烃混溶，但是不与饱和烃混溶。中等毒性，大量吸入蒸气，
引起急性中毒
22 . 异丙醇：与乙醇、乙醚、氯仿、水混溶。微毒，类似乙醇
23 . 甲苯：不溶于水，与甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙醚、冰醋酸、苯等有机
溶剂混溶。低毒类，麻醉作用。
24 .乙二胺：溶于水、乙醇、苯和乙醚，微溶于庚烷。刺激皮肤、眼睛
25 . 丁醇：与醇、醚、苯混溶。低毒，大于乙醇3倍。
26 . 乙酸：与水、乙醇、乙醚、四氯化碳混溶，不溶于二硫化碳及C12以上高级脂肪烃。低毒，浓溶液毒性强
27 .吡啶：与水、醇、醚、石油醚、苯、油类混溶。能溶多种有机物和无机物。
低毒，皮肤黏膜刺激性
28 . 乙酸丁酯：优良有机溶剂，广泛应用于医药行业，还可以用做萃取剂。一
般条件毒性不大
29 . N，N-二甲基甲酰胺：与水、醇、醚、酮、不饱和烃、芳香烃烃等混溶，
溶解能力强。低毒。
30 . N，N-二甲基乙酰胺：溶解不饱和脂肪烃，与水、醚、酯、酮、芳香族化
合物混溶。微毒类
31 . 二甲亚砜：与水、甲醇、乙醇、乙二醇、甘油、乙醛、丙酮乙酸乙酯吡啶、
芳烃混溶。微毒，对眼有刺激性
32 . 甲酰胺：与水、醇、乙二醇、丙酮、乙酸、二氧六环、甘油、苯酚混溶，
几乎不溶于脂肪烃、芳香烃、醚、卤代烃、氯苯、硝基苯等。皮肤、黏膜刺激性、
33 . 乙酰胺：溶于水、醇、吡啶、氯仿、甘油、热苯、丁酮、丁醇、苄醇，微
溶于乙醚。毒性较低
34 . 1，4-二氧六环：能与水及多数有机溶剂混溶，仍溶解能力很强；不溶于乙醚、氯仿、二硫化碳、苯、四氯化碳、石油醚。微毒，强于乙醚2~3倍。食用对人体无毒。
35 . 1，2-二氯乙烷：与乙醇、乙醚、氯仿、四氯化碳等多种有机溶剂混溶。高
毒性、致癌。
36 . 乙二醇二甲醚：溶于水，与醇、醚、酮、酯、烃、氯代烃等多种有机溶剂
混溶。能溶解各种树脂，还是二氧化硫、氯代甲烷、乙烯等气体的优良溶剂。吸
入和经口低毒
37 . 三氯乙烯：不溶于水，与乙醇、乙醚、丙酮、苯、乙酸乙酯、脂肪族氯代烃、汽油混溶。有机有毒品
38 . 三乙胺：水:18.7以下混溶，以上微溶。易溶于氯仿、丙酮，溶于乙醇、乙醚。易爆，,皮肤黏膜刺激性强
39 . 丙睛：溶解醇、醚、DMF、乙二胺等有机物，与多种金属盐形成加成有机物。高毒性，与氢氰酸相似
40 . 庚烷：与己烷类似。低毒，刺激性、麻醉性
41 . 硝基甲烷：与醇、醚、四氯化碳、DMF等混溶。麻醉性，刺激性
42 . 硝基乙烷：与醇、醚、氯仿混溶，溶解多种树脂和纤维素衍生物。局部刺
激性较强
43 .4-甲基-2-戊酮：能与乙醇、乙醚、苯等大多数有机溶剂和动植物油相混溶。毒性和局部刺激性较强。
44 . 辛烷：几乎不溶于水，微溶于乙醇，与醚、丙酮、石油醚、苯、氯仿、汽
油混溶。低毒性，麻醉性。
45 . 氯苯：能与醇、醚、脂肪烃、芳香烃、和有机氯化物等多种有机溶剂混溶。
毒性低于苯，损害中枢系统
46 . 乙二醇一甲醚：与水、醛、醚、苯、乙二醇、丙酮、四氯化碳、DMF等混溶。低毒类。
47 . 乙二醇一乙醚：与乙二醇一甲醚相似，但是极性小，与水、醇、醚、四氯
化碳、丙酮混溶。低毒类，二级易燃液体
48 . 对二甲苯：不溶于水，与醇、醚和其他有机溶剂混溶。一级易燃液体
49 . 二甲苯：不溶于水，与乙醇、乙醚、苯、烃等有机溶剂混溶，乙二醇、甲
醇、2-氯乙醇等极性溶剂部分溶解。一级易燃液体，低毒类
50 . 间二甲苯：不溶于水，与醇、醚、氯仿混溶，室温下溶解乙睛、DMF等。
一级易燃液体
51 . 邻二甲苯：不溶于水，与乙醇、乙醚、氯仿等混溶。一级易燃液体
52 . 环己酮：与甲醇、乙醇、苯、丙酮、己烷、乙醚、硝基苯、石油脑、二甲
苯乙二醇、乙酸异戊酯、二乙胺及其他多种有机溶剂混溶。低毒类，有麻醉性，
中毒几率比较小
53 . 环己醇：与醇、醚、二硫化碳、丙酮、氯仿、苯、脂肪烃、芳香烃、卤代
烃混溶。低毒，无血液毒性,刺激性
54 . 糠醛：与醇、醚、氯仿、丙酮、苯等混溶，部分溶解低沸点脂肪烃，无机
物一般不溶。有毒品，刺激眼睛，
55 . N-甲基甲酰胺：与苯混溶，溶于水和醇，不溶于醚。一级易燃液体
56 . 苯酚（石炭酸）：溶于乙醇、乙醚、乙酸、甘油、氯仿、二硫化碳和苯等，
难溶于烃类类溶剂，65.3℃以上与水混溶，65.3℃以下分层。高毒类，对皮肤、黏膜有强烈腐蚀性，可经皮吸收中毒。
57 . 甲酚：微溶于水，能于乙醇、乙醚、苯、氯仿、乙二醇、甘油等混溶。低
毒类，腐蚀性，与苯酚相似
58 . 邻甲酚：微溶于水，能与乙醇、乙醚、苯、氯仿、乙二醇、甘油等混溶。
参照甲酚
59 . 间（对）甲酚：与甲酚类似，参照甲酚。
60 . N，N-二甲基苯胺：微溶于水，能随水蒸气挥发，与醇、醚、氯仿、苯等
混溶，能溶解多种有机物。抑制中枢和循环系统，经皮肤吸收中毒
61 . 乙二醇：与水、乙醇、丙酮、乙酸、甘油、吡啶混溶，难溶于氯仿、乙醚、
苯、二硫化碳等，对烃类、卤代烃不溶，溶解食盐、氯化锌等无机物。低毒类，
可经皮肤吸收中毒
62 . 硝基苯：几乎不溶于水，与醇、醚、苯等有机物混溶，对有机物溶解能力
强。剧毒，可经皮肤吸收。
63 . 甘油：与水、乙醇混溶
64 . 1，2-丙二醇：与水、乙醇、乙醚、氯仿、丙酮等多种有机溶剂混溶。低毒，吸湿。
65 . 二甘醇：与水、乙醇、乙二醇、丙酮、氯仿、糠醛混溶；与乙醚、四氯化
碳等不混溶。微毒，经皮吸收，刺激性小
66 . 苄醇：与乙醇、乙醚、氯仿混溶，20
℃在水中溶解 3.8%(wt) 。低毒，黏膜刺激
67 . 六甲基磷酸三酰胺：与水混溶，与氯仿络合，溶于醇、醚、酯、苯、酮、烃、
卤代烃等。较大毒性
68 . 喹啉：溶于热水、稀酸、乙醇、乙醚、丙酮、苯、氯仿、二硫化碳等。中
等毒性，刺激皮肤和眼
69 . 吗啉：溶解能力强，超过二氧六环、苯、和吡啶，与水混溶，溶解丙酮、苯、乙醚、甲醇、乙醇、乙二醇、2-己酮、蓖麻油、松节油、松脂等。腐蚀皮肤，刺激眼和结膜，蒸汽引起肝肾病变。
70 . 乙二醇碳酸酯：与热水、醇、苯、醚、乙酸乙酯、乙酸混溶，干燥醚、四
氯化碳、石油醚中不溶。毒性低
71 . 丁二睛：溶于水，易溶于乙醇和乙醚，微溶于二硫化碳、己烷。中等毒性
72 . 环丁砜：几乎能与所有有机溶剂混溶，除脂肪烃外能溶解大多数有机物
实验室安全考试——化学题440-877
扑救燃油类易燃液体火灾时，应（）。使用干粉灭火器 化工原料电石或乙炔着火时，严禁用（）。四氯化碳灭火器 化学品泄漏事故发生时,下面（）做法是错误的。所有人员参加事故救援 一氧化碳气味（）无味 氧气钢瓶瓶身颜色是什么？天蓝色 超级恒温水浴使用时错误的操作是（）。可以使用自来水 下列属于易制爆化学品的是（）。硝酸钠 何种毒性的化学品为高毒药品？大鼠一次经口LD50 为1-50 大多数氧化剂和（）都能发生剧烈反应，放出有毒气体。强酸 气体钢瓶的使用步骤是（）。先开总阀门，再开减压阀 化学实验中，为防止（）发生氧化自燃，常将其置于水中保存。黄磷 是否能在纸上称量过氧化钠？不能 关于氢氟酸的描述哪个是错误的？氢氟酸有强烈的腐蚀性和危害性，皮肤接触氢氟酸后可出现疼痛及灼伤，随时间疼痛渐剧，皮肤下组织被破坏，这种破坏会传播到骨骼；稀的氢氟酸危害性很低，不会产生严重烧伤 实验室内的浓酸、浓碱处理，一般可（）。先中和后倾倒，并用大量的水冲洗管道 市售浓硝酸质量分数约为多少？65 何种毒性的化学品为低毒药品？大鼠一次经口LD50 为500-5000 吸湿性强、遇水释放较多热量的化学品沾染皮肤后应立刻（）用软纸、软布抹去 化学药品存放室要有防盗设施，保持通风，试剂存放应（）。按不同类别分类存放 有些特殊金属遇水会发生燃烧，比如，钾、（）。钠 在使用液化石油气时，钢瓶应该（）。直立放置 用剩的活泼金属残渣应如何处理（）。缓慢滴加乙醇将所有金属反应完毕后，整体作为废液处理 试剂或异物溅入眼内，处理措施正确的是（）。以上都对 下列属于易制毒化学品的是（）盐酸 实验中吸入Cl2或HCl气体时，应如何处理？立即到室外呼吸新鲜空气 关于化学品的使用、管理，下列说法哪个是错的？有机溶剂可以置于普通冰箱保存 以下关于气体钢瓶使用说法正确的是（）。不可把气瓶内气体用光，以防重新充气时发生危险 甲烷气体的气味（）。无味 大量销毁易燃易爆化学物品时，应征得所在地（）监督机构的同意。公安消防 在装卸易燃易爆品操作中,不能使用( )工具。铁制 H2S的气味（）。臭鸡蛋味道 当做实验时，皮肤不小心被碱灼伤怎么办？先用大量水冲洗，再用1 %硼酸或2 %醋酸溶液浸洗，最后用水洗 危险化学品单位发生危险化学品事故造成人员伤亡、财产损失的，应当依法承担（）责任。赔偿 （）可能发生阴燃。煤 实验时废弃的少量金属钠该如何处理？先用乙醇处理，再用大量水冲洗 相互反应产生会产生有毒气体或剧烈放热的废液，应（）。不得倒入同一收集桶中 下面（）物质属于自燃物品？黄磷 甲醇属于何种级别的毒性？低毒 对于高挥发性化学试剂，正确的储存方式为？放在通风橱内
常用免疫组化标记物精编版
常用免疫组化标记物公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]
常用免疫组化指标的意义 Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA(增埴细胞核抗原)。 多数腺癌表达CEA Rb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。 P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。野生型半衰期很短 Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。 E-Ca，E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞之间连接的破坏，主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。 PS2（雌激素调节蛋白），其表达和ER表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。 CK18，低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。 CK19，分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，而胆管为阳性反应 Hep par 1,肝细胞抗原，正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。 CK20，用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。 CK7 卵巢、肺和乳腺上皮常阳性，结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。 Villin 绒毛蛋白，正常组织中，villin通常只表达于有刷状缘的细胞上，如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中（特别是近曲小管）。Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率，具有明显腺样结构的肿瘤上没有villin表达，则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低。 乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除的一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显的villin免疫组化阳性染色，则这个肿瘤就极
免疫组化操作方法原理步骤以及常见问题处理大总结
免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结 1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。 5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那，这是因为我经过了反复的动手+动脑，把理论原理运用于实践，在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯通。 一、概念和常用方法介绍 1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。 2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较
免疫组化操作步骤
免疫组化操作步骤集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#
免疫组化操作流程 试剂准备 1. PBS缓冲液（～）： NaCl 137mmol/L，KCl L，Na2HPO4 L， KH2PO4 L。 2. L柠檬酸盐缓冲液（CB，，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸。即抗原修复液 : PBS+吐温-20（1000:1）洗液可全部运用PBST 4. 3% 甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。 5. 封片剂：中性树脂+二甲苯。 操作流程 免疫组织化学染色 SP法： 1. 脱蜡、水化： 脱蜡前，应将切片在60℃恒温箱中烘烤60~120分钟，观察石蜡应溶解。 从烤箱拿出切片后尽快置于二甲苯中浸泡30分钟，更换二甲苯后再浸泡30分钟； 无水乙醇中浸泡3分钟； 95%乙醇中浸泡3分钟； 70%乙醇中浸泡3分钟（我用80%）； 50%乙醇中浸泡3分钟； 自来水中浸泡3分钟；
梯度脱蜡 2. 抗原修复：（用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片） 高压热修复高压锅里放少许水，用一量杯或容器（大小能容纳玻片架为宜）装抗原修复液放入高压锅里一起煮沸，再放入玻片架，盖上不锈钢高压锅的盖子，将排气阀门套上，待听到阀门冒气时，即可倒计时2min，之后将玻片杯一起放入凉水中，静置15min，平衡至室温。电磁炉1000W 2min。 3.丢弃抗原修复液，将玻片浸泡在去离子水中（时间不限）可省略 4.用组织笔沿组织边缘画线（可与组织边缘留适当间隙），画完立即放入PBST溶液中浸泡3遍X3min（三个容器，每个容器3min，时间不限制）。 5. 3%H2O2滴加在切片上，室温静置15分钟(3%的H2O2用30%的 H2O2加双蒸水稀释10倍，现配现用。目的为阻断内源性过氧化物酶)； 6. PBST洗3次各3分钟(过三缸) 7. 滴加正常山羊血清封闭液,室温30分钟。用与一抗不同源的血清即可，本人用Western-blotting的含胎牛血清封闭液。 8. 甩去封闭液（注：不要冲洗），滴加一抗50ul（至少50ul否则易干片），4℃孵育过夜。4℃过夜后需在37℃复温45分钟（未验证：室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。）。 9. PBST洗3次各3分钟；
草酸实验室常用化学品MSDS
草酸的化学品安全技术说明书（MSDS） 第一部分：化学品名称回目录 化学品中文名称：乙二酸 化学品英文名称：ethanedioic acid 中文名称2：草酸 英文名称2：oxalic acid 技术说明书编码：1180 CAS No.：144-62-7 分子式：C2H2O4 分子量：90.04 第二部分：成分/组成信息回目录 有害物成分含量CAS No. 乙二酸144-62-7 第三部分：危险性概述回目录 危险性类别： 侵入途径： 健康危害：本品具有强烈刺激性和腐蚀性。其粉尘或浓溶液可导致皮肤、眼或粘膜的严重损害。口服腐蚀口腔和消化道，出现胃肠道反应、虚脱、抽搐、休克而引起死亡，肾脏发生明显损害，甚至发生尿毒症。可在体内与钙离子结合而发生低血钙。长期吸入蒸气引起神经衰弱综合征，头痛，呕吐，鼻粘膜溃疡，尿中出现蛋白，贫血等。 环境危害：对环境有危害，对水体和大气可造成污染。 燃爆危险：本品可燃，有毒，具强腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤。 第四部分：急救措施回目录 皮肤接触：立即脱去污染的衣着，用大量流动清水冲洗至少15分钟。就医。
眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗至少15分钟。就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。 食入：尽快用清水或清水加乳酸钙、葡萄糖酸钙或石灰水洗胃。再用葡萄糖40g 灌入胃内。第五部分：消防措施回目录 危险特性：遇明火、高热可燃。加热分解产生毒性气体。 有害燃烧产物：一氧化碳、二氧化碳。 灭火方法：消防人员须戴好防毒面具，在安全距离以外，在上风向灭火。灭火剂：雾状水、泡沫、干粉、二氧化碳、砂土。 第六部分：泄漏应急处理回目录 应急处理：隔离泄漏污染区，限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴防尘面具（全面罩），穿防毒服。避免扬尘，小心扫起，置于袋中转移至安全场所。也可以用大量水冲洗，洗水稀释后放入废水系统。若大量泄漏，用塑料布、帆布覆盖。收集回收或运至废物处理场所处置。 第七部分：操作处置与储存回目录 操作注意事项：密闭操作，局部排风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴防尘面具（全面罩），穿连衣式胶布防毒衣，戴橡胶手套。远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。使用防爆型的通风系统和设备。避免产生粉尘。避免与碱类、碱金属接触。搬运时要轻装轻卸，防止包装及容器损坏。配备相应品种和数量的消防器材及泄漏应急处理设备。倒空的容器可能残留有害物。 储存注意事项：储存于阴凉、干燥、通风良好的库房。远离火种、热源。保持容器密封。应与碱类、碱金属、食用化学品分开存放，切忌混储。配备相应品种和数量的消防器材。储区应备有合适的材料收容泄漏物。
细胞免疫组化常用试剂配制
免疫细胞化学常用试剂 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 试剂：多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂：A液：多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液：Na2HPO4·2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液：NaOH 3.86g 蒸馏水200m
配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH 或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin’s液及改良Bouin’s液 试剂：饱和苦味酸 40%甲醛250ml 冰醋酸50ml 配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良Bouin’s液即不加冰醋酸。 该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸（pH为3～3.5），对抗原有一定损害，且组织收缩较明显，故不适于组织标本的长期保存。此外，操作时，应避免吸入或与皮肤接触。 4．Zamb oni’s(Stefanini’s)液 试剂：多聚甲醛20g 饱和苦味酸 150ml Karasson-Schwlt’s PB至1000ml 配制方法：称取多聚甲醛20g，加入饱和苦味酸150ml，加热至60℃左右，持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后，加Karasson-Schwlt’s PB至1000ml充分混合（Karasson –Schwlt’s磷酸缓冲液的配制配制方法见后）。 该固定液适于电镜免疫细胞化学，对超微结构的保存较纯甲醛为优，也适于光镜免疫细胞化学研究，为实验室常用固定剂之一。我们在应用中，常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸，以增加其对组织的穿透力和固定效果，保存更多的组织抗原。固定时间为6～18h。 5．PLP液PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液 （Periodate-Lysine-paraform-alde－hyde fixative）
免疫组化入门实验操作
免疫组化入门实验操作 一、实验目的： 1.了解免疫组化基本原理。 2.了解免疫组化实验操作及注意事项。 3.免疫组化结果判定。 通过实验，让学生熟悉免疫组化操作流程及注意事项，对抗原抗体结合、抗原修复和酶催化底物显色进行研究。要求学生通过查阅文献，在归纳、对比、总结的基础上对免疫组化有进一步的了解。 二、实验原理： 三、实验材料： 一抗：CD5、CK8、Ki67 二抗：MaxVision3 其它：柠檬酸抗原修复液、过氧化物酶阻断剂、PBS缓冲液、DAB、孵育盒、染色架、苏木素、盖玻片、冲洗瓶、中性树胶，孵育盒。 四、实验步骤：
1.脱蜡水化 二甲苯5min，二甲苯5min，二甲苯5min，无水乙醇2min，无水乙醇2min，95%酒精2min，85%酒精2min，自来水冲洗。 2.抗原修复 高压锅中加入1200mL柠檬酸修复液，电磁炉煮沸后放入切片，扣紧锅盖，功率调至800W，至压力阀均匀喷气后计时 1.5min，移开高压锅室温冷却10min，自来水冷却。 3.过氧化物酶阻断 修复结束后，流水冲洗干净，除去自来水，在离组织3mm处用免疫组化油笔画圈或用纸巾擦干组织外残留的液体，滴加50 μL（一滴）过氧化物酶阻断剂，室温孵育10min，PBS冲洗3×3min。 4.一抗 甩去PBS，纸巾擦干组织3mm外的残留液体，每张切片加50 μL（一滴）相应一抗，室温下孵育60分钟，PBS冲洗3×3min。 5.二抗 甩去PBS，纸巾擦干组织3mm外的残留液体，每张切片加50 μL（一滴）MaxVisionTM试剂，室温下孵育30分钟，PBS冲洗3×3min。 6.DAB 甩去PBS液，纸巾擦干组织3mm外的残留液体，每张切片加50 μL（一滴）新鲜配制的DAB，显色5分钟，自来水冲洗。 7.苏木素复染 每张切片滴加50 μL（一滴）苏木素，20-30秒后自来水冲洗30s以上，或浸泡于PBS中30s以上再自来水冲洗。 8.封片 梯度酒精脱水干燥（85%酒精2min，95%酒精2min，无水乙醇2min，无水乙醇2min，二甲苯1min），或直接电吹风吹干，中性树胶封固。
免疫组化方法(冰冻切片)
免疫组化方法（冰冻切片） A. 所需溶液和试剂 1.二甲苯 2.无水乙醇（100% 和95%，变性无水乙醇，组织学级） 3.苏木精（可选） 4.固定剂：请参考产品说明书选取合适的固定剂。 a.10%中性福尔马林 b.丙酮 c.甲醇 d.3%甲醛溶液：配制时，将18.75 ml 16%甲醛溶液加入到81.25 ml 1X PBS中。 5.10X Tris缓冲盐水（10X TBS）：在800 ml蒸馏水中加入24.2 g 三羟甲基氨基甲烷（Trizma base ，C4H11NO3）和80 g 氯化钠（NaCl）。用浓盐酸将pH调节到7.6。 6.漂洗（缓冲）液：1 X Tris缓冲盐水（TBS）。100 ml 10 X TBS加900 ml水至1L。 7.甲醇/过氧化氢：配制时，将10 ml 30% H202加入到90 ml甲醇中。保存在-20°C。 8.封闭液：1X TBS / 0.3% Triton-X 100 / 5%正常山羊血清。 9.配制时，将500 μl山羊血清和30 μl Triton-X 100加入到9.5 ml 1X TBS中。 10.检测系统：根据厂家说明书使用。已有的检测系统*。 11.DAB试剂或合适的底物：按产品说明配制。 B. 切片 1.对于保存在-80°C的样品：切片前先从冰箱中取出放在-20°C平衡15分钟左右。这可以避免切 片时样品断裂。 2.将样品切成大约6-8 μm厚，铺在带正电性的玻片上。 3.固定前，可以把切片摊开放在实验台上风干几分钟。（这有助于切片贴紧玻片） C. 固定 注意：参考产品说明书（抗体）选择合适的固定剂 1.玻片上的切片风干后，选用如下合适的固定剂进行固定。 a.10%中性福尔马林：室温10分钟。立即进行染色操作。 b.冰丙酮：-20°C 10分钟。风干。立即进行染色操作。 c.甲醇：-20°C 10分钟。立即进行染色操作。 d.3%甲醛溶液：室温15分钟。立即进行染色操作。
免疫组化试剂
免疫组化 免疫组化是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。 免疫组化试剂盒： Vector Laboratories公司VECTASTAIN@ ABC免疫组化试剂盒： Vector公司于1977年率先开发出了生物素-亲和素系统，该产品系列是检测方法上的重要革命。其后，公司发展出ABC技术（Avidin : Biotinylated Enzyme Complex Technology，亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术），并建立了著名的VECTASTAIN?ABC系统，目前，该系统被视为最灵敏、最可靠与最有效的染色系统，并被广泛应用于免疫组织化学、免疫电镜、原位杂交与凝集素化学中。ABC技术利用生物素和卵白素具有极高亲和性的生物学特征，将卵白素和生物素化辣根酶按照一定的比例混合，形成ABC复合物。该法亦被称作三步法，第一步为biotin化二抗和一抗结合，第二步为avidin（亲和素，A液）和二抗上的biotin结合，第三步为HRP偶联的biotin（B液）和avidin结合，而HRP再催化底物显色完成染色。试剂盒组份： 2ml试剂A（Avidin DH溶液） 2ml试剂B（生物素化的酶） 1ml生物素化的二抗（1.5mg anti-IgG/0.5mg anti-IgM抗体/2.1mg通用抗体） 3ml阻断血清 其中standard试剂盒只含有试剂A和试剂B VECTASTAIN?ABC系列产品 VECTASTAIN?ABC-HRP Kits（辣根过氧化物酶）最通用的系统，使用范围广VECTASTAIN?ABC-AP Kits（碱性磷酸酶）灵敏度较高，染色密度较低，适于形态学染色非常重要的组织 VECTASTAIN?ABC-GO Kits（葡萄糖氧化酶）灵敏度较低，适用于组织内源性HRP或AP 含量比较高的组织，常与HRP或AP系统配合进行双染。 VECTASTAIN?ABC Kits（辣根过氧化物酶）灵敏度高，特别适用于神经组织
免疫组化实验步骤
免疫组化实验步骤 Revised final draft November 26, 2020
石蜡切片免疫组化实验步骤 石蜡切片步骤按照晓峰整理的步骤进行（From徐晓峰、朱老师的“石蜡切片”方案）： 1）材料的准备 在本实验室条件下推荐使用FAA（50%ethanol,5%aceticacid,3.7%甲醛）固定材料。 FAA固定液（100ml），室温保存： 无水乙醇50ml 冰醋酸5ml 37%甲醛10ml 水35ml 第一天：组织固定 用FAA固定，详见“石蜡切片”protocol。 第二天：脱水 以上所有步骤中每换好一步乙醇均置于4℃冰箱等待，并不时轻摇。 *组织可在70%ethanol4℃可存放几个月 第三天：进一步脱水和浸蜡 以下所有步骤在4℃进行并不时轻摇
以下所有步骤在室温进行并不时轻摇 准备工作：60℃预热plus蜡片（ParaplastPlus）石蜡可反复融凝而去气泡 第四天：浸蜡2 将材料置于42℃直至蜡块完全熔化。再加1/4体积的蜡块至完全熔化后移至60℃。几个小时后换上新鲜熔好的蜡液，过夜。 第五天：浸蜡3 换蜡两次（ParaplastPlus） 第六天：浸蜡4 换蜡两次（ParaplastPlus） 第七天：浸蜡5 换蜡两次（ParaplastPlus） 准备工作：60℃预热Regular蜡片（ParaplastRegular）
第八天：包埋（包埋块可长久保存） 第九天及之后： 开始切片，切片应包括自己的片子及正负对照等。事先打开烘片机至37度，在涂有多聚赖氨酸的玻片上加1~2ml的蒸馏水。切好的片子轻至于加水的玻片上。待所有片子准备完之后盖上盖子，烘片过夜。 用自来水及双蒸水清洗免疫组化专用塑料，放在烘箱烘干待用。 第二天：开始脱蜡（From徐晓峰、朱老师整理的“石蜡切片”protocol） （用新买来的免疫组化塑料小盒，每一步只需加入试剂220~250毫升） 抗原修复： 在切片还浸入酒精时，可以事先将煮锅清洗干净，用蒸馏水洗1~2遍，最后加入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH=6.0)，煮沸(保持在95度左右)，将过完PBS的片子让入煮沸的锅中，煮片10~15min。然后将电磁炉关闭，自然冷却锅中切片（千万不要把片子拿出来，放在缓冲液中一起自然冷却至室温！！！） 将片子浸入PBS（PH=7.4）5min。
免疫组化技术(原理、分类、步骤及主要试剂、设备准备)
免疫组化技术 原理 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。 众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。 分类（常用） 1、免疫荧光方法 最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。 2、免疫酶标方法 免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，目前在病理诊断中广为使用的当属PAP法（过氧化物酶-抗过氧化物酶）、ABC法（卵白素-生物素-过氧化物酶复合物）、SP 法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）、即用型二步法（聚合物链接）等。 3、免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。 4、免疫铁蛋白法 5、放射免疫自显影法 标本 1、组织标本：石蜡切片（病理切片和组织芯片）、冰冻切片 2、细胞标本：组织印片、细胞爬片、细胞涂片
《分子实验》06 免疫组化实验
免疫组化操作步骤 （一）、仪器设备 1. 18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉. 2. 水浴锅 （二）、试剂 1. PBS缓冲液（ph7.2―7.4）：NaC137mmol/L，KCl 2.7mmol/L ,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L. 2．0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）：柠檬酸三钠3g,柠檬酸0.4g。3．0.5mol/L EDTA缓冲液（ph8.0）：700ml水中溶解186.1g EDTA& 8226;2H2O,用 10mmol/L NaOH调至ph8.0,加水至1000ml. 4. 1mol/L的TBS缓冲液（ph8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至ph8.0, 加水1000ml。 5. 酶消化液：a. 0.1%胰蛋白酶：用0.1%CaCl 12(ph7.8)配制。b.0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。 6. 3%甲醇―H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制 7.风裱剂：a. 甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（ph9.0–9.5）等量混合b 油和TBS(PBS)配制 8．TBS/PBS PH9.0–9.5,适用于荧光纤维镜标本;ph7.0-7.4适合光学纤维标本 （三）、操作流程 1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。 a 组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟,更换二甲苯后在浸泡10分钟
b 无水乙醇中浸泡五分钟 c 95%乙醇中浸泡五分钟 d 75%乙醇中浸泡五分钟 2、抗原修复：用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片： A 抗原热修复 a 高压热修复在沸水中加入EDTA(ph8.0)或0.01m枸橼酸钠缓冲溶液（ph6.0）.盖上不锈钢锅盖，但不能锁定。将玻片置于金属染色加上，缓慢加压，是玻片在缓冲液中浸泡五分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后除去热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。此方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。 b 沸热修复电炉或水浴锅加热0.01枸橼酸钠缓冲液（ph6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10-15分钟。 c 微波炉加热在微波炉里加热0.01枸橼酸钠缓冲液（ph6.0）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5-10分钟，反复1-2次。适用的抗原Bcl-2. Bax. AR. PR. C-fos. x-jum. z-kit. c-myc. E-cadherin. ChromograninA. Cyclin. ER. Heatshock. Protein. HPV.Ki-67.MDMZ.P53.P34.P15.P-glycoprotein.PKC.PCNA.ras.Rb.等 B 酶消化方法常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热37℃，消化时间约为5-30分钟。适用于被固定遮蔽的抗原：包括Collagen.GFAP. Complement.Cytokeratin.C-erB-2.LCA.LN.等 3、免疫组化染色SP法 （1）脱蜡、水化 （2）PBS洗2-3次各5分钟 （3）3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上，室温静置10分钟
试验室化学药品试剂管理制度
. 实验室化学药品、试剂管理制度及规范 1 目的 1.1规范实验室化学药品、试剂的管理，确保化学药品、试剂正确安全使用，保证检测工作质量。 1.2所有被允许使用的化学药品（化验室的化学试剂、杀虫剂、车间使用的消毒剂、洗涤剂、润滑油、油漆等）应被有序地标记、存放、使用，避免污染食品、食品接触面和包装物料。 2 适用范围 适用于实验室化学药品、试剂的采购、贮存、标识、领取和使用的全过程。 3 职责及术语 负责实验室化学药品、试剂的控制和管理。 从与食品或食品接触面接触的可能性角度分类，把工厂可能使用的化学品分为A、B、C三类： A类化学品：指与原材料、食品或食品接触面发生接触的化学品。（如CIP使用 的酸、碱、清洗剂等）。 B类化学品：在线使用但不与食品及原材料、食品接触面接触（如车间所用的链条润滑油、墨水等）。 C类化学品：为实验室分析用的标准试剂或指示剂。 4 内容及要求 4.1化学药品、试剂的采购 4.1.1实验室依据本室检测任务或药品台账，制定各种化学药品、试剂的采购计划，写清品名、单位、数量、纯度、包装规格等。 4.1.2化学药品、试剂购进后，由相关使用人员负责验收，确认安全有效后，方可领回存放，并记录于台账。 4.2化学药品、试剂的贮存 4.2.1化学药品试剂贮存环境应通风、干燥，实验室用配备消防器材和灭火设备。 4.2.2化学药品、试剂种类繁多，需严格按其性质和贮存要求（参见中国药典2005版附录XV试药项下）分类陈列整齐，放置有序。一般遵循以下原则：①酸液、碱液分开存放；②固体、液体化学品分开存放；③有毒、有害化学品单独存放； ④不常用的化学药品、试剂单独存放。 4.2.3化学性质不同或灭火方法相抵触的化学试剂应分柜存放，化学危险品按其特性单独存放，并有明确规范的标识，较贵的特纯试剂等药品应与一般药. . 品分开，妥善存放。 4.2.4操作区内的橱柜中及操作台上存放化学试剂的数量不应超过三个月使用 的量。
免疫组化技术(原理、分类、步骤及主要试剂、设备准备)
免疫组化技术 免疫组化技术
业精于勤而荒于嬉 行成于思而毁于随
免疫组化技术
原理
抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色 来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。 众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取 出来，以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并 用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物，将抗原放大，由于抗 体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂 DAB 显示 为棕黄色颗粒） 。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产 物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨 基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
分类（常用）
1、免疫荧光方法
最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内 的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某 种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较 广。
2、免疫酶标方法
免疫酶标方法是继免疫荧光后， 60 年代发展起来的技术。 于 基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用， 然后加入酶的底物， 生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标 技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种 标记方法，目前在病理诊断中广为使用的当属 PAP 法（过氧化物酶-抗过氧化物酶） 、ABC 法（卵白素-生物素-过氧化物酶复合物） SP 、SP 、即用型二步法（聚合物链接）等。 法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶） 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）
3、免疫胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白 的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌 A 蛋白)等作为 探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免 疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银 加强的免疫金银法则更便于光镜观察。
4、免疫铁蛋白法 5、放射免疫自显影法
标本
1、组织标本：石蜡切片 石蜡切片（病理切片和组织芯片） 、冰冻切片 石蜡切片 2、细胞标本：组织印片、细胞爬片、细胞涂片
---------------------------------------------------------------------------------华中科技大学同济医学院
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免疫组化实验
免疫组化实验 实验原理：应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使酶标记的抗体与显色剂进行显色反应，生成有色的不溶性产物，来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量。 实验目的：通过染色结果强弱，对所研究蛋白在组织水平的表达进行判断比较。（干净的背景会使结果判断的更加准确）。 在实验室实验时遇到的难题：染色强度不够，背景较深，染色对比不够明显。 实验效果不好的可能原因：一抗效果不够好，脱蜡水化后有机溶剂冲洗的不够干净，抗原修复的程度不够，二抗效果不够好，DAB染色时间过久。 修改后的protocol： 1.烘片：IHC白片，60度或70度烘箱，烘片40min。 2.脱蜡：二甲苯分别浸泡两次，10min/次。（脱蜡时间可以适当延长，不需严格遵守10min 时间，脱蜡脱得越干净越好） 3.水化：依次放入100%酒精，95%酒精，80%酒精，各2min。 4.自来水冲洗：水化后在自来水流水下冲洗。（水流不能太急，务必将有机溶剂完全冲洗 干净，否则会影响后续实验效果） 5.抗原修复：将片子浸没在抗原修复液中，高压锅20min，高温修复。 **实验室中可用小电饭锅或者微波炉替代，若在微波炉中操作，要保证液体在咕噜噜冒泡煮沸状态下煮20min，不然可能抗原修复力度不够。 **关于抗原修复液的选择：选用酸性柠檬酸缓冲液或碱性EDTA，最好根据抗体购买时说明书上推荐使用的缓冲液。 6.冷却：浸泡在修复液中冷却，时间充裕可放在室温下慢慢冷却；也可直接在室温冷却 10min后，用自来水流水冲洗冷却，但不可直接在自来水下冲洗冷却。 7.封闭：3% H2O2中浸泡10min，去除内源性的过氧化氢酶。 8.冲洗：清水冲洗，PBST清洗两次，摇床上3min/次。（摇床可以清洗的更干净） 9.封闭：封闭液（3% FBS或3% BSA或10%山羊血清）室温下封闭1h。 10.冲洗：PBST清洗三次，摇床上3min/次。 11.抗体孵育：一抗，按照稀释比稀释，37度烘箱湿盒中孵育1h（最好不要超过1h，不 然背景会很强），PBST摇床清洗3次，3min/次。二抗，按照稀释比稀释，37度烘箱湿盒中孵育30min。PBST摇床清洗3次，3min/次。 （如果可以，买抗体稀释液，成分更稳定） 12.显色：1XDAB显色，仔细观察，棕色显现后立马用自来水终止反应。（若第一次显色强 度不够，可以再次显色） 13.苏木精复染：苏木精染色1min，自来水冲洗，显微镜下观察，若不够可重复苏木精染 色。（苏木精没染好可以将苏木精洗去，再染，清洗配方没记得，后续再补充） 14.脱水：依次放入80%酒精，95%酒精，100%酒精，各2min。 15.封片：60度烘箱中烘干片子，中性树脂封片，完全晾干后，显微镜下观察，拍照。 注意点： ?本实验室所用切片一般是石蜡切片。
实验室危险化学品安全使用管理规定
实验室危险化学品、易燃易爆物品安全使用管理规定 五华县潭江中学 为加强危险化学品的安全使用监督管理，根据中华人民共和国国务院《危险化学品安全管理条例》(国务院令第344号)，特制定本管理规定。 一、危险化学品的范围 本规定所指危险化学品，是指中华人民共和国国家标准GB-86《危险货物分类与品名编号》规定的分类标准中的爆炸品、压缩气体和液化气体、易燃液体、易燃固体、自燃物品和遇湿易燃物品、氧化剂和有机过氧化物、毒害品和腐蚀品等七大类及国家经贸委、公安部、国家工商行政管理局《关于加强易制毒化学品生产经营管理的通知》(国经贸产业[2000]1105号)中的两大类易制毒化学品。 二、危险化学品的管理 1.使用、储存危险化学品必须建立危险化学品安全管理制度。 2.使用危险化学品必须按国家相关要求到指定的管理机关备案。 3.危险化学品需经保管员检查登记后方可经指定路线（或消防专用电梯）进入实验室。 4.使用、储存危险化学品需按制定危险化学品安全使用操作规
程。 三、危险化学品的储存 1.储存危险化学品要落实保管责任制，责任到人。保管人员调动应做好交接工作，并及时备案。 2.危险化学品应按规定分类、分项存放，相互之间保持安全距离； 3.危险化学品的存储量不得超过一个季度的用量或一个实验周期所需用量； 4.遇火、遇潮容易燃烧、爆炸或产生有毒气体的危险化学品，不得在露天、潮湿或低洼容易积水的地点存放； 5.受阳光照射易燃烧、易爆炸或产生有毒气体的危险化学品和桶装、罐装等易燃液体、气体应当在阴凉通风地点存放； 6.化学性质防护和灭火方法相互抵触的危险化学品，不得在同一储存室存放。 四、化学废弃物的处理 化学固体、液体废物处理前，必须按国家规范要求进行预处理和使用符合国家要求的包装、容器等存储，随时分级、分类收集，并在外包装醒目位置标明化学废弃物的内容、已经处理的工艺等，并应由专人负责妥善保管，在实验室定点存放，不得随意排放、丢弃、掩埋
免疫组化染色机种类介绍
自动化免疫组化染色机种类介绍 免疫组化的传统技术正在受到新的快速高敏的新技术的挑战，一方面是新试剂的推出，如SP、EPOS、Envision和CSA，另一方面是自动免疫组化染色机的问世。免疫组化技术正进入一个新的发展阶段。从先进国家免疫组化规范化或标准化的进程来看，自动免疫组化染色机的应用几乎贯穿始终，早在20世纪末已得到极大的普及，然而国内的自动免疫组化染色机应用则在近几年才得以发展。浙江省肿瘤医院作为省内较早应用的少数单位之一，在自动化免疫组化染色的使用和质量控制方面获得些许经验，在此做简单的介绍交流。 自动化免疫组化染色技术是由电脑控制整个染色程序的免疫组化染色机，具有自动加抗体、自动冲洗、显色、复染及预处理等功能，有全自动和半自动、封闭型和半开放型之分。根据不同仪器大小，每次染色20～240张切片不等，整个染色程序约需60～90min左右，它不仅可以应用于免疫组化染色，某些仪器还可应用于组织化学染色、特殊染色及原位分子杂交染色。目前较为理想的仪器为Roche公司、Lecia公司及Thermo公司的产品等。下面对不同机型的自动免疫组化染色机的特点分述如下。 Thermo公司的LabVision Autostainer 该机型属开放式半自动系统类型，用户可任意编辑所需试剂及模板，内建试剂兼容性检测。切片特殊染色模板可任意调整试剂量、孵育时间。体系开放保证可适就性强，即可同时运行不同检测试剂盒和不同的染色程序及不同厂商生的的一抗。使用单一探头，探头材料为特氟伦包被不锈钢，检测探头交叉污染残留物 <10-6 ，且分样精度>99%(总体积)。联合使用配套的抗原修复仪，可实现脱蜡与抗原修复一步完成。DAKO公司的 Autostainer系LabVision Autostainer贴牌产品，配合使用DAKO的Flex检测系统可获得极为敏感的免疫组化结果。早期的Biogenex i6000TM全自动染色仪亦属该类型产品，不同的是其加样头采用标准的Tip头加样，完全避免交叉污染的风险。 Lecia公司的Bond-Max