waters超高效液相色谱

waters超高效液相色谱
waters超高效液相色谱

超高效液相色谱(UPLC?)简介

UPLC原理基础

随着科学技术的进步,液相色谱用户对液相色谱技术的

要求也不断提高,他们需要“更快地得到更好的结果”。因

此超高效液相色谱(UltraPerformance LC?)概念的提出也

就十分自然;简单的说:UPLC是用HPLC的极限作为自己的起

点,把分离科学推向一个新领域。

沃特世公司引入UPLC的概念是由研究著名的van

Deemter 方程式及其曲线开始。

由van Deemter曲线可以得到以下几点启示:

首先,颗粒度越小柱效越高;其次,不同的颗粒度有各自

最佳柱效的流速;最后,更小的颗粒度使最高柱效点向更高

流速(线速度)方向移动,而且有更宽的线速度范围。所以

降低颗粒度不但能提高柱效,同时还能提高分析速度。

使用更高的流速会受到色谱柱填料耐压及仪器耐压的

限制。反之;如果不用到最佳流速,小颗粒度填料的高柱效

就无法体现。

此外;更高的柱效需要更小的系统体积(死体积)、更快的检测速度等一系列条件的支持,否则小颗粒度填料的高柱效同样无法充分体现。

因此;要真正创建一个全新的分离科学领域- UPLC,必须解决以下几个问题:

1. 大幅度提高色谱柱的性能:第一要解决小颗粒填料的耐压问题,第二要解决小颗粒填

料的装填问题,包括颗粒度的分布以及色谱柱的结构。

2. 高压溶剂输送单元(超过15,000psi)

3. 完善的系统整体性设计,降低整个系统的体积,特别是死体积,并解决超高压下的耐

压及渗漏问题。

4. 快速自动进样器,降低进样的交叉污染

5. 高速检测器;优化流动池以解决高速检测及扩散问题

6. 系统控制及数据管理,解决高速数据的采集、仪器的控制问题

新型的色谱填料及装填技术

UPLC分离只有在新型的、耐压而且颗粒度分布范围很窄的1.7μm颗粒填料合成出来之后才有可能实现。

色谱柱技术应该涵盖几个方面的内容:首先是填料的合成,以得到高质量的填料颗粒,包括:耐高压、耐酸碱等等。其次是颗粒的筛选,选出颗粒度分布尽可能窄的填料。最后是装填技术,以保证既能堵住颗粒不使其外流,又不至于引起反压的大幅升高。

沃特世公司的ACQUITY UPLC?BEH色谱柱使用了更严格的筛分技术,使1.7μm填料的分布很窄,并且使用了全新筛板(专利申请中)及其它色谱柱硬件(柱管及其连接件),在超过20,000psi的压力下装填。沃特世公司为此安装了一条新的色谱柱装填生产线及新的测试设备。因此;ACQUITY UPLC色谱柱的性能及质量比目前的HPLC柱有了质的飞跃。

基于1.7 μm小颗粒技术的UPLC,与人们熟知的HPLC技术具有相同的分离原理。不同的是:UPLC不仅比传统HPLC具有更高的分离能力,而且结束了人们多年来不得不在速度和分离度之间忍痛割舍的历史。使用UPLC可以在很宽的线速度、流速和高反压下进行高效的分离工作,并获得优异的结果。(见下图)

供的信息达到了一个新的水平。而且又极大地缩短了开发方法所需的时间。

UPLC:HPLC的未来

UPLC可以更快的速度和更高的质量完成以往HPLC的工作,沃特世将致力于丰富已有的

UPLC产品,现已推出了六种新的色谱柱,包括:BEH C18、C8、苯基和ShieldRP18、 HILIC 及

HSS T3。同时还有适应UPLC使用的蒸发光散射检测器(ELSD),进一步扩展了UPLC的应用领

域。

我们确信:UPLC将对全球的实验室产生持久而深刻的影响。

UPLC是HPLC的未来。

waters超高效液相色谱

超高效液相色谱(UPLC?)简介 UPLC原理基础 随着科学技术的进步,液相色谱用户对液相色谱技术的 要求也不断提高,他们需要“更快地得到更好的结果”。因 此超高效液相色谱(UltraPerformance LC?)概念的提出也 就十分自然;简单的说:UPLC是用HPLC的极限作为自己的起 点,把分离科学推向一个新领域。 沃特世公司引入UPLC的概念是由研究著名的van Deemter 方程式及其曲线开始。 由van Deemter曲线可以得到以下几点启示: 首先,颗粒度越小柱效越高;其次,不同的颗粒度有各自 最佳柱效的流速;最后,更小的颗粒度使最高柱效点向更高 流速(线速度)方向移动,而且有更宽的线速度范围。所以 降低颗粒度不但能提高柱效,同时还能提高分析速度。 使用更高的流速会受到色谱柱填料耐压及仪器耐压的 限制。反之;如果不用到最佳流速,小颗粒度填料的高柱效 就无法体现。 此外;更高的柱效需要更小的系统体积(死体积)、更快的检测速度等一系列条件的支持,否则小颗粒度填料的高柱效同样无法充分体现。 因此;要真正创建一个全新的分离科学领域- UPLC,必须解决以下几个问题: 1. 大幅度提高色谱柱的性能:第一要解决小颗粒填料的耐压问题,第二要解决小颗粒填 料的装填问题,包括颗粒度的分布以及色谱柱的结构。 2. 高压溶剂输送单元(超过15,000psi) 3. 完善的系统整体性设计,降低整个系统的体积,特别是死体积,并解决超高压下的耐 压及渗漏问题。 4. 快速自动进样器,降低进样的交叉污染 5. 高速检测器;优化流动池以解决高速检测及扩散问题 6. 系统控制及数据管理,解决高速数据的采集、仪器的控制问题 新型的色谱填料及装填技术 UPLC分离只有在新型的、耐压而且颗粒度分布范围很窄的1.7μm颗粒填料合成出来之后才有可能实现。 色谱柱技术应该涵盖几个方面的内容:首先是填料的合成,以得到高质量的填料颗粒,包括:耐高压、耐酸碱等等。其次是颗粒的筛选,选出颗粒度分布尽可能窄的填料。最后是装填技术,以保证既能堵住颗粒不使其外流,又不至于引起反压的大幅升高。 沃特世公司的ACQUITY UPLC?BEH色谱柱使用了更严格的筛分技术,使1.7μm填料的分布很窄,并且使用了全新筛板(专利申请中)及其它色谱柱硬件(柱管及其连接件),在超过20,000psi的压力下装填。沃特世公司为此安装了一条新的色谱柱装填生产线及新的测试设备。因此;ACQUITY UPLC色谱柱的性能及质量比目前的HPLC柱有了质的飞跃。 基于1.7 μm小颗粒技术的UPLC,与人们熟知的HPLC技术具有相同的分离原理。不同的是:UPLC不仅比传统HPLC具有更高的分离能力,而且结束了人们多年来不得不在速度和分离度之间忍痛割舍的历史。使用UPLC可以在很宽的线速度、流速和高反压下进行高效的分离工作,并获得优异的结果。(见下图)

高效液相色谱仪使用注意事项[1]全解

岛津液相色谱仪使用注意事项 1.流动相必须用HPLC级的试剂,使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。 2.流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。 3.不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 4.使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,以充分洗去离子。对于柱塞杆外部,做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。 5.长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子,而应该用有机相(如甲醇等),因为纯水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7.C18柱绝对不能进蛋白样品,血样、生物样品。 8.堵塞导致压力太大,按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法;①以异丙醇作溶剂冲洗:②放在异丙醇中间用超声波清洗;⑧用10%稀硝酸清洗。 9.气泡会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 10.如果进液管内不进液体时,要使用注射器吸液:通常在输液前要进行流动相的清洗。 11.要注意柱子的pH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。 12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗,然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。 液相色谱柱使用经验谈 色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。 1、样品的前处理: a、最好使用流动相溶解样品。 b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。 流动相的配制 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点: a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。 b、流动相具有一定惰性,与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。

高效液相色谱仪Waters 工作站 Empower2_现场培训教材

Empower 2 软件现场培训教材 (第三版) 沃特世科技(上海)有限公司 沈晓峰 2008年11月

目录 EMPOWER软件概述1 一.登录1二.P RO 界面主要组件的介绍3三.新建项目6 EMPOWER软件数据采集与处理11 一.概述11(一)方法组11(二)数据采集与处理的流程12二.数据的采集14(一)平衡系统样14(二)单个运行样品19(三)样品组运行样品20三.数据的处理24(一)利用处理方法向导建立处理方法24(二)修改样品信息30(三)定量计算34四.数据报告的打印39 系统管理43 一.系统配置43(一)查看色谱系统43(二)色谱系统管理43二.数据管理48(一)项目的备份48(二)项目的还原51 附录3D数据的处理55 (一)建立处理方法55(二)修改样品信息62(三)定量计算67

Empower软件概述一.登录 1.双击电脑桌面上的Empower图标

选择用户类型(提示:Empower 2 可以为一个用户分配多种身份,如果为您在建立用户的时候为该用户分配了多个身份,在每次登录的时候可以选择进行本次任务所使用的用户类型。系统默认的用户System只有一个“管理员”的身份。),首次登录时请选择您所在的时区(中国的时区为“PRC”),并选择所需的登录界面,然后单击确定。 关于不同的用户界面,请参阅下面的说明: l QuickStart 为单一窗口界面,它将用户需要使用的所有功能置于同一个单一界面中,以简洁明确的方式提供了进行色谱分析需要的所有功能。用户甚至可以用QuickStart 界面进行包括PDA和质谱数据提取在内的分析方法开发工作,还能灵活地定制报告和管理数据。 l Pro 界面是进行系统管理的完美界面,可以控制所有软件功能。 l Open Access 界面适合没有任何色谱经验的初学者使用,使用者只需要选择方法、样品数,然后点击鼠标运行即可。 l Web 界面可以使远程用户或移动用户通过互联网或企业内部网方便地访问色谱系统中的信息。 本教程使用Pro 界面,请选择登录”Pro 界面”完成随后的操作。

(沃特世)UPLC超高效液相色谱介绍

UPLC超高效液相色谱(沃特世) 主要特点 超高速度 1.小颗粒填料色谱柱能超乎寻常地提高分析速度而不降低分离度 2.显著增加样品的通量,提高工作效率,降低分析成本 3.节省以往一向耗时的方法开发与认证的时间 超高灵敏度 1.小颗粒技术和整体化的仪器设计,UPLC?能在改善分离度的同时提高灵敏度 2.更高的柱效和更窄的色谱峰,意味着更高的色谱峰高和更高的灵敏度 3.在得到超高分离度和超高速度的同时能够得到超高灵敏度 超高分离度 1.利用高效创新小颗粒填料(1.7μL),获得超强分离能力 2.超低扩散体积,充分发挥小颗粒填料分离能力 3.超高分离度,适合复杂混合物的分离分析 超级创新 为满足色谱实验室对历史追踪不断增长的需求,每根ACQUITY UPLC?色谱柱出售时均带一个永久性的eCord,它能记录进样次数,最高的反压和柱温,其中还含有由沃特世公司提供的该色谱柱的分析测试合格证书。色谱柱安装后,智能化的芯片会自动地把关键参数采集进入色谱柱的历史文档,并记录色谱柱整个寿命周期的历史。该记录不能被删除。 技术参数 最大操作压力:15000psi(1mL/min) 溶剂输送精度:0.075%RSD或0.02minSD 流速范围:0.010-2.000mL/min,增量0.001mL/min 梯度曲线:11种。包括线性、凹线、凸线和两种步进梯度变化 有效系统体积:<140μL,与系统反压无关。带标准混合器 溶剂选择:最多四种。可在A1与A2和B1和B2之间选择 交叉污染:0.005%或2nL 进样范围:0.5-50μL 进样精度:<0.3%RSD 进样线性:>0.999 样品室温度控制:4 - 40℃ 色谱柱历史追踪:使用eCord技术 检测器配置:紫外可见检测器、光电二极管矩阵检测器、蒸发光散射检测器以及所有质谱检测器 超高速度,超高灵敏度,超高分离度,超级创新 为满足色谱实验室对历史追踪不断增长的需求,每根ACQUITY UPLC?色谱柱出售时均带一个永久性的eCord,它能记录进样次数,最高的反压和柱温,其中还含有由Waters公司提供的该色谱柱的分析测试合格证书。色谱柱安装后,智能化的芯片会自动地把关键参数采集进入色谱柱的历史文档,并记录色谱柱整个寿命周期的历史。该记录不能被删除。

Waters_2695_型高效液相色谱仪操作方法

Waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法 1 仪器组成及开机 1.1 仪器组成本仪器由Waters 2695 分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机组成。 2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统,四通道在线真空脱气机(或氦气脱气机),可容纳120 个样品瓶的自动进样系统,柱温箱,内置的柱塞杆密封垫清洗系统,溶剂瓶托盘,液晶显示器,键盘用户界面及软盘驱动器。 1.2 开机依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通2695 分离单元后,约20s 仪器开始自检,约1min 后,显示主屏幕,此时继续各部件的初始化,待主屏幕上方标题区出现“Idle ”时,仪器进入待命状态。 2 溶剂管理系统的准备 2.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂,按【Menu/Status 】,进入“Status (1 )”屏幕,光标选“Degasser ”,按【Enter 】,显示选项屏幕,光标下移选“Continuous ”,按【Enter 】。 2.2 启动溶剂管理系统 2.2.1 干启动,当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时,在“Status (1 )”屏幕下,按【Direct Function 】,光标选“Dry Prime ”,按【Enter 】,显示“Dry Prime ”屏幕,按欲启动的溶剂管路的屏幕键,如【OpenA 】,光标选“Duration ”,按数字键输入5min ,按【Continue 】,待限定时间结束后,重复操作,使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。 2.2.2 湿启动在“Status (1 )”屏幕下,光标选“Compomtion ”中欲使用的流动相,输入10 0%,按【Direct Function 】,光标选“Wet Prime ”,按【Enter 】,显示“Wet Prime ”屏幕,输入7.5Ml/min 和6min ,按【OK 】,待限定时间结束后,对每种流动相重复操作。 2.2.3 平衡真空脱气机在“Status (1 )”屏幕下,光标选“Composition ”,输入流动相的组成,按【Enter 】再用光标选“Degasser ”中的“Normal ”,按【Enter 】,按【Direct Function 】,光标选“Wet Prime ”,输入0.000mL/min 和10min. ,按【OK 】。待限定时间结束后,按【Abort Prime 】。 3 样品管理系统的准备 3.1 冲洗自动进样器在“Status (1 )”屏幕下,光标选“Composition ”,输入流动相的组成。按【Direct Function 】,光标选“PurgeInjector ”,按【Enter 】,显示“Purge Injector ”屏幕,输入“Sample Loop Volumes 6.0 ”,光标下移“Compression Check ”,按任意数字键,按【OK 】。 3.2 冲洗进样针在主屏幕下,按【Diag 】,显示“Diagnositcs ”屏幕,按【Prime Ndl Wash 】,显示“Prime Needle Wash ”屏幕,按【Start 】,30s 内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit 】。 3.3 冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下,按【Diag 】,显示“Diagnosities ”屏幕,按Prime Seal Wash ,显示“Prime Seal Wash ”屏幕,按【Start 】,待排放口有水流出,按【Halt 】、【Close】、【Exit 】。 3.4 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置,打开样品仓门,显示“Door is Open ”屏幕,装入样品盘,按【Next 】,直至所有样品盘装毕,关仓门。 4 编辑分析方法及执行样品分析表 在主屏幕下,按【Develop Methods 】,显示“Methods ”屏幕。 4.1 编辑分析方法 4.1.1 建立新的分离方法在“Method ”屏幕下,按【New 】、【Separation Methods 】,输入方法名,按【Enter 】,显示分离方法屏幕,该屏幕共有6 页,通过按【Next 】或【Prev 】切换。如需设定梯度,在第( 1 )页按【Gradient 】,输入后按【Exit 】;如需设定色谱柱的温度,在第( 4 )页输入后按【Exit 】;在第(6 )页设定检测器的种类,光标选“Absorbance Detector ”,按【Enter 】,光标选“48 6﹨2487 ”,按Abs (1 )图标,设定检测波长,按【OK 】、【Exit 】、【Save 】。 4.1.2 编辑已建立的分离方法在“Methods ”屏幕下,光标选欲编辑﹨修改的分离方法的图标,按【Edit 】,编辑\ 改各种分析参数,按【Exit 】、【Save 】。 4.2 编辑执行样品分析表 4.2.1 建立新的样品组在“Methods ”屏幕下,按【New 】、【Sample Set 】,输入样品组名,按【Enter 】,显示方法组屏幕,在样品组表中输入待分析样品的信息。在“Vial ”中输入样品放置的位

(完整)Waters高效液相色谱仪标准操作规程

1.目的 描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。 2.适用范围 化验室 3.责任者 化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。 4.定义 HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。 5.安全注意事项 5.1有机溶媒有害健康,各溶剂瓶口应封严。 5.2注意检查废液桶中废液应避光,防止废液桶满外溢。 6.规程 6.1.Waters HPLC的组成:贮液器输液泵自动进样器分离柱 (柱温箱 ) 紫外检测器控制及数据处理系统 (Millennium 32化学工作站 )。 6.2. HPLC系统的打开及关闭顺序 6.2.1打开顺序 ?对于分体式:请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关,待各部分分别显示初始化完毕后,最后 打开M i l l e nn i um32化学工作站。 泵与色谱工作站的连接:对于 510 泵,因为此泵与色谱工作站是 单向联系,如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制,首先要在泵 的键盘上按 Menu 键,待显示屏切换至 Mode 状态下,其状态是 Loca ,按 Edit/Enter 键,在 Local 的L 前有闪动的光标显示,按键, Local 转换成Rem,再按Edit/Enter 键,此命令已输入进去, 最后按 Stop/Run 键,使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。泵 的任何动作都可由工作站来控制。还应注意这一步工作在每次开机 时都要进行。

对于 Alliance 2690 系统:先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关, 待初始化完毕后,再进入 Millennium 32化学工作站。 对于流动相的要求:对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂;对于所 用到的固体试剂应采用分析纯试剂;对于水,应采用经纯水机处 理过的超纯水;流动相在使用前一定要经 0.45m 的滤膜(滤膜分 为水相膜与有机相膜,确保使用正确的滤膜,参见附表 ) 过滤、超声 真空脱气方可使用,严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。 应养成良好操作习惯: 规范操作,树立保护 HPLC 整套系统的概念,尤其对于输液泵、色 谱柱、检测器,在使用后应及时冲洗,以免污染而使其寿命缩短或 损坏,尤其如操作者使用了含盐的流动相,更应注意清洗的步骤: 首先用脱过气的纯水在流速为1ml/min 左右冲洗 30~60 分钟,再用 含 50%以上甲醇或乙腈的水溶液以相同的流速冲洗 20~30 分钟左 右。 如要卸下柱子,在经过上述冲洗过程之后,再经纯甲醇或乙腈以 1ml/min 的流速冲洗 20~ 30 分钟,柱子卸下后应马上拧紧柱堵。 流速的变化应采用阶梯式递增或递减的方式,启动泵时,应在 2 分 钟之内由小流速慢慢增大到所需的流速,泵关闭时亦然( 流速递 减)。切忌流速的骤变。 6.2.2关闭顺序 首先退出 Millennium 32化学工作站,再关闭系统的其他部分。 https://www.360docs.net/doc/0d9804499.html,lennium 32化学工作站 Millennium 32色谱管理系统是集数据采集、处理、 HPLC系统的控制、结果的管理、报告的打印为一体的综合系统。下面就着重介绍该系统的基本操作知识。 6.3.1Millennium 32化学工作站的进入 打开化学工作站,系统自动进入Program Manager界面,双击 Millennium 肖像,这时进入Millennium界面,双击 Session Manager 图 标,系统将自动初始化,以使工作站和 HPLC整套系统进行联 接。初始化后,按系统要求键入你的 User Name和 Password,这时 你已进入该系统。 6.3.2Project的进入和建立

高效液相色谱仪操作步骤

高效液相色谱仪操作步骤: 1).过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。 2).对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3).打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。 4).进入HPLC控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。 5).有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6).调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。 7).设计走样方法。点击file,选取select users and methods,可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击new method。选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。选完后,点击protocol。一个完整的走样方法需要包括:a.进样前的稳流,一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间,随不同的样品而不同。 8).进样和进样后操作。选定走样方法,点击start。进样,所有的样品均需过滤。方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。 9).关机时,先关计算机,再关液相色谱。 10).填写登记本,由负责人签字。 注意事项: 1).流动相均需色谱纯度,水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 2).柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要让液体过柱子。 3).所有过柱子的液体均需严格的过滤。

Waters高效液相色谱仪仪器校验报告

* Waters自动进样系列高效液相色谱仪 仪器校验报告 型号: 编号: 校验报告编号: 目录 1校验报告的起草说明.................................... ?............... (2) 1.1起草说明及目的................................. ?.......... ? .. (2) 1.2认可范围 (2) 1.3运行项目及认可标准 (2)

2校验报告的起草与批准 (3) 2.1校验报告的归属.................................................... . 3 2.2江苏恒瑞医药股份有限公司研究所分析高效液相色谱仪信息一览表 (3) 2.3待校验色谱仪各部件序列号......................................... .. (4) 3 .运行确认-------------------------------------------------------------------------------- 4 3.1目的--------------------------------------------------------------------------------- 4 3.2认可范围----------------------------------------------------------------------------- 4 3.3运行前准备--------------------------------------------------------------------------- 4 3.3.1 环境条件----------------------------------------------------------- ------ 4 3.3.2标准样准备--------------------------------------------------------- ------ 4 3.4运行测试项目及认可质量标准---------------------------------------------------------- 4 3.5试验方法及结果:--------------------------------------------------------------------- 5 3.5.1泵流量设定值误差及流量稳定性检查 -------------------- ------------------------ 5 3.5.2柱温箱的检定------------------------------------------------------- ——6 3.5.3进样精密度检测--------------------------------------------------------------------- 7 3.5.4最小检测浓度----------------------------------------------------------------------- 8 3.5.5检测器噪声稳定性检查 -------------------------------------------------------------- 8 3.5.6检测器样品浓度响应线性检测 ------------------- --------------------- ------- 9 3.5.7进样体积线性检测 ------------------------------------------------------------------- 10 3.5.8检测器波长准确度 ------------------------------------------------------ 10 3.5.8.1重铬酸钾溶液检定----------------------------------------------------------------- 10 3.5.8.2咖啡因测试 ---------------------------------------------------------------------- 10 3.5.9 A/B通道梯度测试------------------------------------------------------------------- 11 3.5.10C/D通道梯度测试 ------------------------------------------------------------------ 12 3.6运行确认结论-------------------------------------------------------------------------- 14 Waters高效液相色谱仪仪器校验报告 1校验报告的起草说明 1.1起草说明及目的 根据国家《高效液相色谱仪检定规程》、根据仪器的不同配置要求,为了确保仪器使用正常,确保产品检测的准确性,对仪器的不同配置进行相应部件的确认

Agilent-1290-超高效液相色谱仪标准操作规程

Agilent 1290 超高效液相色谱仪标准操作规程 一、目的 制定Agilent 1290超高效液相色谱仪使用操作规程,确保操作人员能正确规范地操作液相色谱仪。 二、范围 适用于Agilent1290超高效液相色谱仪的使用。 三、操作规程 1 开机 1.1 打开计算机,进入 Windows画面。 1.2 打开 1290INFINITY HPLC 各模块电源。 1.3 待各模块自检完成后,双击“Instrument 1 Online”图标,化学工作站自动与 12001290INFINITY HPLC 通讯。 1.4 从“View”菜单中选择“方法和运行控制”画面,点击”视图”菜单中的“样品视图 “系统视图”,使其命令前有“√”标志,来调用所需的界面。 1.5 点击泵下面的瓶图标,选择‘瓶填充‘如下图所示,输入溶剂的实际体积和瓶体积。也 可输入停泵的体积。点击“Ok”。 1.6 从菜单“视图”中,选中“在线信号”,选中“信号窗口 1”,然后点击“改变…”钮, 将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“确定”。(如同时检测二个信号,则重复选中“信号窗口 2”) 2 排气 2.1 首先在方法编辑中,泵的参数设置部分,选好需要排空的通道(保证是开的) 2.2 点击仪器状态视图中泵的图标,选择控制,出现如下图 2.3 勾上吹扫,并且输入流速,时间,比例就可以 purge 泵头。排空的时候阀会自动切换, 无需人为介入。 2.4 当我们发现泵头里面有气泡出不来的时候,选择预备---开。然后点击确定。此时泵会 用很强烈的方式朝外泵液体,并持续 20 次自动停止。 3 编辑数据采集方法 3.1 开始编辑完整方法: 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法…”项,如下图所示选中除“数据分析”外

高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项

高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项 一、操作步骤: 1.开机前先将流动相过滤和超声:水流动相用混合滤膜(0.2μm)过滤,有机流动相用有机滤膜过滤,之后超声脱气15-20分钟。(过滤的目的是除去流动相里的杂质,以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱;超声的目的是排除流动相里面的气体,以防气体进入色谱柱损害色谱柱,影响柱效能) 注:试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜,第一次使用时感觉效果不好,于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。 2.超声结束后,将流动相放置到规定位置(1号泵接水流动相,2号泵接有机流动相),开机逐个排气(先启动泵,排气结束后再打开检测器)。 3.排气结束后,关闭所有排气阀。先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟,基线走稳之后,再打开水流动相(注意:水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min),继续走基线,直到基线平稳。 注意:实验结束后,再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟,冲出色谱柱内残留的样品物质,预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内,导致下次使用难以冲出,色谱柱柱压偏高,基线不稳,出现大量鬼峰。(不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同) 4.走基线时,应将进样阀处于Load状态,用注射器进样时应快速进样,进样后将进样阀立即扳回到Inject状态,此时液相系统开始进入采样状态。采样结束后,可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑,也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。 二、使用中常见的问题及注意事项 1.过滤时有时会出现流动相漏液。可能的原因是滤膜放置不正确(有点偏)和接头有点错位,导致流动相从缝隙中漏出。 注意:操作时,应先向滤瓶内倒入少量流动相,观察是否漏液并开始过滤,若未漏液,再向滤瓶中添加流动相。 2.超声时,瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面,否则流动相内的气体可能无法排出液体,气体仍然残留在流动相内,以致开机排气时无气泡排出。

Waters 515高效液相色谱仪使用方法

Waters 515高效液相色谱仪使用方法 一、打开仪器与工作站: 1.按要求配制流动相,经过滤、超声波脱气后装入贮液瓶中,然后将恒流泵上末端带有过滤器的输 液管分别插入对应贮液瓶中。 2.打开电脑及色谱输液泵、二极管阵列检测器电源开关,在输液泵控制面板中,按向上或向下箭头, 找到“Local”,按“Edit”进入可编辑状态,再按向上或向下箭头,调至“Rem.”状态,按“Edit/Enter” 确认,按下面板左面的“Run/Stop”,此时屏幕右上角“Local”与“Run”相继闪动。(接通电源前,应先用专用注射器从排液阀抽去泵前管路中可能存在的气泡)。 3.双击电脑桌面上“Empower”图标,输入用户名“system”与密码“manager”,确定,进入工作站主窗 口。 二、运行样品: 1.在主窗口中点击运行样品,选择采集数据的项目与色谱系统后,点击“确定”打开运行样品窗口。 2.运行样品窗口中,在左面写入样品名称与合适的运行时间,左下部分上下两个按钮分别为“改变流 速”与“停止流液”,右下部分的“仪器方法”的下拉框中可以选定仪器方法,“编辑”可以对选定仪器参数进行编辑,“设置”用于将编辑好的仪器参数下载到色谱主机,“监视器”用于察看色谱基线情况,色谱图在窗口右侧显示。 3.分析样品之前应设定压力上限,以保护色谱柱。 4.设置各参数后,待基线平直才可进样。 5.将进样阀手柄置于“Load”(右上)位置,用微量注射器吸取一定量的试样溶液,插入进样口(插到底) 并将试样溶液缓慢推入。 6.点击运行窗口左半部分中右侧的按钮“进样”,待窗口下面的状态栏中出现“等待进样”时,扳下进 样阀手柄,进样运行即开始。 7.运行时间结束后自动停止运行,或可以单击上面的红色快捷按钮“停止运行”用以手动停止。 三、测定数据的察看 1.在工作站主窗口中点击浏览项目,在右侧窗口选定相应方法组后确定,打开数据列表,在表中第 一行选定“进样”,在表中找到相应数据,双击打开。 2.在数据显示窗口中,中间上半部分为等高图区,中间下半部分为色谱图区,右上部分为光谱图区; 点菜单“处理”-“提取色谱”后,等色谱图区中出现一白色数据框,上下拖动或双击-输入相应波长值-回车后,在色谱图区出现相应色谱图;点菜单“处理”-“提取光谱”,可以在窗口色谱图区中出现一白色数据框,左右拖动或双击-输入相应波长值→回车后,光谱图区出现相应光谱图; 中间最下面的部分是峰表,表中有峰号、保留时间、峰面积、峰高等项目。 四、关机: 1.在运行样品窗口中,点击左下方两个按钮中的“停止流液”钮,退出工作站。 2.依次关闭检测器与输液泵电源,关闭电脑及其它相关电源。 3.冷却10min后,盖上仪器罩。

超高效液相色谱仪技术参数

超高效液相色谱仪技术参数 原装进口 1. 工作条件 1.1 电源:220V,50Hz 1.2 操作环境 15?C-28?C 1.3 湿度:20-80% 2.技术参数 *2.1 二元高压泵结构:四压力传感器,数控直线驱动色谱双泵。四个压力传感器能够准确的监控泵系统的压力,并对泵做出相应调整,保证流量精度的重复性和稳定性。(需在投标文件中提供泵结构示意图予以证明并加盖仪器制造商公章,并标明四压力传感器示意图位置和真实位置)。 2.1.1 泵类型:数控直线驱动色谱双泵 2.1.2 泵输出压力:≥20000 psi *2.1.3 泵驱动马达:≥4 2.1.4 柱塞杆与马达联接方式:刚性直连 *2.1.5 泵压力传感器数量:≥4 2.1.6 1-4路溶剂任意混合 2.1.7可配内置溶剂选择阀,扩展到9路溶剂 #2.1.8 真空脱气:六通道在线真空脱气机 #2.1.9 流量:最小流量范围≥0.0100,最大流量范围≤2.000mL/min,以0.001mL/min 为增量 *2.1.10 最大操作压力:≥17,800psi(须提供厂家英文官方原版指标及应用证明文件,并加盖仪器制造商公章。 #2.1.11 梯度模式:线性、步进、凹线、凸线四种类型 2.1.12 柱塞清洗:自动,可编程 2.1.13 流量精度:+/-0.02min SD,(全流速范围内),不随反压变化 2.1.14 流速准确度:±1.0% 2.1.15 梯度准确度:± 0.5%,不随反压变化 2.1.16 梯度精度:±0.15%RSD,不随反压变化

#2.1.17缓冲盐浓度和pH值调节:自动配置缓冲盐浓度和自动调节pH值2.1.17.1配置方式:自动比例混合 2.1.17.2计算方式:梯度曲线 2.1.17.3 pH精度: ±0.01 2.2 自动进样器系统 2.2.1密封在线针进样 2.2.2 耐压: 18,000psi 2.2.3 进样模式:任意体积直接注射进样 2.2.4 样品瓶数:≥90 位 2.2.5 进样精度:<0.3%RSD #2.2.6 样品交叉污染度:<0.001% 2.2.7 进样体积:0.1-50μL,以 0.1μL 为增量 2.2.8 进样线性度:>0.999 2.2.9 自动进样循环时间:<30 秒 2.3 柱温箱及色谱柱 2.3.1 温度范围:室温以上 5℃-90℃,增量:0.1℃ 2.3.2加热方式:电加热 2.3.3 预热方式:主动式 2.3.4 色谱柱颗粒度:≤1.7 um 2.3.5 色谱柱与柱温箱上带有使用信息记录装置 2.4紫外/可见光检测器 *2.4.1波长范围:190~700nm 2.4.2波长准确度:±1nm 2.4.3测量范围:0.0001~4.0000AUFS 2.4.4基线噪音:6.0×10-6 AU, 2.4.5基线漂移: ≤5.0x10-4AU/hr/℃ 2.4.6线性范围:2.5AU 2.4.7吸收范围:0.0001 to 4.0000 AUFS 2.4.8光源:氘灯,寿命2000小时

最新高效液相色谱使用方法

最新高效液相色谱使用方法 一、流动相准备 将流动相按比例混合,注意混合的流动相必须相互溶解,最好能将流动相混合在一起,若相互溶解性不好,可分成两种。流动相配好后,将管路放入,注意不要将瓶口密封。 二、开机 首先将真空泵打开,待泵的指示灯由黄变绿打; 打开600泵开关,按Direct键,进入操作菜单。 三、抽气 抽取管路A液体:先将注射器旋转插入,将旋钮由Run转至 Draw,抽液,完成后将旋钮由Draw至Run,再将注射器旋转取下,反复1-2次,抽至管路内无气泡。 抽取管路B液体:在泵操作菜单上将B设为100%,给0.2ml/min的流速,听到泵转换的声音后,将流速设为0,以抽取管路A的步骤进行抽气。 四、调节流动相比例与流速 在泵操作菜单上设定流动相比例,并以0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml/min的速度逐步升高流速,每次间隔3-5分钟。 五、2410示差检测器的使用 1、打开2410示差检测器开关 2、调整检测器内、外温度 3、实验前一天晚上,使用“purge”状态平衡过夜,若第二天还要做实验,结束工作后不关机,节省第二天的平衡时间,保持0.2ml/min的流速。 六、2487紫外检测器的使用 1、打开2487示差检测器开关,机器自动进入自检过程,约需7分钟。 2、设置检测波长 3、预热30分钟左右,即可注样测定。

试验四、番茄内源激素高效液相色谱法测定 一、样品准备 取新鲜番茄根、茎、叶5克左右,液氮冷冻,放入冰箱储存。配80%甲醇,冰箱冷冻。 二、提取 样品放入预冷研钵,加l0ml 80%的冰冻甲醇研磨至匀浆,转入小烧杯中,再用甲醇清洗研钵2次,每次l0ml,转入小烧杯中。小烧杯放入冰箱(0~4℃)冷藏14小时以上。 三、过滤 取出用漏斗滤纸过滤,并用10m180%甲醇清洗残渣,合并滤液;如果提取液中沉淀物或色素多,则用10000g离心l0~12min,上清液转入冻干瓶中。 四、浓缩 将冻干瓶中的液体用减压蒸干机蒸干(至瓶中液体结冰),然后用2m1 80%的甲醇冲洗,如果有浑浊物,再次用离心机12000g离心l0min,倒入带有刻度的试管中,为保证试管中的液体有5ml左右,将不足5ml的试管中再加入一些甲醇。 五、萃取 提取液中加入等量石油醚萃取,用力振荡,待静止分层后,用胶头滴管吸取上层液体弃去,此过程反复进行,直至醚层不再有颜色。 六、过柱纯化 萃取脱色后液体吸入针管,通过C18小柱滤除色素,用1~2m1甲醇清洗小柱一次,若滤出色素,将液体吸回,用新小柱重新滤一次(小柱使用前要用甲醇浸泡,用后再用甲醇反复冲洗,再浸泡)。 七、二次浓缩 液体转入蒸发皿中,60℃蒸干,用lml甲醇洗脱。 八、过滤 0.45um滤膜过滤,滤液收集到小瓶中,冷冻待测定。 九、测定与计算 用标样做标准曲线,分别为10,50,100,200,500mg/ml。进样量为20ul。 测定条件:流速为lml/min,柱温设定为35℃,测定波长为260nm,流动相甲醇:3%乙醇=45:55 计算:通过曲线计算样品中激素浓度。

Waters高效液相色谱仪标准操作规程

XXXXXXXXXX部仪器设备标准操作规程 1 目的:建立Waters高效液相色谱仪标准操作规程。 2 范围:Waters高效液相色谱仪。 3 责任:化验室操作者。 4 规程: 4.1 型号与主要性能指标 4.1.1 型号 4.1.1.1 主机Waters2695分离单元、Waters2489紫外/可见光检测器。 4.1.1.2 工作站Empower2。 4.2 主要技术指标: 4.2.1 泵流量设定:0.000和0.010到10.000毫升/分,增量为0.001毫升/分。 流量准确度:±1%或10μL/分,取其中的较大值(0.200到5.000毫升/分),反压为600psi下的脱气甲醇。 4.2.2 检测器:光源:氘灯。 波长范围:190~700nm 波长精度:±1nm 4.2.3 柱温箱:温度设定范围:20~60℃,间隔:1℃ 控温精度:±5℃ 4.2.4 工作站计算机:Dell OPTIPLEX330(操作系统Windows XP)。 4.2.5 打印机:HP LaserJet P1008打印机。

5 操作条件: 5.1 电源要求:950VA(最大值) 线电压:85到132Vac或180到250Vac 频率:47到63Hz 5.2 环境条件:温度:4~40℃,相对湿度:20~80%。 5.3 机房内应清洁无尘,无易燃、易爆和腐蚀性气体,室内排风良好。 5.4 仪器应平稳放置在工作台面上,便于操作,周围无强烈的机械震动和电磁干扰,仪器接地应良好。 6 操作前准备: 6.1 配制所需流动相。 6.2 配制和制备所需的对照品溶液和供试品溶液。 6.3 将色谱柱连接到色谱仪管路系统上。 7 操作步骤: 7.1 打开交流稳压电源开关,稳压电源上电压表指示并稳定至220V。 7.2 将“2695分离单元”电源开关(位于左侧面板的面板顶部)推到(开)I 位置即可启动“2695分离单元”, 启动诊断程序将启动。启动诊断程序的初始部分成功后,前面板上将显示Main(主)屏幕。启动诊断程序将继续执行,将初始化:针头、注射器和阀门;样品转盘托架;溶剂管理系统。诊断运行时,Main(主)屏幕的标题区内将显示这些机械诊断测试的状态。如果启动诊断程序不成功,则排除故障。当启动诊断程序完成后,“分离单元”将进入“空闲”模式。仪器开始自检(4-5分钟),待屏幕上方出现“idle”字样表示自检成功。 7.3 将输液泵上的烧结不锈钢过滤器及吸液管放入流动相中,使导管内充满溶剂。打开在线脱气,使其伪on,设定柱温,一般为35℃,清洗柱塞杆1~2分钟(Prime seal wash),将每一个会用到的管道进行排气一次(Wet prime),注射器排气泡及清洗(Purge injector),清洗注射针(Prime needle wash)。

高效液相色谱操作手册

转 HP1100高效液相色谱使用说明书注意事项: 1使用前,应申明样品名称和特性以及使用的流动相。 2更换色谱柱应由中级仪器实验室完成。 3溶剂必须经微孔滤膜过滤,所有废弃物(溶液等)请带走自行处理。 4不得在计算机上进行与实验无关的操作。 5注意适时更换废液收集瓶,防止废液溢出。 6认真登记实验记录。 7相关论文发表后,应送一份复印件给中级仪器实验室。 北京大学化学学院中级仪器实验室 一、概述 HPLC1100系统构成如下: 1 流动相A B C D 2 真空脱气装置3、6、9、11 电缆 4 输液泵 5 自动进样器(无)7 柱温箱8 检测器(DAD) 10 数据接收处理控制系统(计算机)12 打印机13 手动进样器 1.指示灯状态 每个部件接通电源后,LED灯显示绿色; 黄色Not Ready 绿色Run 红色Error 2.四元泵系统的工作原理图

3.柱温箱的特征 ●可以在低于室温10℃至80℃间恒温 ●空间大,可以容纳三根30cm长的柱子 ●安装柱识别可以记录进样次数 ●两个单独的加热区 ●可以程序升温 4.检测器 HP1100高效液相色谱仪配置的单光路二极管阵列检测器的光路如下所示: 光源发出的复合光经消除色差透镜系统聚焦后,照射到流通池上,透射光经全息凹面衍射光栅色散后,投射到一个由1024个二极管组成的二极管阵列上而被检测。此光路系统中光闸是唯一的运动部件,它有三个动作位置:(1)光闸将入射光束全部遮挡,以进行暗电流补偿;(2)将氧化钬滤光片插入光路,对衍射后的波长进行精确校正;(3)打开光闸使入 射光通过样品流通池照在光栅上。

HP1100系统所有控制和操作基本在计算机上完成,熟悉软件十分重要。本系统操作是基于Windows NT的多窗口多任务操作系统,要注意窗口之间可能覆盖。 根据所选色谱柱的性能,本系统可用于分子量小于2000的各种化合物的分离分析。目前中级仪器实验室仅备有ODS反相柱(可用于弱极性化合物及弱离子型化合物的分析)。一般要求自备色谱柱。自备色谱柱应使用HP系列接口,大连化物所及天津Autoscience公司可提供,一般分析柱的价格在1600-2000元之间,HP进口柱价格在4000元人民币左右。 本系统可提供多达四元体系的各种梯度淋洗,但在选择溶剂时须十分小心。流动相选择对分离分析有着重要的影响。 二、开机 打开各部分电源,脱气装置、输液泵、柱温控制、检测器的指示灯变黄。 开启计算机,若有选项,选择开启Windows NT4.0。点START-PROGRAM-HPChemStation-Instl online,计算机开始与仪器联接,并打开各控制界面,此时,各单元指示灯变绿,在工具条的View中选择界面为Runcontrol。 在第一个小窗口中利用下拉菜单,选择显示界面为Method and Run Control; 在第二个小窗口中选择已设定的使用方法(若是旧用户则有记录),新用户先编辑实验方法,然后选工具栏中Method-Save Method As(具体见后)。 第三个小窗口中显示LC操作条件。 三、样品分析 1.溶剂的处理和设置 不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器,降低泵的性能。遵从下列建议可以提高性能,延长溶剂过滤器的寿命: ●使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌 ●用滤膜过滤溶剂去除微生物 ●每二天更换或过滤溶剂 ●避免溶剂瓶直接日照 各洗脱液应分别过滤,注意有机相和水相应使用不同的滤膜。 避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂: ●卤化物碱金属溶液和相应的酸溶剂 ●高浓度的无机酸例如:硝酸和硫酸 ●能够形成卤素自由基或酸的卤化物试剂及其混合物 ●含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂过滤吸收氧化物 ●在有机溶剂中的有机酸溶剂 ●含有强络合剂的溶液 ●四氯化碳和异丙醇或THF混合物 溶剂的设置: 在输液泵图标上按鼠标左键,在出现的小菜单中选Setup Pump,在Solvents栏中输入A、B、C、D溶剂名称;点溶剂瓶图标,在Solvent Bottles Filling中输入A、B、 C、D各溶剂的实际体积数。点OK确定并退出。 2.设置泵的参数 点输液泵图标,选Setup Pump,出现流速控制界面。设定流速flow rate(一般ODS

相关文档
最新文档