教你如何看懂花了好几千的免疫组化报告单

教你如何看懂花了好几千的免疫组化报告单
教你如何看懂花了好几千的免疫组化报告单

教你如何看懂花了好几千的免疫组化报告单

免疫组化是用标记的特异性抗原(抗体)对组织内抗体(抗原)的分布进行检测。免疫组化虽然价钱昂贵,却有不能替代的作用:

①恶性肿瘤的诊断和鉴别②确定转移性恶性肿瘤的原发部位③对某类肿瘤进行病理分型④明确软组织肿瘤的正确组织学分类,明确软组织的诊断⑤发现微小转移灶⑥为临床治疗方案提供支持虽然免疫组化有那么多作用,但是很多患友拿到手了根本就看不懂,都是些英文缩写,代表着什么意思呀,别着急,下面小编就按照字母顺序列张表,告诉大家各个代表什么意思:

项目临床意义Actin肌动蛋白,间叶组织来源标记,平滑肌、血管内皮、肌上皮组织表达。AE1/AE3细胞角蛋白

AE1/AE3,标记上皮及上皮来源的肿瘤,鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性,如胆管细胞阳性,肝细胞阴性,鉴别肝癌和胆管癌。AFP甲胎蛋白,肝癌细胞表达,胃和肝脏同时肿瘤时,胃肝样腺癌HepPar-1、AFP、CK19 和CDX-2等4 种不同程度阳性表达,而肝细胞癌CK19 和CDX-2不表达。ALK间变型淋巴瘤激酶,用于淋巴造血来源标记,间变性大细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和炎症性肌纤维母细胞瘤的诊断。AMACR甲基酰基辅酶A消旋酶,癌特异

性指标,只存在于癌症组织。结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤等过度表达,以结直肠癌和前列腺癌表达最高。Bax促进凋亡蛋白,同Fas/FasL。Bcl-2抑制细胞凋亡相关基因-2,肿瘤预后指标,高表达者对多数抗癌药物、放射治疗耐受,高表达者预后差。Bcl-6B淋巴细胞凋亡相关基因-6,抑制细胞凋亡作用,淋巴造血细胞来源标记,用于B淋巴瘤诊断。Bel-XL抑制细胞凋亡相关基因-XL,Bcl-2 抑制细胞凋亡基因家族成员之一,作用同Bcl-2 。Cam5.2人角蛋白抗原决定簇,正常分泌上皮表达,复层鳞状上皮不表达,用于鉴别腺癌和鳞癌。CD10分化簇10,间叶组织来源标记,未成熟淋巴细胞阳性表达,用于B细胞淋巴瘤、慢性髓性白血病等诊断,某些非造血肿瘤子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞癌也可阳性。CD117分化簇117,间叶组织来源标记,胃肠间质瘤细胞阳性表达,阳性者可用格列卫靶向治疗。某些肿瘤如黑色瘤、白血病、皮肤纤维瘤、血管肉瘤、尤文氏瘤、胶质瘤也可阳性。CD14脂多糖LPS受体,单核细胞、巨噬细胞等细胞表面分化抗原,用于单核细胞和组织细胞相关病的鉴别诊断。CD15半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖组成的碳水化合物抗原,又称半抗原χ,是粒/单核细胞相关抗原标记,成熟粒细胞、激活的淋巴细胞(主要是T淋巴细胞)、R-S细胞、大多数腺癌等阳性表达。用于霍奇金淋巴瘤、胃癌、结直肠癌、甲状腺癌、乳腺

癌等诊断。表达随癌细胞分化程度下降、淋巴结转移和临床分期增高而明显增高,判断肿瘤的发展、预测淋巴结转移和预后良好指标。CD1a树突状细胞DC表面抗原递呈分子,DC发挥抗肿瘤免疫作用的特征标记,肿瘤组织表达减少,肿瘤细胞逃脱免疫监视,恶性程度高预后差。CD20L26分化簇20,淋巴组织源性标记,B细胞标记抗体。用于B淋巴瘤诊断,阳性者可用Rituxan或Zavalin靶向治疗。CD3T细胞的共受体是一种蛋白质复合物,标记胸腺细胞、T淋巴细胞,用于T细胞淋巴瘤诊断。CD31分化簇31,血管内皮表达。CD31是血管内皮分化的标志,现在强阳性提示肿瘤细胞具有血管内皮分化,而CD34是间质起源,用在血管肿瘤诊断时提示血管肿瘤起源。CD34分化簇34,间叶组织来源标记,血管内皮细胞表达用于血管源性肿瘤的诊断,胃肠间质瘤、乳腺叶状肿瘤、孤立性纤维肿瘤、黏液性脂肪瘤可阳性。而CD31强阳提示肿瘤细胞具有血管内皮分化。CD44分化簇44,跨膜糖蛋白分子,肿瘤预后指标,CD44s透明质酸受体,结合透明质酸后影响肿瘤的生长和转移。CD44v 淋巴转移的肿瘤细胞表达,提示肿瘤细胞的侵袭性与易转移性强。CD45CD45RACD45RO分化簇45,淋巴组织源性标记,T细胞标记抗体,白细胞共同抗原Ⅰ型跨膜蛋白, 在机体免疫应答中,CD45RA 阳性T 细胞遇抗原刺激后以增殖反应为主,CD45RO 阳性T 细胞以分泌细胞因子产生免疫效应为主。

用于自身免疫疾病诊断和随访。CD56分化簇56,神经内分泌标记,神经细胞黏附分子阳性表达,用于神经外胚层细胞来源星型细胞瘤、神经母胞瘤、神经内分泌肿瘤诊断。NK 细胞瘤、小细胞肺癌也可阳性。CD68分化簇68,淋巴组织源性标,骨髓和神经组织巨噬细胞源表达,用于粒细胞白血病、单核细胞白血病、恶性纤维组织细胞瘤诊断。CD79-aB 淋巴细胞抗原受体复合物,B淋巴组织源性标记,用于B细胞淋巴瘤的诊断。CD99分化簇99,小圆细胞标记,用于神经外胚层肿瘤骨尤文肉瘤诊断,其它肿瘤特异性差。CEA癌胚抗原,上皮来原标记,用于内胚层来源发肿瘤如胃癌、肠道癌、胰腺癌和肺腺癌等诊断,少量成人上皮细胞和良性肿瘤亦可表达。C-erbB-2NeuHER-2原癌基因蛋白表达产物

P185,增殖活性标记,乳腺癌、卵巢癌、胃癌、食管癌、涎腺肿瘤、肺癌、胆管癌、膀胱癌、前列腺癌、结直肠癌等均有阳性表达。表达越高多药耐药可能越大、恶性程度越高。乳腺癌ER、PE、C-erbB-2同时阳性三苯氧胺治疗效果不好,但提示可以Herceptin赫赛汀治疗。CgA嗜铬蛋白颗粒A,神经内分泌细胞标记,几乎所有的神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素。用于于所有含有颗粒的内分泌细胞和神经内分泌细胞来源的肿瘤的诊断。Chr嗜铬素,神经内分泌肿瘤标记,用于神经内分泌肿瘤诊断,鉴别肾上腺髓质和皮质源肿瘤。CK细胞角蛋白,上皮来源标记,鉴别和判断转移性肿

瘤是否为上皮源性。CK14细胞角蛋白14,肌上皮来源标记,用于鉴别肿瘤基底细胞上皮和肌上皮来源,鳞状上皮也可阳性表达。CK18细胞角蛋白18,上皮性肿瘤标记,各种单层上皮包括腺上皮标记,诊断小细胞癌、胸腺瘤、梭形细胞癌、肝细胞癌诊断;复层鳞状上皮阴性,用于鉴别鳞癌。CK19细胞角蛋白19,上皮性肿瘤标记,单层上皮和间皮标记,常用于腺癌诊断,肝细胞不表达,胆管上皮阳性反应,鉴别肝癌和胆管癌。CK20细胞角蛋白20,胃肠上皮移行上皮Merkel 细胞来源标记,用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断,鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜/卵巢非黏液性肿瘤、神经内分泌肿瘤常阴性用于鉴别。CK5/6细胞角蛋白5/6,上皮来源标记,鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性,腺上皮细胞阴性,用于鳞癌和腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断,支气管上皮基底细胞、间皮;鳞癌、大细胞癌、移行细胞癌、间皮瘤阳性。大多数腺癌为阴性。CK7细胞角蛋白7,上皮来源标记,通常在腺癌中表达,腺上皮和移行上皮细胞表达,非上皮来源细胞无表达。在卵巢、乳腺和肺的腺癌呈阳性反应,而胃肠道的腺癌阴性。用于卵巢、肺和乳腺癌诊断,结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性用于鉴别诊断。CKH高分子角蛋白,鳞状细胞肿瘤标记,用于鳞状细胞肿瘤诊断。CKL低分之角蛋白,单层上皮、腺上皮标记,用于腺

上皮来源肿瘤诊断。CK-Pan上皮来源标记,同AE1/AE3CT 降钙素, 内分泌细胞标标记,用于甲状腺髓样癌诊断。DesDesmin结蛋白,间叶组织来源标记,平滑肌和横纹肌可检测到结蛋白,用于平滑肌、骨骼肌细胞和肌上皮细胞肿瘤诊断,高分化高表达、低分化低表达。DOG-1间叶组织来源标记,用于源于Cajal 细胞胃肠间质瘤诊断。E-CaE钙粘附蛋白,肿瘤增殖活性与凋亡标记,阳性表达细胞之间连接的破坏,肿瘤侵袭和转移性强。EGRF抗表皮生长因子,结直肠癌表达阳性可用Erbitux(Cetuximab)爱必妥(西妥昔单)抗靶向治疗。EK表皮角蛋白,上皮性肿瘤诊断标记,用于鳞状上皮或高分化鳞癌诊断。EMA上皮膜抗原,上皮来源标记,广泛分布于各种上皮细胞,低/未分化上皮高表达;用于多数的癌、间皮瘤、滑膜肉瘤和上皮样肉瘤等,间变大细胞、恶性横纹肌样瘤也可阳性。淋巴瘤、黑色素瘤和软组织肿瘤阴性表达。过表达与肿瘤侵袭程度有关。ER雌激素受体,内分泌细胞标记,肿瘤组织阳性率越高,肿瘤对内分泌治疗越有效,预后越好。FasFasLT细胞表面促进凋亡蛋白,维持T细胞总量平衡,T细胞标记,过少表达与免疫功能紊乱、淋巴结脾肿大、多种自身免疫疾病相关,过度表达T细胞易被CTL识别杀伤免疫功能低下。GA733肿瘤相关抗原,编码上皮糖蛋白40,上皮细胞黏附分子(EP-CAM),对上皮细胞的生长与分化起着重要作用。多种肿瘤可有GA733

表达,尤其是乳腺癌、结肠癌及肺癌等。非小细胞肺癌手术切除淋巴结中隐匿性微转移灶表达阳性预后差。结肠癌细胞膜及细胞浆表达预后较基膜侧的表达为差。GFAP胶质纤维酸性蛋白,神经来源标记,脑胶质细胞阳性表达,多用于星形胶质瘤诊断。GST-π谷光甘肽S转移酶(GST π)多药耐药相关基因表达产物,:阳性率越高对下列药物耐药性越强:阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。谷光甘肽S转移酶--解毒作用--胞浆--阳性率越高,对下列药物耐药性越强:阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。HAS上皮来源标记,用于判断上皮来源肿瘤。HBME1间皮细胞标记,鉴别间皮瘤与腺癌参考,间皮瘤为厚膜型,腺癌为薄膜型或胞浆着色。HCG性腺来源标记,用于判断性腺上皮来源肿瘤。Hep par1肝细胞抗原,正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。HepPar肝细胞抗原,在正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。HER-2原癌基因,同C-erbB-2,胃癌生物学行为及预后的指标,HER-2 (3 )及HER-2 (2 )时应进一步FISH 检测分析HER-2基因状态,野生型可用赫赛汀靶向治疗。HMB45上皮性肿瘤标记,恶性黑色素瘤阳性表达。Inhibin-a 性腺来源标记,判断性腺上皮来源肿瘤。Ki-67Ki-67,细胞增殖标志,细胞周期G1、S、G2、M 期表达,G0 期缺如,阳性率越高,肿瘤增殖越快,分化差、浸润转移快、预后差,

共认的肿瘤预后指标。LCA详见CD45,淋巴组织源性标记,淋巴网状细胞一线标记抗体LH性腺来源标记,判断性腺上皮来源肿瘤。MDRP-gp多药耐药(MDR)基因编码P-糖蛋白(P-170),蛋白位于细胞膜上,有药物泵作用,将进入细胞的药物泵出细胞外而使细胞产生耐药,阳性率越高对下列药物耐药性越强:阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。Melan A间叶组织来源标记,用于黑色素细胞瘤诊断和转移性肿瘤的鉴别诊断,比HMB-45敏感。MNF-116细胞角蛋白共同的抗原决定簇,上皮来源一线标记,用于鳞癌、小细胞癌、肉瘤样癌/梭形细胞癌、腺癌、间皮瘤(纤维状细胞)、滑膜肉瘤、血管肿瘤、平滑肌肿瘤和浆细胞瘤等诊断。MOC-31上皮细胞来源标记,大多数腺癌为阳性,而间皮瘤通常为阴性。MRP1ABCC1基因表达的多药耐药相关蛋白,药泵作用,肺癌、乳腺癌、前列腺癌等肿瘤阳性表达,化疗敏感性差、预后不良。MSA肌特异性肌动蛋白,广泛分布于几乎所有肌型细胞中用于肌源性来源肿瘤鉴别。MSI微卫星不稳定性,遗传性结直肠癌如阳性表达,90%诊断Lynch综合征(遗传性非息肉性结直肠癌,错配修复基因胚系突变)和10-15%诊断散发性MSI阳性结直肠癌(错配修复基因MLH1基因启动子甲基化)。mtp53

同Bcl-2Myosin肌红蛋白,间叶组织来源标记,用于横纹肌来源肿瘤鉴别。Myotlobin肌球蛋白,间叶组织来源标记,

用于横纹肌来源肿瘤鉴别。NESTIN神经组织源性标记,用于神经干细胞来源肿瘤鉴别。NEU同Her-2, C-erbB-2NF神经纤维细丝蛋白,神经组织源性标记,用于神经组织源性肿瘤鉴别。Nm23转移抑制基因,其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等检测,高表达患者淋巴结转移率相对较低,存活期相对较长。N-myc是MYCN表达的一种螺旋蛋白,能导致肿瘤发生,多种肿瘤阳性表达,过度阳性表达如肺小细胞癌和神经母细胞瘤等化疗反应差,病情进展快。NSE神经内分泌肿瘤标记,神经原特异性烯醇化酶,神经内分泌肿瘤阳性表达Ost成骨素,骨化细胞阳性表达,用于骨肿瘤诊断。P16P16蛋白,上皮性肿瘤标记,用于宫颈癌预后判断,阳性表达者预后差。P504S上皮性肿瘤标记,甲酰基辅酶A,前列腺癌阳性表达,敏感性97%,特异性为100%。P53Mtp53一种抑癌基因,人类研究最多的基因,分野生型(Wtp53)和突变型(Mtp53)。野生型Wtp53因微量免疫组化难以检测,正常参与细胞从G0期进入G1期的负调节,而控制细胞的增生,同时诱导细胞的程序性死亡。突变型Mtp53能够被免疫组化测定,突变后则丧失了启动细胞凋亡的能力。突变型p53高表达,细胞的高度增生、分化程度差分化、恶性程度越高、预后不良,公认预后差指标之一。P63新发现抑癌基因表达蛋白,细胞周期中的刹车装置,一旦失灵则会导致细胞恶性

增殖,导致恶性肿瘤发生,阳性表达提示预后好。PCNA增殖细胞核抗原,增殖活性与凋亡标记,阳性表达肿瘤增殖快、预后差,目前公认的肿瘤预后差指标之一。P-gp同MDR。PH甲状旁腺素标记,甲状旁腺肿瘤阳性表达PLAP性腺来源标记,判断性腺来源肿瘤。PR孕激素受体,内分泌细胞标记,肿瘤组织阳性率越高,肿瘤对内分泌治疗越有效,预后越好。PS2雌激素调节蛋白,增殖活性标记,表达和ER 表达有关,可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。PSA 内分泌细胞标记,用于前列腺癌来源肿瘤的判断。RbRb基因表达蛋白,肿瘤抑制蛋白,抑制肿瘤细胞周期,但对多数肿瘤无作用,阳性表达意义尚不清。S-100神经组织来源标记,神经组织周围神经雪旺氏细胞阳性表达,神经内分泌肿瘤、垂体瘤、颈动脉体、肾上腺髓质、唾液腺、少数间叶组织阳性表达,用于神经鞘瘤、恶黑、脂肪肉瘤、软骨肿瘤诊断。SMA平滑肌肌动蛋白,间时组织来源标记,用于平滑肌来源肿瘤诊断。SP表面活性蛋白,肺表面活性物质含,用于细支气管肺泡癌诊断。Survivin抑制凋亡蛋白家族的新成员,具有肿瘤特异性,只表达于肿瘤和胚胎组织,且与肿瘤细胞的分化增殖及浸润转移密切相关,肿瘤组织阳性表达者肿瘤浸润转移率高,预后差。Syn突触素,存在于神经元突触前囊泡膜,神经性和上皮性神经内分泌肿瘤的特异性标志,用于神经内分泌肿瘤诊断。Tg甲状腺球蛋白,甲状腺癌Tg 阳

免疫组化技术全程原理

免疫组化技术全程原理 一、概念和常用方法介绍 1、定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。 2、原理 根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应,前者再用标记辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如链霉亲和素等)结合,最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分,在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。 3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较常用的方法;聚合物链接,如即用型二步法,此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。 4、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1)免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广。 2)免疫酶标方法

免疫组化临床意义

临床免疫组化意义 1恶性肿瘤免疫组化耐药预后标志全套4项:P-gP, GSTt, TOPOI, Ki-67。 2、乳腺癌免疫组化耐药预后标志全套7项:P-gp, GSTr, TOPO, Ki-67 , ER PR C-erbB- 2。 3、意义:标志物作用阳性部位临床意义 (1) 、多药耐药基因蛋白(P-Gp)药泵作用胞膜/胞浆,阳性率越高,对下列药物耐药性越强:阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。 (2) 、谷光甘肽S转移酶(GSTr)解毒作用胞浆,阳性率越高,对下列药物耐药性越强:阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。 ⑶、拓扑异构酶n(TOPO )靶点作用胞核,阳性率越高,对下列药物越无效:蒽环类抗生素和鬼臼毒素类,如VP16替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26阳性率高者对VP16尤其无效。 ⑷、雌激素受体(ER性激素作用胞核,阳性率越高,肿瘤对内分泌医治越无效,预后越好。 (5) 、孕激素受体(PR) 性激素作用胞核,阳性率越高,肿瘤对内分泌医治越无效,预后越好。 ⑹、C-erbB-2癌基因产物,胞浆阳性率越高,肿瘤恶性水平越高。ER PR阳性而C-erbB-2 也阳性者,用三苯氧胺医治效果不好。 (7) 、Ki-67 细胞增殖标志, 胞核阳性率越高肿瘤增殖越快,恶性水平越高。 Ki-67为细胞增值的一种标志,在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达,G0期缺如,其和许多 肿瘤分化水平、浸润、转移、预后亲密相关。PCNA增埴细胞核抗原)。 (8) 、CEA 少数腺癌表达CEA (9) 、Rb (retinoblastoma 视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因,调理细胞周期。 (10) 、P53在免疫组化中均为渐变型,阳性率越高,预后约差。野生型半衰期很短 (11) 、Nm23是转移抑制基因,其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。目前已被普遍使用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等多种恶性肿瘤的检测。简直一切的研讨都标明,nm23蛋白高表达患者淋巴结转移率绝对较低,存活期绝对较长。 (12) 、E-Ca, E钙粘附蛋白,介导细胞间粘轮作用的跨膜糖蛋白,其功用丧失惹起细胞之间衔接的毁坏,次要用于肿瘤侵袭和转移方面的研讨。 (13) 、PS2(雌激素调理蛋白),其表达和ER表达有关,可作为内分泌医治和预后判别的目标 之一。 (14) 、CK18 低分子量角蛋白,主要标志各种单层上皮包括腺上皮,而复层鳞状上皮常阴性, 主要用于腺癌诊断。 (15) 、CK19 散布于单层上皮和间皮,常用于腺癌诊断,肝细胞不表达,而胆管为阳性反应。 (16) 、Hep par 1, 肝细胞抗原,正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。 (17) 、CK20用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、 肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。 (18) 、CK7 卵巢、肺和乳腺上皮常阳性,结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。 (19) 、Villin 绒毛蛋白,正常组织中,villin 通常只表达于有刷状缘的细胞上,如胃肠道上 皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾本质的上皮细胞中(特别是近曲小管)。Villin 在胃肠 道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率,具有分明腺样构造的肿瘤上没有 villin 表达,则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的能够性极低。乳腺癌也常常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别扫除的一种疾病。由于在转移癌组织上察看到分明的villin 免疫组化阳性染色,则这个肿瘤就极不能够为乳腺来源。其他villin 免疫组化染色通 常为阴性表达的肿瘤还有:如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌和前列腺癌。间皮瘤也常常为villin 阴性表达,因而在一些状况下Villin 还可以作为鉴别间皮瘤和腺癌运用抗体的一种。 但是也有一些非胃肠道来源的肿瘤可表达villin ,如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌和小局部肺癌。也有一些专家报道Villin 在局部宫颈内膜腺癌病例中表达。 肝癌的诊断

石蜡切片免疫组化染色实验操作流程

石蜡切片免疫组化染色实验操作流程_ 1.石蜡切片脱蜡至水: (石蜡切片染色前应置60℃1小时)。 ①二甲苯I、II,各30分钟。 ②梯度酒精:100%I、II,各10分钟;95%,5分钟;80%,5分钟;70%5分钟。 ③蒸馏水洗:5分钟,2次(置于摇床)。 2抗原修复: 根据待检测的抗原,选择适当的方法。 附: 抗原修复液(10mMpH 6.0枸橼酸钠缓冲液)的配制: ①储备液的配制: A液: 枸橼酸三钠-2H2O 29.41g+蒸馏水1000ml;B液: 枸橼酸21g +蒸馏水1000ml;②工作液的配制: A液82ml+ B液18ml+蒸馏水900ml 抗原修复的方法: 高压锅处理技术: 枸橼酸钠缓冲液(10mM,PH

6.0),淹没切片,盖上锅盖,高压锅内煮沸,上汽3分钟后缓慢冷却(可用自来水在高压锅外冲,以助冷却)。晾至室温抗原修复的注意事项: ①组织不能干。②选择抗原修复方法要因抗体而异。③该方法主要用于10%福尔马林固定、石蜡包埋组织。④抗原修复后至DAB显色的过程中,均需用PBS缓冲液。 3.PBS:5分钟,2次(置于摇床) 4.过氧化氢封闭内源性过氧化物酶:3%H2O2,室温20分钟(避光)。 5.PBS水洗:5分钟,2次。 6.正常血清封闭: 从染片缸中取出切片,擦净切片背面水分及切片 正面组织周围的水分(保持组织呈湿润状态,)滴加正常山羊或兔血清(与第二抗体同源动物血清)处理,37℃,15分钟。 附: 正常血清配制(或按试剂盒规定的浓度配制): 按1:10比例,用PBS配制,每张切片需要量按50μ+5μl (10%抛洒量)计算。 7.滴加第一抗体: 用滤纸吸去血清,不洗,直接滴加第一抗体50μ,(也可置于4℃冰箱过夜)。 第二天片子晾至室温 8.PBS:5分钟,2次。 9.滴加聚合物增强剂(试剂A),37℃孵育30分钟, 0.01 M PBS洗涤三次,5分钟/次,振洗。

免疫组化操作步骤

免疫组化操作步骤集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#

免疫组化操作流程 试剂准备 1. PBS缓冲液(~): NaCl 137mmol/L,KCl L,Na2HPO4 L, KH2PO4 L。 2. L柠檬酸盐缓冲液(CB,,1000ml):柠檬酸三钠 3g,柠檬酸。即抗原修复液 : PBS+吐温-20(1000:1)洗液可全部运用PBST 4. 3% 甲醇-H2O2溶液:用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。 5. 封片剂:中性树脂+二甲苯。 操作流程 免疫组织化学染色 SP法: 1. 脱蜡、水化: 脱蜡前,应将切片在60℃恒温箱中烘烤60~120分钟,观察石蜡应溶解。 从烤箱拿出切片后尽快置于二甲苯中浸泡30分钟,更换二甲苯后再浸泡30分钟; 无水乙醇中浸泡3分钟; 95%乙醇中浸泡3分钟; 70%乙醇中浸泡3分钟(我用80%); 50%乙醇中浸泡3分钟; 自来水中浸泡3分钟;

梯度脱蜡 2. 抗原修复:(用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片) 高压热修复高压锅里放少许水,用一量杯或容器(大小能容纳玻片架为宜)装抗原修复液放入高压锅里一起煮沸,再放入玻片架,盖上不锈钢高压锅的盖子,将排气阀门套上,待听到阀门冒气时,即可倒计时2min,之后将玻片杯一起放入凉水中,静置15min,平衡至室温。电磁炉1000W 2min。 3.丢弃抗原修复液,将玻片浸泡在去离子水中(时间不限)可省略 4.用组织笔沿组织边缘画线(可与组织边缘留适当间隙),画完立即放入PBST溶液中浸泡3遍X3min(三个容器,每个容器3min,时间不限制)。 5. 3%H2O2滴加在切片上,室温静置15分钟(3%的H2O2用30%的 H2O2加双蒸水稀释10倍,现配现用。目的为阻断内源性过氧化物酶); 6. PBST洗3次各3分钟(过三缸) 7. 滴加正常山羊血清封闭液,室温30分钟。用与一抗不同源的血清即可,本人用Western-blotting的含胎牛血清封闭液。 8. 甩去封闭液(注:不要冲洗),滴加一抗50ul(至少50ul否则易干片),4℃孵育过夜。4℃过夜后需在37℃复温45分钟(未验证:室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。)。 9. PBST洗3次各3分钟;

免疫组化原理和步骤

免疫组化原理及步骤 免疫组化操作规程 一、实验原理与意义免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 二、实验器材微波炉、吹风机、组化笔、湿盒、烤箱、振荡器、染缸、光学显微镜、纯木浆卫生纸、计时器和通风橱等。 三、试剂配制 1. 0.01 M PBS(pH 7.34 ):9.0 g NaCl + 50 ml 0.2 M PB 加双蒸水至1000 ml ; 1000 ml 0.2M PB (pH 7.4)=5.93 g NaH 2 PO 4 2·H 2 O +58.02 g Na 2 HPO 4 ·12H 2 O in 1000 ml 双蒸水或=190 ml A + 810 ml B (A. 0.2 M NaH 2 PO 4 2·H 2 O :15.6 g in 500 ml ddH 2 O ; B. 0.2 M Na 2 HPO 4 ·12H 2 O :71.632 g in 1000 ml dH 2 O )。 2. Citrate Buffered Saline (0.01 M 柠檬酸缓冲液, PH6.0 ):28 ml A + 72 ml B + 200 ml ddH 2 O (A.Citrate acid

(柠檬酸):10.5 g

加双蒸水至 1000 ml ; B.Citrate sodium (柠檬酸钠): 29.41 g 加 双蒸水至 1000 ml )。 3. 细胞通透液:由终浓度分别为 0.3% 双氧水和 0.5%Triton X-100 混合而成。配制方法是先用微波加热的 36 ml PBS ,再接着 加 120 ul TritonX-100, 并加热一儿,冷却至临用前加 0.4 ml 30 % H 2 O 2 。 4. 5%羊血清或封闭血清,用 PBS 稀释。 5. 含 0.03 % H 2 O 2 的 0.05 %DAB (避光) :用 20×DAB (1%, 10 mg/ml )5 ul +0.1 ul 30% H 2 O 2 +95 ul PBS 。 6. 一抗、二抗均用 PBS 稀释。 7. Xylene 、梯度 Ethanol (100 %×2、95%、80%、70%、50%)、 双蒸水、中性树胶(封裱剂)。 8. 苏木精染液: 四、操作步骤 1 、脱蜡、水化 60 ℃× 20 min →Xylene 2 × 10 minut ;es 80% ethanol 2 minutes ; 70% ethanol 2 minutes ; distilled water:5 min ; PBS 洗 3 次×3 min 。 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 100% absolute ethanol :2 ×5 minutes ; 95% ethanol 2 minutes ;

免疫组化染色操作步骤

免疫组化染色操作步骤 Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】

免疫组织化学染色原理和操作步骤一、免疫组织化学原理 免疫组织化学(IHC)又称免疫细胞化学,是根据抗原—抗体特异性结合的原理,应用带有可见标记的特异性抗体作为探针,检测组织和细胞中抗原性物质的一种技术。免疫组化技术主要有直接法和间接法:直接法是以标记的一抗孵育标本以检测其中的抗原成分;间接法则先后加入一抗和二抗,形成抗原—一抗—二抗复合体以达到检测该抗原的目的,该法因二抗的放大作用而具有较高的敏感性。间接法常用的有过氧化物酶—抗过氧化物酶(PAP)法、亲和素—生物素—过氧化物酶(ABC)法和链霉亲和素—过氧化物酶(SP)法。 PAP法一抗和二抗均不标记,避免了标记过程对抗体活性的影响,但需要制备过氧化物酶的抗体,与适量过氧化物酶混合形成PAP复合物(含3个酶分子和 2个抗体分子),染色时依次加入一抗、二抗、PAP复合物孵育标本,最后用H 2O 2 和二氨基联苯(DAB)为底物显示过氧化物酶,即可检测标本中的抗原成分。 生物素为含硫的杂环单羧酸,可通过其羧基与蛋白质中的氨基结合,从而标记抗体和酶。亲合素又称抗生物素蛋白,与生物素有很高的亲合力,1分子亲合素可结合4分子生物素,ABC法即在此基础上建立。ABC法与PAP法相似,一抗不标记,二抗用生物素标记,染色前按一定比例将亲和素与生物素标记的过氧化物酶混合,制成ABC复合物,并使亲合素分子上至少空出一个生物素结合位点。在标本孵育过一抗和二抗后,再加入ABC复合物使其结合到二抗的生物素上,最后加入DAB进行显色。ABC法的敏感性较PAP法更高。 图1. 免疫组织化学基本原理示意图(引自八年制《组织学与胚胎学》)

免疫组化超详细步骤

免疫组化超详细步骤 Prepared on 22 November 2020

免疫组化 一实验目的:分别用KRAS、NRAS、HRAS蛋白抗体检测肺癌组织中KRAS、NRAS、HRAS蛋白的表达情况 二实验原理:应用基本原理——抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使的(、酶、、)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和),对其进行定位、定性及定量的研究,称为或. 三实验试剂及耗材:经病理医生确认的肺癌组织切片、KRAS、NRAS、HRAS蛋白抗体、DAB显色试剂盒、抗原修复液、PBS、苏木素染料、1%盐酸酒精溶液、%氨水、二甲苯、等 四实验设备:切片机、4℃冰箱、显微镜、烤片机 五主要试剂配置: 缓冲液 应用液配成1000毫升溶液 应用液BNa2HPO4·配成1000毫升溶液 配制1000毫升PBS需要14毫升应用A液,36毫升应用B液,加。 枸橼酸钠抗原修复液 应用液A枸橼酸配成1000毫升溶液 应用液B柠檬酸三钠(三水合柠檬酸三钠)配成1000毫升溶液 配制500毫升抗原修复液需要9毫升应用A液,41毫升应用B液。 苏木素染液配方:苏木素2g,无水乙醇250毫升,硫酸铝蒸馏水750毫升,碘酸钠,冰醋酸20毫升。先将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝溶于蒸馏水水中。两液溶解后将其混合,加入碘酸钠,最后加入冰醋酸。 抗体说明书建议的抗体稀释度 N-Ras1:50-1:500 H-Ras1:50-1:500 K-Ras1:20-1:200 六实验步骤: 1组织常规石蜡切片厚度3-5um,防脱片捞片后晾干,放入72℃烤箱烤片2小时。 2切片脱蜡水化程序 ⑴二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各12分钟; ⑵无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各3分钟;(洗二甲苯) ⑶95%乙醇3分钟; ⑷85%乙醇3分钟; 3自来水漂洗3分钟,洗涤一定要充分。 4组织修复采用高温高压法:压力锅中加入,抗原修复液约1000ml,切片插入塑料架上,放入压力锅,盖上锅盖(此时不扣上压力阀)1600W预热至沸腾,扣上压力阀1300W,待高压锅阀门喷气开始计时,修复时间为2分钟。 5停止加热并用流水冲洗高压锅以降温,室温冷却。 6将抗原修复后切片置自来水中,浸泡2分钟。将样本置于内源性过氧化物酶阻断剂 3%H2O2,室温放置4分钟。(需要盖盖子)自来水洗2分钟,PBS缓冲液洗涤2分钟。

免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结

免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总 结 1、方法操作不难,最大的难处是出现异常结果时如何解决?这就需要掌握免疫组化实验原理,每一步知道为什么这样做,这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间,这三者一般是相互成反比的(相对),其中浓度是最重要的先决条件,温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说,可以有4度、室温、37度,我推荐4度最佳,反应最温和,背景较浅;而37度反应速度较快,时间较短;室温我不太提倡,除非你每次都把环境温度控制在一定的范围,否则,尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法,免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确,是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析,但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下,分析最为准确,这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做;阴性对照一般是用PBS 或非一抗替代一抗来进行反应,其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题;后者是排除有无一抗外的非特异性染色。

5、免疫组化的应用广泛,是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时,明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难,加一些形态学数据或图片,老外十分欢迎,可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤,重复运用于同一性质的切片和同一种抗体,做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法,更换一种抗体后,居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程,成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那,这是因为我经过了反复的动手+动脑,把理论原理运用于实践,在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决,最终把理论与实践融会贯通。 一、概念和常用方法介绍 1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。 2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等

免疫组化评分标准

免疫组化评分标准 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020

免疫组化评分标准: The immunohistochemical staining results were assigned a mean score considering both the intensity of staining and the proportion of tumor cells with an unequivocal positive reaction. Each section was independently assessed by 2 pathologists without prior knowledge of patient data. 免疫组织化学染色结果分配一个平均评分,既考虑一个明确阳性反应染色强度和肿瘤细胞的比例。 Positive reactions were defined as those showing brown signals in the cell cytoplasm. For δ-catenin, a staining index (values, 0-12) was determined by multiplying the score for staining intensity with the score for positive area.阳性反应被定义为那些细胞浆显示棕色信号的。对于δ-catenin,一个染色指数(0-12)被定义为染色强度和染色区域的乘积。 The intensity was scored as follows: 0, negative; 1, weak; 2, moderate; and 3, strong. The frequency of positive cells was defined as follows: 0, less than 5%; 1, 5% to 25%; 2, 26% to 50%; 3, 51% to 75%; and 4, greater than 75%. 染色强度的分数被定为:阴性0分;弱1分;中等2分;强阳性3分。阳性细胞的频率被定义为:少于5%,0分;5%-25%,1分;26%-50%,2分;51%-75%,3分;大于75%,4分。 When the staining was heterogeneous, we scored it as follows: each component was scored independently and summed for the results. For example, a specimen containing 75% tumor cells with moderate int ensity (3 × 2 =6) and another 25%

免疫组化技术(原理、分类、步骤及主要试剂、设备准备)

免疫组化技术 免疫组化技术
业精于勤而荒于嬉 行成于思而毁于随
免疫组化技术
原理
抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色 来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。 众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取 出来,以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物,制备特异性抗体,再用这种抗体(第一抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体,并 用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合,形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物,将抗原放大,由于抗 体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的,因此,还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来(常用显色剂 DAB 显示 为棕黄色颗粒) 。通过抗原抗体反应及呈色反应,显示细胞或组织中的化学成分,在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产 物,从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质,如蛋白质、多肽、氨 基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
分类(常用)
1、免疫荧光方法
最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内 的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某 种抗原的定位,进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用比较 广。
2、免疫酶标方法
免疫酶标方法是继免疫荧光后, 60 年代发展起来的技术。 于 基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用, 然后加入酶的底物, 生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标 技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种 标记方法,目前在病理诊断中广为使用的当属 PAP 法(过氧化物酶-抗过氧化物酶) 、ABC 法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物) SP 、SP 、即用型二步法(聚合物链接)等。 法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶) 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶)
3、免疫胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白 的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌 A 蛋白)等作为 探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免 疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察。如应用银 加强的免疫金银法则更便于光镜观察。
4、免疫铁蛋白法 5、放射免疫自显影法
标本
1、组织标本:石蜡切片 石蜡切片(病理切片和组织芯片) 、冰冻切片 石蜡切片 2、细胞标本:组织印片、细胞爬片、细胞涂片
---------------------------------------------------------------------------------华中科技大学同济医学院
1

常用免疫组化指标的意义

常用免疫组化指标的意义 Ki-67为细胞增值的一种标记,在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达,G0期缺如,其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA(增埴细胞核抗原)。 多数腺癌表达CEA Rb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因,调节细胞周期。 P53在免疫组化中均为突变型,阳性率越高,预后约差。野生型半衰期很短 Nm23是转移抑制基因,其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。 E-Ca,E钙粘附蛋白,介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白,其功能丧失引起细胞之间连接的破坏,主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。 PS2(雌激素调节蛋白),其表达和ER表达有关,可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。 CK18,低分子量角蛋白,主要标记各种单层上皮包括腺上皮,而复层鳞状上皮常阴性,主要用于腺癌诊断。 CK19,分布于单层上皮和间皮,常用于腺癌诊断,肝细胞不表达,而胆管为阳性反应Hep par 1,肝细胞抗原,正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。 CK20,用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。 CK7 卵巢、肺和乳腺上皮常阳性,结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。 Villin 绒毛蛋白,正常组织中,villin通常只表达于有刷状缘的细胞上,如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中(特别是近曲小管)。Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率,具有明显腺样结构的肿瘤上没有villin表达,则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低。 乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除的一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显的villin免疫组化阳性染色,则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源。其他villin免疫组化染色通常为阴性表达的肿瘤还有:如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌和前列腺癌。间皮瘤也经常为villin阴性表达,因此在一些情况下Villin还可以作为鉴别间皮瘤和腺癌使用抗体的一种。 但是也有一些非胃肠道来源的肿瘤可表达villin,如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌和小部分肺癌。也有一些专家报道Villin在部分宫颈内膜腺癌病例中表达。 肝癌的诊断: Villin免疫组化染色可以显示出毛细胆管结构,因此它也可能在表达部分肝癌的管状结构上很有用。多克隆CEA是用于此目的的第一种试剂,而且CD10 (CALLA)在表达肝癌的该结构上也非常有用。多克隆CEA、villin和CD10 (CALLA)在肝癌病例上的表达,相互之间并没有任何的冲突,因此如果怀疑肝癌的可能性,建议将这三种抗体共同使用以协助疑难病例的诊断。 Villin在神经内分泌肿瘤上的应用: Villin在神经内分泌肿瘤的研究上也很有帮助。众所周知,类癌和胰腺的胰岛细胞肿瘤具有相相似的形态学特征,仅在形态学上区分这两种肿瘤几乎是不可能的。Villin在这种情况下特别有用,因为据文献报道在85%的胃肠道类癌病例中有villin的表达,但在胰岛细胞肿瘤上未见阳性表达报道。Villin在类癌上的表达通常为胞膜阳性。另外,有一些证据表明villin在胃和下消化道的小细胞癌上的表达率比在其他部位的小细胞癌上要高。如:肺、食道、膀胱或前列腺等。据文献报道,

免疫组化与免疫荧光的区别

免疫组化与免疫荧光 一、两者都是蛋白定位的检测(也就是确定蛋白是表达在细胞核/浆/膜)。 二、区别是: 1、概念和基本原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜的现像和放大作用,在细胞,亚细胞水平检测各种抗原物质,并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫组织化学技术现已有:免疫荧光组织(细胞)化学技术、免疫酶组织(细胞)化学技术、亲和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。 免疫荧光组织(细胞)化学技术是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针,检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗体),形成的抗原抗体复合物上带有荧光素,在荧光显微镜下,由于受高压汞灯光源的紫外光照射,荧光素发出明亮的荧光,这样就可以分辨出抗原(或抗体)的所在位置及其性质,并可利用荧光定量技术计算抗原的含量。以达到对抗原物质定位、定性、定量测定的目的。 2、标本制作: 免疫荧光一般用冰冻切片,减少杂质干扰;而酶免疫组化一般用石蜡切片或冰冻切片均可以。 3、实验步骤:免疫荧光染色步骤简单,而酶免疫组化方法较为复杂,多了DAB显色过程。 4、染色后的标本保存:免疫荧光染色后的标本一般短时间拍照,时间长了荧光衰退;而酶免疫组化染色标本可以长期保存。 5、免疫组化结果除了知道蛋白是在细胞浆还是细胞膜表达高些,还可以用软件做相对定量分析。 6、免疫荧光得到的图片是彩色的,漂亮些,可以发高档次文章。 免疫学三大工具:免疫组化、Western、ELISA,分别用于定位,定性和定量。

免疫组化操作方法原理步骤以及常见问题处理大总结

免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结 1、方法操作不难,最大的难处是出现异常结果时如何解决?这就需要掌握免疫组化实验原理,每一步知道为什么这样做,这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间,这三者一般是相互成反比的(相对),其中浓度是最重要的先决条件,温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说,可以有4度、室温、37度,我推荐4度最佳,反应最温和,背景较浅;而37度反应速度较快,时间较短;室温我不太提倡,除非你每次都把环境温度控制在一定的范围,否则,尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法,免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确,是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析,但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下,分析最为准确,这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做;阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应,其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题;后者是排除有无一抗外的非特异性染色。 5、免疫组化的应用广泛,是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时,明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难,加一些形态学数据或图片,老外十分欢迎,可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤,重复运用于同一性质的切片和同一种抗体,做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法,更换一种抗体后,居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程,成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那,这是因为我经过了反复的动手+动脑,把理论原理运用于实践,在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决,最终把理论与实践融会贯通。 一、概念和常用方法介绍 1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。 2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应,前者再用标记辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如链霉亲和素等)结合,最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分,在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较

免疫组化意义

免疫组化常用标记物 一、常用标志物 1. CD15(LeuM1)---(阳性部位:细胞膜)。是一种由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖 组成的碳水化合物抗原,又称半抗原χ,是粒/单核细胞相关抗原。免疫组织化学表达: 成熟粒细胞、激活的淋巴细胞(主要是T淋巴细胞)、R-S细胞、大多数腺癌等。 2. 癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)(CD66e)---(阳性部位:细胞膜/浆)。癌胚抗原是表达于胎儿上皮细胞的一种糖蛋白,分子量为180kDa。存于某些恶性肿瘤组 织尤其是内胚层来源发肿瘤中,大多数胃肠道(包括胰腺)和肺腺癌均有表达,少量成人上皮细胞和良性肿瘤亦可表达。CEA主要用于标记上皮性肿瘤,尤其是腺上皮来源的腺癌。 3.嗜铬素A(chromogranin A,CgA)---(阳性部位:细胞浆)。嗜铬素是位于神经分 泌颗粒内的酸性糖蛋白家族,是一组可溶性酸性蛋白,分子量为76~120 kDa,分布广泛。含量最丰富的是嗜铬素A,另两个是嗜铬素B和嗜铬素C。几乎所有的神经内分泌肿瘤中 均可检测到嗜铬素。嗜铬素A不仅存在于神经内分泌细胞的分泌颗粒中,也广泛分布于所有含有颗粒的内分泌细胞和神经内分泌细胞来源的肿瘤细胞。此抗体可以识别嗜铬素A抗原羧基末端的片段,而不与氨基末端的片段反应,主要用于标记神经内分泌细胞及其来源的肿瘤。对小细胞癌进行抗原修复可提高检测的敏感性。 4.细胞角蛋白(cytokeratin pan,广谱 CK)--- AE1/ AE3(阳性部位:细胞浆)。此抗体可以识别绝大部分酸性细胞角蛋白(Ⅰ型/低分子量)和碱性细胞角蛋白(Ⅱ型/高分子量)。用于标记上皮及上皮来源的肿瘤,特别是对鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性具有一定的意义。 5.细胞角蛋白5/6(cytokeratin 5/6,CK5/6)---(阳性部位:细胞浆)。在正常组织中,鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性,腺上皮细胞阴性。因此,可用于鳞癌和腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断。支气管上皮基底细胞、间皮;鳞癌、大细胞癌、移行细胞癌、间皮瘤阳性。大多数腺癌为阴性。 6. 细胞角蛋白7(cytokeratin 7,CK7)---(阳性部位:细胞浆)。CK7是分子量为54 kDa的一种碱性细胞角蛋白,存在于大多数正常组织的腺上皮和移行上皮细胞中,一般 非上皮来源的细胞无表达。在卵巢、乳腺和肺的腺癌呈阳性反应,而胃肠道的腺癌阴性。 7. 细胞角蛋白20(cytokeratin 20,CK20)---(阳性部位:细胞浆)。CK20(46kDa) 存在于正常的胃肠道上皮、移行上皮、Merkel细胞及其来源的肿瘤,而乳腺癌、肺癌和 神经内分泌肿瘤不表达。 CK7 positive CK7 negative CK20 positive uninformative c olorectum CK20 negative lung uninformative 8. 细胞角蛋白(高分子量)(cytokeratin,HMW)---(阳性部位:细胞浆)。高分子 量细胞角蛋白抗体(34βE12)可以识别68kDa、58kDa、56.5kDa和50kDa的细胞角蛋白。 9.上皮膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)(MUC1)---(阳性部位:细胞浆)。上皮膜抗原是一种高分子量(400 kDa)跨膜糖蛋白,广泛分布于各种上皮细胞及其来源

免疫组化超详细步骤

免疫组化 一实验目的:分别用KRAS、NRAS、HRAS蛋白抗体检测肺癌组织中KRAS、NRAS、HRAS蛋白的表达情况 二实验原理: 应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术. 三实验试剂及耗材:经病理医生确认的肺癌组织切片、KRAS、NRAS、HRAS蛋白抗体、DAB 显色试剂盒、抗原修复液、PBS、苏木素染料、1%盐酸酒精溶液、0.05%氨水、二甲苯、等 四实验设备:切片机、4℃冰箱、显微镜、烤片机 五主要试剂配置: 缓冲液 应用液A NaH2PO4 38.4g配成1000毫升溶液 应用液B Na2HPO4·12H2O 114.8g配成1000毫升溶液 配制1000毫升PBS需要14毫升应用A液,36毫升应用B液,加8.5gNaCl。 枸橼酸钠抗原修复液 应用液A 枸橼酸 10.55g配成1000毫升溶液 应用液B 柠檬酸三钠(三水合柠檬酸三钠) 29.01g 配成1000毫升溶液 配制500毫升抗原修复液需要9毫升应用A液,41毫升应用B液。 苏木素染液配方:苏木素2g,无水乙醇250毫升,硫酸铝17.6g蒸馏水750毫升,碘酸钠0.2g,冰醋酸20毫升。先将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝溶于蒸馏水水中。两液溶解后将其混合,加入碘酸钠,最后加入冰醋酸。 抗体说明书建议的抗体稀释度 N-Ras 1:50-1:500 H-Ras 1:50-1:500 K-Ras 1:20-1:200 六实验步骤: 1组织常规石蜡切片厚度3-5um,防脱片捞片后晾干,放入72℃烤箱烤片2小时。 2 切片脱蜡水化程序

免疫组化原理、步骤及要注意的事项

免疫组化原理、步骤及要注意的事 项 免疫组化 ,免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 二,免疫组化技术的基本原理 免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量;形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。在原位检测出病原的同时,还能观察到组织病变与该病原的关系,确认受染细胞类型,从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。 免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上,制成酶标抗体,再借酶对底物的特异催化作用,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位,根据酶标记的部位可将其分为直接法(一步法)、间接法(二步法)、桥联法(多步法)等, 用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体,最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上,间接法是将酶标记在第二抗体上,检测组织细胞内的特定抗原物质。目前通常选用免疫酶组化间接染色法。 ,免疫组化步骤 1, 切片,烤片60C, 1h;

2, 脱蜡及复水 二甲苯10min,100%乙醇5min,95%乙醇5min,90%乙醇5min,85%乙醇5min,80%乙醇5min,75 %乙醇5min,60%乙醇5min,50%乙醇5min,30%乙醇5min,自来水1min,双氧水1min ; 3,1份30%H2O加10份蒸馏水,室温10min,蒸馏水洗3次,每次3min; 4, 微波修复 将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液,微波中最大火力(98E -100C)加热至沸腾,冷却(约5-10min),反复两次; 5, 将切片自然冷却至室温,PBS洗涤3次,每次5min; 6, 封闭,5%BSA室温20min,甩去多余液体; 7, 滴加一抗,37C, 1h,或者4C过夜; 8, PBS洗涤3次,每次3min; 9, 滴加二抗,37°C, 15-30min ; 10, PBS洗涤3次,每次3min; 11, 滴加SABC 37C, 30min ; 12, PBS洗涤3次,每次5min; 13, 1ml蒸馏水中分别滴加显色剂,混匀; 14, DAB显色剂配置好后,滴加于切片,室温,镜下检测反应时间(约5min); 15, 自来水冲洗干净,过蒸馏水; 16, 苏木素复染2min,自来水冲洗; 17, 脱水 30%乙醇3min, 50%乙醇3min, 70%乙醇3min, 80%乙醇3min, 90%乙醇3min, 95%乙醇3min, 100%乙醇3min,二甲苯20min ; 18, 树胶封片,镜检。

相关文档
最新文档